Transcript Gynogenesis

น.ส.พรรณทิพา
บุรรี ต
ั น์
นักวิชาการประมงปฏิบต
ั ก
ิ าร
สั งกัด ศูนยวิ
ั และพัฒนาพันธุกรรมสั ตว ์
์ จย
ปลาตะเพียนขาวเพศผูนี
้ โอเมล
ปลาตะเพี
ยนนี
โอเมลคื
อี อะไร ? สาคัญ
คื
อ ปลาตะเพี
ยนเพศผู
ที
ม
่
้
อยางไร
?
่
โครโมโซม
XX
ตางจากเพศผู
ปกติ
ทม
ี่ ี
่ วิธก
้
ี
ารผลิ
ต
ปลาตะเพี
ย
นนี
โ
อ
โครโมโซม XY
เมล ใช้
กระบวนการเหนี่ยวนาแบบ
ปลาตะเพียนทีไ่ ดจาก
้
Gynogenesis
Gynogenesis จะเป็ นเพศเมีย
ลวน
แปลงเพศผูโดยใช
้
้
้
ฮอรโมน
์
ปลาตะเพียนขาวเพศผูนี
้ โอเมล
หลัก
การ
X
ผู้ปกติ
เมียปกติ
XYงสี ทาลายสารพัXX
ผานการฉายรั
นธุกรรมในsperm
่
และเหนี่ยวนาให้เป็ น 2n
ลูกปลาเพศเมียทีม
่ ส
ี ารพันธุกรรม
เหมือนแม่ โมน
ให้กินอาหารผสมฮอร
์ XX 17α
methytestosterone เพือ
่ ให้เป็ นเพศผู้
ไดปลาตะเพี
ยนขาวเพศผู้ทีม
่ โี ครโมโซม
้
ปลาตะเพียนขาวเพศผูนี
้ โอเมล
X
เพศผู้
Neomale XX
1
2
3
เพศเมีย
ปกติ XX
ลูกปลาตะพียนขาวเพศเมีย
ลวน
้ XX
• เจริญเติบโตเร็วและดีกวา่
• ลูกทีไ่ ดเป็
้ นเพศเมีย นิยมใช้ทาปลาส้ม
• ให้ผลผลิตตอไร
สู
ยนขาว
่
่ งกวาปลาตะเพี
่
ปกติ 20%
กระบวนการไจโนจีนีซิส
การเก็บน้าเชือ
้ ปลาตะเพียนเพศผู้ปกติ
กระบวนการไจโนจีนีซิส
• เจือจางน้าเชือ
้ 4,000 เทา่ ใน NaCl 0.85 % เพือ
่
ความงายในการนั
านวน sperm
่ ดูด 10 บจดู
ด 10
ดูด 10
µl.
µl.
µl.
หลอดที่ 3
หลอดที่
Spermเจือจาง
2
10 µl.
Sperm
NaCl 390 µl.
101µl.
:
1 : 40
NaCl
990
100
ดังนั้น ความเขมข
ใน NaCl สุทธิคอ
ื 1:
้ นของsperm
้ µl.
4,000
หลอด
ที่ 1
Sper
m
กระบวนการไจโนจีนีซิส
• คาตายตั
ว
่
Haemacytometer
ความลึกระหวาง
่
Haemacytometer และ
cover glass คือ 1/10
mm
ช่องทีเ่ ล็กทีส
่ ุดทีต
่ ต
ี าราง
ไว้ คือ 1/400 mm2
กาลังขยาย
40 เทา่
กาลังขยาย
100 เทา่
ตาแหน่งช่อง
ตาราง
ปริมาตร 1 ช่องเล็กคือ
1/400 x 1/10 = 1/4,000
ลบ.มม.
กระบวนการไจโนจีนีซิส
• นับจานวน sperm 5 ช่องE (ใน 1 ช่องE จะมีช่อง
เล็กทีส
่ ุดอยู่ 16 ช่อง)
ดังนั้น จะมีช่องทีเ่ ล็กทีส
่ ุด 5
xสมมติ
16 = 80
่ อง้ 300 cell
นับชได
ดังนั้น 300/80 = 3.75 cell
ตอช
องเล็ก
่
่
คานวณความเขมข
้ นให
้
้เป็ น
cellตอมิ
ิ ร
่ ลลิลต
= 3.75 x 4,000 x 4,000 x
1,000
แปลงหน่วย
แปลงเป็ นความ
10
=
xนก
10
cell/ml.
เข6
มข
อนเจื
อ
จาก µl
้ ้ ่
จาง
คาตายตัวของ เป็ น ml.
่
Haemacytometer
กระบวนการไจโนจีนีซิส
• ปรับความเขมข
้ ให้เหมาะสมตอการฉาย
้าเชือ
้ นของน
้
่
รังสี
N 1 V1 = N 2 V2
(6 x 1010 cell/ml.) x V1 = (8 x 108 cell/ml.) x
10 ml.
V1 = 0.133333 ml. หรือ
sperm
133.333 µl.
เติม NaCl 0.85% ; 10,000 µl. - 133.333 µl. =
0.85% NaCl
9,866.667 µl.
ดังนั้น ในplate ทีจ
่ ะฉายรังสี มีสารละลาย 10
ml. หรือ 10,000 µl. ประกอบดวย
sperm สด
้
133.333 µl. และ NaCl 0.85% 9,866.667 µl
กระบวนการไจโนจีนีซิส
ฉายรังสี อล
ั ตราไวโอ
้
เลต
ทีค
่ วามเขมข
้ น
้ 196
ไมโครวัตต/ตร.ซม.
ผสมน้าเชือ
้
กับไข่
ประมาณ
1 กรัม
แกวงไข
ที
่
่ ไ่ ดรั
้ บการ
ผสมใน waterbath
อุณหภูม ิ 2 องศา
เซลเซียส นาน 10
เลี้ยงปลาตะเพียนนีโอเมล
ลูกปลาตะเพียนเมือ
่
ฟักเป็ นตัว
เมือ
่ ลูกปลาอายุ 14 วัน
จึงให้กินอาหารผสม
ฮอรโมน
์
17α methyl
testosterone
น.ส.พรรณทิพา
บุรรี ต
ั น์ (ลูก
ตาล)
เบอรติ
่ : 044 – 605223
์ ด ตอ
ในเวลาราชการ