Transcript 人感染H7N9禽流感病毒病原学特点及实验室检测

人感染H7N9禽流感病毒
实验室检测要求
菏泽市疾病预防控制中心检验科
2013年4月9日
15605301739
刘启林
1.H7N9实验室诊断方法。
2.实验室检测策略。
3.标本的采集、包装、保存和运送。
H7N9实验室诊断方法
1.病毒培养分离: 金标准,只要拿到毒株，就能确诊
传染病的种类。费时 5-7天.
2.血清学检测：酶病联免疫法（ELISA）费时
急性期、恢复期血清抗体 2-4周
3.核酸检测： 快速敏感特异,可以早期发现病人.
Real-Time PCR
实时检测，灵敏度更高
全封闭体系，不需电泳：
不易交叉污染，结果更快
4-5h。
目前国家推荐使用RealTimePCR检测方法；市疾控
中心流感网络实验室已具备
检测能力。
病例1
病例2
病例3
HA核酸同源性比较
人感染H7N9禽流感病毒序列测定
PB2
PB1
PA
HA
NP
NA
MP
NS
6个内部片段来源于H9N2
三株H7N9病毒为同一基因类型
实验室检测策略
1.不明原因肺炎病例标本检测：
流感网络实验室收到不明原因肺炎标本后，要在
12小时内进行标本处理和核酸检测，进行甲型通
用引物，甲型H1N1流感，季节性H3N2流感，A（
H5）、A (H7)亚型流感病毒以及SARS、新型冠状
病毒的检测。如果H5或H7亚型、SARS、新型冠状
病毒检测阳性，应将标本立即送省疾控中心进行
复核鉴定，省疾控复核阳性的标本，在24小时内
送国家流感中心进行复核鉴定和病毒分离。
实验室检测策略
2.暴发疫情标本检测：
流感网络实验室收到暴发疫情标本后要在
24小时内进行标本处理和核酸检测，进行
甲型通用引物，甲型H1N1流感，季节性
H3N2流感，A（H5）、A (H7)亚型流感病毒
的检测。如果H5或H7亚型检测阳性，立即
将标本送省疾控中心进行复核鉴定。
实验室检测策略
3.流感样病例标本检测：
流感网络实验室收到常规监测标本后，应进行甲
型通用引物，乙型通用引物、甲型H1N1流感，季
节性H3N2流感病毒检测。如果甲型通用引物为阳
性，甲型H1N1流感，季节性H3N2流感病毒检测为
阴性，应再进行A(H5)和A(H7)亚型检测。如果H5
或H7亚型检测阳性，立即将标本送省疾控中心进
行复核鉴定。
标本采集
标本种类及采集时间
1.上呼吸道标本：咽拭子，鼻咽拭子、鼻咽抽提物
最佳采集时间用药前发病3天内，一般不超过7天
2.下呼吸道标本：主要采集重症患者，无时间限制
包括气管吸取物，支气管洗液，肺组织活检标本
3.尸检标本：病人死亡后应尽早进行解剖，无菌条
件下主要采集肺组织和气管组织标本。
4.血清标本：急性期血样应尽早采集，发病后7天内
，恢复期血清在发病后2-4周采集。空腹采集35ml全血
采样材料
无菌拭子
采样管
专用记号笔
采样登记表
签字笔
采样液
可封口塑料袋
标本送检箱
个人防护设备(PPE）
标本采集要求
1.做好个人防护：
采集标本时应穿戴N95口罩、隔离衣、手套
帽子必要时使用防护镜或面罩。
2.信息完整：
<疑似人感染H7N9禽流感病例标本送检单>
姓名\性别\年龄\职业\现住址\发病日期\标本种
类\标本量\采集日期\备注。
标本采集要求
3. 选择不易破损的采样管
4.采样液：
Hanks氏液或MEM/DMEM液。禁用生理 盐水，
PBS。
5.避免污染：减少细菌污染，避免接触含菌较高
的部位；避免与病人检材交叉污染。
标本采集方法
1.咽拭子标本
采样时，让受检者
尽量张开口，用压舌板
将舌头轻轻压下，
用灭菌拭子擦拭
双侧扁桃体及咽后壁，
将棉签头部浸入采集液中，
尾部弃去，拧紧盖子。
2.鼻咽拭子标本
将无菌拭子轻轻插入
鼻道内鼻腭处，停留片刻后
缓慢转动退出，将棉签头部
浸入采集液中，尾部弃去，
和采集的咽拭子放入同一
采样管中，拧紧盖子。
3.鼻咽抽取物
用与负压泵相连的收集器
从鼻咽部抽取粘液。
先将收集器头部插入鼻腔，
接通负压，旋转收集器头部
并缓慢退出。收集抽取的粘液，
并用采样液3ml冲洗收集器3次。
鼻咽吸取装置
标本采集注意事项
1、采集咽拭子时 ，要让病人头部微仰，嘴张大，
露出两侧咽扁桃体，手持拭子在病人两侧扁桃体
用力来回擦拭至少3次，然后再在咽后壁中央擦拭
至少3次。
2、采集鼻咽拭子 时要将采集的一支咽拭子和一支
鼻拭子，放入同一采样管中,以便提高检出率。
标本采集注意事项
3、采集血清标本时，要空腹采集静脉血35ml，沿管壁慢慢注入采血管中，防止溶血
现象发生。置室温数小时，待血液完全凝
固后，1500-2000rpm离心10分钟，将血清
转于血清保存管，做好标记。
4、采样管应放在放有冰排的冷藏箱中，带到
采样地点，采样后要尽快转送4℃冰箱短时
保存或尽快送流感网络实验室。
标本包装
1.在采样管上用专用记号笔做好标记，用塑料袋密
封，每袋装一份标本。同时填写<疑似人感染H7N9
禽流感病例标本送检单>，用塑料袋密封 。
2.将装采样管的密封袋放入专用标本送检箱内，放
入冰排，以柔软物质填充，填充物应具吸水性和
缓冲能力。所有容器必须有生物危险标识，警告
用语或提示用语。
标本保存
1.标本采集后应在4 ℃条件下24小时内运送到流感
网络实验室，未能24小时内送至实验室的，应-70
℃以下保存，标本应尽量避免反复冻融。标本采
集一式二份，其中一份单独保存，以备复核。
2.用于病毒分离和核酸检测的标本，24小时能够检
测的可置于4℃保存，24小时内无法检测的置于70 ℃或以下保存。。
3.血清可在4 ℃放1-3天，-20 ℃以下可长期保存
标本运送
1. 标本送检应有专人专车运送，送检人员不
少于２人，要具有高度责任心，相关专业
知识，接受过生物安全培训。
2.标本送达实验室后，接收人员应做好个人防
护在生物安全柜内取出标本，核对标本送
检表和流行病调查表后填写标本接收单，
标本送检箱消毒后方可带出实验室。
谢
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