Transcript Regulación de Medicamentos Biotecnológicos en la UE

debido a su complejidad no pueden ser completamente
caracterizados mediante técnicas analíticas solamente
calidad determinada por la combinación de análisis físicoquímicos y biológicos, además del proceso de producción y
su control (controles en proceso)
la actividad biológica e inmunogenicidad dependen de
todas las “características estructurales”
DIRECTIVA 2003/63/CE DE LA COMISIÓN de 25 de junio de 2003
Productos biotecnológicos
 proteínas y glicoproteínas
 moléculas grandes y complejas
 microheterogeneidad inherente debido a
modificaciones post-traduccionales
i) Idénticas a la molécula natural
Insulina*
Hormona de crecimiento
ii) Moléculas modificadas/nuevas
Proteínas de fusión (TNFR:Fc)
Anticuerpos monoclonales “humanizados”
'Pharmed' goats seek drug license
Imagine you could get life-saving
medicines from milking a common
farmyard animal.
That idea moves a step closer to
becoming a reality this week, as the
European Medicines Agency (EMEA)
considers the final stages of an
application to license a natural human
protein extracted from the milk of
goats.
22 February 2006
EU funding for GM plant vaccines
European scientists have launched a project
to make pharmaceutically useful products in
genetically modified crops. The consortium,
called Pharma-Planta, wants to produce
vaccines and other treatments for major
diseases, such as HIV/Aids, rabies and TB.
The EU has put 12 million euros (£8m) into
the project, which hopes to start clinical trials
by 2009.
The first product, possibly grown in maize, is
likely to be an antibody that can be used to
block HIV transmission.
It would be incorporated into a microbicidal
cream that could be used in the vagina.
12 July 2004
Calidad, eficacia:
Caracterización compleja
Impurezas (del proceso de producción y relacionadas con
el producto)
Seguridad:
Control de bancos celulares
Control durante el proceso de producción
Control de reactivos (e.g. suero bovino, enzimas)
Estudios de inactivación viral
MATERIAL DE PARTIDA
PROCESO DE PRODUCCION
CARACTERIZACIÓN
CONSISTENCIA DE PRODUCCIÓN
ESTABILIDAD
Aspectos generales a controlar durante el proceso de producción:
 caracterización del vector de expresión
 su estabilidad durante todo el proceso
 establecimiento y control de los bancos celulares
 controles durante la fermentación y la purificación del producto
 requisitos mínimos para la caracterización del producto
 determinación de la consistencia de producción
 ensayos de liberación del producto
Master Cell Bank (MCB)
Working Cell Bank (WCB)
End Of Production Cells
(EOPC)
BACTERIAS
LEVADURAS
Líneas celulares
de mamífero
Animales
TRANSGÉNICOS
- Fácil producción a gran escala
- Producción rápida, costo bajo
- No modificaciones secundarias o 
- Menor antigenicidad
- Producción compleja, costo elevado
- Riesgo de contaminación
- Menor antigenicidad (?)
- Mantenimiento de animales, GMP
- Riesgo de contaminación
Cloned Cells
Anion Exchange Chromatography
MCB Cells
Ammonium Sulphate Precipitation
WCB Cells
Hydrophobic Interaction Chromatography
Production Cells
Reverse Phase Chromatography
Production Harvest
Anion Exchange Chromatography
Clarified Supernatant
Gel Filtration for Buffer Exchange
Ultradiafiltration
Nanofiltration for Virus Removal
Sterile Filtrate – Batch Purified Product
(Drug Substance)
Operating Parameters
Load rate: 5 to 10 g/L resin
Pool dilution factor:
4.5 to 5.5 fold
Elution flow rate:
0.15 to 0.20 CV/min
Pool hold temperature: 2.08.0C
Process Step
In-process Controls
Column: Cation
exchange
chromatography
SP Sepharose HP
resin, bed volume
~21.5 L
RP-HPLC purity, main peak:
 86.8%
CEX-HPLC purity, main peak:
 81.8%
SE-HPLC purity, main peak:
 99.0%
E coli protein:  2.5 ng/mg
Bacterial endotoxin: < 0.24
EU/mL
Aerobic bioburden:
< 30 CFU/mL
Step yield:
32.2% to 63.3%
Pool volume:
40.9 to 77.4 L
Position of start collect:
46.6 to 95.1 min
Peak shape: Pass
Impurity
Residual level
Host cell DNA
< 2.5 ng/max. dose
CHO Proteins
< 0.375 µg/max. dose
Insulin
< 17 ng/mL (below the LOQ)
Gentamicin
< 2.5 ng/mL (below the LOQ)
Anti-foam agent
< 12.5 µg/mL
Protein A
< 0.4 ng/mL
TRIS
< 83 µM (10 g/mL)
VALIDACION del PROCESO de PRODUCCION
Requerimientos mínimos para productos
biológicos/biotecnológicos:
• Numero de lotes de producción requerido depende de la
complejidad del proceso de producción
• Al menos tres lotes consecutivos obtenidos a la escala de
producción comercial propuesta
Caracterización Físico-Química
Estructura primaria
• Análisis de la composición de aminoácidos
• Secuenciación N/C-terminal
• Mapa peptídico y secuenciación/MS
Estructura secundaria y terciaria
•
•
•
•
•
Dicroísmo circular
Resonancia Magnética Nuclear
Cristalografía de rayos-X
Inmuno-reactividad
Ensayos biológicos
Composición
(cualitativa y cuantitativa)
Otras propiedades
• Carga: CE, IEC, IEF
• Tamaño: AUC, SDS-PAGE, SEHPLC, MALDI-TOF MS
• Inmuno-reactividad: IP, WB
Actividad Biológica
Ensayos biológicos
en cultivos celulares
INTERFERON
Ensayos biológicos
en animales
ERITROPOYETINA
Ensayos bioquímicos
FACTOR VIII
 potencia
 consistencia de producción
Modificación de proteínas
(product-related impurities)
 Oxidación
 Desamidación
 Agregación
 Clipping
 Plegamiento inadecuado
 Glicosilación alterada
 Modificación química
 Puentes disulfuro inadecuados
Caracterización
extensiva durante el
desarrollo del producto
cumplimiento
de GMPs
Controles
en-proceso
Control de los
materiales de partida
Validación
de la
producción
Estudios de
estabilidad
Especificaciones
SEGURIDAD & EFICACIA
 No se recomiendan métodos ni límites específicos (propios del
fabricante en función de su propia experiencia)
e.g. formas desamido
 Describe los principios que deben guiar el establecimiento de
especificaciones a diferentes niveles del proceso de producción:






caracterización del producto
controles en proceso
materiales de partida
liberación del producto
validación de los métodos de análisis
uso de estándares de referencia, etc.
•
•
•
•
•
•
•
rDNA products
EPO
insulin
somatropin
IFN alfa
IFN gamma
glucagon
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•
•
•
•
•
rhuFVIII
alteplase (rtPA)
calcitonin
HBsAg
molgramostim (GM-CSF)
MoAbs
Las especificaciones de una monografía de Ph. Eur.
se consideran requisitos mínimos pero no son
suficientes para definir cada producto en particular.
Las especificaciones son propias de cada producto
y asociadas a cada proceso de producción (ej.
EPO)
 Estudios de estabilidad que han de presentarse al solicitar la
autorización comercial
 Incluye aspectos tales como
•
•
•
•
frecuencia a la que se debe medir la estabilidad
condiciones de almacenamiento
parámetros que deben ser medidos
criterios de selección de los lotes que se incluyen en los
estudios, etc.
Final product
• at least 3 batches, representative of the scale of
production and the material used in preclinical and
clinical studies
• Final container, from different batches of bulk material
where possible
• Minimum of 6 months stability data at the time of
submission
• Expiry date based upon the actual data submitted