Transcript Práctica 5 Hema

LAB HEMATOLOGÍA 2011

Pueden ser: Manuales o automatizados.

Materiales:
 Cámara de Neubauer
 Pipetas de Thoma
 Tips
 Pipeta automática
 Diluyente
 Microscopio
 Aspirador o pipetor.
CÁMARA DE NEUBAUER

Esta hecha de vidrio óptico. Especial de precisión.

Base rectangular y gruesa.

En el tercio medio se hallan cuatro ranuras longitudinales.

La superficie del puente central es más profunda que los dos
puentes exteriores.

En el puente central (fondo de la cámara) están grabadas
las redes de conteo.

Cuando se coloca la cubrecámara:
PIPETAS THOMA

Pipetas de leucocitos  perla blanca
0.5

11
Pipetas de rojos  perla roja
0.5
101
DILUCIONES

Blancos: 1:20 (0.5 + 9.5 )
 10 uL+190 uL/10 uL= 20
 20 uL+380 uL/20 uL= 20

Rojos: 1: 200 (0.5 + 99.5)
 5 uL+ 995 uL/10 uL = 200



Cantidades exactas
Evitar burbujas
Mezclar gentilmente y descartar 3 gotas
Soluto + solvente
soluto
Colocar la punta de la
pipeta de Thoma en el
borde
 Empezar a llenar la
cámara y por capilaridad
se llena la hendidura.
 Evitar el rebalse de la
muestra.
 Sedimentar 2-3 min.
 Contar

RECUENTO CELULAR
ACEPTABLE: diferencia 10%
LECTURA DE LA CÁMARA


Para recuento celular de góbulos blancos
enfocar cámara en 10X.
Para recuento celular de glóbulos rojos
enfocar cámara en 40X en el cuadrante de
en medio.
CÁLCULO

RG/mm3 =
# células * FD * inverso de volumen
# cuadrantes contados

20*10/4 = 50 (FACTOR BLANCOS)

200*250/5 = 10,000 (FACTOR ROJOS)
EJEMPLOS

Leucocitos
1. Células contadas: 161 leucocitos
2. Superficie recontada: 4 cuadrados
3. Volumen del cuadro: (1mm x 1 mm x 0.1 mm) 0.1 mm3
4. Dilución 1 : 20
R/ 8,050 GB/mm3

Eritrocitos
1. Células contadas: 507 eritrocitos
2. Superficie recontada: 5 cuadrados
3. Volumen del cuadro: (0.2 mm x 0.2 mm x 0.1 mm) 0.004 mm3
4. Dilución 1 : 200
R/ 5.07*106 GR/mm3
LIMPIEZA DE LA CÁMARA

Limpiar con agua o con una solución
limpiadora suave.

Secar con un paño blando y acetona.

Las pipetas de Thoma se limpian con agua y
se secan con acetona.
OBSERVACIONES

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
Diafragma del condensador cerrado en su mayoría
Diferencia < 10 células entre cuadrantes
Realizar dobles determinaciones
Tener en cuenta que la cámara no esté reseca
Cámara limpia
Cubrecámara colocada correctamente
No tener burbujas de aire en el relleno de la
cámara/pipeta
Cámara sobrellenada
Tiempo de sedimentación corto