Transcript Impacto de la realización de genotipo de VPH en

Dra. Jhoanne Esther Muñoz
Gineco-Obstetra –CINBIOCLI.
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La Infección por VPH y el posterior desarrollo de
Cáncer de cérvix se espera que sean altos en R.D.
Los datos preliminares de un estudio en Puerto
Rico sugieren que el genotipo de HPV en el
Caribe es diferente del que existe en EE.UU.
El VPH-16 y -18 son los genotipos de HPV más
frecuentemente asociados con Cáncer de Cérvix
en los EE.UU, mientras que la prevalencia de VPH
18 es más baja en el Caribe.
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la Infección por el VIH es muy frecuente en R.D y
cerca del 1% de los 9 millones de Dominicanos
están infectados por VIH-1 sobre todo a través
de contactos heterosexuales y de estos el 50%
son mujeres.
La incidencia de neoplasias asociadas al VPH se
espera que aumente en la R.D a medida que se
propaga mas la epidemia del VIH-1.
La Infección de múltiples genotipos del VPH es
más común entre los pacientes con cáncer y / o
infectados por VIH-1.
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A nivel mundial, la infección del VPH está asociada
con un 5% de todos los cánceres.
VPH infecta el epitelio escamoso estratificado de la
piel y la mucosa, provocando lesiones benignas la
mayoría de los cuales son subclínicas.
Otras veces son crónicas y progresan a tumores
malignos donde son persistentes los genotipos de
VPH 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 66 y
69 se asocian frecuentemente con el desarrollo de la
displasia de alto grado y cáncer invasor de cérvix.
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Las Co-infecciones de múltiples genotipos de
VPH son generalmente de aparición poco
frecuente, pero la detección de productos de
amplificación por PCR con sondas de captura
ha revelado que las infecciones por múltiples
genotipos se encuentra en alrededor de 30%
de las mujeres con resultados anormales de
la citología cervical.
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Del mismo modo los niveles elevados de
infecciones de genotipo múltiples se han
descrito
en
las
mujeres
Inmuno
comprometidas, por ejemplo, con el virus de
inmunodeficiencia humana tipo 1 (VIH-1).
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La aplicación de este estudio propuesto
identificará y diagnosticará infecciones
persistentes por VPH , el cual es un factor de
riesgo grave para el desarrollo de neoplasias
malignas del cérvix.
El diagnóstico precoz y preciso de la
infección por VPH y la identificación de los
genotipos
implicados puede contribuir
significativamente a la orientación de los
pacientes y la reducción eventual de la
malignidad.
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Este estudio debe determinar, como se prevé,
que el VPH 18 es un agente importante
asociado con neoplasias malignas del cuello
uterino en RD.
En la actualidad hay vacunas disponibles
contra el VPH, pero no absequible a toda la
población, por lo cual es importante conocer
los diferentes genotipos de VPH antes de que
la vacunación pueda ser aplicada en la
República Dominicana a toda la población.
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Determinar la distribución de genotipos de
VPH en mujeres VIH seropositiva y
seronegativas.
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1-Determinar la prevalencia de la infección
por VPH y las pautas de distribución entre el
VIH-1 en mujeres positivas y negativas
atendidas en el HRUJMCyB.
2-Determinar la prevalencia de múltiples
genotipos de las infecciones por VPH
implicados en tales infecciones multiples.
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Se
identificarán los casos de VPH en la
citología cervical de las mujeres que asistan a
consulta y que son por una parte VIH
positivas y por otra VIH negativa.
Reclutamiento.
Consentimiento informado.
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Cuestionarios.
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Toma de muestras.
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Estudio descriptivo de corte transversal.
300 mujeres VIH positivas y 300 VIH
negativas.
Muestra:
Todas las mujeres con citología sugestiva de
VPH.
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1- Mujeres de 18 a 45 años
2- Citología sugestiva de VPH.
3- Entender los riesgos y beneficios
4- Comprender y firmar el consentimiento
informado.
Criterios de exclusion:
Mujer con alguna lesión cervical que amerite
tratamiento.
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Se selecionarán las mujeres de la consulta de
GO. Y de la UAI.
C.I
Historia clínica, datos demográficos y exámen
físico.
Toma de muestra.
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Se toma la muestra del exudado cérvico
vaginal, utilizando la solución PreservCyte.
Las muestras recogidas se les realizara
varios lavados con soluciones buffers.
Se congelan -85>c, se envian a Ponce por
FEDEX.
En Ponce, las Muestras se procesaran para la
purificación y la extracción de ADN.
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El ADN será aislado de cualquier raspadura
vaginal o discos de papel de punto seco
vaginal, mediante el uso de la columna de
purificación de ADN de Qiagen 16 de acuerdo
a las instrucciones del fabricante.
Amplificación del gen del VPH de la cápside
L1.
Amplificación por PCR.
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Las secuencias de ADN obtenidos también nos
permiten realizar un análisis filogenético de
cepas del VPH. Pero este análisis tiene un grave
defecto: El método sólo puede identificar el
genotipo predominante en cuestión y es incapaz
de determinar si otros genotipos están Presentes
simultáneamente, pero sólo como de menor
importancia las poblaciones virales.
En cambio el método INNO-Lipa o micro-Roche
17 (procedimientos matriz) son capaces tanto de
la identificación de genotipos y la determinación
de la actual administración concomitante de
varios genotipos de VPH.
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Se estima que el 20% de 300 mujeres VIH negativas se
identifique con el VPH, para cada uno de los cuales el genotipo
será identificado por secuenciación del ADN.
Prevemos que la prevalencia del VPH entre las mujeres
dominicanas que son infectados por VIH-1 pueden estar en el
rango de 70-80%, lo que dará 210- 240 muestras HPV positivas.
En Aproximadamente el 50 ~ 60%
VPH-16, (120-150 muestras)
se puede anticipar que el
el 10% HPV-33,\
y con menor número el VPH-18, -45, -52, -58, 70, -71 y -81,
etc.
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Los patrones de divergencia genética del
VPH-16 son prácticamente idénticos entre
las dos poblaciones.
Se prevé también que el VPH 16 de las
mujeres VIH- 1 positivos, no será más
divergente que el de las mujeres VIH-1
negativos.
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Los patrones de distribución de genotipos de VPH en
dos poblaciones de estudio se supone que son
significativamente diferentes entre sí. Sin embargo,
con la secuencia de ADN sólo se puede proporcionar
la información relativa a los genotipos de VPH más
predominantes en los casos de infección, los
resultados pueden no representar la "verdadera"
distribución de los genotipos, en particular en las
mujeres VIH-1 positivos.
Donde w utilizará INNO procedimiento de Lipa. Los
resultados de las dos secciones se combinarán para
evaluar los genotipos de HPV, que son los
Predominantes y los que no son en todos los casos
de co-infección.
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Los patrones de divergencia genética del
VPH-16,
son
idénticos
en
las
dos
poblaciones.
Se prevee que el VPH-16 de las mujeres VIH
positivas no sera más divergente que el de las
mujeres VIH negativas.
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Los patrones de distribución de genotipos de
VPH en dos poblaciones de studio, se supone
que son diferentes entre si.
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MUCHAS GRACIAS