Transcript DM. METODOLOGIAS HBa1c. Ing S Sanchez Ramos
Slide 1
Métodos para determinación de
HbA1c.
ING. SOFIA SANCHEZ RAMOS
[email protected]
Slide 2
Historia
Mediados de los 50’s
1955 Investigadores notaron que la hemoglobina
era heterogenea 1,2
1957 Se reporta que empleando cromatografía
de intercambio cationico la Hb puede ser
separada en tres componentes menores con
cargas más negativas que HbA (sin relación con
la diabetes)
Slide 3
Historia
Rahbar reporta una elevación de esos
“componentes menores” en pacientes diabeticos
Estudios para correlacionar la HbA1c con la
glucosa promedio (ADAG)
Mediados de los 70’s
Es claro que la HbA1c es el resultado de la
union no enzimatica de la glucosa con la Hb
Slide 4
Historia
Relación de la HbA1c con la glucosa plasmatica
debido a que los eritrocitos son permeables a la
glucosa.
El nivel de HbA1c proporciona un “historial” de la
glicemia de ~120 días previos.
Slide 5
Historia
Finales de los 70’s
Estan disponibles para laboratorio clínico las
pruebas para GHb.
Las pruebas de GHb se recomiendan de manera
rutinaria para:
Determinar el grado de glicemia
Despues para monitoreo de los pacientes
diabeticos
Slide 6
Historia
En la actualidad
La American Diabetes Association (ADA),
International Diabetes Federation (IDF), and
European Association for the Study of Diabetes
(EASD) aprobaron el uso de HbA1c para el
diagnostico de diabetes. El punto de corte
recomendado es de HbA1c ≥ 6.5%
Diagnosis and Classification of Diabetes Mellitus.
Diabetes Care, Volumen 34, January 2011
Slide 7
Importancia HbA1c
Refleja la concentración promedio diaria de
glucosa 3 meses previos a la evaluación de
HbA1c
Es el mejor marcador de la glucemia crónica
Marcador Estándar para el manejo adecuado de
la glucemia.
Diagnosis and Classification of Diabetes
Mellitus. Diabetes Care, Volumen 34,
January 2011
Slide 8
Importancia HbA1c
Correlaciona significativamente con las
complicaciones microvasculares y
macrovasculares
Estudios clínicos han demostrado dicha correlación
• DCCT (Diabetes Control And Complications Trial).
• UKPDS (United Kingdom Prospective Diabetes Study).
• Kumamoto (Study of Optimal Diabetes Control in Type 2
Diabetes Mellitus)
Diagnosis and Classification of Diabetes Mellitus.
Diabetes Care, Volumen 34, January 2011
Slide 9
Importancia HbA1c
El uso de HbA1c evita el problema de la
variabilidad día a día de la medición de la
glucosa.
Elimina la necesidad de que el paciente este en
ayuno o tenga una preparación alimenticia
previa.
Implicaciones : Temprana identificación y
tratamiento
Use of Glycated Haemoglobin
(HbA1c) in the Diagnosis of Diabetes
Mellitus 2011
Slide 10
Importancia HbA1c
Cuando un método para la determinación de
HbA1c es empleado los resultados que reporte
deberan ser:
Comparables con estandares internacionales
Slide 11
Estandarización de los
métodos para HbA1c
Principal objetivo es armonizar los métodos
para determinación de HbA1c
La IFCC establecio un grupo de trabajo en
HbA1c para que junto con el NGSP evaluen y
estandaricen los métodos existentes para HbA1c
de los diferentes fabricantes.
Slide 12
Metodologías para determinación de
HbA1c.
Los métodos disponibles para determinación de
HbA1c se dividen en dos categorias principales:
Métodos basados en la diferencias de cargas
Métodos basados en diferencias estructurales
Tests of Glycemia in Diabetes
DIABETES CARE, VOLUME 27, NUMBER 7, JULY 2004
Slide 13
Métodos basados en diferencias
estructurales.
En estos métodos la determinación de Hb se
realiza por cromatografía de afinidad.
La prueba generalmente se realiza en
microcolumnas que contienen resinas
cargadas con ácido
m-aminofenilborónico
La porción glicada de la hemoglobina
tiene afinidad por el ácido boronico y se une a el.
Slide 14
Métodos basados en diferencias
estructurales.
La fracción no glicada se eluye primero
posteriormente se eluye la fracción glicada
empleando un buffer con sorbitol el cual tiene
mayor afinidad al ácido boronico y desplaza dicha
fracción. Estos métodos son sensibles a las
propiedades de la resina así como de la
concentración del ligando.
Slide 15
Cromatografía de afinidad.
AXIS-SHIELD AFINION (POC)
Tiempo de procesamiento
Medición de diferentes analitos
Bias Negativo cuando se comparo con un
sistema HPLC
No cuenta con bloqueo para monitoreo de QC
ni de operador.
No portátil.
CAP GH2-A 2010 survey
Slide 16
Cromatografía de afinidad.
IN2IT (POC)
Portátil
Opción de lector de código de barras,
impresora y teclado.
Bloqueo para monitoreo de QC
Reporte dual
Automatizado
Proceso de Cartucho control.
CAP GH2-A 2010 survey
Slide 17
Métodos basados en diferencias estructurales.
Inmunoensayo.
Se basa en la reacción de anticuerpos específicos para la
N-terminal de la cadena de la HbA1c
El anticuerpo se hace reaccionar con un complejo con
fragmentos de la N-terminal de la cadena que aglutina o
inhibe la aglutinación.
Slide 18
Inmunoensayo
A1c Now+ (POC)
CV alto
Preparación de la muestra
En pacientes con hemoglobinas variantes
(S, F, C entre otras) los valores de A1c se ven
pueden ver incrementados o disminuidos.
Poca precisión en pacientes con DM tipo 1
Especifico para A1c
Portatil
Tiempo de procesamiento
CAP GH2-A 2010 survey
Slide 19
Inmunoensayo
DCA Vantage (POC)
No portatil
En presencia de HbF elevada el error
sistemático que presenta es negativo
Especifico para A1c
Tiempo de procesamiento
CAP GH2-A 2010 survey
Slide 20
Inmunoensayo
COBAS
Tiempo de procesamiento
Certificación NGSP
No se puede detectar Hb variantes
Preparación de la muestra por parte del
usuario
Falsos incrementos de A1c por interferencias
con Ab inespecificos.
Falsos resultados de A1c bajos por
interferencias con Ab inespecificos
CAP GH2-A 2010 survey
Slide 21
Inmunoensayo
VITROS
Tiempo de procesamiento
Capacidad estadística (solo 5600)
No se puede detectar Hb variantes
Dilución de la muestra por parte del usuario
(5600 no )
Interferencia con HbF elevada
CV elevado (CAP GH2-A 2010 survey)
No ha sido evaluado para interferencias con
algunas Hb variantes (HbD)
CAP GH2-A 2010 survey
Slide 22
Inmunoensayo
ADVIA
Tiempo de procesamiento
Posibilidad de realizar paneles metabólicos
Los Ab que emplea en su método no
reconocen la HF
Las muestras requieren de un pre-tratamiento
de 10 min
Requiere de por lo menos 4 reactivos
distintos para el pre-tratamiento de la muestra.
Sesgo en concentraciones de HbF elevadas
Siemens 510(K) submission
CAP GH2-A 2010 survey
Inserto del equipo
Slide 23
Inmunoensayo
ARCHITECT
Tiempo de procesamiento
Posibilidad de realizar pruebas de serología y
química clínica
Preparación de las muestras
CV más alto de todos los inmunoensayos de acuerdo
al CAP
Los resultados de A1c se ven afectados por HbF
elevada
Requiere 6 niveles de calibración
Hay por lo menos 13 substancias que interfieren son
los resultados de A1c
Comparison of four methods for HBA1c determination N.S. Torke et al
2005 AACC
Slide 24
Métodos basados en diferencias de
cargas.
Electroforesis
Separación de hemoglobinas
de acuerdo a su movilidad
en un campo eléctrico.
Requieren de mucho tiempo
y tiene interferencias con la HbF.
Slide 25
ELECTROFORESIS
HYDRASYS 2
Sistema semi-automatizado que lleva a cabo todas
las etapas de una electroforesis.
Lectura de código de barras
Electroforesis no esta considerado como un método
cuantitativo debido a su alto CV
Método manual
Requiere de varias horas
No tiene certificación NGSP
CAP GH2-A 2010 survey
Slide 26
Métodos basados en diferencias de
cargas.
Cromatografía por intercambio iónico.
• HPLC (Cromatografía líquida de alta resolución)
referenciado por NGSP
Slide 27
HPLC (Cromatografía líquida de alta
resolución)
HPLC - Estos sistemas usan una columna para eluir las
diferentes fracciones HbA1a, HbAb, HbA1c y HbAo a
distintos tiempos dependiendo de su carga eléctrica,
empleando buffers con diferente fuerza iónica. Estos
métodos muestran una excelente precisión y permiten
una rápida separación de los componentes.
Slide 28
HPLC
TOSOH G7/G8
Tiempo de procesamiento
Estabilidad en su cartucho analítico
CV 1.4% - 1.6 %
Limitaciones en presencia de HbD, HbS y HbC
En presencia de HbE el pico no puede ser
distinguido de A1c
Falta de seguimiento para lotes de reactivos y de
controles.
CAP GH2-A 2010 survey
Slide 29
HPLC
PRIMUS
Combina HPLC y afinidad a boronatos
No tiene interferencias con Hb variantes
Determinación de A1c y programa para talasemias
Con valores altos de HbF los valores de A1c se
reportan bajos
No hay una medición directa de HbA1c, mide GHb
No hay interferencia de Hb variantes pero tampoco se
puede detectar la presencia de estas.
CAP GH2-A 2010 survey
Slide 30
HPLC
D-10
No tiene interferencias con Hb variantes
como HbS, HbC, HbE y HbD
Proporciona información importante en la
detección de hemoglobinas variantes
Determinación de A1c y programa para
talasemias
Toma de muestra en tubo primario
Acondicionamiento de la columna
analítica entre corrida
Slide 31
HPLC
VARIANT II A1c
No tiene interferencias con algunas Hb
variantes como HbS, HbC y HbD
Proporciona información importante en la
detección de hemoglobinas variantes
Determinación de A1c y programa para
talasemias
Toma de muestra en tubo primario
Interferencia con Hb variantes HbE en el
CAP GH2-A 2010 survey
resultado de A1c
Slide 32
Cuadro comparativo de metodologías
Método
Tiempo
Precisión
Cromatografía CA
2h
+
Electroforesis
3h
++
Inmunoensayo
30 min
+
I. Aglutinación
6 min
++
C. Afinidad (In2it)
10 min
+++
3 min
1.6 min
++++
* HPLC (D-10,
Variant II)
Variant II Turbo
* método de referencia por convención internacional
++++
Slide 33
Interferencia en la determinación de HbA1c.
Slide 34
Ventajas y desventajas de los métodos para
HbA1c.
Slide 35
Las pruebas de laboratorio son un
elemento indispensable para detectar,
confirmar, clasificar y controlar al
paciente diabético.
Slide 36
Sofia Sanchez Ramos
[email protected]
Métodos para determinación de
HbA1c.
ING. SOFIA SANCHEZ RAMOS
[email protected]
Slide 2
Historia
Mediados de los 50’s
1955 Investigadores notaron que la hemoglobina
era heterogenea 1,2
1957 Se reporta que empleando cromatografía
de intercambio cationico la Hb puede ser
separada en tres componentes menores con
cargas más negativas que HbA (sin relación con
la diabetes)
Slide 3
Historia
Rahbar reporta una elevación de esos
“componentes menores” en pacientes diabeticos
Estudios para correlacionar la HbA1c con la
glucosa promedio (ADAG)
Mediados de los 70’s
Es claro que la HbA1c es el resultado de la
union no enzimatica de la glucosa con la Hb
Slide 4
Historia
Relación de la HbA1c con la glucosa plasmatica
debido a que los eritrocitos son permeables a la
glucosa.
El nivel de HbA1c proporciona un “historial” de la
glicemia de ~120 días previos.
Slide 5
Historia
Finales de los 70’s
Estan disponibles para laboratorio clínico las
pruebas para GHb.
Las pruebas de GHb se recomiendan de manera
rutinaria para:
Determinar el grado de glicemia
Despues para monitoreo de los pacientes
diabeticos
Slide 6
Historia
En la actualidad
La American Diabetes Association (ADA),
International Diabetes Federation (IDF), and
European Association for the Study of Diabetes
(EASD) aprobaron el uso de HbA1c para el
diagnostico de diabetes. El punto de corte
recomendado es de HbA1c ≥ 6.5%
Diagnosis and Classification of Diabetes Mellitus.
Diabetes Care, Volumen 34, January 2011
Slide 7
Importancia HbA1c
Refleja la concentración promedio diaria de
glucosa 3 meses previos a la evaluación de
HbA1c
Es el mejor marcador de la glucemia crónica
Marcador Estándar para el manejo adecuado de
la glucemia.
Diagnosis and Classification of Diabetes
Mellitus. Diabetes Care, Volumen 34,
January 2011
Slide 8
Importancia HbA1c
Correlaciona significativamente con las
complicaciones microvasculares y
macrovasculares
Estudios clínicos han demostrado dicha correlación
• DCCT (Diabetes Control And Complications Trial).
• UKPDS (United Kingdom Prospective Diabetes Study).
• Kumamoto (Study of Optimal Diabetes Control in Type 2
Diabetes Mellitus)
Diagnosis and Classification of Diabetes Mellitus.
Diabetes Care, Volumen 34, January 2011
Slide 9
Importancia HbA1c
El uso de HbA1c evita el problema de la
variabilidad día a día de la medición de la
glucosa.
Elimina la necesidad de que el paciente este en
ayuno o tenga una preparación alimenticia
previa.
Implicaciones : Temprana identificación y
tratamiento
Use of Glycated Haemoglobin
(HbA1c) in the Diagnosis of Diabetes
Mellitus 2011
Slide 10
Importancia HbA1c
Cuando un método para la determinación de
HbA1c es empleado los resultados que reporte
deberan ser:
Comparables con estandares internacionales
Slide 11
Estandarización de los
métodos para HbA1c
Principal objetivo es armonizar los métodos
para determinación de HbA1c
La IFCC establecio un grupo de trabajo en
HbA1c para que junto con el NGSP evaluen y
estandaricen los métodos existentes para HbA1c
de los diferentes fabricantes.
Slide 12
Metodologías para determinación de
HbA1c.
Los métodos disponibles para determinación de
HbA1c se dividen en dos categorias principales:
Métodos basados en la diferencias de cargas
Métodos basados en diferencias estructurales
Tests of Glycemia in Diabetes
DIABETES CARE, VOLUME 27, NUMBER 7, JULY 2004
Slide 13
Métodos basados en diferencias
estructurales.
En estos métodos la determinación de Hb se
realiza por cromatografía de afinidad.
La prueba generalmente se realiza en
microcolumnas que contienen resinas
cargadas con ácido
m-aminofenilborónico
La porción glicada de la hemoglobina
tiene afinidad por el ácido boronico y se une a el.
Slide 14
Métodos basados en diferencias
estructurales.
La fracción no glicada se eluye primero
posteriormente se eluye la fracción glicada
empleando un buffer con sorbitol el cual tiene
mayor afinidad al ácido boronico y desplaza dicha
fracción. Estos métodos son sensibles a las
propiedades de la resina así como de la
concentración del ligando.
Slide 15
Cromatografía de afinidad.
AXIS-SHIELD AFINION (POC)
Tiempo de procesamiento
Medición de diferentes analitos
Bias Negativo cuando se comparo con un
sistema HPLC
No cuenta con bloqueo para monitoreo de QC
ni de operador.
No portátil.
CAP GH2-A 2010 survey
Slide 16
Cromatografía de afinidad.
IN2IT (POC)
Portátil
Opción de lector de código de barras,
impresora y teclado.
Bloqueo para monitoreo de QC
Reporte dual
Automatizado
Proceso de Cartucho control.
CAP GH2-A 2010 survey
Slide 17
Métodos basados en diferencias estructurales.
Inmunoensayo.
Se basa en la reacción de anticuerpos específicos para la
N-terminal de la cadena de la HbA1c
El anticuerpo se hace reaccionar con un complejo con
fragmentos de la N-terminal de la cadena que aglutina o
inhibe la aglutinación.
Slide 18
Inmunoensayo
A1c Now+ (POC)
CV alto
Preparación de la muestra
En pacientes con hemoglobinas variantes
(S, F, C entre otras) los valores de A1c se ven
pueden ver incrementados o disminuidos.
Poca precisión en pacientes con DM tipo 1
Especifico para A1c
Portatil
Tiempo de procesamiento
CAP GH2-A 2010 survey
Slide 19
Inmunoensayo
DCA Vantage (POC)
No portatil
En presencia de HbF elevada el error
sistemático que presenta es negativo
Especifico para A1c
Tiempo de procesamiento
CAP GH2-A 2010 survey
Slide 20
Inmunoensayo
COBAS
Tiempo de procesamiento
Certificación NGSP
No se puede detectar Hb variantes
Preparación de la muestra por parte del
usuario
Falsos incrementos de A1c por interferencias
con Ab inespecificos.
Falsos resultados de A1c bajos por
interferencias con Ab inespecificos
CAP GH2-A 2010 survey
Slide 21
Inmunoensayo
VITROS
Tiempo de procesamiento
Capacidad estadística (solo 5600)
No se puede detectar Hb variantes
Dilución de la muestra por parte del usuario
(5600 no )
Interferencia con HbF elevada
CV elevado (CAP GH2-A 2010 survey)
No ha sido evaluado para interferencias con
algunas Hb variantes (HbD)
CAP GH2-A 2010 survey
Slide 22
Inmunoensayo
ADVIA
Tiempo de procesamiento
Posibilidad de realizar paneles metabólicos
Los Ab que emplea en su método no
reconocen la HF
Las muestras requieren de un pre-tratamiento
de 10 min
Requiere de por lo menos 4 reactivos
distintos para el pre-tratamiento de la muestra.
Sesgo en concentraciones de HbF elevadas
Siemens 510(K) submission
CAP GH2-A 2010 survey
Inserto del equipo
Slide 23
Inmunoensayo
ARCHITECT
Tiempo de procesamiento
Posibilidad de realizar pruebas de serología y
química clínica
Preparación de las muestras
CV más alto de todos los inmunoensayos de acuerdo
al CAP
Los resultados de A1c se ven afectados por HbF
elevada
Requiere 6 niveles de calibración
Hay por lo menos 13 substancias que interfieren son
los resultados de A1c
Comparison of four methods for HBA1c determination N.S. Torke et al
2005 AACC
Slide 24
Métodos basados en diferencias de
cargas.
Electroforesis
Separación de hemoglobinas
de acuerdo a su movilidad
en un campo eléctrico.
Requieren de mucho tiempo
y tiene interferencias con la HbF.
Slide 25
ELECTROFORESIS
HYDRASYS 2
Sistema semi-automatizado que lleva a cabo todas
las etapas de una electroforesis.
Lectura de código de barras
Electroforesis no esta considerado como un método
cuantitativo debido a su alto CV
Método manual
Requiere de varias horas
No tiene certificación NGSP
CAP GH2-A 2010 survey
Slide 26
Métodos basados en diferencias de
cargas.
Cromatografía por intercambio iónico.
• HPLC (Cromatografía líquida de alta resolución)
referenciado por NGSP
Slide 27
HPLC (Cromatografía líquida de alta
resolución)
HPLC - Estos sistemas usan una columna para eluir las
diferentes fracciones HbA1a, HbAb, HbA1c y HbAo a
distintos tiempos dependiendo de su carga eléctrica,
empleando buffers con diferente fuerza iónica. Estos
métodos muestran una excelente precisión y permiten
una rápida separación de los componentes.
Slide 28
HPLC
TOSOH G7/G8
Tiempo de procesamiento
Estabilidad en su cartucho analítico
CV 1.4% - 1.6 %
Limitaciones en presencia de HbD, HbS y HbC
En presencia de HbE el pico no puede ser
distinguido de A1c
Falta de seguimiento para lotes de reactivos y de
controles.
CAP GH2-A 2010 survey
Slide 29
HPLC
PRIMUS
Combina HPLC y afinidad a boronatos
No tiene interferencias con Hb variantes
Determinación de A1c y programa para talasemias
Con valores altos de HbF los valores de A1c se
reportan bajos
No hay una medición directa de HbA1c, mide GHb
No hay interferencia de Hb variantes pero tampoco se
puede detectar la presencia de estas.
CAP GH2-A 2010 survey
Slide 30
HPLC
D-10
No tiene interferencias con Hb variantes
como HbS, HbC, HbE y HbD
Proporciona información importante en la
detección de hemoglobinas variantes
Determinación de A1c y programa para
talasemias
Toma de muestra en tubo primario
Acondicionamiento de la columna
analítica entre corrida
Slide 31
HPLC
VARIANT II A1c
No tiene interferencias con algunas Hb
variantes como HbS, HbC y HbD
Proporciona información importante en la
detección de hemoglobinas variantes
Determinación de A1c y programa para
talasemias
Toma de muestra en tubo primario
Interferencia con Hb variantes HbE en el
CAP GH2-A 2010 survey
resultado de A1c
Slide 32
Cuadro comparativo de metodologías
Método
Tiempo
Precisión
Cromatografía CA
2h
+
Electroforesis
3h
++
Inmunoensayo
30 min
+
I. Aglutinación
6 min
++
C. Afinidad (In2it)
10 min
+++
3 min
1.6 min
++++
* HPLC (D-10,
Variant II)
Variant II Turbo
* método de referencia por convención internacional
++++
Slide 33
Interferencia en la determinación de HbA1c.
Slide 34
Ventajas y desventajas de los métodos para
HbA1c.
Slide 35
Las pruebas de laboratorio son un
elemento indispensable para detectar,
confirmar, clasificar y controlar al
paciente diabético.
Slide 36
Sofia Sanchez Ramos
[email protected]