Transcript Rajnai: Mikroszkopia.ppt

Mikroszkópia
Különböző spéci mikroszkópok és
festési eljárások
Készítette: Rajnai Tamás
Mikroszkópia története






Mikroszkóp:
mikron = kicsi
szkopein = nézni
Mikroszkópia: szemmel
láthatatlan tárgyak mikroszkópos
vizsgálata
Első mikroszkóp: ~ 1600:
Hans Lippershey,
Hans Janssen,
Zacharias Janssen
Mikroszkópok fajtái:

Optikai elméletet használó:



Mintán áthaladó/visszaverődő sugarakat egy
optikai rendszer felnagyítja
Binokuláris/szimpla
Fajtái:

összetett fénymikroszkópok
(max kb. 1500X, elméleti felbontóképesség 0,2 mikrométer ),


szetereomikroszkópok,
Elektronmikroszkópok (vákuum kell)
Sztereomikroszkóp
Elektronmikroszkóp
Mikroszkópok fajtái

Speciális fénymikroszkópok:








Ultraibolya-mikroszkóp
Ultramikroszkóp
Fáziskontraszt-mikroszkóp
Lumineszcencia-mikroszkóp
Konfokális pásztázó mikroszkóp
Polarizációs mikroszkóp
Binokuláris mikroszkóp
Sztereomikroszkóp
Mikroszkópok fajtái

Elektronmikroszkópok:


Pásztázó elektronmikroszkóp
Transzmissziós elektronmikroszkóp
Elektronmikroszkóp
Mikroszkópok fajtái:

Pásztázószondás mikroszkópok

mikroszkopikus sugárszondát használnak a felület
feltérképezésére : szondasugár + detektor:
kölcsönhatás alapján:







Atomerő mikroszkóp
Elektrosztatikus mikroszkóp
Mágneses erőmikroszkóp
Alagútelektron-mikroszkóp
Közeli mező optikai mikroszkópia
Pásztázó elektronmikroszkóp
Egyéb: akusztikus mikroszkóp:

Hanghullámmal, minta hangvezetését méri
Fénymikroszkópia




Látható fény segítségével
Optikai lencse használatával
Felfogó: szem, fotolemez, digitális képalkotó eszköz
Korlátok:



sötét vagy erős fényvisszaverésű vizsgálandó felület kell
Diffrakció miatt: max felontóképesség 0,2 mikrométer
Fókuszsíkól kieső pontok csökkentik a kép tisztaságát
Egy eljárás menetének bemutatása
mikroorganizmusokra:

1. Tárgylemez tisztítása: zsírtalanítás 96%-os alkohollal,
majd hőkezelés (max 60-70 °C-on)

2. Preparátum rögzítése (sejtek megtapadása a tárgylemezen)

Sok rögzítési eljárás ismeretes; egyik legegyszerűbb: hővel való rögzítés


Megjegyzés: finom ultracellulális részletek vizsgálatakor nem alkalmazható, mert a
sejt ezen részében durva változásokat okoz a hő
3. Festés: egyszerű vagy összetett festési eljárással



Pozitív vagy negatív festés
Egyszerű: Polikróm festés, mikroanalitikai festések és indikáló
festések
Összetet: Differenciáló festések
Festési eljárások


Láthatóbbá tehetőek velük a minták
Fluoreszcens festékek:



Immunfestés
Zöld fluoreszcens fehérje
pH alapján (mikroorganizmusok festéséhez):

Bázikus színezőanyagok (metilénkék, fukszin, malahitzöld,
kristályibolya, neutrálvörös)


Savas színezőanyagok (eozin)
Semleges színezőanyagok (rhodamin B)
Gram-pozitív
baktérium:
Gram-negatív
baktérium:
Konkrét alkalmazás: mikroorganizmusok kimutatása:
Bacillus cereus és Pseudomonas fluorescens



A megfelelően előkészített tárgylemezre 1 csepp vizet
cseppentünk
Ebben szuszpendálunk 1-1 kacsnyit az előre kitenyésztett
baktériumtenyészetekből (Bacillus cereus és Pseudomonas
fluorescens)
Alapos elkeverés, és a tárgylemezen minél vékonyabb
rétegben történő szélesztés után a készítményt láng felett
rögzítjük. Kihűlés után a festést az alábbi séma szerint
végezzük:








Festés genciánibolya-oldattal 1 percen át
Vizes öblítés
Pácolás Lugol-oldattal 1 percen át
Vizes öblítés
Színtelenítés 96 %-os alkohollal 0,5 percen át
Vizes öblítés
Kontrasztfestés szafraninnal 1 percen át
Vizes öblítés, szárítás



A készítményt immerziós objektívvel vizsgáljuk.
Benne a Bacillus cereus baktériumok kék színű (Grampozitív), a Pseudomonas fluorescens sejtek pedig piros
színű (Gram-negatív) pálcikaként mutatkoznak.
A preparátum értékelésekor tekintettel kell lenni arra a
tényre,hogy a festés eredménye függ a tenyészet korától
is. Gram-pozitív baktériumok idősebb tenyészete néha
Gram-negatív jelleget mutathat.
Bacillus cereus
Pseudomonas fluorescens
Források:

Írott források:






Bruno P. Kremer – A mikroszkóp
használata, Geobook Hungary Kiadó, 2008.
Öveges József- A mikroszkóp és használata
http://www.hefop.u_szeged.hu/hefop_kk/doc
uments/Tananyag/EKF/Okologiai_es_kornye
zetelemzesi_komplex_terepgyak.pdf
http://hu.wikipedia.org/wiki/Mikroszk%C3%B
3pia
http://www.taki.iif.hu/hungarian/soilbio/halbrit
tera/mikro.html
picasso.elte.hu/microscopy/pozsgai2005.ppt
Források:

Képek:









archive.microbelibrary.org
textbookofbacteriology.net
makszutov.hu
auroscience.hu
alphaoptika.hu
mikroszkop.network.hu
elektro-optika.hu
mokkka.hu
sirbuday.hu