SANG et TRANSFUSION

Objectifs : savoir se repérer à partir de notions simples Introduire la notion d’hémovigilance

Plan du cours

Les groupes sanguins érythrocytaires Les examens immunohématologiques

TRANSFUSION

   1900 Landsteiner découvre le 1er système des groupes sanguins : le système ABO 1940 valide le système Rhésus 1952 Dausset met en évidence le système HLA des GB

Les groupes sanguins érythrocytaires

   La membrane du GR porte une mosaïque de substances antigéniques, génétiquement déterminées, qui définissent les systèmes de groupes sanguins Antigènes allotypiques cad caractères propres à un groupe d’individus dans une espèce donnée Génétiquement contrôlés et indépendants

Les groupes sanguins érythrocytaires

  25 systèmes Le plus connu et le plus ancien : le système ABO, le plus important du fait de son implication en transfusion sanguine et pour la transplantation d’organe

Les antigènes érythrocytaires

Les antigènes de groupe sanguin sont situés dans la membrane lipidique du GR (Rhésus) ou dans les glycolipides sur la face externe de la membrane (ABH)

Le système ABO

   Le système ABO présente deux caractéristiques qui sont à l’origine des méthodes de groupage et expliquent son rôle important en transfusion et lors des transplantations : La présence ou l’absence des antigènes A et/ou B à la surface des GR La présence ou l’absence des anticorps naturels anti-A et/ou anti-B dans le plasma, correspondants aux antigènes absents sur les GR

Biosynthèse des antigènes du système ABO

Substance de base H h ENZYME A B ENZYME Substance A et/ou B Substance H

Les antigènes

Groupe sanguin

A

Antigènes membranaires

A B B O AB H A et B

Anticorps sériques

anti-B anti-A anti-A et anti-B aucun

Fréquence en France

45% 9% 43% 3%

Les antigènes

Répartition des Ag ABH dans l’organisme

    À la surface des GR Des GB Des plaquettes De la plupart des tissus (cellules épithéliales, endothélium vasculaire, secrétions salivaires) à l’exception de l’os, des neurones et de la cornée

Les anticorps naturels,réguliers

     Les anticorps anti-A et anti-B sont régulièrement présents chez tous les individus dépourvus de l’antigène correspondant Présents dans le plasma d’un sujet en dehors de toute stimulation antigénique reconnue (transfusion ou grossesse) Sont dirigés contre les antigènes que le sujet ne possèdent pas sur leur GR Apparaissent chez l’enfant entre 0 et 6 mois Intérêt primordial en transfusion sanguine en raison du risque d’incident dès la 1ère transfusion incompatible

Les anticorps immuns, irréguliers

   N’existent pas à l’état naturel Apparaissent à la suite d’une immunisation préalable : grossesse ABO incompatible, transfusion ABO incompatible Présents le plus souvent chez les donneurs O (notion de donneur O dangereux, recherche obligatoire sur chaque don)

Détermination du groupe ABO

Le groupage ABO repose sur deux épreuves qui doivent être concordantes :

Epreuve globulaire dite de Beth-Vincent

consiste à rechercher par une technique d’agglutination les antigènes présents sur les hématies GR à tester (antigènes à déterminer) + sérums tests connus (anticorps monoclonaux anti-A et anti-B)

Réaction d’agglutination

Agglutination Formation d’un réseau

Détermination du groupe ABO

Epreuve sérique dite de Simonin

Consiste à identifier les anticorps naturels réguliers dirigés contre les antigènes absents Plasma à tester (anticorps naturels) + GR tests connus Le groupe ne sera définitif qu’à la suite de 2 déterminations réalisées à partir de 2 prélèvements sanguins différents

Groupage ABO

O A B AB

BETH VINCENT

anti-A anti-B

_ _

+++

_

+++

_

+++ +++

SIMONIN

GR A GR B +++ +++

_

+++

_

+++

_ _

Règles de compatibilité ABO



SYSTEME ABO POUR LES GLOBULES ROUGES A O donneur universel O Ac anti-A Ac anti-B

identité

A Ac anti-B

compatibilité compatibilité

Ac anti-A B

identité

AB pas d'Ac AB receveur universel B

Règles de compatibilité ABO

POUR LE PLASMA A AB O B

Le système Rh (Rhésus)

     Système complexe de groupe sanguin On compte 52 antigènes appartenant à ce système En pratique courante seuls 5 sont à connaître : D, C, c, E, e La présence de l’antigène D défini le groupe Rhésus positif (85%) son absence le groupe Rhésus négatif

Le système Rhésus comprend 52 antigènes situés sur la membrane du GR

Les antigènes

ANTIGENES D (RH1) C (RH2) E (RH3) c (RH4) e (RH5) Fréquence en France 85% 70% 30% 80% 98%

Le groupe Rhésus est déterminé par la présence ou l’absence de l’antigène D Le phénotype Rhésus est déterminé par la présence ou l’absence des 5 antigènes : D, C/c, E/e La protéine D

Les Anticorps du système Rhésus

   Toujours acquis, secondaires à une immunisation, lors d’une transfusion ou d’une grossesse Probabilité d’apparition fonction de l’immunogénicité de classe IgG, hémolysants, capables de traverser le placenta, responsables de la symptomatologie présentée par un nouveau-né Rhésus + né de mère Rhésus - : maladie hémolytique du nouveau né

Incompatibilité foetomaternelle

Règles de compatibilité Rhésus

POUR LES GLOBULES ROUGES



SYSTEME RHESUS Rh Rh + = Ag D+

Les autres systèmes érythrocytaires

     Importance transfusionnelle car certains de leurs antigènes sont fortement immunisants Système Kell: l’Antigène KEL1 est un puissant immunogène pour les sujets Kell (90% de la population) Système Duffy : antigène FY1 et FY2 Système MNS : antigène MNS3 et MNS4 Système Kidd : antigène JK1 et JK2

Les autres systèmes érythrocytaires

L’absence d’un Antigène dans l ’un de ces systèmes ne s’accompagne pas d’anticorps naturels, comme dans le système ABO, mais une transfusion ou une grossesse peuvent provoquer la formation d’anticorps immuns responsables ultérieurement d’accidents transfusionnels ou de MHNN (alloimmunisation)

Les examens immunohématologiques

      Groupage ABO RH1 (RhD) Phénotypage RH et Kell Phénotypage étendu Recherche d’anticorps irréguliers (RAI) Epreuve de compatibilité au laboratoire Tests de Coombs

Les examens immunohématologiques

   

Groupage ABO RH1

correspond à la détermination du groupe ABO et du Rhésus standard D la détermination est basée sur la réaction d’agglutination spécifique le groupage est considéré comme définitif si les résultats sont concordants sur deux déterminations sur 2 prélèvements différents Contexte prétransfusionnel avéré ou potentiel et contexte prénuptial et périnatal

Phénotype Rhésus Kell

    Recherche grâce à l’utilisation de sérums tests anti-C, anti-E, anti-c, anti-e et anti-K la présence ou l’absence à la surface des hématies des 5 antigènes suivants : C (RH2), E (RH3), c (RH4), e (RH5) et K (KEL1) Contexte prétransfusionnel avéré ou potentiel Contexte prénuptial, pré et périnatal Validation de l’identification d’anticorps anti érythrocytaires

Phénotype étendu

 Recherche de la présence ou l’absence des antigènes : JK1, JK2, FY1, FY2, MNS3 et MNS4  Champ d’application : - allo-immunisation anti-érythrocytaire complexe - à titre préventif chez certains patients transfusés de façon itérative - validation de la RAI

Recherche d’Anticorps Irréguliers (RAI)    Examen consistant à dépister et identifier les anticorps dirigés contre les antigènes érythrocytaires autres que A et B dans le sérum à étudier grâce à une gamme d’hématies tests Délai de réalisation de 45 mn à plusieurs heures Validité 72H

Recherche d’Anticorps Irréguliers (RAI) Champ d’application :   Obligatoire chez tout patient susceptible d’être transfusé Contexte de greffe ou de transplantation    Contexte pré ou périnatal Chez le patient transfusé itératif en bonne place au cours des séries de transfusion Chez le patient transfusé dans le cadre du suivi post transfusionnel

Produits transfusés en cas d’urgence hémorragique Urgence vitale immédiate

pas de groupe ni de RAI si non disponibles CGR O sans hémolysines distribution sans délai

Urgence vitale

pas de RAI si non disponible nécessité de groupe ABO conforme délai de distribution inférieur à 30 minutes

Urgence « relative »

nécessité de groupe et RAI conformes délai de distribution de 2 - 3 heures

Epreuve directe de compatibilité au laboratoire EDC     Qualification biologique du don Consiste à tester le sérum du receveur vis-à-vis du CGR à transfuser (l’objectif étant de détecter certains Ac masqués par la présence d’autres Ac, ou des Ac rares) Validité 72H Champ d’application : Receveur présentant ou ayant présenté un ou plusieurs allo anticorps anti-érythrocytaires Nouveau-né présentant un test de Coombs positif ou né de mère allo-immunisée

Test de Coombs   Permet la mise en évidence de la sensibilisation in vivo des hématies humaines par des anticorps grâce à l’utilisation d’un réactif appelé antiglobuline humaine Champ d’application : Maladie hémolytique du nouveau-né Incident transfusionnel Anémie hémolytique autoimmune

Recherche d'anticorps fixés sur les hématies Ac non spontanément agglutinables + anti-gammaglobulines humaines Hématies fœtales ayant fixé l'Ac complexe agglutinant