Transcript Dr. Bobovčák M.(pwpoint): Problematika BAL v

Problematika BAL v pneumológii
prínos
pre diagnostiku a výskum v súčasnosti
BOBOVČÁK M. a kol.
Klinické laboratórium
Vojenský V. ústav pre choroby pľúc
Nová Polianka - Vysoké Tatry
05983 Slovensko
Laváž
Laváž
Laváž
Bronchiálna10-30 ml
Bakteriológia, Tumory-cytológia
Terapeutická 10-20 l,
AB, Cyst.Fib., Al.proteinóza
Bronchoalveolárna 100-300 ml
diff.dg- prach, aktivita ILD
Klinické indikácie BAL
Intersticiálny infiltrát
Alveolárny infiltrát
Pľúcny infiltrát u
imunokompromitácie
Sarkoidóza
EAA
Polieková Alveolitis
Idiopat.pľ.fibróza
Kolagenózy
Histiocytóza X
Pneumokoniózy
Lymfangiosis Ca
Pneumónie
Alveolárna hemorágia
Alveolárna proteinóza
Eozinofilná Pneumónia
Bronchiolitis obliterans
HIV-infekcia
Cytostatiká, ožarovanie
Imunsupresívna terapia
Transplantácia orgánov
Diferenciálna diagnostika
Aktivita ochorenia
Neinvazívnosť - nízke riziko
Profesionálna expozícia
-prašné prostredie
Technika a spracovanie BAL
Výkon BAL - FBS
Eur.Resp.Rev. 1992,2:47-127
BAL - spracovanie vzorky
-3,4 x 50 ml Fyziológ
-celá 3 frakcia ,cytocentrifúga 0,3 ml
Cytológia - cytopreparáty
MGG, špeciálne farbenia /Fe/
solubilné markery
-filtrácia (gáza)
-určenie absolútneho počtu (CD45,Lýza)
-centrifugácia 400g,15 min,4C,
-resuspendovanie peletu cca 1-2 ml
-určenie absolútneho počtu
-určenie vitality
Prietoková cytometria
imunohistochémia
-nastavenie cc 2000 bb/ul
-značenie Abs 20 min.
-Lýza 5 min.
-Meranie
BAL - flow cytometry
FW
FW
Mo
OR
Gra
Ly
GR
SS
SS
BAL
Perif.Krv
CD3
CD45
CD4
CD45
CD3
SS
Celulárny profil v BAL - a diagnóza
CD4/CD8
zvýšený
znížený
normálny
(2,4 1,4)
Lymfocytóza
Normálny nález / 80-90%AM /fajčiari/
vylučuje:
Aktívnu Sarkoidózu
Aktívnu EAA
Beryliózu
Eozinifilná pneumónia
Alveolárna proteinóza
Alveolárna hemorágia
Lymfocytárna alveolitis
Sarkoidóza
EAA
Berylióza
TBC , HIV , Virová BP
Polieková Alveolitis
Alveolárna proteinóza
Kolagenózy
Silikóza
Pneumokoniózy Azbest
Bronchiolitis obliterans
Lymfangiosis Ca
Eozinofília
Neutrofília
Idiopat.pľ.fibróza
Pneumónie-infekt
ARDS
Kolagenózy
Wegener.Granulomatóza
Pneumokonióza
Eozinifilná pneumónia
Churg-Strauss-Syn.
Hyper Eoz.Syn.
Alerg. BP aspergilóza
Idiopat.pľ.fibróza
Lieky
Asthma bronchiale
Diagnóza a typické nálezy BAL
Sarkoidóza:
CD4/CD8-IRI>5,0
EAA:
CD4/CD8 <1.3, CD57Ly>15%Ly, Ly >50%bb
Eozinofilné ochorenia: Eo>25%
Oportúnne infekty: pneumocystis c., kvasinky, CMV transform. bunky
Alveolárna proteinóza:
mliečny vzhľad, veľa PAS+ bunkovej drte
Alveolárny hemorhagický sy.: Fragmenty Ery v Mf, Fe+ Mf
Profesionálne pneumokoniózy: prach. častice v Mf. , pozitívna filtrácia-azbest
Histiocytóza X:
CD1+ Langerhansove bunky >3% bb.
Berylióza: pozitívny LTT test s Berýliom
Nádory, Ly.Ca., Lymfóm, Leukémie:Tumorové bb., Lymfóm leukemické bb.
100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
BAL Lymfocyty
SD
67,9
44,1
aSA
n=30
29,3
28,5
26,8
iSA
n=7
Sako
n=9
KON
n=18
40,1
26
IFA
n=8
SFA
n=3
FAko
n=11
80
BAL diferenciál
Ly
AM16+14+
AM16-14+
Ne
60
40
20
0
aSA
n=30
iSA
n=7
Sako
n=9
KON
n=18
IFA
n=8
SFA
n=3
FAko
n=11
120
CD3 lymfo
100
80
60
40
93,2
90,3
89,3
90,9
88,8
85,2
84,6
20
0
aSA
n=30
80
70
iSA
n=7
Sako KON IFA
n=9 n=18 n=8
SFA FAko
n=3 n=11
CD3+8+Ly
60
50
40
30
53,6
20
10
0
33,3
27,8
28,2
48,6
28,8
10,6
aSA
n=30
iSA Sako KON IFA
n=7 n=9 n=18 n=8
SFA FAko
n=3 n=11
100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
CD3+4+Ly
81,1
53,3
55,8
58,3
54,6
36
32,5
aSA
n=30
iSA
n=7
Sako KON IFA
n=9 n=18 n=8
SFA FAko
n=3 n=11
CD3 +HLA DR+lymfo
90
20
80
18
70
16
14
60
12
50
10
40
308
6 49,8
47,8
20 10,9
4
27,3
26,2
10
19,3
2
2
2,5 2,5 0,8 2,5
00
aSA iSA
iSA Sako
Sako KONKONIFA IFASFA
aSA
n=30 n=7
n=7 n=9n=9 n=18n=18n=8 n=8n=3
n=30
IRI
43,5
0,9
18,1
SFA
FAko FAko
n=3
n=11 n=11
Výskum
Phenotypic analysis
- CD4+ T helpers
100
80
60
40
20
0
- celulárny obraz - fenotypizácia
ASA
ISA
CSA
CON
WB
- patomechanizmus ILD
CD45RO+
HLADR+
CD69+
CD28+
- imunopatogenéza
CD7+
CD28-7CD95-FAS+
- aktivácia, apoptóza
Phenotypic analysis- CD8+ T lymphocytes
- solubilné molekuly /cyto a chemokíny, ROS
100
80
60
40
20
0
ASA
ISA
HLADR+ CD69+
CSA
CD28+
OON
CD95-FAS+
WB
Záver
BAL - pri použití:
-štandartná technika pri odbere
- preanalytická fáza
- analýza cytopreparát
histochémia
prietoková cytometria
-správna indikácia
-interpretácia
pri relatívne nízkom riziku predstavuje pre dif dg a dg
nenahraditeľnú súčasť diagnostického procesu najmä
u intersticiálnych pľúcnych ochorení
často plne nahradzujúcu viac invazívne vyšetrenia.