دکتر آتوسا شریعت تربقانی آزمایشگاه مرجع سالمت Electrical Optical Outlet Light Source Beam Aperture Photodiode Inlet Constant Current Source Electrodes Aperture Vacuum Pump 9% NaCl Electrolyte Tube with Aperture Cell Container Direction of Flow.
Download ReportTranscript دکتر آتوسا شریعت تربقانی آزمایشگاه مرجع سالمت Electrical Optical Outlet Light Source Beam Aperture Photodiode Inlet Constant Current Source Electrodes Aperture Vacuum Pump 9% NaCl Electrolyte Tube with Aperture Cell Container Direction of Flow.
Slide 1
دکتر آتوسا شریعت تربقانی
آزمایشگاه مرجع سالمت
Slide 2
Electrical
Optical
Slide 3
Outlet
Light Source
Beam
Aperture
Photodiode
Inlet
Slide 4
Constant Current
Source
Electrodes
Aperture
Vacuum
Pump
9% NaCl
Electrolyte
Tube with
Aperture
Cell
Container
Direction of
Flow
Slide 5
Coincidence
Carry over
Post aperture recirculation
Slide 6
Slide 7
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
Inadequate mixing
Pipetting fault
Inappropriate dilution
Delay in transferring suspension to counting chamber
Electric interference
External noise
Aperture blockage
Aspiration failure
Contaminated diluent
Air bobbles
Residual lysic agent
Inadequate drainage
Slide 8
RBC/ WBC imprecision
linearity
WBC
Platelet
CV%
Calibration
incomplete
lysis stability
solution with dust
imprecision
Slide 9
مطالعه کاتالوگ
5روز آشنائی با نگهداری و کاربری و SET UPدستگاه
استفاده از خون کنترل و رسم چارت
کالیبراسیون دستگاه
Slide 10
شرایط خونگیری
غلظت ضد انعقاد
ظرف مناسب
درپوش مناسب
شستشوی ظروف
زمان آزمایش 4-1ساعت
مخلوط شدن با ضد انعقاد
Slide 11
نوسانات برق
اتصال به زمین
محلولها
دفع
زمینه
Slide 12
RBC < 0.03 × 10 12/l
WBC < 0.04 × 10 9/l
HGB < 0.2 g/l
PLT < 5 ×10 9/l
Slide 13
نمونه حد اقل 3-5دقیقه روی روتاتور و یا 20بار با دست سر
و ته شود
حباب نداشته باشد
لخته نداشته باشد
Slide 14
Each step in triplicate (each dilution read in
duplicate)
10-20 normal individuals
Hct can be corrected 1.5-3%
2% for 0.440.442%=0.0088 .44-.0088=0.43
CF(coefficient factor)=
[(manual-analyzer) / (analyzer )]100
Slide 15
Sample
1
2
3
4
5
manual
11,11.5,11
12,12.8,13
14,14.2,13.9
13,13.5,13.6
14.3,14.6,14.5
mean
cell counter
11.7 12,12,12
12.6
13,12.8,12.8
14.03 14.5,14.5,14.8
13.37 13.6,13.1,13.4
14.47 15,15,15.1
Mean(manual)=11.7+12.6+14.03+13.37+14.47 = 13.23
5
Mean(cell counter)=12+12.87+14.6+13.37+15.13=13.57
5
CF=(13.23 – 13.57 ) / 13.57 = -0.025
98 X (-0.025) = -2.45 → 98 – 2.45 = 95.55
mean
12
12.87
14.6
13.37
15.03
Slide 16
Concentration 1.5 mg / cc
or
3 mg / 2 cc
Solution 3%
3 gr / 100 cc or 3000 mg /1000
30000 mg
1000 cc
3 mg
X
X= 0.1 cc or 100 µl
Solution 6%
6 gr / 100 cc or 6000 mg /1000
60000 mg
1000 cc
3 mg
X
X= 0.05 cc or 50 µl
Slide 17
.A
.B
.C
.D
.E
.F
.G
.H
.I
.J
.K
نمونه سالم
نمونه لیپمی
پلی سیتمی ( هموگلوبین 18-20میلیگرم در دسی لیتر )
آنمی میکروسیتیک )(MCV <75 fl , Hg=10-11 gr/dl
لکوسیتوز )(WBC=20-40×10 9 /l
لکوپنی ) (WBC = 0.5-2 × 10 9 /l
ترومبوسیتوز )(PLt = 500-700 × 10 9 /l
ترومبوپنی )(PLt = 50-80 × 10 9 /l
آنمی ماکروسیتیک )(MCV>100 , Hg = 10-11 gr/dl
جاندیس ) (Bil > 30 µmol/l
پاراپروتئینمی
Slide 18
خون کنترل
بررسی منحنی کنترل –هر 5روز
نمونه های خارج از +4Sdرا مردود کرده
هر 5روز دوباره میانگین انحراف معیار محاسبه شود
در این مدت از محلولهایی بایک سری ساخت استفاده شود
Slide 19
20روز کاری
هر روز دو نمونه که هر کدام را به صورت دوپلیکیت به دستگاه
دهید
اگر قدر مطلق تفاوت دو خوانده از 5/5انحراف معیار بیشتر بود باید آن
دو خوانده را حذف کرد.
Slide 20
Slide 21
Slide 22
Slide 23
10نمونه خون تازه با دامنه های متفاوت که جهت انجام آزمایش
CBCجمع آوری شده را در شرایط یکسان هر کدام را 10بار
آزمایش کرده سپس نمونه ها را در یخچال بگذارید.به مدت 5روز
نمونه ها را در پایان همانروز پس از آن که به دمای اطاق رسید
دوباره مانند ران اول آزمایش کنید .در این صورت می توان
برای هر روز به طور جداگانه SDو CVمحاسبه کرده که به
عنوان Within-run Precisionخواهد بود .نتایج آزمایشهائی
که در یک روز و طی 2ران کاری آزمایش شده به عنوان
Between-run Precisionخواهد بود.
برای بررسی Precision Between-dayاز خون کنترل
استفاده شود نتایج آزمایشهای ده روز متوالی محاسبه شود.
Slide 24
20روز هر روز یک نمونه کنترل را 20آزمایش
با کمک فرمولهای رایج ،عدم کنیددقت را محاسبه نمائید
Slide 25
test
unit
Level
1
Level Level Level Level
2
3
4
5
Hematocrit
L/L
0.14
0.33
0.56 0.70
Hemoglobin
g/dl
4.5
10.5
17
23
Mean corpuscular volume
Fl
80
100
White blood cell count
K/µl
0.5
3
12
30
Platelet count
K/µl
10
50
100
600
1000
Slide 26
CVقابل قبول برای within-runیا within-dayبرابر
( ) 0.25 ×TEمی باشد
CVقابل قبول برای between-dayبرابر
)TE) 0.33 ×Tمی باشد
Slide 27
Test
White cell count
Allowable total
error (TE )
Target + 15%
Within-run CV
Within-day CV
3.75%
Erythrocyte count Target + 6%
1.5%
Hematocrit
Target + 6%
1.5%
Hemoglobin
Target + 7%
1.75%
Platelet count
Target + 25%
6.25%
Slide 28
،یک نمونه highرا سه بار پشت سر هم آزمایش کرده
)(H1,H2,H3
سپس یک نمونه lowرا سه بار آزمایش کنید (L1.L2.L) .
نمونه های C / D
نمونه های E / F
نمونه های G / H
سپس برای هر یک از پارامترها ،با کمک فرمول زیر محاسبه
نمائید.
= %carry over
Slide 29
برای مثال اگر برای شمارش گلبول قرمز سه بار نمونه باالو
سپس سه بار نمونه پائین به شرح زیر باشد:
6.28-6.27-6.30 0.74-0.52-0.49
به روش زیر محاسبه خواهد شد
نتایج را با ادعای سازنده مقایسه نمائید.
Slide 30
بدین منظور نمونه های الزم را به طور سریال رقیق کرده به طوری که
در محدوده reportable rangeدستگاه باشد .سپس مقادیر فوق را
با مقادیری که از طریق محاسبات آماری بدست آمده مقایسه نمائید.
برای این مرحله نمونه های Cو Eو Gمورد نیاز می باشد.
جهت پالکت از نمونه فردی که با platelet rich plasmaمخلوط
شده استفاده نمائید.
برای لکوسیت میتوان از نمونه بیمار مبتال به CMLاستفاده کرد.
برای هموگلوبین و گلبول قرمز پارامترهای MCV.MCH.MCHC
محاسبه شود.
جهت رقیق کردن از پالسمای فرد استفاده شود
Slide 31
برای هر یک از پارامترها ،حد اقل پنج رقت تهیه گردد و هر نمونه را دو تا
سه بار آزمایش کرده ،میانگین را به کار برید.
High pool
Low pool
0%
0
5 part
Mixture 1
25%
1 part
3 part
Mixture2
50%
2 part
2 part
Mixture3
75%
3 part
1 part
Mixture4
Slide 32
برای هر رقت ،دو نتیجه ثبت نمائید یکی نتیجه آزمایش با دستگاه و
یکی نتیجه ریاضی محاسبه شده
منحنی رگرسیون خطی دو سری اعداد ( سری اول مقادیر آزمایش
شده و سری دوم مقادیر محاسبه شده است) را بدست آورید.
همبستگی این دو باید به صورت R2 > 0.95باشد.
Slide 33
حداقل نمونه خون 100فرد که شامل افراد سالم و بیمارباشد ،با دستگاه
فوق و سیستم قابل قبول مورد آزمایش قرار میگیرد.
بهتر است هر نمونه را به صورت دوپلیکیت آزمایش کرد تا از خطای
راندوم جلوگیری شود
بهتر است نمونه ها طی روزهای مختلف ( 20روز ) آزمایش شود
بهتر است نمونه ها را در فاصله زمانی کوتاه ( ترجیحا ً بالفاصله )
توسط دو دستگاه آزمایش کرد تا پارامترهای خونی در اثر گذشت زمان
تغییر نکنند
تبصره :الزم به ذکر است که باید تمام نکات الزم برای تهیه ی نمونه
خون ، CBCمانند ضد انعقاد مناسب ،زمان انجام آزمایش ،مخلوط
کردن و .....مد نظر گرفته شود .
Slide 34
طبق پیشنهاد FDAدستگاه سل کانتر با روش مرجع ،مورد
مقایسه قراربگیرد به همین دلیل برای پارامتر های هموگلوبین و
هماتوکریت و همچنین شمارش افتراقی گلبولهای سفید ،از روش
دستی با کارشناسان کارآزموده و تهیه حداقل دو گسترش برای هر
نمونه ،استفاده می گردد.
تبصره :روش انجام آزمایش های فوق طبق دستورالعمل های
CLSIباشد
Slide 35
پس از انجام آزمایشها ،نتایج را با محاسبه R2و – Slop
intercept-Biasمورد مقایسه قرار میدهیم .اگر چه برای تفسیر
نتایج از محاسبه T duplicate testهم استفاده می کنیم .
برای flag NRBC & flag immature cellبا توجه به
گسترشهای تهیه شده ،حساسیت و اختصاصیت را محاسبه می کنیم
Slide 36
این ارزیابی در مورد دستگاههائی صورت میگیرد که سیستم مخلوط
کردن اتوماتیک نمونه را دارند.
برای این کار شمارش گلبولهای قرمز را مالک قرار دهید.
14نمونه را 10بار سروته کرده و هرکدام را 3بار آزمایش کرده ،
میانگین را برای هر نمونه به عنوان مقدار پایه baselineدر نظر
گرفته میشود.
نمونه هارا 4ساعت در دمای اطاق قرار داده
بدون آنکه نمونه هارا تکان دهید با سیستم اتوماتیک مورد آزمایش قرار
دهید.
نمونه ها را با دست سروته کرده و دوباره با سیستم اتوماتیک دستگاه
آزمایش کنید.
Slide 37
نتایج را در دو مرحله سوم و چهارم با مقادیر پایه ( مرحله اول )
مقایسه کنید .اختالف تا baseline 1.5%قابل قبول میباشد.
به عنوان مثال نمونه اول سه بار ،آزمایش و نتایج در جدول ثبت
شده است.
RBC1
4.1
4.12
4.11
4.11
4.09
4.13
0.49
-0.49
ok
Run1
Run2
Run3
Average
4h Unmixed
4h Premixed
Change unmixed%
Change premixed %
<1.5%
Slide 38
4.1+4.12+4.11 / 3 = 4.11میانگین محاسبه شده
مطابق مرحله سوم ،بدون مخلوط کردن آزمایش شده و 4.09
بدست آمده است.
مطابق مرحله چهارم پس ازمخلوط کردن با دست ،آزمایش انجام
شده 4.13
Slide 39
در صورت امکان ،از این دستگاه در برنامه ارزیابی خارجی
کیفیت استفاده شود و در مقایسه با سایر سیستمهای موجود قرار
بگیرد.
Slide 40
در حین کار باید به نحوه کار با نرم افزار دستگاه توانائی های آن و
. بودن آن نیز توجه کردuser friendly
GP19-A Laboratory Instruments and Data
Management Systems: Design of Software
User Interfaces and End-User Software Systems
Validation, Operation, and Monitoring;
Approved Guideline
Slide 41
General Principles of Software Validation; Final
Guidance for Industry and FDA Staff
Document issued on: January 11, 2002
U.S. Department Of Health and Human Services
Food and Drug Administration
Center for Devices and Radiological Health
Center for Biologics Evaluation and Research
GP19-A Laboratory Instruments and Data Management
Systems: Design of Software User Interfaces and EndUser Software Systems Validation, Operation, and
Monitoring; Approved Guideline , CSLI
Slide 42
Homogenous
Non-homogenous
Slide 43
بعد از اینكه نمونه ها بسته بندي و آماده ارسال شد باید این كار
انجام شود.
تعداد مناسبي از نمونه ها( )%5به صورت تصادفي انتخاب شود
به طوریكه از تمام جعبه ها باشد.
هر نمونه دو بار به سل كانتر داده شود.
Slide 44
X
X1
X2
X3
….
بار دوم
X1.2
X2.2
X3.2
…..
بار اول
X1.1
X2.1
X3.1
……
Slide 45
بار اول
بار دوم
Wt
Wt2
X1.1
X1.2
X1.1-X1.2
(X1.1-X1.2)2
X2.1
X2.2
X2.1-X2.2
(X2.1-X2.2)2
X3.1
X3.2
X3.1-X3.2
(X3.1-X3.2)2
…….
……..
……….
……….
Duplicate test
Slide 46
Ss 0.3 sd test for program
Slide 47
Stable
Unstable
Slide 48
تعدادي از نمونه ها را انتخاب كرده ( حد اقل سه نمونه )
تا زماني كه آخرین جواب آزمایشگاهها دریافت و ران كاري بسته
شد نگه داشته شود(در شرایط مناسب)
سپس هر نمونه را دو بار آزمایش كرده
میانگین نتایج را محاسبه كرده
میانگین حاصله را با میانگین هموژنیتي مقایسه كنید
Slide 49
Test or Analyte
Acceptable Performance
White cell differentiation
Target ± 3 SD based on percentage of
different types of white cells
Erythrocyte count
Target ± 6%
Hematocrit
Target ± 6%
Hemoglobin
Target ± 7%
Leukocyte count
Target ± 15%
Platelet count
Target ± 25%
Slide 50
.I
.II
با درب بسته
پس از باز شدن درب
چند ویال را به طور تصادفي انتخاب كرده
چند ویال را با درب باز و چند عدد را با درب بسته در دماي اطاق نگه
میداریم.
هر ساعت و یا هر نیم ساعت آزمایش مي كنیم (بخصوص با درب بسته
بسیار اهمیت دارد زیرا تخمیني از شرایط توزیع بدون زنجیره
سرد داریم)
Slide 51
با تشکر
دکتر آتوسا شریعت تربقانی
آزمایشگاه مرجع سالمت
Slide 2
Electrical
Optical
Slide 3
Outlet
Light Source
Beam
Aperture
Photodiode
Inlet
Slide 4
Constant Current
Source
Electrodes
Aperture
Vacuum
Pump
9% NaCl
Electrolyte
Tube with
Aperture
Cell
Container
Direction of
Flow
Slide 5
Coincidence
Carry over
Post aperture recirculation
Slide 6
Slide 7
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
Inadequate mixing
Pipetting fault
Inappropriate dilution
Delay in transferring suspension to counting chamber
Electric interference
External noise
Aperture blockage
Aspiration failure
Contaminated diluent
Air bobbles
Residual lysic agent
Inadequate drainage
Slide 8
RBC/ WBC imprecision
linearity
WBC
Platelet
CV%
Calibration
incomplete
lysis stability
solution with dust
imprecision
Slide 9
مطالعه کاتالوگ
5روز آشنائی با نگهداری و کاربری و SET UPدستگاه
استفاده از خون کنترل و رسم چارت
کالیبراسیون دستگاه
Slide 10
شرایط خونگیری
غلظت ضد انعقاد
ظرف مناسب
درپوش مناسب
شستشوی ظروف
زمان آزمایش 4-1ساعت
مخلوط شدن با ضد انعقاد
Slide 11
نوسانات برق
اتصال به زمین
محلولها
دفع
زمینه
Slide 12
RBC < 0.03 × 10 12/l
WBC < 0.04 × 10 9/l
HGB < 0.2 g/l
PLT < 5 ×10 9/l
Slide 13
نمونه حد اقل 3-5دقیقه روی روتاتور و یا 20بار با دست سر
و ته شود
حباب نداشته باشد
لخته نداشته باشد
Slide 14
Each step in triplicate (each dilution read in
duplicate)
10-20 normal individuals
Hct can be corrected 1.5-3%
2% for 0.440.442%=0.0088 .44-.0088=0.43
CF(coefficient factor)=
[(manual-analyzer) / (analyzer )]100
Slide 15
Sample
1
2
3
4
5
manual
11,11.5,11
12,12.8,13
14,14.2,13.9
13,13.5,13.6
14.3,14.6,14.5
mean
cell counter
11.7 12,12,12
12.6
13,12.8,12.8
14.03 14.5,14.5,14.8
13.37 13.6,13.1,13.4
14.47 15,15,15.1
Mean(manual)=11.7+12.6+14.03+13.37+14.47 = 13.23
5
Mean(cell counter)=12+12.87+14.6+13.37+15.13=13.57
5
CF=(13.23 – 13.57 ) / 13.57 = -0.025
98 X (-0.025) = -2.45 → 98 – 2.45 = 95.55
mean
12
12.87
14.6
13.37
15.03
Slide 16
Concentration 1.5 mg / cc
or
3 mg / 2 cc
Solution 3%
3 gr / 100 cc or 3000 mg /1000
30000 mg
1000 cc
3 mg
X
X= 0.1 cc or 100 µl
Solution 6%
6 gr / 100 cc or 6000 mg /1000
60000 mg
1000 cc
3 mg
X
X= 0.05 cc or 50 µl
Slide 17
.A
.B
.C
.D
.E
.F
.G
.H
.I
.J
.K
نمونه سالم
نمونه لیپمی
پلی سیتمی ( هموگلوبین 18-20میلیگرم در دسی لیتر )
آنمی میکروسیتیک )(MCV <75 fl , Hg=10-11 gr/dl
لکوسیتوز )(WBC=20-40×10 9 /l
لکوپنی ) (WBC = 0.5-2 × 10 9 /l
ترومبوسیتوز )(PLt = 500-700 × 10 9 /l
ترومبوپنی )(PLt = 50-80 × 10 9 /l
آنمی ماکروسیتیک )(MCV>100 , Hg = 10-11 gr/dl
جاندیس ) (Bil > 30 µmol/l
پاراپروتئینمی
Slide 18
خون کنترل
بررسی منحنی کنترل –هر 5روز
نمونه های خارج از +4Sdرا مردود کرده
هر 5روز دوباره میانگین انحراف معیار محاسبه شود
در این مدت از محلولهایی بایک سری ساخت استفاده شود
Slide 19
20روز کاری
هر روز دو نمونه که هر کدام را به صورت دوپلیکیت به دستگاه
دهید
اگر قدر مطلق تفاوت دو خوانده از 5/5انحراف معیار بیشتر بود باید آن
دو خوانده را حذف کرد.
Slide 20
Slide 21
Slide 22
Slide 23
10نمونه خون تازه با دامنه های متفاوت که جهت انجام آزمایش
CBCجمع آوری شده را در شرایط یکسان هر کدام را 10بار
آزمایش کرده سپس نمونه ها را در یخچال بگذارید.به مدت 5روز
نمونه ها را در پایان همانروز پس از آن که به دمای اطاق رسید
دوباره مانند ران اول آزمایش کنید .در این صورت می توان
برای هر روز به طور جداگانه SDو CVمحاسبه کرده که به
عنوان Within-run Precisionخواهد بود .نتایج آزمایشهائی
که در یک روز و طی 2ران کاری آزمایش شده به عنوان
Between-run Precisionخواهد بود.
برای بررسی Precision Between-dayاز خون کنترل
استفاده شود نتایج آزمایشهای ده روز متوالی محاسبه شود.
Slide 24
20روز هر روز یک نمونه کنترل را 20آزمایش
با کمک فرمولهای رایج ،عدم کنیددقت را محاسبه نمائید
Slide 25
test
unit
Level
1
Level Level Level Level
2
3
4
5
Hematocrit
L/L
0.14
0.33
0.56 0.70
Hemoglobin
g/dl
4.5
10.5
17
23
Mean corpuscular volume
Fl
80
100
White blood cell count
K/µl
0.5
3
12
30
Platelet count
K/µl
10
50
100
600
1000
Slide 26
CVقابل قبول برای within-runیا within-dayبرابر
( ) 0.25 ×TEمی باشد
CVقابل قبول برای between-dayبرابر
)TE) 0.33 ×Tمی باشد
Slide 27
Test
White cell count
Allowable total
error (TE )
Target + 15%
Within-run CV
Within-day CV
3.75%
Erythrocyte count Target + 6%
1.5%
Hematocrit
Target + 6%
1.5%
Hemoglobin
Target + 7%
1.75%
Platelet count
Target + 25%
6.25%
Slide 28
،یک نمونه highرا سه بار پشت سر هم آزمایش کرده
)(H1,H2,H3
سپس یک نمونه lowرا سه بار آزمایش کنید (L1.L2.L) .
نمونه های C / D
نمونه های E / F
نمونه های G / H
سپس برای هر یک از پارامترها ،با کمک فرمول زیر محاسبه
نمائید.
= %carry over
Slide 29
برای مثال اگر برای شمارش گلبول قرمز سه بار نمونه باالو
سپس سه بار نمونه پائین به شرح زیر باشد:
6.28-6.27-6.30 0.74-0.52-0.49
به روش زیر محاسبه خواهد شد
نتایج را با ادعای سازنده مقایسه نمائید.
Slide 30
بدین منظور نمونه های الزم را به طور سریال رقیق کرده به طوری که
در محدوده reportable rangeدستگاه باشد .سپس مقادیر فوق را
با مقادیری که از طریق محاسبات آماری بدست آمده مقایسه نمائید.
برای این مرحله نمونه های Cو Eو Gمورد نیاز می باشد.
جهت پالکت از نمونه فردی که با platelet rich plasmaمخلوط
شده استفاده نمائید.
برای لکوسیت میتوان از نمونه بیمار مبتال به CMLاستفاده کرد.
برای هموگلوبین و گلبول قرمز پارامترهای MCV.MCH.MCHC
محاسبه شود.
جهت رقیق کردن از پالسمای فرد استفاده شود
Slide 31
برای هر یک از پارامترها ،حد اقل پنج رقت تهیه گردد و هر نمونه را دو تا
سه بار آزمایش کرده ،میانگین را به کار برید.
High pool
Low pool
0%
0
5 part
Mixture 1
25%
1 part
3 part
Mixture2
50%
2 part
2 part
Mixture3
75%
3 part
1 part
Mixture4
Slide 32
برای هر رقت ،دو نتیجه ثبت نمائید یکی نتیجه آزمایش با دستگاه و
یکی نتیجه ریاضی محاسبه شده
منحنی رگرسیون خطی دو سری اعداد ( سری اول مقادیر آزمایش
شده و سری دوم مقادیر محاسبه شده است) را بدست آورید.
همبستگی این دو باید به صورت R2 > 0.95باشد.
Slide 33
حداقل نمونه خون 100فرد که شامل افراد سالم و بیمارباشد ،با دستگاه
فوق و سیستم قابل قبول مورد آزمایش قرار میگیرد.
بهتر است هر نمونه را به صورت دوپلیکیت آزمایش کرد تا از خطای
راندوم جلوگیری شود
بهتر است نمونه ها طی روزهای مختلف ( 20روز ) آزمایش شود
بهتر است نمونه ها را در فاصله زمانی کوتاه ( ترجیحا ً بالفاصله )
توسط دو دستگاه آزمایش کرد تا پارامترهای خونی در اثر گذشت زمان
تغییر نکنند
تبصره :الزم به ذکر است که باید تمام نکات الزم برای تهیه ی نمونه
خون ، CBCمانند ضد انعقاد مناسب ،زمان انجام آزمایش ،مخلوط
کردن و .....مد نظر گرفته شود .
Slide 34
طبق پیشنهاد FDAدستگاه سل کانتر با روش مرجع ،مورد
مقایسه قراربگیرد به همین دلیل برای پارامتر های هموگلوبین و
هماتوکریت و همچنین شمارش افتراقی گلبولهای سفید ،از روش
دستی با کارشناسان کارآزموده و تهیه حداقل دو گسترش برای هر
نمونه ،استفاده می گردد.
تبصره :روش انجام آزمایش های فوق طبق دستورالعمل های
CLSIباشد
Slide 35
پس از انجام آزمایشها ،نتایج را با محاسبه R2و – Slop
intercept-Biasمورد مقایسه قرار میدهیم .اگر چه برای تفسیر
نتایج از محاسبه T duplicate testهم استفاده می کنیم .
برای flag NRBC & flag immature cellبا توجه به
گسترشهای تهیه شده ،حساسیت و اختصاصیت را محاسبه می کنیم
Slide 36
این ارزیابی در مورد دستگاههائی صورت میگیرد که سیستم مخلوط
کردن اتوماتیک نمونه را دارند.
برای این کار شمارش گلبولهای قرمز را مالک قرار دهید.
14نمونه را 10بار سروته کرده و هرکدام را 3بار آزمایش کرده ،
میانگین را برای هر نمونه به عنوان مقدار پایه baselineدر نظر
گرفته میشود.
نمونه هارا 4ساعت در دمای اطاق قرار داده
بدون آنکه نمونه هارا تکان دهید با سیستم اتوماتیک مورد آزمایش قرار
دهید.
نمونه ها را با دست سروته کرده و دوباره با سیستم اتوماتیک دستگاه
آزمایش کنید.
Slide 37
نتایج را در دو مرحله سوم و چهارم با مقادیر پایه ( مرحله اول )
مقایسه کنید .اختالف تا baseline 1.5%قابل قبول میباشد.
به عنوان مثال نمونه اول سه بار ،آزمایش و نتایج در جدول ثبت
شده است.
RBC1
4.1
4.12
4.11
4.11
4.09
4.13
0.49
-0.49
ok
Run1
Run2
Run3
Average
4h Unmixed
4h Premixed
Change unmixed%
Change premixed %
<1.5%
Slide 38
4.1+4.12+4.11 / 3 = 4.11میانگین محاسبه شده
مطابق مرحله سوم ،بدون مخلوط کردن آزمایش شده و 4.09
بدست آمده است.
مطابق مرحله چهارم پس ازمخلوط کردن با دست ،آزمایش انجام
شده 4.13
Slide 39
در صورت امکان ،از این دستگاه در برنامه ارزیابی خارجی
کیفیت استفاده شود و در مقایسه با سایر سیستمهای موجود قرار
بگیرد.
Slide 40
در حین کار باید به نحوه کار با نرم افزار دستگاه توانائی های آن و
. بودن آن نیز توجه کردuser friendly
GP19-A Laboratory Instruments and Data
Management Systems: Design of Software
User Interfaces and End-User Software Systems
Validation, Operation, and Monitoring;
Approved Guideline
Slide 41
General Principles of Software Validation; Final
Guidance for Industry and FDA Staff
Document issued on: January 11, 2002
U.S. Department Of Health and Human Services
Food and Drug Administration
Center for Devices and Radiological Health
Center for Biologics Evaluation and Research
GP19-A Laboratory Instruments and Data Management
Systems: Design of Software User Interfaces and EndUser Software Systems Validation, Operation, and
Monitoring; Approved Guideline , CSLI
Slide 42
Homogenous
Non-homogenous
Slide 43
بعد از اینكه نمونه ها بسته بندي و آماده ارسال شد باید این كار
انجام شود.
تعداد مناسبي از نمونه ها( )%5به صورت تصادفي انتخاب شود
به طوریكه از تمام جعبه ها باشد.
هر نمونه دو بار به سل كانتر داده شود.
Slide 44
X
X1
X2
X3
….
بار دوم
X1.2
X2.2
X3.2
…..
بار اول
X1.1
X2.1
X3.1
……
Slide 45
بار اول
بار دوم
Wt
Wt2
X1.1
X1.2
X1.1-X1.2
(X1.1-X1.2)2
X2.1
X2.2
X2.1-X2.2
(X2.1-X2.2)2
X3.1
X3.2
X3.1-X3.2
(X3.1-X3.2)2
…….
……..
……….
……….
Duplicate test
Slide 46
Ss 0.3 sd test for program
Slide 47
Stable
Unstable
Slide 48
تعدادي از نمونه ها را انتخاب كرده ( حد اقل سه نمونه )
تا زماني كه آخرین جواب آزمایشگاهها دریافت و ران كاري بسته
شد نگه داشته شود(در شرایط مناسب)
سپس هر نمونه را دو بار آزمایش كرده
میانگین نتایج را محاسبه كرده
میانگین حاصله را با میانگین هموژنیتي مقایسه كنید
Slide 49
Test or Analyte
Acceptable Performance
White cell differentiation
Target ± 3 SD based on percentage of
different types of white cells
Erythrocyte count
Target ± 6%
Hematocrit
Target ± 6%
Hemoglobin
Target ± 7%
Leukocyte count
Target ± 15%
Platelet count
Target ± 25%
Slide 50
.I
.II
با درب بسته
پس از باز شدن درب
چند ویال را به طور تصادفي انتخاب كرده
چند ویال را با درب باز و چند عدد را با درب بسته در دماي اطاق نگه
میداریم.
هر ساعت و یا هر نیم ساعت آزمایش مي كنیم (بخصوص با درب بسته
بسیار اهمیت دارد زیرا تخمیني از شرایط توزیع بدون زنجیره
سرد داریم)
Slide 51
با تشکر