Transcript Slide 1
Fibrocell Zehra Aysun Kezer Fibrocell Nasıl? • • • • Biyopsi alım Serum üretimi için kan alımı Fibroblast üretimi Uygulama Biyopsi Alımı Tekniği • Hastanın kulak arkasından ya da kol içinden steril şartlarda 3,0mm’lik punch biyopsi ile mercimek tanesi büyülüğünde 1 adet doku biyopsisi alınır. • Uygulanan alan önceden lokal ve topikal olarak bir anestetik kremle (EMLA krem vs.) uyuşturulur. • Biyopsi % 1 antibiyotik içeren taşıma solüsyonuna ( RPMI ) aktarılıp, hastadan alınan kan ile birlikte aseptik koşullarda soğuk zincir ile Laboratuvara gönderilir ve üretime alınır. Kan Alımı • Üretimin tamamiyle kişiye özel olması, üretim esnasında da kişinin kendi serumunun kullanılmasını gerektirir. • İlk uygulamada, 60 cc kan alınır. • 60 cc kan 25 cc serum. • 12 cc Fibrocell soln • 13 cc analizler, otolog medya Kan alımı • Kan özel serum tüpüne alınır ve içindeki pıhtılaşma faktörünün etkisini artırmak için yavaşça 5-6 defa alt üst edilir. • Serum için özel jelli (sarı kapaklı) tüplerin tercih edilmesi hemolizin önlenmesi ve serumun rahat ayrışması bakımından tercih edilebilir. • Kanın pıhtılaşması için 10-20 dk. tüp dik pozisyonda dinlendirilir. • Ardından 12o, 1500 G’de 10 dk boyunca santrifüj edilir. • Alınan kanlar soğuk zincire mümkün olduğunca dik bir şekilde yerleştirilip sabitlenmeye çalışılır. Biyopsinin lojistiği • Soğuk zincir; zararsız kimyasal bir madde ile kaplı özel olarak hazırlanmış strofor kutularda +4 - + 10°C sıcaklıkta olacak şekilde düzenlenmiştir. Alınan biyopsi ertesi gün laboratuara ulaştırılır. • Cuma günleri hariç haftanın her günü biyopsi alınabilmektedir. Biyopsinin lojistiği • Labaratuara 24 saat içerisinde ulaşan deri biyopsisi steril koşullarda traşlanıp yıkanarak ufak parçalara ayrılır ve üzerine kişinin serumundan elde edilen otolog medya ilave edilerek inkübasyona bırakılır. İzole edilmiş fibroblast hücreleri İn vitro fibroblast hücre kültürü Doku mühendisliğinde, GMP kurallarına göre, her hastanın hücre üretim prosedürü bir oturumda gerçekleştirilir ve çapraz kontaminasyon riski bulunmamaktadır. Bir hastanın hücresine yapılan işlem bittikten sonra diğer hastanın hücresi için işleme geçilir. Her işlem öncesinde de ortam sterilize edilir. Fibroblast Hücre Kültür Üretimi • Fibroblast hücre kültürü üretimi GMP esaslarına uygun olarak yapılır. • Her hücre işleme tek başına alınır. • Her numuneye bir işlem kodu verilir ( örn: F 13-XXX) • Biyopsi kabı ve kan tüpleri aynı kodla işaretlenir. • Kalite konrol sorumlusu her aşamayı inceler. FİBROBLAST HÜCRE KÜLTÜR ÜRETİMİ: Üretim sorumlu işleme alacağı hasta flaskasının üzerindeki kodla serum üzerindeki kodu karşılaştırarak doğrular. Her bir hastaya ait hücre flaskası inkübatör içerisinde ayrı kabinlere yerleştirilir. Bu sayede çapraz kontaminasyondan korunmuş olur. Hasta hücreleri birbirine karıştırılmaz. FİBROBLAST HÜCRE KÜLTÜR ÜRETİMİ: • Hücre işleme aşamaları üretim sorumlusu tarafından kayıt altına alınır kalite kontrol tarafından denetlemesi yapılır. • Hücre canlılığı, sayısı, fenotipik özellikleri ve (IPC)üretim esnasında mikrobiyel kontroller sürekli olarak ölçümlenerek izlenir. Uygulama Protokolü • Yaklaşık 1 ay sonunda mL’sinde 7-10x106 olacak şekilde istenilen hücre yoğunluğuna ulaşıldığında, steril alanda fibroblast hücrelerinin enjektör (min 4cc) içerisine dolumu yapılarak enjeksiyon için soğuk zincir ile hekime ulaştırılır. • Hekim hasta ile randevulaşarak kültür fibroblastların geleceği gün hasta, tedavi için kliniğe gelir. Uygulama Protokolü • Tercihie ve uygulama bölgesine göre genellikle 30G incelikte 12-13 mm uzunlukta steril enjektör kullanılmaktadır. Enjektörün luerlock olması uygulamada rahatlık ve emniyet sağlayacaktır. • Solüsyon intradermal olarak enjekte edilir ve 3-6 hafta ara ile 3 tekrar olarak yapılır. • Kırışıklık düzeltmede en uygulanan bölgeler glabellar bölge, göz kenarı kaz ayağı bölgesi, burun dudak hattı, dudak kenarıdır. • Hekim tarafından istenirse değişik dolgu maddeleri eklenerek de kullanılabilir. Hücre Üretilmesi • Hücreler bırakıldıkları yere dağılırken kendileri dolgu maddelerini üretir. • Biyopsi materyalinden elde edilen hücreler ileride dondurularak tekrar biyopsi alınmadan kullanılabilir. Dondurulmuş hücreler sayılarına bağlı olarak yaklaşık 6-8 kez kullanılabilir. • Fibrocell, FDA tarafından onaylanmış bir yöntem ile üretilmektedir. FibroCell Uygulama öncesinde yapılması gerekenler • Uygulama yapılacak hasta kan inceltici tedavisi ( Aspirin, Kumarin, Plavix ) görüyorsa bir gün önceden bu ilaçların kesilmesi gereklidir. • Uygulanacak bölge öncelikle mekanik olarak ( gazlı bez veya pamuk ) ile temizlenmelidir. • Özellikle bayanlarda yüzde yapılacak uygulamalarda makyaj varsa kişi bunu önceden çıkarmalı ya da doktor uygulama öncesi uygun temzileyicilerle ( cleasing milk & tonik) temizlenmeli ve cilt dezenfeksiyonu için piyasada mevcut muayenehanelerde kullanılan cilt dezenfeksiyon solüsyonları ile hasta uygulanmaya hazırlanmalıdır.