UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi

UICC

HPV e CÂNCER CERVICAL

CURRÍCULO

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Capítulo 2.d

Triagem e diagnóstico Análise e tipagem de HPV

Prof. Suzanne Garland MD Diretora de Pesquisa Microbiológica, Chefe de Microbiologia Clínica e Doenças Infecciosas Hospital Real de Mulheres Melbourne, Austrália Associado Prof. Sepehr Tabrizi Cientista de Pesquisa Sênior, Departamento de Microbiologia Hospital Real de Mulheres Melbourne, Austrália UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi

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Partículas semelhantes a Vírus (VLP)

• Análogos não infecciosos de um vírus patogênico • VLP-L1 se une

in vitro

a capsídeos vazios ou “VLPs” • Produção de VLP não padronizada Sistemas diferentes de expressão, métodos preparativos, abordagens de controle de qualidade Formatos de identificação variam (direto vs. indireto) Sem padrão ouro para estabelecimento de limite para resultado positivo Poucas comparações entre laboratórios UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi

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Partículas semelhantes a Vírus (VLP)

• VLPs podem ser analisadas utilizando técnicas de microscopia eletrônica W UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi

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Detecção de anticorpo para HPV

• Anticorpos A presença representa infecção passada ou presente Pode ser gerado contra proteínas de HPV precoces (E) ou proteínas tardias (L) - Anticorpos neutralizantes L1 se correlacionam com proteção iniciada por vacina UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi

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Detecção de anticorpo para HPV

• Vários ensaios foram desenvolvidos para detectar anticorpos no soro/mucosa Teste imunoabsorvente de ligação a enzima (ELISA): medidas de Ig total, neutralizantes e não neutralizantes Testes de ligação competitiva, por exemplo, teste Luminex competitivo (cLIA): medidas de Ig neutralizantes a um epítopo apenas, mas a todas as classes de Ig Teste de pseudovírus: medidas de Ig neutralizantes total, todas as subclasses - Western blot - Radio imuno precipitação UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi

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Detecção de DNA do HPV por microscopia no tecido

• Imuno-histoquímica (antígeno específico para o grupo) • Exame Papanicolau: detecta células precursoras de câncer UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi

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Técnicas de Detecção Molecular para DNA do HPV

Métodos de Amplificação

• Amplificação de sinal Captura Híbrida (HC2) • Amplificação Alvo Reação em cadeia da polimerase - DNA do HPV por PCR - RNAm do HPV UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi

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Teste de Captura Híbrida 2

• Teste aprovado atualmente pelo FDA formato de tubo em 1995; formato de microtitulação em 1999 • Destinado para trabalhar com amostra de célula cervical esfoliada • Kit de coleta recomendado inclui escova e meio de transporte de amostra Coleta de células endo e ectocervicais UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi

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Teste de Captura Híbrida 2

• Sensibilidade de 5000 genomas/amostra • Sonda para detecção de HPV de baixo risco - HPV dos tipos 6, 11, 42, 43, 44 • Sonda para HPV de alto risco - HPV dos tipos 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 e 68 • Resultados não específicos ao tipo • Sem controle para entrada do número de células • Boa comparação entre laboratórios UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi

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Reação em cadeia da polimerase

• Muito sensível em cerca de 1 a 10 cópias /100.000 células • Permite o teste de vários tipos de amostra • Permite o teste de amostras estocadas com qualidade ruim de DNA • Testes de consenso: geralmente com alvo na

região L1

- Conservado - Primers variam: MY09/MY11 SPF1/SPF2 PGMY09/PGMY11 GP5+/GP6+ Detecção de variedade dos sistemas: ELISA dot blot UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi

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Diferentes metodologias de PCR

• Teste AMPLICOR ® para HPV • Teste LINEAR ARRAY® para HPV • Teste de genotipagem INNO-LiPA ® Genotipagem de HPV em cortes incluídos em parafina - Os cortes do tecido podem ser muito antigos e submetidos à degradação do DNA (inclusive durante a extração) UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi

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Diferentes metodologias de PCR

• Formulário do chip de DNA do HPV • Microarray para HPV • Ensaio de citometria de fluxo UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi

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Outras metodologias para detectar os tipos de HPV

• Tecnologia xMAP® da Luminex • Norchip - Proficiência ao HPV UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi

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Limitações e desafios

• Diversa variação de ensaios • Sensibilidade e especificidade diferentes • Falha de leitura dos controles disponíveis, GQ, CQ UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi

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Uso prático de métodos de teste de DNA para HPV

Clínico

• Triagem • Triagem de exame Papanicolau equivocados / com valores limítrofes • Monitoria de tratamento pós-displasia

Epidemiologia

• Áreas geográficas de vigilância Prevalência do HPV Prevalência do genótipo do HPV

Vacina

• Execução pré e pós vacina Estudos de eficácia para a vacina Diferentes regiões em todo o mundo UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi

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