Transcript M. tuberculosis

Vergelijking van
genotypische en
fenotypische
gevoeligheidsbepalingen
van M. tuberculosis
Tridia van der Laan, Rina de Zwaan,
Miranda Kamst, en Dick van Soolingen
1National
Mycobacteria Reference Laboratory, National Institute for Public Health and
the Environment (RIVM), Bilthoven, the Netherlands
19 juni 2014
Disclosure belangen spreker
(Potentiële) belangenverstrengeling
• Voor bijeenkomst mogelijk relevante
relaties met bedrijven
• Sponsoring of onderzoeksgeld
Geen
Becton Dickinson
• Honorarium of andere (financiële)
vergoeding
• Aandeelhouder
• Andere relatie, namelijk …
2
Geen
Inhoud
1. Introductie
Verschillende antibiotica
2. Materiaal & Methode
Fenotypisch – MGIT
Genotypisch – reverse line blot
3. Resulaten
4. Conclusie
5. Vragen
3
Celwand synthese
Werking antibiotica
DNA-RNA
Isoniazide (1951)
Rifamycine
Remt celwand synthese
Genotypering inhA en katG
Remt RNA polymerase
Genotypering rpoB
Rifampicine, Rifabutine
Ethambutol (1961)
Fluorochinolonen
Remt celwand synthese
Genotypering embB
Remt DNA gyrase
Genotypering gyrA
Ciprofloxacine, Ofloxacine, Moxifloxacine
Acyl lipids
Mycolic acid
Arabinogalactan
Peptidogycan
Plasmamembraan
Proteine synthese
Pyrazinamide (1952)
Plasmamembraan
Energie metabolisme
Genotypering pncA
Aminoglycoside
Amikacin, Capreomycin, Kanamycin, Streptomycin
tomycin
omyc
cin
c
in
in
Remt proteïne synthese
Genotypering rrs
Isolaten 2007-2013
MGIT INH &RIF MGIT 2e lijns
Species
MTBDRplus
M. africanum
37
M. bovis
43
M. bovis BCG
65
1
M. tuberculosis
2681
136
51
1
2877
138
M. tuberculosis complex
Totaal
5
MGIT gevoeligheid
O2
1/100
verdunnen
EMB 5
RIF 1
STR 1
GC 1/100
INH 0.1
500 μl
500 μl
6
MTBDRsl
Reverse Line Blot
Isolaat
DNA
Interpretatie
Amplificatie
Kleurreactie
Denaturatie
Hybridisatie
Conjugaat binding
7
Reverse Line Blot
Rifampicine
8
MTBDRplus
Isoniazide
MTBDRsl
Reverse Line Blot
Aminoglycoside
Ethambutol
Fluorochinolonen
9
Isoniazide
inhA & katG mutatie
geen mutatie
100
%
90
80
% inhA & katG
(n=2877)
70
60
50
40
30
20
10
0
Gevoelig
Resistent
Isoniazide 0.1 mg/l
10
Isoniazide
S
R
geen mutatie
88
1
mutatie
0
11
Rifampicine
rpoB mutatie
geen mutatie
100
90
% rpoB
(n=2877)
80
70
%
60
Rifampicine
S
R
geen mutatie
96
0
rpoB mutatie
1
3
50
40
30
20
10
0
Gevoelig
Resistent
Rifampicine 1 mg/l
11
Aminoglycoside
Amikacine
rrs mutatie
geen mutatie
100
%
90
80
% rrs
(n=94)
70
60
50
40
30
20
10
0
Gevoelig
Resistent
Amikacine 1 mg/l
12
Amikacine
S
R
geen mutatie
88
2
rrs mutatie
2
8
Fluorochinolonen
Moxifloxacine
gyrA mutatie
geen mutatie
100
90
80
% gyrA
(n=136)
70
%
60
Moxifloxacine
S
R
geen mutatie
93
0
rrs mutatie
1
6
50
40
30
20
10
0
Gevoelig
Resistent
Moxifloxacine 0.5 mg/l
13
Ethambutol
embB mutatie
geen mutatie
100
90
80
% embB
(n=138)
70
%
60
50
40
30
20
10
0
Gevoelig
Resistent
Ethambutol 5 mg/l
14
Ethambutol
S
R
geen mutatie
63
12
embB mutatie
10
15
Resultaten
MTBDRpl
Drug
Isoniazide
Rifampicine
Moleculair
inhA & katG
rpoB
Aantal getest
2877
2877
Sensitiviteit
88
99
Specificiteit
100
99
Positief
voorspellende waarde
100
83
Negatief
voorspellende waarde
98
100
15
Aminoglycoside
Drug
MTBDRsl
Amikacine
Moleculair
Capreomycine Kanamycine
rrs
Aantal getest
94
89
79
Sensitiviteit
78
56
67
Specificiteit
98
96
97
Pos voorsp waarde
78
62
75
Neg voorsp waarde
98
95
96
16
Fluorochinolonen
Drug
MTBDRsl
Ciprofloxacine Moxifloxacine
Moleculair
Ofloxacine
gyrA
Aantal getest
71
136
127
Sensitiviteit
50
100
80
Specificiteit
100
99
99
Pos voorsp waarde
100
89
89
Neg voorsp waarde
99
100
98
17
Ethambutol
18
MTBDRsl
Drug
Ethambutol
Moleculair
embB
Aantal getest
138
Sensitiviteit
57
Specificiteit
86
Pos voorsp
waarde
60
Neg voorsp
waarde
85
Conclusie
Genotypische test
• Snel resultaat
• MTBDRplus voor Isoniazide en rifampicine betrouwbaar
• MTBDRsl voor AG, FLQ en Ethambutol minder
betrouwbaar
Fenotypische test
• Duurt wat langer ivm groei bacterie
• Blijft nodig
19
Bedankt
20