Transcript Zapalenie

ZAPALENIE
Zapalenie cz. I
1. Rodzaje odpowiedzi organizmu na uszkodzenie
2. Definicja zapalenia i objawy kliniczne
3. Rola komórek
biorących udział w zapaleniu (neutrofile, makrofagi,
mastocyty, bazofile, eozynofile, limfocyty)
4. Mediatory biorące udział w zapaleniu, ich pochodzenie i działanie (układ
dopełniacza, układ kininowy, układ krzepnięcia, aminy biogenne, pochodne
kwasu arachidonowego, PAF, cytokiny, wolne rodniki, neuropeptydy)
5. Zmiany w przepływie krwi podczas reakcji zapalnej
6. Zjawiska komórkowe w przebiegu zapalenia (marginacja, adhezja, diapedeza,
chemotaksja, fagocytoza)
7. Gorączka jako jedna z odpowiedzi ostrej fazy i jej rola w organizmie
8. Pozytywne i negatywne białka ostrej fazy
9. Ćwiczenie praktyczne: oznaczanie fibrynogenu jako białka ostrej fazy
Zapalenie cz. II
1. Przyczyny zapalenia (czynniki zewnątrzpochodne-fizyczne, chemiczne,
biologiczne i wewnątrzpochodne)
2. Podział zapaleń ze względu na przebieg (nadostre, ostre, podostre,
przewlekłe),
3. Podział zapaleń ze względu na rozmieszczenie zmian chorobowych o
charakterze zapalenia (ogniskowe, wieloogniskowe, miejscowo rozległe,
rozlane)
4. Podział zapaleń ze względu na charakter zmian (zapalenie uszkadzające,
wytwórcze, wysiękowe: podział ze względu na charakter wysiękusurowicze, śluzowe, krwotoczne, ropne, włóknikowe)
5. Owulacja jako proces zapalny
6. Ćwiczenie praktyczne: Ocena płynu wysiękowego w przebiegu zapalenia
opłucnej.
NEUTROFILE
KOMÓRKI
MONONUKLEARNE
Czas od zadziałania bodźca zapalnego (w godzinach)
Akumulacja leukocytów w przebiegu zapalenia; jako pierwsze napływają neutrofile,
komórki mononuklearne pojawiają się później
ZAWARTOŚĆ ZIARNISTOŚCI NEUTROFILOWYCH
Ziarnistości azurofilne
Mieloperoksydaza
Elastaza
Lizozym
Katepsyna G
Defensyny
Ziarnistości specyficzne
Kolagenazy
Gelatynaza (MMP-8)
Heparynaza
Laktoferyna
Ziarnistości trzeciorzędowe
Gelatynaza (MMP-9)
Lizozym
DZIAŁANIE ANTYKOAGULACYJNE
Aktywacja białka C
Tworzenie prostacyklin
PROLIFERACJA KOMÓREK
Mitogen dla fibroblastów
regulacja wytwarzania PDGF
TROMBINA
DZIAŁANIE PROKOAGULACYJNE
Przekształcenie fibrynogenu do włóknika
Aktywacja płytek (receptor PAR)
Chemotaksja i agregacja płytek
DZIAŁANIE PROZAPALNE
Aktywacja płytek
Indukowanie wytwarzania IL-6 i IL-8
Aktywacja neutrofili
Chemotakcja neutrofili
FIBRYNOGEN
DZIAŁANIE PROZAPALNE
Aktywacja fagocytów:
nasilenie degranulacji,
fagocytozy, cytotoksyczności,
opóźnienie apoptozy.
Podścielisko dla migracji komórek
zapalnych.
Wpływ na lepkość krwi
DZIAŁANIE PROKOAGULACYJNE
Substrat dla tworzenia skrzepu
i naprawy tkanek
Wpływ na lepkość krwi
Oznaczanie fibrynogenu ( met. uproszczona )
Zasada oznaczania : fibrynogen zawarty w osoczu pod wpływem dodanej trombiny przekształca się we włóknik, który
następnie jest oznaczany ilościowo na drodze kolorymetrycznej wg Quicka. Procedura :
1: 0,25 ml osocza zmieszać z 2,5 ml buforu fosforanowego ( pH 6,4); 2 do powyższej mieszaniny szybko wprowadzić 0,5 ml
trombiny ( 20 jednostek MIH/ml płynu fizjologicznego);
3. całość inkubować 25 min. (temp. pok.)
4. mieszaninę poddać wirowaniu ( 4 tyś. obr./min) przez 15 min.
5. supernatant zlać, pozostały skrzep (włóknik) osuszyć odwracając probówkę do góry
dnem;
6. dodać 1 ml NaOH ( 10 %) i zawartość probówki ogrzewać (temp. ok. 80 °C), aż do
całkowitego rozpuszczenia białka;
7. dodać 1,75 ml ml. wody dest. i delikatnie wymieszać ;
8 z tak rozcieńczonego roztworu pobrać 1 ml i przenieść do innej probówki ;
9. dodać 3 ml 10% roztworu Na2CO3 i 0,5 ml odczynnika Folina-Ciocialteu'a ( rozcieńczonego z wodą dest. w
stosunku 1:1);
10. całość inkubować 5-15 min.
11. dokonać odczytu absorbancji przy 720 nm względem kontroli ( 1 ml płynu
fizjologicznego + 3 ml 10% roztworu Na2CO3 + 0,5 ml rozcieńczonego odczynnika
Folina-Ciocialteu'a;
12. znając wartość absorbancji, odczytać z uprzednio przygotowanej krzywej wzorcowej
stężenie tyrozyny;
13. stężenie fibrynogenu (X) w osoczu obliczyć ze wzoru :
X = (T x 10,8 x 10) : 0,9 =120 x T
gdzie : X- stężenie fibrynogenu ( mg/ml)
T - stężenie tyrozyny odczytane z krzywej wzorcowej ( mg/ml)
10,8 - mnożnik przeliczeniowy tyrozyny na fibrynogen
0,9 - poprawka uwzględniająca wprowadzony do krwi w stosunku 1:9 antykoagulant
( wersenian, cytrynian lub szczawian sodu)
Przygotowanie krzywej wzorcowej:
przygotować szereg probówek zawierających 1 ml roztworu kolejno : 5, 25, 50, 100, 200,
i 400 mg tyrozyny
do każdej dodać 3 ml 10 % roztworu Na2CO3 i 0,5 ml rozcieńczonego z wodą dest. odcz.
Folina-Ciocialteu'a
po 10 min. dokonać odczytu absorbancji
na podstawie uzyskanych wyników ustalić graficznie zależność absorbancji od stężenia
tyrozyny w probówce.
Owulacja jako proces zapalny
Ćwiczenie praktyczne: Ocena płynu wysiękowego w
przebiegu zapalenia opłucnej.
WYKONANIE ROZMAZU NA SZKIEŁKU PODSTAWOWYM
umieścić kroplę badanego płynu na szkiełku podstawowym ( suchym i
odtłuszczonym).
drugie szkiełko podstawowe o oszlifowanej krawędzi ustawić pod kątem 30-45 ° do
szkiełka z kroplą.
-
zaczekać aż kropla rozpłynie się wzdłuż krawędzi i lekko przyciskając przesunąć
dość szybko ku drugiemu brzegowi ( dobry rozmaz powinien być cienki).
-
wykonany rozmaz wysuszyć w temp. pokojowej.
Barwienie met. Pappenheima
suchy rozmaz zalać barwnikiem May-Griinwalda - na 3 min.
dodać kilka kropli wody dest. - odczekać 3 min.
-
zlać barwnik ze szkiełka
nanieść roztwór barwnika Giemsy ( 3 krople barwnika / 2 ml wody dest. o pH 7,2) i
odczekać 15-20 min. spłukać preparat wodą dest. wysuszyć na powietrzu oglądać pod
immersją
Różnicowanie krwinek białych
określa ich wzajemny stosunek odsetkowy - obraz
Schillinga.
Skład odsetkowy poszczególnych krwinek białych liczymy ze 100, 200 lub 500,
przesuwając obraz po linii meandrowej w kilku miejscach rozmazu.