Transcript Blutbank und Immunhämatologie I

Blutbank und
Immunhämatologie I
Serologische Grundlagen, Methoden
und Besonderheiten
Guido Heymann
Der ganze Aufwand wofür ?
• Geltende deutsche Richtlinien, TFG
• Um gefährliche Antikörper zu erkennen
• Um Probleme vorab zu erkennen:
– immer positive X-Probe
– großer Aufwand, passende Konserven zu finden
Was sind Blutgruppen?
• Antigene auf der Oberfläche von Blutzellen
– aber auch Organe, Thrombos, Leukos…
• Polymorphismus, Verteilung,
Immunogenität
• Vererblichkeit (genetische Anlage)
Wer ist verantwortlich?
Was können die tun?
Wie tun sie es?
Komplementaktivierung durch
Antikörper
Komplementaktivierende Antikörper:
IgM
IgG3
IgG1
Häufigkeiten
Frequenz
Quotient
85%
0,11
8%
0,092
80%
0,008
29%
0,0234
99,8%
0,00003
98%
0,0003
66%
0,0017
68%
0,0064
77%
0,00023
55%
0,00036
74%
0,000078
89%
0,000066
Eigene Daten: 1.6. – 30.10.06
Anti-D
Anti-K
Anti-c
Anti-E
Anti-e
Anti-Fy(a)
Anti-C
Anti-Jk(a)
Anti-S
Anti-Jk(b)
19
7
2
21
0
5
6
3
1
1
AKS 5204
AKS+ 248
4,8 %
0,365 %
0,135 %
0,038 %
0,406 %
7,661 %
2,823 %
0,806 %
8,468 %
0,11
0,092
0,008
0,0234
0,0003
0,096 %
0,115 %
0,058 %
0,019 %
0,019 %
2,016 %
2,419 %
1,21 %
0,403 %
0,403 %
0,0017
0,0064
0,00023
0,00036
0,000078
Rationelles Vorgehen I
Probe
Bg bekannt?
Bg bestimmen
nein
ja
AKS aktuell?
AKS
nein
ja
weiter, wie
Anforderung
nein
ja
AKS negativ?
S1- S2- S3- EA+
1.) Pat. hat keine antierythr. Antikörper
- EA ist diagnosebedingt positiv (C3d, Lupus)
- EA ist durch Medikamente positiv (z.B. Gelatine)
2.) Pat. hat Autoantikörper
- Auto-Ak sind nur enzymsensitiv (Ansatz mit
Enzym)
- schwache Kälteautoantikörper (Röhrchentest bei
3.) Pat. hat antierythrozytäre Antikörper
- z.B. Jk, (M, Fy) u.a. (Vortransfusion?, Eluat)
- medikamentabh. Ak (Gabe zuvor mit Abstand)
4°)
S1+/- S2+/- S3+/- EA1.) Pat. hat spezifische antierythr. Antikörper
- Einzelantikörper (Relevanz?) oder Ak-Gemisch
(Differenzierung mit größerem Panel)
2.) Pat. hat „unspezifische“ Antikörper
- Auto-Ak mit Pseudospezifität (Rhesus)
- Kälteantikörper (I, HI) (Röhrchentest bei 4° mit
Cordzelle)
3.) Pat. hat keine antierythr. Antikörper
- Gelröhrchen
- diluentabhängige Reaktionen (Zellen mit NaCl
waschen)
- Suchzelle Coombs+?! oder verkeimt
S1+ S2+ S3+ EA1.) Pat. hat spezifische antierythr. Antikörper
- Hochfrequenzantikörper (Relevanz?) oder AkGemisch
(Differenzierung mit größerem Panel)
2.) Pat. hat „unspezifische“ Antikörper
- Auto-Ak (EA teilweise nur im Enzym +, mDCT)
- Kälteantikörper (I, HI, H) (Röhrchentest bei 4° mit
Cordzelle und A1(B)-Zellen)
3.) Pat. hat keine antierythr. Antikörper
- Gelröhrchen
- diluentabhängige Reaktionen (Zellen mit NaCl
waschen)
- Suchzellen verkeimt oder vermischt?!
S1+ S2+ S3+ EA+
1.) Pat. hat Auto-Antikörper
- Wärmeautoantikörper (Diff. und mDCT/Eluat)
- Kälteautoantikörper (Diff. Röhrchen streng bei 37° und 4°)
- Ak-Mischungen (gr. Diff., Auto-Absorbtion o.
WARM, Absorbtion-Elution)
- medikamentabh. Ak (Medikation?, Serumdialysat)
2.) Pat. hat Allo-Antikörper mit Vortransfusion
- Ak-Gemisch (s.o.)
3.) Pat. hat keine antierythr. Antikörper
- Gelröhrchen, Zentrifugenfehler, ausgeronnen?....
- diluentabhängige Reaktionen (Zellen mit NaCl
waschen)
- Vorbehandlung mit sensiblen Medikamenten (Gelatine, HAES,
ATG…)
aber: S1- S2- S3- EA1.) Pat. hat keine antierythr. Antikörper
2.) Ansatz wurde fehlerhaft durchgeführt
- Serum verdünnt oder Plasma bei best. Ak
- zu wenig Serum oder zu viel Suchzellsuspension
- Verwechslung
3.) Pat. hat antierythrozytäre Antikörper, aber:
- Antigen in Suchzellen nicht vorhanden
- Suchzellen sind fehlerhaft oder zu alt
- HTR mit kompletter Bindung der Ak, aber Coombs- medikamentenabh. Ak ohne aktuelle Gabe
- Ak nur im Enzym nachweisbar (IgM)
Begriffsklärung
Antigen/Zelle
D
C
c
Fya
Fyb
1
+
+
+
+
2
+
+
+
-
3
+
+
+
+
4
+
+
5
+
+
+
6
+
-
Anti-D allein
3
3
3
0
0
0
Anti-D mit unterliegendem
Anti-C
3
3
3
0
0
0
0
3
3
0
3
0
Anti-Fy(a) allein mit
Homozygoteneffekt
0
3
0
0
0
0
Anti-Fy(a) im Enzym
0
0
0
0
0
0
Anti-Fy(a) allein
Antithetische Antigene
Antigen
antithet. Ag
Homozygoteneffekt
Enzym
D
-
-
+
C
c
(+)
+
c
C
(+)
+
E
e
(+)
+
e
E
(+)
+
K
k
-
~
k
K
-
~
Kp(a)
Kp(b)
-
~
Jk(a)
Jk(b)
++
~
Jk(b)
Jk(a)
++
~
Fy(a)
Fy(b)
+
---
Fy(b)
Fy(a)
+
---
Le(a)
-
-
~
Le(b)
-
-
~
M
N
++
---
N
M
+
---
S
s
+
-
s
S
+
-
P1
-
-
~
Beispiel
Weiteres Vorgehen:
- 4°C Ansatz im Röhrchen
-weitere N+ Zellen aus anderen Panels
-Antigenbestimmung
XX
X
XX
Anti-Fy(a), mgl. Anti-N
? X
XX
L/
C
EN
3
3
0
0
2
2
0
4
0
0
0
0
0
0
0
0
0
3
0
0
0
0
typisches Vorgehen
1. Ansatz von auffälligem Serum mit DiffPanel auf L/C Karte
2. Ergebnis genau abgestuft ablesen (+/-,
1,2,3,4, MF) und übertragen
3. Antigenausschluß nach folgendem
Verfahren:
->
Antigenausschluß
1. Sicherer Ausschluß bei negativem
Ergebnis von zwei homozygoten Zellen
2. Antigene des Patienten lassen zumindest
keinen Alloantikörper zu
3. Mäßig sicherer Ausschluß bei negativem
Ergebnis mit einer homozygoten Zelle
4. fraglicher Ausschluß bei negativem
Ergebnis mit heterozygoten Zellen
Reaktionsformen
• Enzymsensitivität: z.B. Fy und MN(S)
• Reaktionssmuster: komplette Agglutination,
„schlierige“ 1-2fache Reaktion,
Mischfeldreaktion
• Nur homozygote Zellen reagieren
Ein Wort zum Titer
• Wie wird Titer bestimmt?
– homozygote, „stärkste“ Zelle
– gleiche Reaktionsbedingungen
• Ein hochtitriger Ak kann irrelevant sein – ein
niedrigtitriger Ak kann relevant sein…
• Wann ist Titer notwendig (meine Meinung)
–
–
–
–
in der Schwangerschaft
zur Ak-Differenzierung (HTLA)
Verlauf nach Transfusionsreaktion
nach Transplantation / KMT
Z.B.: HTLA
High titre – low avidity
-„schlierige“,
mischfeldige und
ungleich
starke Reaktionen
-alle Zellen pos.
-Titer meist > 1:64
-aber: völlig irrelevant
-stören X-Probe
Ak, immer relevant
•
•
•
•
•
A und B, H bei Bombay
Duffy (Fy), Kell, Kidd (Jk), Rhesus
S, s, U
P, PP1Pk
Vel, Diego
Ak, manchmal relevant
•
•
•
•
•
Lan, Landsteiner-Wiener (Lw)
Cartwright (Yt), Cromer, Dombrock
Colton, Gerbich, Scianna
Junior (Jr), Indian
At(a)
Ak, relevant, wenn reaktiv bei 37°C
•
•
•
•
•
•
•
A1
H
M, N, P1
Lewis a (Le(a))
Lutheran (Lu)
Sid (Sd(a))
KAK (Transfusion?)
Ak, immer irrelevant
• Lewis b (Le(b))
• HLA (Bg(a-c))
• HTLA: Chido, Rodgers, Knops, McCoy,
Cost
• JMH(?)
• WAK (für Transfusion)