Transcript diagnostico de laboratorio en microbiologia

DIAGNOSTICO DE LABORATORIO EN
MICROBIOLOGIA
{
UNIVERSIDAD DE SANTANDER UDES
MEDICINA VETERINARIA.
MICROBIOLOGIA VETERINARIA.
JOHN JAIRO URIBE GONZALEZ








OBJETIVOS GENERALES
EVALUAR ASPECTOS DE LA SELECCIÓN,
RECOLECCION Y TRASNPORTE DE MUESTRAS.
CRITERIOS DE IDENTIFICACION DE BACTERIAS
PATOGENAS.
CARACTERISTICAS DE CULTIVOS Y PRUEBAS
BIOQUIMICAS.
DETRMINAR AGENTES ANTIMICROBIANOS
MECANISOS DE ACCION ANTIMICROBIANA
RESISTENCIA ANTIMICROBIANA
COLONIZACION, INVASION Y ENFEREMEDAD
CLINICA.


IDENTIFICACION DEL AGENTE
ETIOLOGICO.
DETRMINAR SUCEPTIBILIDAD
ANTIMICROBINA.
•
{
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•
•
•
•
HISTORIA CLINICA
EDAD
SEXO
ESPECIE
NUMERO DE ANIMALES
AFECTADOS.
TRATAMIENTO ADMINISTRADO.





LAS MUESTRAS DEBEN OBTENERSE DE
ANIMALES VIVOS O ANTES DE CAMBIOS
AUTOLITICOS O PUTREFACCION.
COLONIZACION DEL PATOGENO,
MINIMIZANDO LA CONTAMINACION.
REFRIGERACION DE MUESTRAS.
CONTENEDORES INDEPENDIENTES A
PRUEBA DE ESCAPES.
IDENTIFICACION DEL ANIMAL, TIPO DE
MUESTRA Y FECHA DE RECOLECCION.
{
EXACTITUD Y VALIDEZ DE
LOS RESULTADOS ESTA
INFLUENCIADA POR LA
RECOLECCION Y ENVIO DE
LAS MUESTRAS.

•
•
•
•
TINCION DE GRAM: GRAM POSITIVAS (VIOLETAS) GRAM NEGATIVAS (ROJO).

CRISTAL VIOLETA

LUGOL DE GRAM

DECOLORANTE DE GRAM

SAFRANINA.

GRAM POSITIVAS (VIOLETAS).

GRAM NEGATIVAS (ROJO).
GIEMSA: OBSERVACION Rickettsias y Trypanosomas.
•
COLORANTE GIEMSA
•
ALCOHOL ABSOLUTO
•
XILOL
FUCSINA CARBONICA: RECONOCIMIENTO Campylobacter y fusobacterium, color
rojo.
•
FENOL
•
ALCOHOL AL 1005%
•
FUCSINA BASICA
•
AGUA DESTILADA.
AZUL DE METILENO POLICROMO: Bacillus anthracis en ESP, coloracion azul.
TINCION ZIELHL NEELSEN: Bacilos acido alcohol resistentes como mycobacterias.
•
FUCSINA BASICA
•
CALENTAR HASTA EMISION DE VAPORES 5 MIN.
•
DECOLORAR POR 3 MIN.
•
AZUL DE METILENO 1 MIN.
•
{
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•
•
•
TECNICAS DE COLORACION
PRESENCIA DE BACTERIAS
PATOGENAS SE CONFIRMA CON
EXAMEN DE FROTIS TEÑIDOS.
CULTIVOS CELULARES.
PRUEBAS BIOQUIMICAS.
METODOS INMUNOLOGICOS.
PRUEBAS MOLECULARES

•
AGAR NUTRITIVO:
•
MEDIO BASICO, DEMSTRACION MORFOLOGICA Y PIGMENTACION,
RECUENTO DE VIABILIDAD.


SELECTIVO DE ENTEROBACTERIAS Y ALGUNAS GRAM NEG.
EVALUACION DE FERMENTADORES DE LACTOSA (ROSADAS) Y NO
FERMENTADORES.

CALDO SELENITO:
ENRIQUECIMIENTO SELECTIVO, AISLAMIENTO Salmonella A PARTIR
DE MUESTRAS CON MICROORGANISMOS ENTRICOS GRAM NEG.

•
AGAR SANGRE: CRECIMIENTO PATOGENAS, AISLAMIENTO
PRIMARIO, EVALUACION HEMOLISISNAS.
AGAR MAcCONKEY:
AGAR CHOCOLATE:
FACTORES DE CREMIENTO (XYV) PARA AISLAMIENTO Haemophilus.

AGAR VERDE BRILLANTE:

AGUA PEPTONADA:
MEDIO INDICADOR PARA Salmonella (rosado).
ENRIQUECIMIENTO NO SELECTIVO, POTENCIAMIENTO DEL
CRECIMIENTO DE MICROORGANISMOS EN BAJO NUMERO.
{
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•
•
•
•
•
SELECCIÓN MEDIO
CONDICIONES ATMOSFERICAS
CARACTERISTICAS Y LAS REACCIONES
PERMITEN IDENTIFICACION
PRELIMINAR.
CRITERIOS DE INTIFICACION
MORFOLOGIA Y COLOR DE LAS
COLONIAS.
PRESENCIA O AUSENCIA DE HEMOLISIS
COLORACION DE GRAM
MOVILIDAD
CAPACIDAD DE CRECER EN MAcCONKEY
REACCION EN PRUEBAS DE OXIDACION Y
FERMENTACION.
REACCION PRUEBAS DE CATALASA Y
OXIDASA.
PRUEBA
INDICADOR
OBSERVACION
•
AZUCAR EN AGUA
PEPTONADA
ANDRADE
Streptococcus
HIERRO TRIPLE
AZUCAR TSI.
ROJO DE FENOL
Salmonella
SULFURO DE
HIDROGENO
COMPUESTOS DE
HIERRO
Salmonella y Brucella
DECARBOXILASA
PURPURA DE
BROMOCRESOL
Enterobacterias
UREASA
ROJO DE FENOL
Proteus y
corynebacterium
PRUEBA DE INDOL DE
ROJO DE METILO Y
VOGES PROSKAUER
REACTIVO DE KOVAC
Y ROJO DE METILO
OXIDACION
ACETONINA
UTILIZACION DEL
CITRATO
AZUL DE
BROMOTIMOL
Enterobacterias
{
•
•
•
Enterobacterias
TECNICAS BIOQUIMICAS
CATALASA: AEROBIOS Y
ANAEROBIOS
FACULTATIVOS,
PRESENCIA CITOCROMO
OXIDASA.
RELACIONAN LAS
ACTIVIDADES
CATABOLICAS Y UN
INDICADOR PARA
DEMOSTRAR UTILIZACION
DEL SUSTRATO.
RANGO DE AZUCARES
PERMITE IDENTIFICACION.
METODOS COMERCIALES
API.



HIBRIDACION DE ACIDOS NUCLEICOS Y
REACCION EN CADENA DE LA
POLIMERASA (PCR).
HIBRIDACION UTILIZO SONDAS
SINTETICAS DE ACIDOS NUCLEICOS QUE
SE APLICAN AL MATERIAL GENETICO DEL
PATOGENO. SONDAS ARN – ADN.
NUMERO PEQUEÑO DE BACTERIAS SE
UTILIZA PCR, AMPLIACION ACIDO
NUCLEICO DEL MICROORGANISMO,
LUEGO SE UTILIZAN PATRONES DE ADN O
ARN, EL PRODUCTO SE IDENTIFICA POR
ELECTROFORESIS.
TECNICAS INMUNOLOGICAS :
LA SEROTIPIFICACION ES LA IDENTIFICACION
INMUNOLOGICA DE LOS ANTIGENOS
BACTERIANOS. UTILIZAN ANTICUERPOS
FLUORESCENTES INMOVILIZADOS EN FASES
SOLIDAS ELISA.
TIPIFICACION DE FAGOS:
ESPECIFICOS PARA # LIMITADO DE ESPECIES
BACTERIANAS SUCEPTIBLES. UTILIZADA EN
INVESTIGACION EPIDEMIOLOGICA.
TECNICAS MOLECULARES:
{

TECNICAS SEROLOGICAS
LA EXPOSICION A UN MICROORGANISMO
PERMITE PRODUCCION DE ANTICUERPOS.
LA EVIDENCIA DE ESTOS ANTICUERPOS
EVIDENCIA LA EXPOSICION A UN AGENTE
INFECCIOSO.
AGENTES ANTIMICROBIANOS
{
Bacillus colistinus
Colistina o polimixina E.
Bacillus polymyxa
Polimixina B
Bacillus subtilis
Bacitracina
Cephalosporium spp
Cefalosporinas
Micromonosporas purpurea
Monobactamos
Penicillium notatum
Gentamicina
Penicillium griseofulvin
Penicilina G
Streptomyces spp
Estreptomicinas y Tetraciclinas.
Streptomyces cattleya
Carbapenemos
Streptomyces erythreus
Eritromicina

ANTIBIOTICOS:
METABOLITOS MICROBIANOS DE BAJO
PESO MOLECULAR O AGENTES
ANTIMICROBIANOS SINTETICOS QUE
ELIMINAN O INIBEN EL CRECIMIENTO
BACTERIANO.

{
ALEXANDER FLEMING (1929)
ACTIVIDAD ANTIBIOTICA Penicillium
notatum SOBRE CEPAS ESTAFILOCOCOS.
FLOREY Y CHAIN (1940) INDUSTRIA
FARMACEUTICA.

USO DE ANTIBIOTICOTERAPIA
TOXICIDAD SELECTIVA
AMPLIOESPECTRO
PERFIL DE SEGURIDAD
ADMINISTRACION EN DOSIS UNICAS
DIARIAS.
TIEMPO DE INFUSION BREVE.
ESTABILIDAD A CAMBIOS DE
TEMPERATURA.


MODO Y LUGAR DE ACCION
INTERACCION CON LA ESTRUCTURA CELULAR O
BLOQUEAR RUTA METABOLICA.
BACTERIOSTATICO: INHIBEN EL CRECIMIENTO
BACTERIANO PERMITIENDO ACCION SISTEMA
INMUNE. CONCENTRACION DEL ANTB.
BACTERICIDA: MUERTE CELULAR POR UNIN
ESTRUCTURA DIANA. MODO ACCION INHIBICION
SISNTESIS PARED CELULAR, SINTESIS DE PROTEINAS
Y ACIDOS NUCLEICOS.
{
INHIBICION SINTESIS DE
PARED CELULAR
PREVIENEN LOS ENLACES DE
LAS CADENAS DE
PEPTIDOGLICANO,
SELECTIVAMENTE TOXICOS.
CEFALOSPORINAS Y
PENICILINAS.
UNION PROTEINAS DE UNION A
PENICILINAS ACTIVIDAD
AUTOLITICA. RESITENCIA
PRODUCCION DE β
LACTAMASAS.

INHIBICION DE LA FUNCION DE LA
MEMBRANA.
RUPTURA DE LA INTEGRIDAD FUNCIONAL DE LA
MEMBRANA, LAS MACROMOLECULAS Y IONES SE
LIBERAN PRODUCIENDO MUERTE CELULAR.
DEBIDO A TOXICIDAD SE USO ES GENERALMENTE
TOPICO.

INHIBICION DE LA SISNTESIS DE PROTEINAS
UNEN A RECEPTORES DE LAS SUBUNIDADES DEL
RIBOSOMA, AFECTANDO LA SINTESIS DE
PROTEINAS. EL DESARROLLO DE RESISTENCIA ES
MEDIADA POR FALTA DE RECEPTORES ESPECIFICOS
Y PLASMIDOS DEGRADAN EL ANTB.
TETRACICLINAS: PENETRA POR TRANSPORTE
ACTIVO Y SE UNE SUBUNIDAD 30 S. BLOQUEA EL
SITIO DE UNION DE LAS MOLECULAS DE ARNt
PREVINIENDO LA INCORPORACION EN LOS
AMINOACIDOS DE LA CADENA POLIPEPTIDICA.

{
INHIBICION DE LA SISNTESIS DE
ACIDOS NUCLEICOS.
ACCION SOBRE ADN GIRASA, ENZIMA QUE
SEPARA LAS CADENAS DE ADN EN LA
REPLICACION. ACCION ARN POLIMERASA
(QUINOLONAS Y NOVOBIOCINA),
RIFAMPICINA PREVINIENDO LA SINTESIS
ARN ACTIVO FRENTE MICOBACTERIAS.
RUPTURA DE CADENAS DE ADN
ANAEROBIAS OBLIGADAS
(METRONIDAZOL).
FORMACION DE ACIDO FOLICO DEBIDO A
SU SIMILARIDAD AL PARA AMINOBENZOICO
(SULFAMIDAS).
TRIMETROPIM INHIBE ACTIVIDAD
DIHIDROFOLATO REDUCTASA.

TERAPIA ANTIBACTERIANA COMBINADA.
CUANDO SE COMBINAN ANTIBACTERIANOS EL
RESULTADO ESTA INFLUENCIADO POR LA
ACCION COMBINADA DE LA SUMA DE LAS
ACCIONES.
EFECTO SINERGICO: CUANDO LA ACCION
COMBINADA ES SIGNIFICATIVAMENTE MAS
GRANDE.
ANTAGONISMO: EFICACIA REDUCIDA CUANDO
DOS FARMACOS SE UTILIZAN COMBINADOS.
SUSTANCIAS BACTERICIDAS β LACTAMICOS
EFICIENTES EN DIVION ACTIVA, SI SE UTILIZA UN
BACTERIOSTATICO SU ACTIVIDAD PUEDE
ELIMINARSE.

FACTORES QUE INFLUYEN LA ACTIVIDAD
ANTIBACTERIANA.
IN VIVO POR EL LUGAR Y LA TASA DE
ABSORCION, SITIO DE EXCRESION, DISTRIBUCION
TISULAR.

INTERACCION FARMACO PATOGENO.
LA RESPUESTA DE UN FARMACO IN VITRO
PUEDE DIFERIR IN VIVO.
AMBIENTE CONSTANTE
DISTRIBUCION Y CONCENTRACION
{
LOCALIZACION (INTRACELULAR)
MAS RESISTENTES.
UNION A PROTEINAS
ABSORCION MEDIADA POR PUS O
TEJIDO NECROTICO.

INTERACCION HOSPEPADOR
PATOGENO.
LA ADMINISTRACION DE UNA
SUSTANCIA ANTIMICROBIANA
PUEDE ALTERAR LA RESPUESTA
INMUNE DEL HOSPEDADOR.
CAMBIA MICROBIOTA NORMAL.
FAVORECIMIENTO
SOBRECRECIMIENTO DE
MICROORGANISMOS
RESISTENTES.

RESISTENCIA A LOS ANTIMICROBIANOS.

USO INDISCRIMINADO DE ESTOS COMPUESTOS DA
LUGAR A UNA SELECCIÓN DE BACTERIAS
HEREDITARIAMENTE RESISTENTES.
LA RESISTENCIA SE CODIFICA GENETICAMENTE EN
CROMOSOMAS O PLASMIDOS.
ENTEROBACTERIAS – PSEUDOMONAS.


DETERMINAR EL USO DEL ANTIBIOTICO
MAS ADECUADO SE REALIZAN
PRUEBAS IN VITRO.
DILUCION EN CALDO, DIFUSION DE
DISCOS, GRADIENTE DE AGAR.
METODO DE DIFUSION DISCO KIRBY
BAUER USADA HABITUALMENTE.
MECANISMO DE RESISTENCIA
PRODUCCION DE ENZIMAS
REDUCCION DE LA PERMEABILIDAD CELULAR
RUTAS METABOLICAS ALTERNATIVAS
ELIMINACION POR EXPULSION DEL ANTIBIOTICO
ALTERACION DEL SITIO DIANA.
ESTRATEGIAS DE LIMITACION DE LA
RESISTENCIA.
RESTRICCION DEL USO DE ANTIBIOTICOS
BASE DATOS SOBRE MICROORGANISMOS
RESISTENTES.
EVALUACION DEL RIESGO Y BENEFICIOS DE LA
TERAPIA.
TERAPIA ANTIBIOTICA DEBE SUMINISTRARSE A
LAS DOSIS TERAPEUTICAS RECOMENDADAS.
RESPETAR LOS PERIODOS DE BLANQUEO DE LOS
ANTIBIOTICOS.
NO DEBEN UTILIZARSE COMO PROMOTORES DE
CRECIMIENTO, MEJORAR MEDIDAS DE HIGUIENE.
{
PRUEBAS DE SUSCEPTIBILIDAD
ANTIBACTERIANA.

CONCENTRACION MINIMA
INHIBITORIA.
CMI. ES LA DILUCION MAS ALTA DE UN
AGENTE ANTIBACTERIANO QUE
INHIBE EL CRECIMIENTO DE UN
AISLAMIENTO.
CMB CONCENTRACION MINIMA
BACTERICIDA ES LA DILUCION MAS
ALTA DE UN FARMACO QUE PUEDE
ELIMINAR UNA BACTERIA.

COLONIZACION BACTERIANA, INVASION TISULAR Y ENFERMEDAD
CLINICA.
SAPROFITAS CRECEN SOBRE MATERIA ORGANICA, LAS PATOGENAS
INFECTAN ANIMALES Y HOMBRES.
EL DESARROLLO Y LA GRAVEDAD ESTA INFLUENCIADA POR DETRMINANTES
DEL HOSPEDERO.
LA PIEL ES UN ORGANO DEFENSA QUE LIMITA EL INGRESO BACTERIANO.
TRAUMATISMO O INFECCIONES OPORTUNISTAS.
KOCH POSTULADO SOBRE MICRORGANISMOS CAUSANTES DE ENFERMEDAD.
AISLAMIENTO EN CULTIVO A PARTIR DEL TEJIDO INFECTADO, DEBE CAUSAR
ENFERMEDAD, DEBE SER AISLADO A PARTIR DE ANIMALES INFECTADOS
EXPERIMENTALMENTE.

INFECCION DE ANIMALES SUCEPTIBLES
INFECCION EXOGENA: TRANSMISION DIRECTA O INDIRECTA DE UN ANIMAL
INFECTADO.
INFECCION ENDOGENA: BACTERIAS COMENSALES ANIMAL ES SOMETIDO A
ESTRÉS. (VF)




COLONIZACION Y CRECIMIENTO




LA INFECCION PUEDE ADQUIRIRSE POR DISTINTAS VIAS .
LA VIRULENCIA SE RELACIONA CON LA CAPACIDAD DE INVADIR Y PRODUCIR
ENFERMEDAD
FACTORES QUE INFLUYEN EN EL RESULTADO DE LA INTERACCION ENTRE
HOSPEDADOR Y PATOGENO. (VF)
REPLICACION EVITAR ELIMINACION = COLONIZACION
LOS PATOGENOS DEBEN COMPETIR POR NUTRIENTES, FLORA NORMAL, TOLERAR
CONDICIONES MICROAMBIENTALES Y EVADIR MECANISMOS DEFENSA.
HIERRO COMPONENTE DEL CITOCROMOS Y PROTEINAS FERRO SULFURADAS =
RESPIRACION BACTERIANA. COMPUESTOS QUELANTES DE HIERRO
(SIDEROFOROS), LISAN GR .
DISEMINACION EN EL HOSPEDADOR




EVASION DE LOS MECANISMOS DE DEFENSA ÉXITO DE LA INVASION.
PERMANENCIA PUNTO DE INFECCION RUPTURA DE TEJIDOS POR MEDIO DE LAS
COLAGENASAS, LIPASAS, HIALURONIDASAS Y FIBRINOLISINA.
TORRENTE SANGUINEO LIBRES O INTRACELULARES.
MECANISMOS DE SUPERVIVENCIA BACTERIANA.
MECANISMO
OBSERVACION
Antígeno O de cadena del polisacárido
La longitud de las cadenas del polisacárido impide la unión del
complejo de ataque a la membrana externa de muchas bacterias
Gram negativas.
Antígeno capsular
La incorporación de acido sialico por algunas bacterias Gram
negativas posee un efecto inhibidor sobre la actividad del
complemento.
Producción de capsula
Papel antifagocitico en muchas bacterias.
Producción de proteína M
Actividad antifagocitica en estreptococos.
Producción de proteínas de unión al Fc.
Los estafilococos y estreptococos producen proteínas que se unen a la
región Fc de IgG y previenen la interacción con el receptor Fc de las
membranas de los fagocitos.
Producción de Leucotoxinas
Citolisis de los fagocitos por las toxinas producidas por Mannheimia
haemolytica, especies de Actinobacillus y otras bacterias patógenas.
Interferencia con la fusión fagosoma lisosoma
Permite la supervivencia de las micobacterias patógenas dentro de los
fagocitos.
Evasión de los fagosomas
Los mecanismos de defensa utilizados por Listeria monocytogenes y
ricketsias.
Resistencia al daño oxidativo
Permite la supervivencia de la salmonelas y brucelas dentro de los
fagocitos.
Imitación antigénica de los antígenos del hospedador
Adaptación de los antígenos de superficie por especies de Mycoplasma
elude el reconocimiento por el sistema inmune.
Variación antigénica de antígenos de superficie
Permite la supervivencia de especies de mycoplasma y borrelias. A
pesar de la respuesta inmune del hospedador a estos patógenos.
Producción de coagulasas
La conversión del fibrinógeno en fibrina por parte de staphylococcus
áureas puede aislar el lugar de la infección frente a la respuesta
inmune efectiva.

DAÑO A LOS TEJIDOS DEL HOSPEDADOR Y SIGNOS CLINICOS ASOCIADOS.
LAS BACTERIAS LOGRAN DAÑAR LOS TEJIDOS DEL HOSPEDERO POR MEDIO DE EXOTOXINAS Y
ENDOTOXINAS.
EXOTOXINAS: SE PRODUCEN DENTRO DEL CUERPO TIENEN EFECTO LOCAL O SISTEMICO Clostridium
botulinum.
MUERTE CELULAR POR DIGESTION DE LIPIDOS (LECITINASA Y FOSFOLIPASAS).
ENDOTOXINAS: LIPOPOLISACARIDOS DE LA MEMBRANA EXTERNA DE GRAM NEGATIVAS SE LIBERAN A
PARTIR DE LA LISIS CELULAR.
EL DAÑO TISULAR ESTA MEDIADO POR ENZIMAS SECRETADAS Y RESPUESTA INMUNE.
EFECTOS: INTERACCION CON FAGOCITOS PMN Y MACROFAGOS, PLAQUETAS Y LINFOCITOS B.
LIBERACION DE INTERLEUCINA 1 QUE PRODUCE FIEBRE, ACTIVACION DEL COMPLEMENTO, CAMBIOS
PROINFLAMATORIOS.

TIPOS DE INFECCION BACTERIANAS
CATEGORIZADAS COMO AGUDAS, SUBAGUDAS Y CRONICAS.
AGUDAS: CORTO Y GRAVE (DIAS) ELIMINACION DE LA BACTERIA INVASORA POR SISTEMA
INMUNE.
SUBAGUDAS: EFECTOS CLINICOS DE MENOR INTENSIDAD.
CRONICAS: FALLAS EN LA ELIMINACION DEL PATOGENO. REPLICACION CELULAR, NO HAY
RESPUESTA CELULAR Y HUMORAL, ELIMINACION PERSISTENTE.