Transcript CEDIA® takrolimusanalys

CEDIA® takrolimusanalys
Endast för in vitro-diagnostisk användning
: 10008656
Avsedd användning
CEDIA takrolimusanalys är en medicinsk enhet för in vitro-diagnostik som är avsedd
för kvantitativ bestämning av takrolimus i humant helblod med hjälp av automatiska
analysatorer för klinisk kemi som hjälp vid hantering av patienter med njur- och
leverallograft vilka får takrolimusbehandling.
®
Sammanfattning och förklaring av testet
Takrolimus (FK506, Prograf®) är makrolidantibiotika av svampursprung, Streptomyces
tsukubaensis, med potent immunosuppressiv funktion enligt ordination för patienter
med njur- och levertransplantation.1 Takrolimus är en hämmare av kalcineurin, vilket är
en fosfatas i naturen och aktiverar förökning av T-cellerna.2-4 Vid cellhändelser binder
takrolimus en familj med bindningsprotein som kallas FKBP (FK506-bindningsproteiner)
och bildar därefter ett pentameriskt komplex av takrolimus, FKBP, kalcineuriner A och
B samt kalmodulin.2-5 Pentamerbildningen resulterar i inhibering av fosfatasaktiviteten
för kalcineurin, vilket krävs för att aktivera transkriptionella faktorer för transport in i
cellkärnan. På så vis försämras T-lymfocyternas genuttryck speciellt för cytokiner som
IL-2 och resulterar i immunosuppressiva effekter för patienterna.2-5
Takrolimus uppvisar en liknande effekt som ciklosporin vid koncentrationer som är
ungefär 100 gånger lägre än de för ciklosporin.1 Fördelningen av takrolimus mellan
helblod och plasma beror på flera faktorer, t.ex. hematokrit, läkemedelskoncentration och
koncentrationen av plasmaprotein. Kvoten blod/plasmakoncentration var i genomsnitt 35
(intervallet var 12 till 67).6-7 Takrolimus metaboliseras till stor del av det cytokroma P-450systemet, huvudsakligen CYP3A.8-11 Läkemedlet metaboliseras till 8 metaboliter (M-1 till
M-8) genom demetylering och hydroxylering. Metaboliterna M-1 och M-2 påvisades ha
betydande farmakologisk aktivitet i bioanalyser.11 Den genomsnittliga halveringstiden
för takrolimus in vivo uppskattas vara 48 timmar.8-11 Ett terapeutiskt intervall på 5 till
20 ng/ml i helblod rekommenderas i allmänhet för patienter med standardrisk för
avstötning.11-14 Det rapporterades även att det fanns stor variabilitet för en och samma
patient och mellan olika patienter vad gäller takrolimuskoncentrationer i helblod.15
Övervakning av takrolimus är därför viktigt för effektiv användning av läkemedlet för att
förhindra avstötning av njur- och leverallograft, särskilt för högriskpatienter. Mätning
av takrolimuskoncentrationer i helblod i kombination med andra laboratoriedata samt
klinisk utvärdering är den bästa metoden för att optimera immunosuppressiv verkan
och minimera biverkningarna för patienterna.
CEDIA takrolimusanalys använder rekombinant-DNA-teknik (US-patent Nr. 4708929) för
att producera ett unikt homogent enzymimmunoanalyssystem.16 Analysen är baserad
på enzymet -galaktosidas, vilket har utformats genetiskt i två inaktiva fragment
(enzymdonator och enzymacceptor). Dessa fragment återförenas spontant och bildar fullt
aktiva enzymer som i analysformatet klyver ett substrat och genererar en färgförändring
som kan mätas spektrofotometriskt.
I analysen tävlar läkemedlet i provet med takrolimusanalog som konjugerats till
enzymdonator (ED) för -galaktosidas om begränsade antal bindningsställen
för takrolimusanaloga antikroppar. Om läkemedlet finns i provet binds det till
läkemedelsanalogaantikroppen och låter ED-konjugatet fritt bilda aktiva enzymer
med enzymacceptor (EA). Om läkemedlet inte finns i provet binds läkemedelsanaloga
antikroppar till läkemedelsanalog som konjugerats till ED och hämmar återföreningen
av ED till EA och inget aktiv enzym bildas. Mängden aktivt enzym som bildas och den
resulterande absorbansförändringen är direkt proportionella mot mängden läkemedel
som förekommer i provet.
Reagenser
EA rekonstitutionsbuffert: Innehåller PIPES [piperazin-N,N-bis (2-etansulfonsyra)],
0,39 µg/ml monoklonala analoga anti-takrolimus antikroppar från mus,
stabiliseringsmedel och konserveringsmedel (1 x 26 ml).
1a EA reagens: Innehåller 0,171 g/l enzymacceptor (mikrobiell), buffertsalter och
konserveringsmedel, (1 x 26 ml).
2 ED rekonstitutionsbuffert: Innehåller MES [2-(N-morfolino) etansulfonsyrabuffert],
sekundär antikropp, rengöringsmedel och konserveringsmedel (1 x 11 ml).
2a ED reagens: Innehåller 6 nM (119 ng/ml) enzymdonator (mikrobiell) konjugerat till
takrolimusanalog, 3,27 g/l klorfenolrött -D-galaktopyranosid, stabiliseringsmedel
och konserveringsmedel (1 x 11 ml).
3 Extraktionsreagens: Innehåller 300 mM ZnSO4 (1 x 50 ml).
1
Ytterligare material: Hitachi streckkoder 1xR1- och 1xR2-streckkoder.
FÖRSIKTIGHET – VARNING: Reagenserna som medföljer CEDIA takrolimusanalys
innehåller mindre än 0,1 % natriumazid. Undvik kontakt med hud och slemhinnor. Spola
drabbade områden med rikliga mängder vatten. Uppsök omedelbart sjukvården om
reagenserna sväljs eller kommer i kontakt med ögonen. Natriumazid kan reagera med
bly eller koppar i ledningar och bilda potentiellt explosiva metallazider. Spola alltid
med rikliga mängder vatten vid kassering av sådana reagenser för att förhindra att
azid ansamlas. Rengör exponerade metallytor med natriumhydroxidlösning på 10 %.
Beredning och lagring av reagens
För preparering av lösningarna för Hitachi-analysatorer, se följande instruktioner. För alla
andra analysatorer, se det analysatorspecifika tillämpningsbladet. Preparera följande
lösningar med hjälp av kylskåpskalla (2–8 °C) reagenser och buffertar. Ta ut satsen ur
kylskåpet omedelbart före prepareringen av arbetslösningarna.
Preparera lösningarna i följande ordning för att minimera eventuell kontamination.
R2 enzymdonatorlösning: Anslut flaska 2a (ED reagens) till flaska 2 (ED
rekonstitutionsbuffert) med en av de medföljande adaptrarna. Blanda genom att försiktigt
vända upp och ned samtidigt som du kontrollerar att allt det lyofiliserade materialet från
flaska 2a överförs till flaska 2. Undvik skumbildning. Koppla loss flaska 2a och adaptern
från flaska 2 och kasta. Tillslut flaska 2 och låt stå cirka 5 minuter i rumstemperatur
(15–25 °C). Blanda försiktigt igen och anteckna rekonstitutionsdatum på flaskans etikett.
Placera flaskan direkt i reagensutrymmet på analysatorn eller i kylskåp (2–8 °C) och låt
stå 15 minuter före användning.
R1 enzymacceptorlösning: Anslut flaska 1a (EA reagens) till flaska 1 (EA
rekonstitutionsbuffert) med en av de medföljande adaptrarna. Blanda genom att försiktigt
vända upp och ned samtidigt som du kontrollerar att allt det lyofiliserade materialet från
flaska 1a överförs till flaska 1. Undvik skumbildning. Koppla bort flaska 1a från adaptern
och kassera. Tillslut flaska 1 och låt stå cirka 5 minuter i rumstemperatur (15–25 °C).
Blanda försiktigt igen och anteckna rekonstitutionsdatum på flaskans etikett. Placera
flaskan direkt i reagensutrymmet på analysatorn eller i kylskåp (2–8 °C) och låt stå
15 minuter före användning.
Extraktionslösning: Tillsätt exakt 10 ml rumstempererad extraktionsreagens till en
ren, torr, lufttät flaska. Tillsätt exakt 40 ml metanol av HPLC-grad med ≥ 99,8 % renhet
till flaskan och blanda försiktigt. Märk detta ”Takrolimus arbetsextraktionslösning”.
Anteckna aktuellt datum och utgångsdatum (2 veckor från tillverkningsdatum) på
etiketten. Förvaras i rumstemperatur.
Anmärkning 1: Komponenterna som medföljer i detta kit är avsedda för användning
som en integrerad enhet. Blanda inte komponenter från olika satsloter av CEDIA
takrolimusanalys eller andra CEDIA-satser.
Anmärkning 2: Undvik korskontaminering av reagenser genom att stämma av
reagensförslutningar mot korrekt reagensflaska. Lösningen R2 (ED-reagens) ska ha
gul-orange färg. En mörkröd eller lilaröd färg anger att reagenset har kontaminerats
och måste kasseras.
Anmärkning 3: Lösningarna R1 och R2 måste ha samma temperatur som analysatorns
reagensförvaringsutrymme innan analysen genomförs. Ytterligare information finns i
det analysatorspecifika tillämpningsbladet.
Anmärkning 4: Preparera R2-lösningen före R1-lösningen.
Anmärkning 5: Säkerställ stabiliteten för det rekonstituerade EA-reagensen genom att
skydda det mot utdragen kontinuerlig exponering för starkt ljus.
Förvara komponenterna vid rätt temperatur enligt följande. FÅR INTE FRYSAS.
Information om stabilitet och utgångsdatum för oöppnade komponenter finns på
kartongens eller flaskans etiketter.
R1 lösning: 60 dagar vid kylförvaring i analysatorn eller vid 2–8 °C.
R2 lösning: 60 dagar vid kylförvaring i analysatorn eller vid 2–8 °C.
Extraktionslösning: 2 veckor i rumstemperatur (15–25 °C).
Provtagning och -hantering
Använd helblod som behandlats med EDTA. Var noga med att hålla provet intakt från
tidpunkten då det tappas tills det analyseras. Proverna ska märkas med både tidpunkten
för blodprovstagningen och tidpunkten för senaste läkemedelsadministration. Proverna
ska förslutas och analyseras inom 7 dagar vid förvaring vid 2–8 °C eller inom 2 månader
vid förvaring vid <-70 °C.6, 10-11 Undvik upprepad infrysning och upptining. Undvik
skumbildning i proverna.
Ytterligare material som krävs (men som inte tillhandahålls):
Preparering av prover
Katalognr. 10008666 - CEDIA takrolimuskalibratorsats
Automatisk analysator för klinisk kemi
Metanol, HPLC-grad (> 99,8 % renhet)
Mikrocentrifugrör med rund botten
Takrolimuskontroller (för rekommendationer, kontakta Microgenics tekniska support)
Anmärkning: Följ instruktionerna och hanteringsrekommendationerna i leverantörens
bipacksedel, om sådan medföljer, för kalibratorer och kontroller.
Försiktighetsåtgärder och varningar
Endast för in vitro-diagnostiskt bruk: Utöva de normala försiktighetsåtgärder som krävs
för hantering av alla laboratoriereagenser.
FÖRSIKTIGHET – VARNING: Material med mänskligt ursprung har testats för HIV1 och 2,
Hepatit B och Hepatit C med en av FDA godkänd metod och resultatet var negativt. Men,
eftersom ingen testmetod kan utesluta potentiell risk för infektion med absolut säkerhet,
måste materialet hanteras precis lika försiktigt som patientprovet. I händelse av exponering
skall direktiven från ansvariga hälsovårdsmyndigheter följas.
1. Låt kalibratorer, kontroller och patientprover uppnå rumstemperatur.
2. Blanda proverna (kalibratorer, kontroller eller patientprover) grundligt genom att
vagga dem i 15–20 minuter.
Provextraktion
Anmärkning: Bekanta dig före generering och utfärdande av patientresultat med
användning av CEDIA takrolimusanalys, med extraktionsproceduren och säkerställ
att extraktionslösningen inte har gått ut, dvs. att den används inom 2 veckor efter
konstitutionen.
Förekomsten av patienter som har antikroppar mot E. coli -galaktosidas är extremt
låg. Men några prover som innehåller sådana antikroppar kan producera felaktigt höga
koncentrationer av takrolimus som inte stämmer med patientens kliniska profil. Kontakta
Microgenics tekniska service om du misstänker att detta förekommer.
1.
2.
3.
4.
5.
Pipettera exakt 200 µl av provet till ett mikrocentrifugeringsrör med rund botten.
Pipettera exakt 200 µl av extraktionslösningen till mikrocentrifugeringsröret.
Vortexblanda med maximal hastighet omedelbart i 15–20 sekunder.
Låt mikrocentrifugeringsröret stå i rumstemperatur i 5–7 minuter.
Centrifugera i en mikrocentrifug i 5 minuter vid 13 000 varv per minut (ca 15 000–
16 000 x g).
6. Dekantera supernatanten i en provkopp och kör omedelbart mätningen.
Som vid alla analyser som använder musantikroppar finns möjligheten för interferens
med humana anti-mus antikroppar (HAMA). Prover som innehåller sådana antikroppar
kan potentiellt producera felaktigt höga koncentrationer av takrolimus som inte stämmer
med patientens kliniska profil. Kontakta Microgenics tekniska service om du misstänker
att detta förekommer.
Anmärkning: Hitachi-analysatorer
Om analysatorn inte läser av streckkoden kan den numeriska sekvensen på
streckkodsetiketten föras in manuellt via tangentbordet.
Begränsningseffekt för samadministrerade läkemedel på
takrolimuskoncentrationen
CEDIA takrolimusanalys är avsedd för användning på automatiska analysatorer. Data
om specifika tillämpningars prestanda finns på fil hos Microgenics Corporation.17
Takrolimus metaboliseras till stor del av isoenzymet CYP3A4 i tarmen och levern. Därför
kan absorptionen och den efterföljande elimineringen av systemiskt absorberat takrolimus
påverkas av läkemedel som påverkar detta isoenzym. Inhibitorer av CYP3A4 kan minska
metabolismen för takrolimus och öka takrolimuskoncentrationerna medan inducerare av
CYP3A4 kan öka metabolismen för takrolimus och minska takrolimuskoncentrationerna.
Följande läkemedel är kända för att påverka takrolimuskoncentrationen antingen genom
att öka absorptionen, minska clearence eller båda. Denna lista är inte uttömmande.7
Analysprocedur
Kalibrering
CEDIA takrolimusanalys producerar en standardkurva med användning av tillämpliga
CEDIA takrolimus satskalibratorer. Före analys av patientprover kan du validera
analysens kalibrering genom att testa kontroller med de återhämtningsområden som
fastställts för CEDIA takrolimusanalys.
Läkemedel som kan öka takrolimuskoncentrationen är exempelvis:
Immunosuppressiva läkemedel: ciklosporin
Kalciumkanalblockerare: diltiazem, nikardipin, verapamil, nifedipin
Medel mot svamp: klotrimazol, flukonazol, ketokonazol, itrakonazol
Makrolidantibiotika: klaritromycin, erytromycin, troleandomycin
Gastrointestinala prokinetiska medel: cisaprid, metoklopramid
Övriga: bromokriptin, cimetidin, danazol, HIV-proteashämmare (t.ex. ritonavir, indinavir),
etinylestradiol, metylprednisolon, omeprazol, nefazodon
Anmärkning: Kort för kalibratorvärdestilldelning ingår i varje kalibratorsats. Innan du
använder en ny sats kalibratorer kontrollerar du kemiparametrarna för att säkerställa
att kalibratorkoncentrationerna stämmer med värdena på värdetilldelningskortet.
Kalibreringsfrekvens
Omkalibrering rekommenderas
• Efter byte av reagensflaska
• Efter byte av kalibrator- eller reagenslot eller -sats
• Efter att månatligt instrumentunderhåll genomförts
• Vid behov enligt kvalitetskontrollprocedurer
Läkemedel som kan minska takrolimuskoncentrationen är exempelvis:
Antiepileptika: karbamazepin, fenobarbital, fenytoin
Antibiotika: rifampin, rifabutin
Örtpreparat: Johannesört
Rapporterbart område
Begränsningar – differenser och variation för analysen
Rapporterbart intervall för CEDIA takrolimusanalys är 2,0 ng/ml till 30 ng/ml takrolimus.
Minsta detekterbara koncentration av takrolimus i helblod för CEDIA takrolimusanalys
är 2,0 ng/ml.
Olika immunoanalyser kan ge olika resultat för samma prov på grund av analysspecifika
variationer i metabolitens korsreaktivitet. Patienter med nedsatt clearance kan ha den
största variationen. För sådana patienter kan användning av denna analys stödjas
med en kromotografisk metod som är mer specifik för huvudföreningen. Givet den
potentiella spridningen för jämförelsen av CEDIA takrolimusanalys och LC/MS för
detektering av takrolimus i helblod är det viktigt för varje laboratorium att etablera sitt
eget terapeutiska intervall.
Prover utanför intervallet
Prover som kvantiterar > 30 ng/ml takrolimus kan rapporteras som koncentration
> 30 ng/ml takrolimus eller spädas med en del ursprungligt prov med en del låg kalibrator för
att analyseras om. Värdet som erhålls vid omanalyseringen ska härledas på följande sätt:
Faktiskt värde = 2 x utspätt värde
Förväntade värden
Det rekommenderade intervallet för takrolimuskoncentrationer i helblod för effektiv
postoperativ hantering av transplantationspatienter med njur- och leverallograft är
5 ng/ml till 20 ng/ml med användning av LC/MS.11-14 Optimalt terapeutiskt intervall för
takrolimus i helblod har inte fastställts med denna analys.
Prover med ett resultat under minsta detekterbara koncentration för analysen ska
rapporteras som < 2,0 ng/ml takrolimus.
Kvalitetskontroll och kalibrering
Resultat och förväntade värden
Patientens aktuella och tidigare medicinska tillstånd, individuella skillnader i känslighet
för immunosuppressiva och toxiska effekter av takrolimus, samadministrering av andra
immunosuppressiva medel, tid efter transplantation och ett antal andra faktorer kan
ge upphov till olika krav på optimala blodkoncentrationer för takrolimus. Individuella
takrolimuskoncentrationer ska inte användas som enda kriterium för att ändra
behandlingen. På grund av heterogeniteten för patientens kliniska status bör klinikerna
fastställa ett önskvärd terapeutiskt hanteringsintervall, baserat på deras egen erfarenhet
samt varje patients kliniska krav. Dessutom kan takrolimuskoncentrationerna variera
enligt vilken metod som används. Konverteringsfaktorer ska inte användas för att
förutsäga värden för individuella patienter för en metod med hjälp av resultaten från
en annan metod. Dessutom ska takrolimuskoncentrationerna för enskilda patienter
bestämmas med hjälp av en enda konsekvent metod för att minimera förvirrande effekter
som är förknippade med korsreaktivitet och igenkänning av metaboliter.
Se tillämplig användarhandbok eller analysatorspecifika protokoll för detaljerad
beräkningsinformation.
Specifika prestandaegenskaper
Varje laboratorium bör etablera sin egen godkända kontrollfrekvens. God laboratoriesed
rekommenderar att minst två koncentrationer (t.ex. låga och höga medicinska
beslutspunkter) kvalitetskontroll ska testas varje dag som patientprover analyseras
och varje gång en kalibrering utförs. Övervaka alla trender för och förändringar av
kontrollvärdena. Om några trender eller förändringar detekteras eller om kontrollen
inte återhämtas inom det angivna intervallet, granska alla driftsparametrar. Kontakta
Microgenics tekniska support för ytterligare hjälp och rekommendationer om lämpligt
kontrollmaterial.
Anmärkning: Utvärdera kontrollmål och -intervall på nytt efter varje byte av reagenslot eller
-sats.
Typiska prestandadata som erhållits för CEDIA takrolimusanalys återfinns nedan.17 Om
ingenting annat anges genomfördes alla analyser enligt analysproceduren som återges
här och med användning av analysatorn Hitachi 917. Resultaten kan skilja sig från dem
som erhållits i enskilda laboratorier. Ytterligare analysatorspecifika prestandadata
återfinns i det analysatorspecifika tillämpningsprotokollet. Du kan också kontakta
Microgenics tekniska support för hjälp.
Begränsningar – endogena substanser
Prestandaegenskaper för CEDIA takrolimusanalys har inte fastställts för andra
kroppsvätskor än humant EDTA-helblod.
Acceptanskriterier: Prestanda bedöms accepterbar när återhämtningen är ±1,5 ng/ml
takrolimus vid initiala koncentrationer på < 10 ng/ml takrolimus eller ±10 % av initiala
koncentrationer på > 10 ng/ml takrolimus.
Ikterus (gulsot): Ingen betydande interferens från ej konjugerat bilirubin upp till en
koncentration på 60 mg/dl.
Lipemi: Ingen betydande interferens från triglycerider upp till en koncentration på
1 500 mg/dl och från kolesterol upp till 500 mg/dl.
Totalt protein: Ingen betydande interferens från albumin upp till en koncentration på
12 g/dl och från -globulin upp till 12 g/dl.
Reumatoid faktor: Ingen betydande interferens från reumatoid faktor upp till en
koncentration på 573 IU/ml.
Hematokritintervall: Det finns inte någon betydande interferens när hematokrit ligger
mellan 15 % och 60 %.
EDTA-koncentration: Helblodsprover som ska testas ska tappas i EDTA-rör (lila kork).
EDTA-koncentrationen får inte vara mer än 4,5 mg/ml. Därför måste prover som tappats
i rör med lila kork uppta minst 1/3 av provtagningsröret för att säkerställa att EDTAkoncentrationen är mindre än 4,5 mg/ml. EDTA-koncentrationer på mer än 4,5 mg/ml
kan påverka kvantifiering.
Precision
Precisionsstudier inom analysen och mellan analyser (reproducerbarhet) genomfördes
med användning av patienthelblodprover och toppade prover. Resultaten för
precisionen inom analysen och den totala analysprecisionen (fastställd genom
21 individuella körningar under 11 dagar enligt beskrivning i ett NCCLS-modifierat
replikationsexperiment, EP5-A) är följande:
2
Precisionen inom analysen och totalt (reproducerbarhet)
Prov
Patient 1
Patient 2
Patient 3
Toppning 1
Toppning 2
Toppning 3
n
126
126
126
126
126
126
Standard­
avvikelse
(SD)
0,43
0,43
0,47
0,32
0,35
0,43
Medelv
6,30
9,23
15,18
5,33
10,54
21,01
Inom
Variations­
koefficient
(CV %)
6,80
4,68
3,12
5,97
3,28
2,04
Standard­
avvikelse
(SD)
0,49
0,56
0,65
0,48
0,49
0,72
Samadministrerade immunosuppressiva medel tillsattes till helblodsprover som innehöll
cirka 15 ng/ml takrolimus och testades för korsreaktivitet. Resultaten presenteras i
tabellen nedan.
Totalt
Variations­
koefficient
(CV %)
7,80
6,06
4,26
8,90
4,69
3,40
Nr.
1
2
3
4
5
6
Samadministrerade
immunosuppressiva
medel
Ciklosporin
Sirolimus
Mykofenolsyra
Prednison
Hydrokortisol
Prednisolon
Testad
koncentration
(ng/ml)
10 000
30
100 000
100 000
100 000
100 000
Korsreaktivitet
(%)
0,0
0,7
0,0
0,0
0,0
0,0
Linjäritet
För att utvärdera analysens linjäritet späddes ett högt takrolimustoppat helblodsprov med
ett takrolimusfritt blodprov för att producera en serie prover över analysens dynamiska
intervall. Den procentuella återhämtningen bestämdes genom att dela den observerade
takrolimuskoncentrationen med den förväntade koncentrationen. De förväntade
koncentrationerna bestämdes med hjälp av den höga testade koncentrationen gånger
en spädningsfaktor.
% högt
prov
Förväntat
värde
(ng/ml)
100
80
60
40
20
0
28,9
23,1
17,3
11,5
5,8
0,0
Följande föreningar tillsattes till takrolimusfria helblodsprover och analyserades
för korsreaktivitet med hjälp av CEDIA takrolimusanalys. Som följande tabell
visar, observerades inte någon korsreaktivitet för någon förening vid den testade
koncentrationen.
Korsreaktivitet med vanliga läkemedel
Observerat
värde
Återhämtning
(ng/ml)
(%)
Förening
100,0
103,4
104,7
107,7
106,2
--
28,9
23,9
18,1
12,4
6,1
0,0
Acetaminofen
Acykloguanosin
Amikacin
Ampicillin
Atenolol
Azatioprin
Cimetidin
Digitoxin
Digoxin
Disopyramid
Erytromycin
Fenobarbitol
Fenytoin
Flukonazol
Furosemid
Ganciklovir
Gentamicin
Hydroklorotiazid
Ibuprofen
Itrakonazol
Kanamycin A
Kanamycin B
Karbamazepin
Ketokonazol
Kinidin
Kloramfenikol
Lidokain
Metoklopramid
Metylprednisolon
Morfinsulfat
MPA glukuronid
N-acetylprokainamid
Naproxen
Nifedipin
Penicillin
Prazosin
Primidon
Prokainamid
Propranolol
Rifampicin
Salicylsyra
Spectinomycin
Streptomycinsulfat
Teofyllin
Tobramycin
Triamteren
Valproinsyra
Vankomycin
Verapamil
Återhämtning
För att utvärdera återhämtningen för CEDIA takrolimusanalys tillsattes takrolimus
till normala, takrolimusfria helblodsprover samt till patientprover som innehöll
takrolimus. Duplikat för varje prov analyserades. Den procentuella återhämtningen
bestämdes genom att dela den observerade dosen för varje prov med den förväntade
koncentrationen för tillsatt takrolimus plus ursprungligt takrolimus i proverna.
Prov A
Prov B
Prov C
Prov D
n
Förväntat
värde
(ng/ml)
Observerat
värde
(ng/ml)
Återhämtning
(%)
20
20
20
20
5,0
10,0
15,0
25,0
5,1
9,6
15,8
25,3
101,0
96,5
105,2
101,2
Specificitet
Prover som innehåller takrolimusmetaboliter tillsattes till helblodsprover som innehöll
cirka 12 ng/ml takrolimus. Proverna testades av analysen och resultaten jämfördes
med en metabolitfri kontroll. Korsreaktiviteten för metaboliterna beräknades med hjälp
av formeln:
uppmätt koncentration - kontrollens koncentration
tillsatt metabolitkoncentration
x 100 %
Resultaten visas i följande tabell.
Korsreaktivitet med takrolimusmetaboliter
Takrolimusmetaboliter
M-1,13-O-demetyl
M-2, 31-O-demetyl
M-3, 15-O-demetyl
M-4, 12-Hydroxyl
M-5,15,31-O-didemetyl
M-6,13,31-O-didemetyl
Förv
konc
(ng/ml)
Obs
konc
(ng/ml)
Korsreaktivitet
(%)
20
20
20
ET
ET
20
7,5
0,9
0,9
ET
ET
0,6
37,7
ED
ED
ET
ET
ED
Testad
koncentration
(ng/ml)
Uppmätt
koncentration
(ng/ml)
Korsreaktivitet
(%)
100 000
100 000
100 000
100 000
40 000
100 000
100 000
10 000
10 000
100 000
100 000
100 000
100 000
100 000
100 000
100 000
100 000
40 000
100 000
100 000
100 000
100 000
100 000
100 000
100 000
100 000
100 000
100 000
100 000
100 000
100 000
100 000
100 000
100 000
100 000
100 000
100 000
100 000
40 000
60 000
100 000
100 000
100 000
100 000
100 000
100 000
100 000
100 000
100 000
0,8
-0,5
0,8
0,8
-0,6
0,6
0,1
-0,2
0,0
0,7
0,3
-2,0
-2,1
0,6
-0,6
-0,4
0,1
-0,5
-0,6
0,0
0,1
-0,1
0,6
-0,2
0,0
0,4
0,3
0,0
-0,8
-0,6
-1,3
-1,5
0,7
-0,2
-1,6
0,1
-0,3
0,2
0,2
-0,7
-1,2
-1,3
-0,5
-1,2
-2,2
-1,4
-2,0
-2,0
-1,7
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
Känslighet
Den funktionella känsligheten för CEDIA takrolimusanalys är 2,0 ng/ml och denna figur
fastställdes som analytkoncentrationen med en koefficientvariation på cirka 20 %.
ED – Ej detekterbart
ET – Material ej tillgängligt
3
Metodjämförelse
En jämförelse genomfördes mellan CEDIA takrolimusanalys (y) LC-MS/MS och MEIA.
Denna metodjämförelse genomfördes med hjälp av prover (koncentrationsintervall från
0 till 30 ng/ml takrolimus) som erhållits från lever- och njurtransplantationspatienter.
CEDIA Transplantattyp
kontra
Njure och
LC-MS/
lever
MS
Njure
LC-MS/
MS
Lever
LC-MS/
MS
Lever
MEIA
n
Lutning
Intercept
Korrelation (r)
187
1,190
0,70
0,9643
118
1,157
1,01
0,9777
69
1,193
1,04
0,9616
50
0,945
0,28
0,8228
Referenser
1. Kino T, Hatanaka H, Myata S, et al. FK506, a novel immunosuppressant isolated from
a streptomyces II. Immunosuppressive effect of FK506 in vitro. J Antibiotics 1987;
40:1256-1265.
2. Bierer BE, Jin YJ, Fruman DA, et al. FK506 and rapamycin: molecular probes of
T-lymphocyte activation. Transplant Proc 1991;23:2850-2855.
3. Schreiber SL. Chemistry and biology of the immunophilins and their
immunosuppressive ligands. Science 1991;251:283-287.
4. Thomson AW, Bonham CA, and Zeevi A. Mode of action of tacrolimus (FK506): molecular
and cellular mechanisms. Ther Drug Monit 1995;17:584-591.
5. Griffith JP, Kim JL, Kum EE, et al. X-ray structure of calcineurin inhibited by the
immunophilin-immunosuppressant FKBP12-FK506 complex. Cell 1995;82:507-522.
6. Jusko WJ, Thomson AW, Fung W, et al. Consensus document; therapeutic monitoring
of tacrolimus (FK506). Ther Drug Monit 1995;17:606-614.
7. Physicians’ Desk Reference,58th ed. Thomson PDR at Montvale, NJ. 2004; Prograf®:
1323-1327.
8. Lhoest GJJ, Maton N, Latinne D, et al. 15-demethyl FK506 and 15,
31-demethyl FK506 from human liver microsomes: isolation, identification (by
fast bombardment mass spectrometry and NMR), and evaluation of in vitro
immunosuppressive activity. Clin chem. 1994:50:740-744.
9. Gonschior AK, Christians U, Winkler M, et al. Tacrolimus (FK506)
metabolite patterns in blood from liver and kidney transplant patients.
Clin Chem. 1996;42:1426-1432.
10. Alak AM. Measurement of tacrolimus (FK506) and its metabolites: a review of assay
development and application in therapeutic drug monitoring and pharmacokinetic
studies. Ther Drug Monit.
1997;19:338-352.
11. Jusko WJ. Analysis of tacrolimus (FK506) in relation to therapeutic drug monitoring.
Ther Drug Monit. 1995:17:596-601.
12. Busuttil RW, Klintmalm GB, Lake JR, et al. General guidelines for the use of tacrolimus
in adult liver transplant patients. Transplantation 1996;61:845-847.
13. van Hooff JP, Boots JM, van Duijnhoven EM, et al. Dosing and management guidelines
for tacrolimus in renal transplant patients. Transplant Proc. 1999;31:54S-57S.
14. Oellerich M, Armstrong VW, Schutz E, and Shaw LM. Therapeutic drug monitoring
of cyclosporine and tarcolimus. Clin Biochem.
1998;31:309-316.
15. Staatz CE, Willis C, Taylor PJ, and Tett SE. Population pharmacokinetics of tacrolimus
in adult kidney transplant recipients. Clin Pharmacology & Ther. 2002;72:660-669.
16. Henderson DR, Friedman SB, Harris JD, et al. CEDIA, a new homogeneous
immunoassay system. Clin chem.. 1986;32:1637-1641.
17. Data on file at Microgenics Corporation.
Tillverkare:
Microgenics Corporation
46360 Fremont Blvd.
Fremont, CA 94538-6406 USA
USA, avgiftsfritt: 800-626-0690
Auktoriserad representant inom EU.:
Microgenics GmbH
Spitalhofstrasse 94
D-94032 Passau Tyskland
Tel: +49 (0) 851 886 89 0
Fax: +49 (0) 851 886 89 10
Andra länder:
Kontakta din lokala Microgenics-representant.
CEDIA är ett registrerat varumärke som tillhör Roche Diagnostics. 4
10008692-2_SV