Transcript Inimese kooriongonadotropiini geenide CGB8 ja CGB5

Inimese
kooriongonadotropiini (hCG)
geenide varieeruvuse ja
ekspressiooni seos korduva
raseduse katkemisega
Kristiina Rull
TÜ Naistekliinik,
TÜ Molekulaar-ja Rakubioloogia Instituut
Juhendajad:
prof.Maris Laan, TÜ Molekulaar-ja Rakubioloogia Instituut
prof. Helle Karro TÜ naistekliinik
15-20% kliiniliselt diagnoositud
rasedustest katkeb
~70-80% juhtudel on põhjuseks loote
kromosoomianomaalia või eluks
sobimatu väärarend
Korduv raseduse katkemine (KRK) ≥3
järjestikust raseduse katkemist enne
22. rasedusnäd. või kui loode kaalub <
500 g
Risk, et tegemist juhusliku katkemisega
3x järjest 0.35% (0.153), kuid
tegelikult esineb KRK 1-2% last
soovivatest paaridest
~50% KRK juhtudel põhjus teadmata
KRK patsientide I ringi sugulastel on 2-7
korda sagedamini raseduse
katkemisi→pärilik eelsoodumus
Kanditaatgeenid: Leideni faktori,
protrombiini geeni mutatsioon,
koesobivusmolekulide geenide variandid
(HLA-G, HLA-DR),........
Human Chorionic
Gonadotropin
•toodetakse süntsüütsiotrofoblasti
rakkudes (loote hormoon)
•peegeldab trofoblasti
funktsionaalset seisundit
HCG on patoloogia korral
MADAL
Raseduse katkemine
(missed abortion,
tühi lootemuna)
Emakaväline rasedus
Trisoomia 18, 13
KÕRGE
Trofoblasti tuumorid,
sh. moolrasedus
Trisoomia 21 (Downi
sündroom)
Ähvardav raseduse
katkemine
Mitte-trofoblasti tuumorid: munand, hüpofüüs,
neerupealis, rind, eesnääre, kusepõis, kops,
jämesool, emakas, munasari, jt.
HCG
a
99%
DNA sarnasus
85%
ühine
FSH
LH
TSH
a-alaühikuga
97-99%
CGA
b
CGB
CGB5
CGB7
CGB8
CGB1
CGB2
?
Uuringu küsimused
I Kas hCG tase ema veres
rasedustüsistuste korral
on seotud CGB geenide
transkriptsiooni
aktiivsusega?
II Kas transkriptsiooni
aktiivsus on seotud CGB
geenide geneetilise
varieeruvusega?
?
?
I Uuringu materjal ja meetodid
CGB geenide ekspressioon trofoblasti/platsenta
koes määrati reaalaja RT-PCR meetodil
Normaalne rasedus:
I trim (n=10)
II trim (n=8)
III trim (n=12)
Blastotsüstid (n=6)
Tüsistunud rasedus:
Emakaväline rasedus,
EP (n=8)
Korduv raseduse
katkemine, RM (n=11)
Moolrasedus (n=2)
Tulemused I
1. Geeni ekspressioon on
indiviiditi varieeruv
2. Normaalse raseduse korral on
CGB geenide ekspressiooni
kõrgeim I trimestril
3. CGB transkriptsioon on
tuvastatav juba blastotsüsti
staadiumis
4. Korduva raseduse katkemise
korral on CGB geenide
transkriptsioon ↓
Rull & Laan (2005) Hum Reprod;
Rull et al. (2008) Mol Hum Reprod
5. Emakavälise ja moolraseduse
korral on CGB geenide
ekspressioon kõrge
Järeldused I
Normaalse raseduse ajal
korreleeruvad hormooni ja
CGB geenide
ekspressioonitase
Emakavälise raseduse korral
esinev madal HCG, kuid kõrge
CGB ekspressioon viitab
häirunud tagasiside
mehhanismile/valgu
tootmisele
KRK korral on HCG madal tase
ema seerumis tingitud CGB
vähesest transkriptsioonist
Hüpotees
hCG b-alaühikut kodeerivate geenide
varieeruvus põhjustab suuri indiviidide
vahelisi erinevusi geenide ekspressiooni
osas ning on seotud inimese reproduktiivse
edukusega
II Assotsiatsiooni uuring
1. Uuritavad indiviidid:
184 KRK-ga patsiendid (≥ 3 raseduse katkemist)
eestlased
soomlased
n=99
n=85
(♀ 64/♂ 35)
(♀ 45/♂ 40)
195 fertiilsed naised, pole eelnevalt raseduse
katkemisi
eestlased n=95 (≥3 last)
soomlased n=100 (≥1 laps)
2. Meetod:
Resekveneerimine
CGB8 ja CGB5 – annavad 70% of hCG b mRNA
transkriptidest.
Tulemused II
•Suur varieeruvus:
71 SNP,
48 (68%) pole
varem kirjeldatud
CGB5: 49 SNP, promootorpiirkonnas 18
CGB8: 22 SNP, promootorpiirkonnas 3
• 1 harv SNP CGB8 promootoralas ja 3 aminohappe
muutust põhjustavat SNP-d leidus ainult patsientidel
p.Val76Leu
CGB5
ATG
-500
+1350
CGB8
c8EF-4
p.Arg28Trp
Paikneb transkriptsiooni reguleerivas motiivis
(Ghosh et al, 2003)
p.Val49Ile
p.Pro93Arg
Tulemused II
6 SNP minoorseid alleele esines sagedamini
viljakatel naistel*
16
minoorse alleeli saegdus
%
14
p=0.018-0.024
OR 0.53-0.58 (95%CI 0.32-0.95)
p=0.007, OR 0.53
(95%CI 0.32-0.85)
12
10
8
6
p=0.042, OR 0.15
4
(95% CI 0.02-1.03)
2
0
c5EF-155 c5EF-147 c5EF-144 c5EF-142 c5EF1038 c8EF1045
Fertiilsed naised n=195
*Cochrane-Armitage trend test
KRK-ga patsiendid n=184
Tulemused II
KRK suhtes kaitsvad SNP-d paiknevad CGB5
promootorpiirkonnas ning CGB5 ja CGB8 intron II samas
positsioonis
c5EF1038
CGB5
ATG
-500
CGB8
+1350
c8EF1045
Eraldi analüüs Eesti ja Soome valimis oli samasuunalise tulemusega, kuigi pväärtus jäi >0.05 (väiksem valimi suurus)
Rull, Nagirnaja et al., JCEM, 2008
Järeldused II
• SNP-d CGB5 promootorosas ja mõlema geeni
intronis vähendavad korduva raseduse katkemise
riski kuni 1,8 korda.
• Harvad polümorfismid CGB8 transkriptooset
aktiivsust mõjutavas piirkonnas (1) ning CGB5 ja
CGB8 eksonites, millega kaasneb aminohappe
muutus (3) esines vaid KRK patsientidel.
Koostööpartnerid
Materjali kogumine:
Eksperimendid ja andme analüüs:
SATÜK Naistekiinik: dr. K. Rull;
Prof. M. Laan uurimisgrupp, TÜ
Molekulaar- ja Rakubioloogia
Instituut: L. Nagirnaja, P. Kelgo, T.
Margus, L. Uusküla, P. Hallast, K. Rull
Helsingi Ülikooli Keskhaigla: dr. VM. Ulander, prof. K. Aittomäki;
AS Nova Vita: dr. P. Karits, dr. A.
Salumets;
SATÜK koepank;
SATÜK Kopsukliinik : Dr. T. Vooder;
SATÜK Androloogiakeskus: Dr. M.
Punab
Helsingi Ülikooli Keskhaigla:
V-M. Ulander, M. Kaare, prof. K.
Aittomäki
Dept.of Molecular Biology, EMD
Serono Research Institute, USA:
Prof. R.K. Campbell, J. Jackson
Wellcome Trust International Senior Research Fellowship, Howard Hughes Medical Institute, Eesti
teadusfond, Eesti teadus- j haridusministerium, Sigrid Juselius Foundation ja Finnish State Fund