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Labo de Microbiologie (BIO 3526)
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Mes coordonnées
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•
Enseignant : John Basso
Courriel : [email protected]
Bureau : Bioscience 102
Tél. : 613-562-5800 poste 6358
Page web :
http://mysite.science.uottawa.ca/jbasso/accueil.htm
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Mes disponibilités
•Courriel :
•Toute la semaine avant 5h
•Tél. :
•LUN - VEN : 9-5
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Évaluation du cours
• Quiz
– 2 points boni pour 100% sur 4/8 quiz
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•
•
Devoirs
2 Rapports
Mi-session
Présentations 3MT
Examen pratique
– En labo
– Entrevue
• Examen final
20%
10%
25%
10%
5%
5%
25%
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Survol de la page web
• http://mysite.science.uottawa.ca/jbasso/accueil.htm
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Microbiologie
Travailler dans le labo de
microbiologie
Au début du labo
• Se laver les mains
aussitôt que vous
entrez dans le
laboratoire
– Aide à prévenir la
contamination des
cultures avec des
microorganismes de
votre flore naturelle
Avant de commencer – À la fin
• Faire la désinfection de votre espace de travail
– Aide à prévenir la contamination des cultures avec
des microorganismes de votre environnement
Avant de quitter le labo
• Se laver les mains
avant de quittez le
laboratoire
– Aide à prévenir la
contamination de
l’environnement
Travailler en Microbiologie
Technique Stérile
Le Matériel
• Le matériel utilisé pour la culture et la
manipulation de microorganismes doit être
stérile et maintenu stérile
–
–
–
–
–
Milieu de culture
Éprouvettes
Assiettes de Pétris
Boucle d’ensemencement/inoculation
Etc.
• Utiliser la technique stérile pour tous les
transferts de microorganismes
– Préviens la contamination de vos cultures
– Préviens la contamination de votre
environnement
– Préviens la contamination de soi
• Toutes les bactéries sont des opportunistes
Transferts par la Technique Stérile
• Stériliser la boucle
d’ensemencement au
bruleur
– Le fil entier doit devenir
rouge
• Ne pas déposer sur la
table!
• Laisser refroidir
Boucle
d’ensemencement
Transferts par la Technique Stérile
• Retirer le capuchon
avec le petit doigt de
la main qui tient la
boucle d’inoculation
– Ne pas déposer le
capuchon sur la
table!
Enlever
capuchon
Transferts par la Technique Stérile
• Chauffer l’ouverture
du tube au bruleur
– Garder l’orientation
du tube aussi prêt de
l’horizontal que
possible
– Garder l’ouverture
du capuchon vers le
bas
Réchauffement de
l’ouverture
Transferts par la Technique Stérile
• Utiliser la boucle
stérile pour retirer
l’inoculum
– Liquide de bouillons
– Solide de géloses
– Solide de pentes
Retirer
l’inoculum
Transferts par la Technique Stérile
• Chauffer l’ouverture
du tube au bruleur
encore une fois!
– Garder l’orientation
du tube aussi prêt de
l’horizontal que
possible
Réchauffement de
l’ouverture
Transferts par la Technique Stérile
• Remettre le
capuchon sur la
culture pure
• Retourner le tube au
support à
éprouvettes
Refermer le
tube
Transferts par la Technique Stérile
• Répéter les mêmes
étapes pour inoculer
le nouveau tube
– Retirer capuchon
– Chauffer l’ouverture
– Inoculer
– Chauffer l’ouverture
– Fermer le tube
Inoculation
Travailler avec des solutions
Définitions
• Solution
– Mélange de 2 substances ou plus dans une phase
unique
– Solution composée de deux composantes
• Le soluté
– Partie qui est dissoute ou diluée – Habituellement la plus
petite quantité
• Le solvant (ou Diluent)
– Partie de la solution dans laquelle le soluté est dissout –
Habituellement le plus grand volume
Concentrations
Concentration =
Quantité de soluté
Quantité de solution (Pas solvant)
Quatre façons d’exprimer les concentrations:
–
–
–
–
Concentration Molaire (Molarité)
Pourcentages
Masse par volume
Rapports
Molarité
• No de Moles de soluté/Litre de solution
– Masse de soluté/PM de soluté = Moles de soluté
– Moles de soluté/vol en L de solution = Molarité
Pourcentages
• Les concentrations en pourcentage peuvent
être exprimé en tant que :
– V/V – volume de soluté/100 ml de solution
– m/m – Masse de soluté/ 100g de solution
– m/V – Masse de soluté/100 ml de solution
• Tous représentent des fractions de 100
Pourcentages (suite)
• %V/V
– Ex. 4.1L soluté/55L solution =7.5%
• Dois avoir les mêmes unités en haut et en bas!
• % m/V
– Ex. 16g soluté/50ml solution =32%
• Dois avoir des unités du même ordre de grandeur en
haut et en bas!
• % m/m
– Ex. 1.7g soluté/35g solution =4.9%
• Dois avoir les mêmes unités en haut et en bas!
Masse par volume
• Une quantité de masse par un volume
– Ex. 1kg/L
– Connaître la différence entre une quantité et une
concentration!
• Dans l’exemple ci-dessus 1 litre contient 1kg (une
quantité)
100g
– Quelle quantité retrouverait-on dans 100ml?
– Quel est le pourcentage (m/v) de cette solution? 100%
Les Rapports
• Façon d’exprimer la relation entre différents
constituants
• Exprimé d’après le nombre de parties de
chaque composante
– Ex. 24 ml de chloroforme + 25 ml de phénol + 1 ml
d’isoamylalcool
• Donc 24 parties + 25 parties + 1 partie
• Rapport: 24:25:1
Combien de parties au total?
50
Les Dilutions
Réduire une Concentration
Une Fraction
Dilutions
• Dilution = produire des solutions plus faibles à
partir de solutions plus fortes
• Exemple : Faire du jus d’orange à partir de
concentré. Mélanger une cannette de jus
d’orange concentré avec trois (3) cannettes
d’eau
Dilutions (suite)
• Les dilutions sont exprimées comme une
fraction du nombre de parties du soluté sur le
nombre total de parties de la solution (parties
de soluté + parties de solvant)
• Dans l’exemple du jus d’orange, la dilution
serait exprimée comme 1/4, pour une
cannette de jus (1 partie) à un TOTAL de
quatre parties de solution (1 partie de jus + 3
parties d’eau)
Un autre exemple
• Si vous diluez 1 ml de sérum avec 9 ml de
saline, la dilution serait écrite 1/10 ou dite
« un dans dix », car vous exprimez le volume
de la solution étant diluée (1 ml de sérum) par
le volume final TOTAL de la dilution (10 ml
totaux).
Un autre exemple
• Une (1) partie d’acide concentré est diluée
avec 100 parties d’eau. Le volume total de la
solution est 101 parties (1 partie d’acide + 100
parties d’eau). La dilution est écrite comme
1/101 ou dite “un dans cent un ”.
Dilutions (suite)
• Les dilutions sont toujours une fraction qui
décrit la relation d’UNE partie de soluté sur un
nombre total de parties de solution
• Donc le numérateur de la fraction doit être 1
• Si plus d’une partie de soluté est diluée, vous
devrez transformer la fraction
Exemple
• Deux (2) parties d’un colorant sont diluées
avec huit (8) parties de solvant
– Le nombre de parties total de solution est 10
parties (2 parties de colorant + 8 parties de
solvant)
– La dilution est initialement exprimée comme 2/10
– Pour transformer la fraction afin d’avoir un
numérateur de un, utilisez une équation de
rapport et de proportion :
• La dilution est exprimée comme étant 1/5
Problème
1. Deux parties de sang sont diluées avec cinq
parties de saline
– Quelle est la dilution? 2/(2+5) = 2/7 =1/3.5
2. 10 ml de saline sont ajoutés à 0,05 L d’eau
– Quelle est la dilution? 10/(10+50) = 10/60=1/6
Problème : Plus d’un ingrédient
1. Une partie de saline et trois parties de sucre
sont ajoutées à 6 parties d’eau
– Quelles sont les dilutions
Saline: 1/(1+3+6) = 1/10
Sucre: 3/(1+3+6) 3/10 = 1/3.3
2. Comment est-ce que vous prépareriez 15mL
de cette solution?
• Exprimer chaque composante sur le même
dénominateur commun!
Saline: 1/10 + Sucre 3/10
= 1.5/15 + 4.5/15
Dilutions en Série
• Dilutions faites à partir de dilutions
• Les dilutions sont multiplicatives
– Ex.
–
–
–
–
A1: 1/10
A2: 1/4
A3: 0.5/1.5 = 1/3
La dilution finale de la série = (A1 X A2 X A3) = 1/120
Le Facteur de Dilution
• Représente l’inverse de la dilution
• Exprimé comme le dénominateur de la fraction suivi
de “X”
– EX. Une dilution de 1/10 représente un facteur de dilution
de 10X
• Le facteur de dilution permet de déterminer la
concentration originale
– Conc. finale X le facteur de dilution = conc. initiale
Déterminer la fraction requise
(La Dilution)
Déterminer le facteur de réduction
(Le facteur de dilution)
=
Qu’est que j’ai
Qu’est que je veux
Ex. Vous avez une solution de 25 mg/ml et
vous voulez obtenir une solution de 5mg/ml
Donc le facteur de réduction est de: 25mg/ml
5mg/ml
= 5 (Facteur de dilution)
La fraction est égale à 1/le facteur de dilution= 1/5 (la dilution)
Déterminer les quantités requises
• Ex. Vous désirez 55 ml d’une solution qui
représente une dilution de 1/5
– Utilisez une équation de rapport et de proportion:
– 1/5 = x/55 = 11/55
• Donc 11 ml de soluté / (55 ml – 11 ml) de
solvant
• = 11 ml de soluté / 44 ml de solvant
Problème
• Préparer 25mL d’une solution de 2mM à partir
d’un stock de 0.1M
– Quel est le facteur de dilution requis? 50
– Quelle est la dilution requise? 1/50
– Quelles volumes de solvant et de soluté sont
requis?
Soluté 0.5ml
Solvant 24.5ml
Problème
• Combien d’une solution de HCl de 10M est-ce
que vous devez ajouter à 18mL d’eau afin
d’obtenir une solution de 1M?
– Quelle est la dilution requise? 1/10
– Quels volumes de solvant et de soluté sont
requis?
1 partie Soluté / 10 parties de Solution
1 partie Soluté / 1 partie Soluté + 9 parties Solvant
Donc 9 parties de solvant = 18mL ou 1 partie = 2mL