Transcript 第五章各类成分的分析
第五章 中药制剂中各类化学成分分析 药物分析 学科 【目的要求】 掌握中药制剂中生物碱、黄酮、三萜皂苷、醌类成 分的定性、定量原理与方法。 熟悉中药制剂中挥发性成分、木质素类成分的定性、 定量原理与方法。 了解其他成分（有机酸类、环烯醚萜类、香豆素类、 单萜及二萜类、多糖类）的分析方法。 药物分析学科 第五章 中药制剂中各类化学成分分析 学习方法 结构 性质 分析方法 结构：母核、官能团、分子量等 物理化学性质：溶解性、酸碱性、挥发性、氧化还原性、 旋光性、光谱特性等 分析方法： 总类成分：化学分析法、分光光度法 单一成分：各种色谱法（GC、HPLC、HPCE、TLCS、SFC等） 药物分析学科 第一节 生物碱类成分分析 一、概述 1、概念：生物碱是生物界除生物体必需的含氮化合物（如 中药名称 主要生物碱成分 中药名称 主要生物碱成分 氨基酸、蛋白质和B族维生素等）之外的所有含氮有机化合 山豆根 苦参碱、氧化苦参碱、 苦 参 苦参碱、槐定碱、槐果碱、 槐果碱、金雀花碱 氧化苦参碱 物，因其结构中氮原子上的未共享电子对而大多具有碱性。 制川乌 乌头碱、次乌头碱、 麻 黄 麻黄碱、伪麻黄碱、去甲麻 新乌头碱 黄碱、甲基麻黄碱 2、含生物碱成分的常用中药： 马钱子 马钱子碱、番木鳖碱 黄 连 小檗碱、巴马丁、药根碱、 （士的宁）、伪马钱子 黄连碱 碱、伪番木鳖碱 黄 柏 小檗碱、药根碱、木兰花碱 延胡索 延胡索乙素、延胡索甲 防 己 粉防己碱、防己诺林碱、轮 素、原阿片碱、黄连碱 环藤酚碱、木兰碱 药物分析学科 第一节 生物碱类成分分析 二、理化性质 1、溶解性 大多数生物碱难溶于水，易溶于氯仿、乙醚、乙醇、丙酮 及苯等有机溶剂； 与酸结合成盐后水溶性增加，但酸不同，生成的盐水溶性 有差异； 季铵型生物碱、有氮氧配位键的生物碱易溶于水 液体生物碱及一些小分子固体生物碱则既溶于水也可溶于 有机溶剂； 含有酸性官能团或酯键的生物碱还可溶于一些碱液或热苛 性碱液。 药物分析学科 第一节 生物碱类成分分析 二、理化性质 2、沉淀反应 大多数生物碱在酸性水溶液中可以与某些试剂生成不溶于 水的复盐或分子复合物。 生物碱沉淀剂：碘化物复盐、重金属盐、大分子有机酸 马钱子散中生物碱成分的鉴别 取马钱子散1g，加浓氨试液数滴及氯仿10ml，浸泡数小时， 滤过，取滤液1ml蒸干，残渣加稀盐酸1ml使溶解，加碘化铋 钾试液1~2滴，即生成黄棕色沉淀。 药物分析学科 第一节 生物碱类成分分析 二、理化性质 3、显色反应 生物碱在一定pH条件下可与一些酸性染料（多为磺酸肽 类）生成有色络合物，可被氯仿等有机溶剂定量提出 结构中具有酯键的酯碱如乌头碱等可与异羟肟酸铁试剂反 应产生紫红色； 这些特点可用于中药制剂中生物碱成分的分析 药物分析学科 第一节 生物碱类成分分析 二、理化性质 4、紫外光谱特性 结构中具有共轭体系的生物碱均有紫外吸收 结构中的氮原子与发色团直接连接或参与发色团的生物碱， 其吸收峰位置与测定时溶剂的pH有关。 药物分析学科 第一节 生物碱类成分分析 三、定性鉴别 1、一般理化鉴别 沉淀反应是生物碱理化鉴别常用方法，此反应一般在 酸性水溶液中进行 制备样品供试液时必须净化处理，防止假阳性结果 药物分析学科 第一节 生物碱类成分分析 三、定性鉴别 讨论：如何改进？ 2、薄层色谱法 ①吸附剂：硅胶、氧化铝； ②展开剂：多以氯仿、苯等低极性溶剂，加入其他溶剂调整展 开剂的极性； ③由于硅胶显弱酸性，强碱性的生物碱在硅胶色谱板上能形成 盐，使Rf值很小或拖尾、形成复斑等。 ④显色剂：常用改良碘化铋钾试剂，有时喷碘化铋钾试剂之后 再喷硝酸钠试剂，可使样品斑点更加清晰。如有荧光，不用显色 ⑤ 亦可用碘蒸汽、硫酸铈、碘铂酸等其他的试剂显色。 药物分析学科 第一节 生物碱类成分分析 三、定性鉴别 3、纸色谱法 可用于生物碱盐或游离碱的鉴别 4、HPLC： 保留时间定性 5、GC： 可用于小分子生物碱的鉴别 药物分析学科 第一节 生物碱类成分分析 四、含量测定 （一）总生物碱的含量测定 1、化学分析法 ①主要使用酸碱滴定法。 ②强碱滴定生物碱盐时，在70%~90%的乙醇介质中终点比在水中 明显，因此常将生物碱盐溶于90%乙醇，再用标准碱乙醇液滴 定。 ③若选择的溶剂及指示终点方法合适，还可用非水滴定法进行 ④要求：总生物碱的纯度较高，用于药味少成分简单制剂的测定 药物分析学科 第一节 生物碱类成分分析 四、含量测定 （一）总生物碱的含量测定 2、分光光度法 （1）直接测定法 ①不经过化学反应、利用生物碱物质自身的光吸收直接进行比色 测定的方法。 ②一般用于药味较少、干扰小的中药制剂中总生物碱的含量测定。 药物分析学科 第一节 生物碱类成分分析 四、含量测定 （一）总生物碱的含量测定 （2）酸性染料比色法（例题P101） 原理： BH++ In- → BH+·In-（水相）→ BH+·In-（有机相） 关键： 酸性染料的选择：甲基橙、溴麝香草酚兰（BTB）和溴甲酚绿等； pH值的选择：与生物碱和酸性染料的性质有关。 有机溶剂的选择：一般用氯仿、二氯甲烷 水分的干扰及消除 药物分析学科 第一节 生物碱类成分分析 四、含量测定 （一）总生物碱的含量测定 （3）雷氏盐比色法 原理： BH++ [Cr(NH3)2(SCN)4]-→ BH [Cr(NH3)2(SCN)4] 测定方法： （复盐沉淀） 复盐沉淀→溶于丙酮（或甲醇）→直接比色测定 样品＋定量过量的雷氏盐→过滤→滤液→比色测定λmax=520nm （4）异羟肟酸铁比色法 用于含有酯键结构的生物碱的测定 药物分析学科 第一节 生物碱类成分分析 四、含量测定 （二）单体生物碱成分含量测定 1、TLCS ①生物碱不具有紫外吸收或挥发性时可用本法测定； ②选用的吸附剂、展开剂及显色方法与鉴别相似； ③使用改良碘化铋钾等作为显色剂时，必须完全挥干展开剂后（尤 其在碱性环境下展开的）才可喷洒，否则背景深、反差小，影响 测定。 药物分析学科 第一节 生物碱类成分分析 四、含量测定 （二）单体生物碱成分含量测定 2、HPLC(例题P105) ①以反相高效液相色谱应用较多； ②在反相高效液相色谱中，由于硅胶表面残留硅醇基的影响，使生 物碱分析易产生保留时间延长、峰形变宽、拖尾； ③可在流动相中加入硅醇基抑制剂、离子对试剂等措施以克服游离 硅醇基的影响，满足定量分析的要求； ④中药制剂中生物碱成分进行高效液相色谱法测定时，使用较多的 是紫外检测器。 药物分析学科 第一节 生物碱类成分分析 四、含量测定 （二）单体生物碱成分含量测定 3、GC ①只适用于有挥发性的，遇热不分解的生物碱类，如麻黄碱、槟榔 碱、苦参碱和颠茄类生物碱等 ②制备供试品溶液时一般应采用冷提取，净化过程也要避免加热以 防成分的流失，最后需用氯仿等低极性有机溶剂为溶媒制备成供试 液。 药物分析学科 第一节 生物碱类成分分析 五、常见生物碱成分分析 化合物名称 小檗碱 （黄连素） Berberine (Umbellatine) 结构式 理化性质、结构及 光谱特征 异喹啉类原小檗碱 O 型生物碱、季铵型 + 生物碱、有共轭体 N O 系。 OCH3 黄色结晶、碱性较 OCH3 强，易溶于热水或 （C20H18NO4；336.37） 热乙醇，微溶或不 溶于苯、氯仿、丙 酮，其盐酸盐水中 溶解度小。 mp：1450 ℃ UV：225 ，270 ， 331。 常用定量分析方法 重量法、滴定法 分光光度法 薄层扫描法 薄层荧光扫描法 高效液相色谱法 脉冲极谱法 流动色谱分析法 酶法 第一节 生物碱类成分分析 五、常见生物碱成分分析 化合物名称 士的宁 （番木鳖碱） Strychnine 结构式 理化性质、结构及 光谱特征 单萜吲哚类生物 N 碱、环叔胺显碱 性、酰胺不显碱 N 性。 O O 难溶于水，可溶于 （C21H20N2 O2;334.40） 乙醇，甲醇。易溶 于氯仿，微溶于乙 醚。 mp：268～290℃。 UV：282。 常用定量分析方法 重量法 滴定法 分光光度法 一阶导数分光光度法 薄层扫描法 高效液相色谱法 第一节 生物碱类成分分析 五、常见生物碱成分分析 化合物名称 乌头碱 Aconitine 理化性质、结构及 光谱特征 结构式 OH OOC6H5 H3 C O H5 C2 OCH 3 N OOCH3 OH HO H3 CO OCH 3 （C34H47 N O11;645.76 ） 二萜类酯型生物 碱。 易溶于氯仿、苯、 无水乙醇和乙醚， 难溶于水、微溶石 油醚 mp：204℃ UV:281,273,230, 202． 常用定量分析方法 滴定法 酸性染料比色法 一阶导数紫外分光光 度法 薄层扫描法 高效液相色谱法 药物分析学科 第二节 黄酮类成分分析 一、概述 中药名称 主要黄酮类成分 中药名称 主要黄酮类成分 1、定义：黄酮类化合物是指基本母核为2-苯基色原酮（2-phenyl 黄芩 山柰酚、山柰素 黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、 山柰 汉黄芩素、千层纸素 chromone）类化合物，现在则是泛指两苯环通过中央三碳链相互 槐米 芦丁、槲皮素 广藿香 联结而成的一系列化合物。 葛根 葛根素、大豆苷、大豆苷元、 白果 商陆素、芹菜素 山奈酚、槲皮素、芦丁 7-木糖苷葛根素 2、含黄酮类成分的常见中药 枳实 橙皮苷、川陈皮素、新橙皮 高良姜 高良姜素、山奈素、槲皮 素 苷、5-邻-去甲基川陈皮素 茵陈 茵陈黄酮、芫花素、槲皮素 补骨脂 补骨脂查耳酮、异补骨脂 查耳酮 山楂 槲皮素、金丝桃苷 金线草 槲皮素、山奈酚 药物分析学科 第二节 黄酮类成分分析 二、结构特征及理化性质 1、结构特征 苯甲酰基 桂皮酰基 240~280nm 300~400nm 药物分析学科 第二节 黄酮类成分分析 二、理化性质 2、溶解度 ①黄酮类化合物的溶解度因结构及存在状态（苷或苷元、单糖苷、 双糖苷或三糖苷）不同而有很大差异。 ②游离苷元难溶或不溶于水，易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙醚 等有机溶剂及稀碱液中； ③黄酮苷一般易溶于水、甲醇、乙醇等强极性溶剂中，但难溶或不 溶于苯、氯仿等。 药物分析学科 第二节 黄酮类成分分析 二、理化性质 3、酸碱性 酸性：黄酮类化合物因分子中多有酚羟基，故显酸性，可溶于碱 性水溶液、吡啶、甲酰胺及二甲基甲酰胺中。酸性强弱：7,4‘- 二 羟基> 7-或4‘- 羟基> 一般酚> 5-羟基 碱性氧原子的性质 药物分析学科 第二节 黄酮类成分分析 二、理化性质 4、显色反应 盐酸-镁粉（锌粉）反应 金属盐类试剂的配合反应 可用于鉴别，但要避免假阳性结果 5、紫外光谱特征 药物分析学科 第二节 黄酮类成分分析 三、定性鉴别 1、理化鉴别 盐酸-镁粉（锌粉）反应 金属盐类试剂的配合反应 2、色谱鉴别 吸附剂：硅胶、聚酰胺 硅胶色谱分离弱极性化合物较好； 聚酰胺色谱分离含游离酚羟基的黄酮及其苷为佳； 纤维素薄层则适用于分离多糖苷混合物。 显色反应：采用在紫外光下观察荧光和喷显色剂相配合的方法。 药物分析学科 第二节 黄酮类成分分析 四、含量测定 1、总成分的含量测定 直接测定：常用芦丁作对照测定 显色测定：常用铝盐做显色剂 2、单体黄酮成分的含量测定 TLCS HPLC（05版药典全部使用此法） 五、常见黄酮类成分（略） 药物分析学科 第三节 三萜皂苷类成分分析 一、概述 1、概念 2、含三萜皂苷类成分的常用中药 中药名称 主要三萜皂苷类成分 中药名称 主要三萜皂苷类成分 人参 人参皂苷Ro、Ra、Rb1、Rb2、 Rb3、Rc、Rd、Re、Rf、Rg1、 Rh1、Rh2、Rh3、Rs1等 桔梗 桔梗苷D、D2等 西洋参 人参皂苷Ro、Rb1、Rb2、Rc、Rd、竹节参 Re、Rg1、拟人参皂苷F11等 人参皂苷Re、竹节参 皂苷Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ 三七 人参皂苷Rb1、Rd、Re、Rg1和三 七皂苷R1、R2、R3、R4、R6等 两头尖 两头尖皂苷R0、R 1、 R2、…、R9 黄芪 黄芪甲苷、黄芪皂苷乙等 远志 远志皂苷A、B、C、 D、E、F、G等 柴胡 柴胡皂苷a、b、c、d、e、f等 酸枣仁 酸枣仁皂苷A、B 甘草 甘草酸、新甘草苷等 第三节 三萜皂苷类成分分析 二、结构及理化性质 COOH H O H 3 RO H R2O OH H 20 3 甘草酸 R1O 6 人参皂甙(A型) 1、溶解度： ①可溶于水，易溶于热水、含水稀醇、热甲醇和热乙醇中， 几不溶于或难溶于乙醚、苯等极性小的有机溶剂； ②在含水丁醇或戊醇中溶解度较好 药物分析学科 第三节 三萜皂苷类成分分析 二、结构及理化性质 COOH H O H 3 RO H R2O OH H 20 3 甘草酸 R1O 6 人参皂甙(A型) 1、溶解度 皂甙元—能溶于石油醚、苯、乙醚、氯仿等 皂甙—可溶于水，易溶于热水、含水稀醇等，在丁醇、戊醇 中溶解性较好。 2、紫外光谱特征 药物分析学科 第三节 三萜皂苷类成分分析 二、结构及理化性质 3、显色反应 醋酐-浓硫酸反应 五氯化锑反应 三铝醋酸反应 冰醋酸-乙酰氯反应 氯仿-硫酸反应 金属盐类反应：+铅、钡、铜盐→沉淀 药物分析学科 第三节 三萜皂苷类成分分析 三、定性鉴别 1、理化鉴别 ①泡沫反应：多用于检验含有皂苷的原料药； ②化学显色反应：仅在组成药物较少的中药制剂中使用。 2、TLC 吸附剂：硅胶，氧化铝、硅藻土等。 展开剂：氯仿-甲醇-水（13：7：2）（10℃以下放置，下层） 氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水（15：40：22：10）（同上） 显色剂：不同浓度的硫酸乙醇液最常用。 药物分析学科 第三节 三萜皂苷类成分分析 四、定量分析 （一）总成分分析 1、重量法 ①该法主要用于含皂苷的原料药质量控制。 ②在中药制剂中，当处方中药味含皂苷类成分较多时，常用正 丁醇作溶剂，测定正丁醇浸出物。 2、比色法： ①常用显色剂有：香草醛-硫酸、香草醛-高氯酸、醋酐-硫酸、 高氯酸、浓硫酸以及亚甲蓝等。 ②注意测定单体皂苷（或皂苷元）与总皂苷的换算系数。 药物分析学科 第三节 三萜皂苷类成分分析 四、定量分析 （二）单体成分分析 1、TLC 薄层洗脱-比色法 薄层扫描法 2、HPLC HPLC-UV：人参皂苷、三七皂苷等可利用其在紫外区的末端； 有紫外吸收的甘草酸、远志皂苷，灵敏度高。 HPLC-ELSD：检测三萜皂苷类成分的应用日渐广泛 五、常见三萜皂苷类成分 药物分析学科 第四节 醌类成分分析 一、概述 1、概念：中药中醌类化合物主要有苯醌、萘醌、菲醌和蒽醌四种类 型可游离存在，也可与糖结合成苷，称为蒽苷。 2、含醌类成分的常用中药 中药名称 主要醌类成分 大黄 大黄素、大黄酸、大黄酚、 芦荟 芦荟大黄素、及其葡萄糖苷、 大黄素甲醚、番泻苷A、B、 C、D、E等 芦荟大黄素苷、异芦荟大黄 素苷 虎杖 大黄素、大黄素甲醚、大黄 酚、大黄酸及其葡萄糖苷等 首乌藤 大黄素、大黄素甲醚 何首乌 大黄素、大黄酚、大黄酸、 大黄素甲醚及其葡萄糖苷等 番泻叶 番泻叶苷A、B、C，大黄素、 大黄酚、芦荟大黄素 决明子 大黄素、大黄酚、大黄酸、 芦荟大黄素、大黄素甲醚、 决明素、黄决明素等 丹参 丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA、ⅡB、 隐丹参酮、羟基丹参酮ⅡA 等 中药名称 主要醌类成分 药物分析学科 第四节 醌类成分分析 二、结构及理化性质 O OH O OH 9 O O OH CH3 10 O 丹参醌IIA 大黄素 1、物理性质：存在的形态，升华性，光不稳定性 2、溶解性： 游离醌类多溶于乙醇、乙醚、苯、氯仿等有机溶剂，微 溶于或不溶于水。 结合成苷后极性增大，易溶于甲醇、乙醇中，在热水中 也可溶解，几乎不溶于苯、乙醚、氯仿等非极性溶剂中。 药物分析学科 第四节 醌类成分分析 二、结构及理化性质 3、酸性：酚羟基的酸性→碱提酸沉法 4、显色反应 羟基蒽醌+碱→橙，红，紫红，蓝 +Pb2+/Mg2+ →配合物 9、10位未取代的羟基蒽酮化合物+对亚硝基二甲基苯胺 →紫，绿，蓝，灰 药物分析学科 第四节 醌类成分分析 三、定性鉴别 1、显色反应 2、升华法 3、TLC 吸附剂：硅胶 展开剂：乙酸乙酯-甲醇-水（100︰16.5︰13.5）适于分离蒽醌苷 元和蒽醌苷，不含水或甲醇的混合溶媒适合于分离蒽醌类的苷元。 显色方法：喷碱性试剂，喷醋酸镁甲醇液、氨气熏及在紫外灯下观 察荧光，可见光下直接观察色斑。 药物分析学科 第四节 醌类成分分析 四、含量测定 1、游离蒽醌的测定：弱极性溶剂提取后，加碱比色 2、结合蒽醌的测定：极性溶剂提取，水解测苷元 先酸水解后，非极性溶剂提取苷元后测定 3、单体成分的含量测定 TLCS HPLC-UV 药物分析学科 第四节 醌类成分分析 四、含量测定 例1、牛黄解毒片中游离蒽醌和总蒽醌的测定—混合碱液比色法 对照品溶液测定：以1，8-二羟基蒽醌为对照品，精密称取10mg于100mL量 瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度（100µg/mL）。取1mL对照品液于10mL量 瓶中，在水浴上蒸干，加5%氢氧化钠-2%氢氧化铵混合碱溶解并稀释至刻 度，放置1小时，以5%氢氧化钠-2%氢氧化铵混合碱液为空白，在510nm波 长处测定。 样品测定：⑴游离蒽醌的测定：取牛黄解毒片10片，刮去糖衣，精密称定 重量，研细。称取一片重，置于具塞三角瓶中，精密加入氯仿100mL，称 重，水浴上回流4小时，取下，加塞，放冷，称重，用氯仿补充至原重量， 滤过，吸取滤液50mL于分液漏斗中，用蒸馏水20mL洗涤数次，至水层无 色，弃去水液。氯仿层用5%氢氧化钠-2%氢氧化铵混合碱液振摇萃取数 次，直至混合碱液无色，合并碱液，用20mL氯仿洗涤数次，至氯仿层无 色，弃去氯仿层。将混合碱液在水浴上加热数分钟至氯仿挥尽，冷却，移 入100mL量瓶中，并稀释至刻度，放置1小时，以5%氢氧化钠-2%氢氧化铵 混合碱液为空白，在510nm处测定，计算游离蒽醌的含量（相当于1，8-二 药物分析学科 羟基蒽醌含量）。 第四节 醌类成分分析 四、含量测定 例1、牛黄解毒片中游离蒽醌和总蒽醌的测定—混合碱液比色法 ⑵总蒽醌的测定：精密称取游离蒽醌项下的牛黄解毒片粉一片置于 150mL烧瓶中，加2.5mol/L硫酸30mL直火回流4小时，放冷，加入 氯仿20mL，水浴回流0.5小时，放冷，吸出氯仿液，再加氯仿，反 复操作至氯仿无色为止。合并氯仿层液，用蒸馏水洗涤数次，至水 层无色，弃去水液。氯仿液用5%氢氧化钠-2%氢氧化铵混合碱液振 摇萃取数次，至碱液无色，合并，用20mL氯仿洗涤数次，至氯仿层 无色，弃去氯仿液。将碱液置水浴上加热至氯仿挥尽，冷却，移入 50mL量瓶中，用混合碱液稀释至刻度，放置1小时，以5%氢氧化 钠-2%氢氧化铵液为空白，在510nm处测定，计算游离蒽醌的含量 （相当于1，8-二羟基蒽醌含量）。 ⑶结合蒽醌的计算： 每片含结合蒽醌量=每片含总蒽醌量—每片含游离蒽醌量。 药物分析学科 第四节 醌类成分分析 四、含量测定 例2、复方丹参片中丹参酮ⅡA含量测定—高效液相色谱法 色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水 （73：27）为流动相；检测波长为270nm。 对照品溶液的制备：精密称取丹参酮ⅡA对照品10mg，置50mL棕色量瓶中 用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5mL，置25mL棕色量瓶中，加 甲醇至刻度，摇匀，即得（每1mL中含丹参酮ⅡA40µg） 供试品溶液的制备：取本品10片，糖衣片除去糖衣，精密称定，研细，取 1g，精密称定，精密加入甲醇25mL，称定重量，超声处理15分钟，放冷， 再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10µL，注入液相色谱 仪，测定，即得。 药物分析学科 第四节 醌类成分分析 五、常见醌类成分 化合物名称 大黄酸 (Rhein) 结构式 OH 理化特征 O OH O （C15H8O6，284.21） 常用定量方法 为黄色针状结晶（升 高效液相色谱法 化 法 ） ， mp321℃ ～ 薄层扫描法 322℃，330℃分解。 几乎不溶于水，溶于 COOH 碱和吡啶，略溶于乙 醇、苯、氯仿、乙醚 和石油醚。 UVλmaxMeOHnm(ε) ： 229(36800),258(201 00),435(11100)。 药物分析学科 第四节 醌类成分分析 五、常见醌类成分 化合物名称 结构式 大黄素 (Emodin) 理化特征 为橙色针状结晶， mp265℃～267℃。几 OH O OH 乎不溶于水，溶于乙醇 及氢氧化钠、碳酸钠、 氨水等碱液中。25℃时 OH 溶于（g/100mL）:乙醚 CH3 0.140、氯仿0.071、四 O 氯化碳0.010、二硫化 （C15H10O5，270.23） 碳0.009。 UVλmaxEtOHnm(Logε)： 220（4.55），252 （4.26），265 （4.34），289 （4.34），437 （4.10）。 常用定量方法 高效液相色谱 法 薄层扫描法 药物分析学科 第四节 醌类成分分析 五、常见醌类成分 化合物名称 结构式 OH 理化特征 O OH 大 黄 酚 (Chrysophan ol) CH3 O （C15H10O4,254.23） 常用定量方 法 六方形或单斜形结晶 高效液相色 （ 乙 醇 或 苯 ） ， 谱法 mp196℃ ， 升 华 。 几 乎 薄层扫描法 不溶于水，略微溶于冷 乙醇，易溶于沸乙醇， 溶于苯、氯仿、乙醚、 冰醋酸及丙酮等，极微 溶于石油醚。橙黄色片 状 结 晶 ， mp198℃ 。 UVλmaxMeOHnm(Logε) ： 224 （ 4.73 ） 、 257 （ 4.48 ） 、 277(4.18) 、 287(4.18)、429(4.14)。 药物分析学科 第四节 醌类成分分析 五、常见醌类成分 化合物名称 结构式 理化特征 常用定量方 法 砖红色单斜针状结晶， 高 效 液 相 色 OH mp203℃～207℃。溶于 谱法 苯 、 氯 仿 、 吡 啶 及 甲 薄层扫描法 大黄素甲醚 苯，微溶于醋酸和醋酸 (Physcion) OCH 乙酯，不溶于甲醇、乙 CH3 醇、乙醚和丙酮。 O UVλmaxMeOHnm(Logε) ： 266 （ 4.45 ） ， 255 （ 4.22 ） ， 267 （C16H12O5，284.26） （ 4.25 ） ， 288 （ 4.22 ） ， 440 （4.02）。 O OH 药物分析学科 第四节 醌类成分分析 五、常见醌类成分 化合物名称 结构式 OH 芦荟大黄素 Aloeemodin 理化特征 O OH CH2 OH O 常用定量方 法 为橙色针状结晶（甲 高效液相色 苯），mp223℃～224℃。谱法 易溶于热乙醇，在乙醚 薄层扫描法 及苯中呈黄色，氨水及 硫酸中呈绯红色。 UVλmaxMeOHnm(Logε) ： 220(3.7)，255(3.3)， 283(3.0)，430(3.0) （C15H10O5，270.23） 药物分析学科 第四节 醌类成分分析 五、常见醌类成分 化合物名称 丹 参 酮 ⅡA(Tanshi noneIIA) 结构式 理化特征 O O O 常用定量方 法 为樱红色针状结晶（甲 高 效 液 相 色 醇），mp209℃～210℃。谱法 UVλmaxEteOHnm(Logε)： 薄层扫描法 224(4.24) ， 250 （ 4.37 ） ,268 （ 4.51 ） ， 273 ， 352 （ 3.94 ） ， 455(3.25) 。 （C19H18O3，294.33） 药物分析学科 第五节 挥发性成分分析 一、概述 挥发性成分是指中药中一类具有芳香气并易挥发的成分，其化学组 挥发油中主要成分 中药名称 挥发油中主要成分 中药 名称 成复杂，主要包括挥发油类成分和其他分子量较小、易挥发的化合 厚朴 物。 β-桉油醇、α-蒎烯、柠檬烯、 醋酸龙脑酯 含挥发油成分的常用中药 辛夷 柠檬烯、丁香酚、桉油精、α肉桂 蒎烯 陈皮 桂皮醛、桂皮酸、乙酸苯丙酯 川芎 柠檬烯、柠檬醛 薄荷 藁本内酯、3-丁叉苯酞、香桧 广霍香 烯 薄荷酮、薄荷脑、乙酸薄荷酯 广霍香醇、苯甲醛、丁香酚、 桂皮醛 羌活 细辛 豆蔻 丁香 α-蒎烯、β-蒎烯、柠檬 烯、萜品烯醇-4、 甲基丁香酚、黄樟醚、细 辛醚 优香 芹酮 、α- 蒎 烯、 β-蒎烯 桉油精、龙脑、樟脑、 草烯松油烯、蒎烯 丁香酚、水杨酸甲酯、 α-蒎烯、β-蒎烯、乙酰 丁香酚 药物分析学科 第五节 挥发性成分分析 二、结构及理化性质 CH CH CHO OH 薄荷醇 柠檬烯 桂皮醛 1、溶解性：易溶于有机溶剂 2、显色反应： 酚类+三氯化铁→蓝，蓝紫，绿 羰基+苯肼、羟胺→结晶体 醛类+硝酸银胺→银镜 内酯类+亚硝酰铁氰化钠+NaOH→红色并逐渐消失 奧类+浓硫酸→蓝，紫 药物分析学科 第五节 挥发性成分分析 三、定性鉴别 TLC 吸附剂：硅胶、氧化铝 展开剂：石油醚、正己烷（加少量乙酸乙酯或苯） 显色剂：茴香醛-浓硫酸试剂（通用型）， 若干扰较多，选用专属性强的显色剂 GC：对照品对照法定性 GC-MS GC-FTIR 药物分析学科 第五节 挥发性成分分析 四、定量分析 总成分分析：蒸馏法 单体成分分析： GC（首选） HPLC TLCS GC-MS GC-FTIR 药物分析学科 第六节 木脂素成分分析 一、概述 木脂素是一类在生物体内由二分子苯丙素衍生物聚合而成的化合物。 含木脂素类成分的常用中药： 中药名称 主要成分 五味子 五味子甲素 五味子乙素 厚朴 五味子醇甲 五味子醇 乙 细辛 牛蒡子苷 牛蒡子苷元 拉帕酚 杜仲 牛蒡子 连翘 中药名称 厚朴酚 和厚朴酚 细辛脂素 芝麻脂素 （+）-1-羟基松脂素 葡萄糖苷 连翘脂素 连翘脂苷 黑芝麻 远志 主要成分 芝麻脂素 中国远志脂酚 药物分析学科 第六节 木脂素成分分析 二、结构及理化性质 OCH 3 O H3CO H 3 CO O 牛蒡子苷(元) RO 五味子甲素 OCH3 OCH3 H 3 CO C H3 H 3 CO C H3 H 3 CO OCH 3 1、溶解性 游离—易溶于苯、乙醚、氯仿、丙酮、乙醇等 成苷时—可溶于甲醇、乙醇等 药物分析学科 第六节 木脂素成分分析 二、结构及理化性质 2、紫外光谱特征 λmax=250-350nm 3、显色反应 通用型显色剂：磷钼酸乙醇、硫酸乙醇 Labat反应：+硫酸+没食子酸→蓝绿 Ecgrine反应：+硫酸+变色酸→蓝紫 药物分析学科 第六节 木脂素成分分析 三、定性分析 TLC 吸附剂：硅胶 展开剂：亲脂性溶剂（苯、氯仿，加甲醇等） 显色：香草醛试液，浓硫酸试液，磷钼酸乙醇溶液、碘熏 四、含量测定 总成分：变色酸比色法 单体成分： TLCS HPLC 药物分析学科 第六节 木脂素成分分析 五、常见木脂素类成分 化合物 结构式 连翘苷 （连翘酯 苷） （Phillyrin） H3CO O H3CO O O O H3CO O glc 常用定量 分析方法 双 环 氧 木 脂 素， 具 有 双 骈 四 氢 呋 喃环 。 可 溶 于 水 、 乙 醇等 极 性 溶剂 UV：332nm 薄层扫描 法 高效液相 色谱法 木脂内酯苷 有内酯环 可 溶 于 水 、 乙醇 等 极 性 溶 剂 ， 有 内酯 环 的 反应 UV：280nm 薄层扫描 法 高效液相 色谱法 OCH3 （C27H33O11 ；534） 牛蒡苷 （Arctiin） glc 理化特性 O OCH3 OCH3 （C27H33O11；534） 药物分析学科 第七节 其他成分分析 一、香豆素类成分 香豆素是具有苯骈吡喃酮母核的内酯类衍生物广泛存在于芸香科和 伞形科的植物中。 1、主要结构及理化性质 CH2C CCH3 O O O O 补骨脂素 O 茵陈内酯 异羟肟酸铁反应： 酚羟基-三氯化铁显色反应： 紫外光谱特性：λmax=300nm， 母核有供电子基团取代可产生荧光 药物分析学科 第七节 其他成分分析 一、香豆素类成分 2、定性鉴别 荧光法 薄层荧光鉴别 七宝美髯颗粒中补骨脂素、异补骨脂素的鉴别 取本品10g，研细，加醋酸乙酯20ml、盐酸0.5ml，超声处 理20分钟，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯0.5ml使溶解， 作为供试品溶液。 薄层条件：硅胶G薄层板，展开剂正已烷—醋酸乙酯（4:1）， 显色剂为10%氢氧化钾甲醇溶液，紫外光灯365nm下检视。 药物分析学科 第七节 其他成分分析 一、香豆素类成分 3、含量测定 可见-紫外分光光度法： 荧光光度法：专属性强 TLCS：薄层荧光扫描 HPLC：C18，甲醇-水，UVD or FD GC：分子量小，具有挥发性 药物分析学科 第七节 其他成分分析 一、香豆素类成分 乌蛇止痒丸中蛇床子素的含量测定 色谱条件 固定相：OV-1，2m×3mmID玻璃柱；气体流速：N2 30ml/min，H2 50ml/min，Air 500ml/min；柱温：200℃；进样器和 检测器温度：260℃。 供试品溶液和对照品溶液的制备 精密称取内标物正廿三烷适量，加氯仿溶 解，制成每1ml约含6mg的溶液，作为内标溶液。取乌蛇止痒丸适量，研成 细粉，精密称取约5g，置索氏提取器中，精密加入内标溶液5.0ml，加氯仿 80ml，回流至近无色。将提取液浓缩至数毫升，通过3g小型硅胶柱，用氯 仿洗脱至10ml量瓶中，加氯仿至刻度，摇匀，作为供试品溶液。称取蛇床 子素约25mg，加入内标溶液5.0ml，振摇使溶解，摇匀，作为对照品溶液。 校正因子的测定 精密吸取对照品溶液，连续进样3～5次，每次2μl，按峰 面积计算校正因子。 样品测定 精密吸取供试品溶液，连续进样3～5次，每次2µl，用校正因子 计算样品含量。 药物分析学科 第七节 其他成分分析 二、有机酸类成分 1、定性鉴别 吸附色谱 分配色谱 2、含量测定 酸碱滴定法→总有机酸 分光光度法 高效液相色谱法 薄层色谱法 其他方法 药物分析学科 第七节 其他成分分析 三、环烯醚萜类成分 O O 特殊的单萜 物理性状（存在的形态；多苦味；稳定性差，易聚合） O 溶解性：易溶于水、甲醇，可溶于乙醇、丙酮、正丁醇 薄层定性鉴别 吸附剂：硅胶、聚酰胺 O glu 龙胆苦苷 显色剂：硫酸乙醇，茴香醛试液，香草醛硫酸试液，对二甲氨基苯 甲醛硫酸试液 药物分析学科 第七节 其他成分分析 三、环烯醚萜类成分 含量测定 高效液相色谱法 薄层扫描法 复方栀子冲剂中栀子甙的含量测定 荧光分光光度法 精密称取本品3g，置索氏提取器内，加甲醇回流提取6小时， 分光光度法 回收甲醇至干，加水10ml溶解，用水饱和正丁醇提取，提取 液蒸干，以甲醇溶解，通过已处理好的活性炭-中性氧化铝柱， 用甲醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用2ml甲醇溶 解，作为供试品溶液。 薄层条件：硅胶GF254薄层板，展开剂氯仿—甲醇—25%氨 水（4:1:0.1），检测波长247nm，参比波长370nm。 药物分析学科 第七节 其他成分分析 四、单萜及二萜类成分 O 1、含芍药甙中药制剂的分析 OH 薄层色谱 CH2 O CH2 高效液相色谱 2、含穿心莲内酯中药制剂的分析 薄层色谱 CH HO CH2OH 穿心莲内酯 回滴法 比色法—总内酯 薄层扫描或高效液相色谱法—单体成分 药物分析学科 第七节 其他成分分析 五、多糖 1、鉴别 TLC：硅胶、纤维素、硅藻土 PC：展开剂：正丁醇、水混合体系 显色剂：苯胺-邻苯二甲酸的正丁醇饱和水溶液等 CE：滤纸电泳、玻璃纤维纸电泳、醋酸纤维薄膜电泳、凝胶电泳 HPLC：氨基柱 GC-MS：酸水解→中和→柱前衍生→GC-MS 2、提取分离：水提醇沉 ※防止水解，注意消除酶、酸、碱等的影响 药物分析学科 第七节 其他成分分析 五、多糖 3、含量测定 1）总多糖的测定（例题P153） 3,5-二硝基水杨酸比色法→棕红色（550nm） 苯酚-硫酸法→蓝绿色（480-490nm） 蒽酮-硫酸法→黄绿色（620nm） 2）单体多糖的含量测定 高效凝胶液相色谱法→确定分子量 高效液相色谱法→确定组成 色谱柱：氨基键合相硅胶柱，或普通硅胶柱 检测器：示差折光检测器 药物分析学科 习 题 1、当采用硅胶薄层色谱法鉴别生物碱成分时，为什么常有斑点Rf 值较小或斑点明显拖尾的现象？可采用哪些方法克服？ 2、酸性染料比色法测定中药制剂中生物碱成分时，关键是什么？ 3、简述聚酰胺薄层色谱分离黄酮类化合物的原理和特点。 4、简述HPLC-ELSD检测人参皂苷等成分的优点。 5、总多糖的主要含量测定方法有哪些？ 6、设计：止喘灵注射液处方组成为麻黄、洋金花、苦杏仁、连翘， 请设计用薄层色谱法鉴别其中洋金花的方法。（样品供试液制备可 根据方法原理用流程表示，薄层色谱法请注明选用的吸附剂及薄层 原理、展开剂特点及显色剂名称） 药物分析学科