Transcript Prezentare - Mang Niculita

CERCETĂRI PRIVIND INIŢIEREA ŞI
DERULAREA UNUI PROGRAM
MODERN DE SELCŢIE (utilizând şi
multiple ovulaţii şi embrio-transferMOET) A EFECTIVULUI DE RASĂ
PINZGAU de TRANSILVANIA din
ŢARA HAŢEGULUI-HUNEDOARA –
Autor: Dr. Ing Niculiţă Mang
Îndrumător ştiinţific:
Prof Dr. Ing. IOAN VINTILĂ
Starea actuală
• - Rasa Pinzgau de Transilvania este în
pericol de extincţie prin absorbţia
genomului său în alte rase mai
performnte.
• - Penru salvarea ei este necesară
conservarea ,,in situ’’ şi (sau),,ex-situ’’ .
Obiectivele proiectului
• Cunoaşterea structurii genetice actuale ale
principalelor caractere importante economice şi
ameliorarea lor
• Evitarea scăderii mărimii genetice a populaţiei
(numărul de familii)şi evitarea erodării în
continuare a diversităţii ei.
• Cunoaşterea stării de heterozigoţie a populaţiei
prin utilizarea polimorfismului markerilor
moleculari în locii care codifică tipurile
deproteine din lapte
• Însuşirea tehnologiei de superovulaţie şi embriotransfer în vederea realizării unei ,,Bănci deGene
‚’în localitatea G-ral Bertelot din jud. Hunedoara
• Elaborarea unei schiţe de program pentru
sporirea agricultorilor care cresc rasa Pinzgau în
stare pură.
REZULTATELE OBŢINUTE
•
•
A.Cu privire la starea structurii
genetice a caracterlor cantitative
importante economic.
Măsurătorile efectuate pe 270 de vaci
în Ţara Haţegului şi compararea
rezultatelor cu cele obţinute de alţi
cercetători în regiunea Suceava au
scos în evidenţă următoarele:
• 1.- Rasa Pinzgau de Transilvania din Ţara Haţegului
are o structură genetică asemănătoare cu cea din
Bucovina.
• 2 - Potenţialul de sinteză a laptelui, pe un ciclu
de productie, nu depăşeşte 3500 Kg şi 130 kg
grăsime cu o persistenţă bună a lactaţiei
• 3.- Producţia medie maximă de lapte se manifestă la
a 7-a lactaţie, iar longevitatea productivă depăşeşte
8 lactaţii
• 4.- Are o remarcabilă fecunditate (77%) şi natalitate
(92%)cu o rată scăzută a avortului embrionar
• 5.- Handicapul ei genetic este tardivitatea productivă
şi cea reproductivă.
• B.Cu privire la polimorfismul locilor care
codifică proteinele din compoziţia laptelui.
• Am folosit două metode:
• a. Analiza ADN pentru doi loci(k-cazeina şi
beta globulina), folosind:
• - Reacţia PCR
• - Analiza RFLP(polimorfismul lungimii
fragmentelor de restricţie)
• b.. Analiza produşilor de expresie a genelor
din 6 loci (Alfa-cazeina, beta –cazeina, Alfa
S2 cazeina, K-cazeina, alfa lactoglobulina .ş
beta lactoalbumina) cu ajutorul electroforezei
cu focalizare izoelectrică
REZULTATELE OBŢINUTE
• Analiza ADN:
• Pentru amplificarea genelor K-cazeinei şi Betalactoglobulinei am folosit următorii primeri:
• Pentru k-cazeină:
• KAPPA-1 5-ATC ATT TAT GGC CAT TCC ACC AAA G-3
• KPPA-2 5-GCC CAT TTC GCC TTC TCT GTA ACA
GA-3
• Pentru Beta-lactoglobuline
• BETA -1 5- TGT GCT GGA CAC CGA CTA CAA AAA G3
• BETA-2 5- GCT CCC GGT ATA TGA CCA CCC TCT-3
• După amplificare în 35 de cicluri în probele recoltate
de la 24 de vaci s-au obţinut ampliconi cu o
dimensiune de 350 perechi de baze pentru K-cazeină
şi de 247 perechi de bază pentru Beta-lactoglobulină.
Aspectul lor îl redăm în figurile de mai jos
PCR - Kcn / 350 pb
Polimorfismul lungimii fragmentelor de restricţie obţinute cu
ajutorul enzimei de restricţie Hind III. PCR-RFLP Kcn /cu
restrictaza Hind III
Se obţin următoarel genotipuri:
AA = 350 pb
AB = 350/219/131 pb
BB = 219/131 pb
Aspectul şi poziţia ampliconilor beta-lactoglobulinei
PCR BLG / 247 pb
Aspectul şi poziţia fragmentelor de resticţie din locusul betalactoglobulinei
PCR-RFLP BLG /cu restrictaza Hae III
Se obţin următoarele genotipuri
AA = 148/99 pb
AB = 148/99/74/74 pb
BB = 99/74/74 pb
Genotiparea vacilor la nivelul
expresiei genelor
• Pentru acest fel de analiză ne-am
folosit de electroforeza cu focalizare
izoelectrică a tipurilor de proteine din
lapte
Rezultatele obţinute
Pe un lot reprezentativ de 25 de vaci din rasa Pinzgau s-au obţinut
următoarea structură genetică pentru 6 loci care codifică tipurile de proteină
din lapte.
Locusul proteinei
Genotipurile
Frecventa genotipurilor
Frecventa genelor
Alfa S-1
cazeina
BB
BC
0,711
0,184
Pb=0,803
CC
0,105
Qc=0,197
A,1A.1
A.1B
A.1A.2
A.2A.2
A.2B
0,237
0,105
0,368
0,158
0,132
qA.1=0,474
Qa,2=0,408
Mb=0,118
AlfaS.2 cazeina
AA
1,00
pA=1,00
K/cazeina
AA
AB
BB
0,184
0,684
0,132
pA=0,526
qB=0,474
Alfa/lactoalbumina
BB
1,00
pB=1,00
Beta-lactoglobulina
AA
AB
BB
BC
0,079
0,342
0,447
0,132
pA=0,25
qB=0,68
qc=0,066
Beta-cazeina
C..Cu privire la embrio-transfer
• Este necesar pentru realizarea Băncii
de Gene destinată conservării ,,Ex-situ’’
a rasei Pinzgau deTransilvania
Metodologia utilizată
•
a. Alegerea a 10
vacilor donatoare
de embrioni
•
b. Inducerea
superovulaţiei cu
FSH şi LH timp de
3 zile injecţii de 2x
pe la interval de 12
ore la 7 vaci
c. Recoltarea embrionilor după 7,5 zile de la data însămânţării
d.In urma recoltarii s-au obtinut 12 embrioni, din acestia un
numar de 9 s-au dovedit a avea perspective sa reziste la congelare
in azot lichid.