Transcript Chromosomes polyténiques bien étalés

Influence de la structure des chromosomes
sur l’expression des gènes
Préparation et observation des chromosomes
 Chez la drosophile: 4 paires de chromosomes
 Chromosomes polyténiques
 Glandes salivaires de larves de troisième stade
Intestin moyen
Caeca digestif
Proventricule
Corps
gras
Oesophage
Corps gras
Ganglion ventral
Hémisphères cérébraux
Glande
salivaire
Glandes salivaires
Disques imaginaux
Glandes salivaires
Machoire
Noyaux de cellules de glandes salivaires non éclatés (X100)
Bras gauche du II
Bras droit du II
Bras droit du III
X
IV
Bras gauche du III
Chromocentre
Chromosomes polyténiques bien étalés
(x400 coloration orcéine acétique)
3L
3R 2R
2L
X
4
Chromosomes polyténiques bien étalés
(x400 vue en contraste de phase sans coloration)
W (B6, C2)
Carte de Bridges
W
Observation microscope
photonique
W
Observation microscope
electronique
Observation de la région du gène white sur le chromosome X
Constriction (C) de la partie antérieure du chromosome X
Homologue
Partie délétée
Boucle de délétion
Appariement d’une délétion de la région des gènes
zeste/white avec un chromosome normal
3
2
1
Chromosome X
non délété
w
Chromosome X
délétion wN
Chromosome X
délétion wpn
Délétions de la région white du chromosome X
Inversion
Boucle d’inversion sur le chromosome X
Exemples d’inversion
Une inversion du chromosome X: In(I)wm4
Pour obtenir une bonne préparation de chromosomes
de drosophile il faut :
 Cultiver les mouches à basse température (19°/20°C)
 Le milieu doit être enrichi par de la levure de boulangerie fraîche
délayée dans un peu d’eau
 Une faible densité d’individu pour ensemencer la culture (5 à 10 couples)
 Prélever les larves avant leur immobilisation sur la paroi des flacons de
culture, elles ne doivent pas présenter d’appendices antérieurs plumeux.
Choisir des larves femelles !!!
Disque labial
Disque prothoracique
dorsal
Disque clypeo-labral
Disque patte T1
Disque œil antenne
Glandes salivaires
Disque d’aile
Disque patte T2
Disque d’haltère
Lobe du cerveau
Disque patte T3
ovaire
testicule
Nid d’histoblaste
dorsal antérieur
Nid d’histoblaste
dorsal postérieur
Disque génital
Ilots de cellules précurseurs
De l’intestin adulte
Tube de Malpighi
La Dissection
*Les larve de 3ème stade sont prélevées et déposées sur une lame
de microscope dans du sérum physiologique.
*La larve est observée sur fond noir au grossissement x10 d’une
loupe binoculaire
*Avec des pinces fines immobiliser la larve en la pinçant au tiers
antérieur et avec une deuxième pince tirer sur la machoire
*Vous devez aboutir à la figure suivante
Dissection de la larve
d’après : http://wwwusers.imaginet.fr/~pol/4chrgean.htm#Protocole
Intestin moyen
Caeca digestif
Proventricule
Corps
gras
Oesophage
Corps gras
Ganglion ventral
Hémisphères cérébraux
Glande
salivaire
Glandes salivaires
Disques imaginaux
Machoire
Dissection de la partie antérieure d’une larve de 3ème stade
*Les glandes salivaires se présentent sous la forme de deux tubes
réunis en un canal unique au niveau de la mâchoire (voir photo).
*Les glandes sont souvent recouvertes de corps gras.
Corps gras
Glandes salivaires
*Prélever les deux glandes en essayant au maximum d’éliminer
le corps gras ceci sans léser les glandes, les transporter sur une
autre lame dans de l’acide acétique 45%, acide lactique, et
laisser environ 30 secondes
*Remplacer l’acide acétique par la solution de coloration:
orcéine/acide acétique/acide lactique (2g orcéine dans 50 ml
acide acétique + 50ml acide lactique)
*Laisser colorer environ au moins 15 minutes
Couvrir la préparation avec une lamelle
Eclatement des noyaux des cellules des glandes salivaires
 Tapoter avec la pointe d’un crayon de papier sur la lamelle à
l’endroit ou se trouve les glandes salivaires.
 Taper fortement plusieurs fois sur la lamelle avec l’autre
extrémité du crayon
 Mettre la préparation sur du papier filtre et presser très
fortement avec le pouce sur la lamelle en faisant attention à ce
qu’elle ne glisse pas
Bras gauche du II
Bras droit du II
Bras droit du III
X
IV
Bras gauche du III
Chromocentre