Transcript PRENATAL TANI

TEKLİ VE ÇOKLU EMBRİYO
KÜLTÜRÜ
Mol. Bio. Zafer Nihat Candan, M.Sc
Yalnızlık yada Mutluluk ???
IN-VİVO
IN VİTRO
TEKLİ KÜLTÜR
ÇOKLU KÜLTÜR
O’Neil, HRU,2008
K Hardy and S Spanos,JE,2002
O’Neil, HRU,2008
Günümüz Embriyo Kültür Vasatları












Su
İyonlar
Karbonhidratlar
Aminoasitler
◦ Amonyum
Vitaminler
Nükleik asit prekürsörleri
Şelatörler
Antioksidanlar
Antibiyotikler
Proteinler
Hormon ve growth faktörler
Tamponlar
In Vitro ile In Vivo Kıyaslaması
In vitro preimplantasyon embriyoları kendi
kendilerine maternal üreme organlarından yoksun
olarak gelişmek ve farklılışmak zorundadır. (Schultz &
Heyner 1993).
 Maternal-embriyo arasındaki ilişki yoktur ve bu
ilişkinin yokluğuna bağlı olarak;

◦ Düşük embriyo viyabite; (Harlow & Quinn 1982).
◦ Kromozomal problemler
◦ Gen ekspresyon paterninde değişiklikl (Wrenzycki et
al.1998, 2001, Niemann & Wrenzycki 2000)
◦ Epigenetik problemler; (Stojanov and O’Neill, 2001; De
Rycke et al., 2002)
◦ Embriyolarda yüksek apoptoz oranı; (Brison & Schultz
1997)
In Vitro ile In Vivo Kıyaslaması

Her ne kadar embriyo kültür vasatları in
vivo ortama benzetilmeye çalışılsa da, çok
önemli olan otokrin, parakrin ve endokrin
faktörler hep eksik kalmaktadır.
Problem
TEKLİ KÜLTÜR

Hacim;
◦ Düşük: Amonyum ve
ROS birikmesi
◦ Yüksek: Atokrin
faktörlerin seyrelmesi

Diğer embriyoların
saldığı embriyo trofik
faktörlerden
yoksunluk
ÇOKLU KÜLTÜR

Hızlı amonyum ve
ROS birikmesi
• Her 24-48 saatte
kültür ortamının
tazelenmesi ???
Embriyo yoğunluğu
 Kültür ortamının hacmi
 Kültür ortamının değiştirilmesi

Hayvan Modelleri

Düşük embriyo yoğunlu (emrbiyo sayısı/kültür vasatı hacmi,
oranı) olan çalışmalarda
◦ az sayıda blastosist geliştiği,
◦ blastosistlerdeki hücre sayısının az olduğu,
◦ interfreron-tau salınımın az olduğu görülmüştür. (O’Doherty et al. 1997,
Larson & Kubisch 1999, Khurana & Niemann 2000 )

Embriyonik faktörler ile etkileşimlerine imkan sağlayan
yüksek embriyo yoğunluğunun sığır in vitro kültüründe
önemli olduğu saptanmıştır (Fujita et al. 2006, Nagao et al. 2008)

5ul/embriyo oranı ve 3den fazla embriyonun aynı anda
kültüre edilmesi tavsiye edilmektedir (Hoelker et al.2009).

< 5ul/embriyo supotimal bulunmuştur
Hayvan Modelleri

Gelişen embriyolardan kültür ortamına EGF ve PAF ve
diğer büyüme faktörleri salınmaktadır (Hardy et al 2002, Summer
MC&Biggers JD 2003, O’Neil et al 1997).

Yüksek embriyo yoğunlu (emrbiyo sayısı/kültür vasatı
hacmi, oranı) olan çalışmalarda
◦ Çok sayıda blastosist geliştiği,
◦ blastosistlerdeki hücre sayısının fazla olduğu görülmüştür (Canseco RS
et al. 1992, Lane M&Gardner DK, 1992,1997, Salahuddin S, et al., 1995, Kato Y et al., 1994).

0,5-1ul/embriyo oranı ve 5 den fazla embriyonun aynı
anda kültüre edilmesi tavsiye edilmektedir (Teraporn V et al, 2011)

< 0,5ul/embriyo supotimal bulunmuştur
Fertil Steril. 1995 Nov;64(5):1034-5.
The quality of human embryo growth is improved when embryos
are cultured in groups rather than separately.
Moessner J, Dodson WC.
0.gün

1.gün
3.gün
Problem:
◦ Düşük hasta sayısı
55 hasta,
◦ Sadece klivaj oranları ve700ul
embriyo skoru kıyaslanıyor. ET
>4 zigot yapılmıyor
◦ Yüksek hacim, otokrin faktörlerin seyrelmesi ???
•Klivaj oranı
700ul
3-5 emb
•Embriyo skoru
Fertil Steril. 1996 Sep;66(3):394-7.
Pregnancy rates after communal growth of
preimplantation human embryos in vitro.
Almagor M, Bejar C, Kafka I,Yaffe H.
0.gün
1.gün
3.gün
42 hasta

Problem:
Klinik
Gebelik
% 24
◦ 3-5 embriyo transferi 1000ul
◦ Hangi gruba kaç embriyo transferi yapıldığı belirtilmemiş
◦ Yüksek hacim, otokrin faktörlerin seyrelmesi ???
% 43
49 hasta
1000ul
3-5 emb
odds ratio = 2.4
0.gün
1.gün
181 hasta
190 hasta
3-5 emb
2.gün
Klinik
Gebelik

Problem:
◦ 2.gün ET, sadece 24 saatlik grup kültürü
◦ Yeterli düzeyde otokrin faktörlerin birikmemesi
Medium değişimi
0.gün
3-4.günler
1-2. günler
Randomizasyon
2-4. embriyo
5.gün
% Blastosist,
p: NS
Grup Kültür( Grup1-4)
35
40
Tekli Kültür( Grup1-4)
Küçük kültür hacmi (Grup 1-2)
40
36
Büyük kültür hacmi (Grup 1-2)

Problem:
◦ Tüm embriyoların 1-3 (48s) kültür süresince grup kültüre
edilmesi.
Outer Well, Single (CWI)
Center Well (CW)
Outer Well, Group
(CWG), 3-5 zigot
30ul kültür
hacmi
1.gün
3.gün/ Kültür ortamınn
tazelenmesi
5.Gün /ET
Decision on which conceptus
to transfer was based on
routine criteria (Gardner
et al., 2000) and not on the type
of in-vitro culture (CW,
OWI, OWG). This failure in
randomization should be noted
SONUÇ



.Çalışmaların niteliğinden ve yapılma
şeklinden dolayı birbirinden farklı sonuçlar
elde edilmiştir.
Hayvan çalışmalarıne benzer sonuçlar elde
edilememiştir.
Yinede ortak kanaat,
 embriyoların ortama saldığı embriyotrofik
faktörlerin embriyo gelişimine faydalı olduğu
 tekli kültürlerinde düşük hacimlerin kullanılması,
 çoklu kültürlerinde ise düşük hacmin kullanılması
ve embriyoların birbirlerine yakın durmaları
tavsiye edilmektedir
Gelecek

Moleküler düzeyde incelemelerin yapıldığı
yeni çalışmalara ihtiyaç duyulmaktadır.