Transcript Automated Hematology Dr.P.Dahim Health Reference Laboratory • • • • Principles of Automation Calibration Quality Control Flagging Hematology Automation • Two General Principles Electronic resistance ( impedance)  Light scattering 

Automated Hematology
Dr.P.Dahim
Health Reference Laboratory
1
•
•
•
•
Principles of Automation
Calibration
Quality Control
Flagging
2
Hematology Automation
• Two General Principles
Electronic resistance ( impedance)
 Light scattering

3
Electronic Resistance (Impedance)
• Utilizes non-conductive properties of blood cells




as blood cell passes through orifice of aperture it
displaces its own volume
increased resistance between electrodes results
in an electrical pulse
RBCs and Platelets counted together, separated
by pulse heights
hydrodynamic focusing forces cells to pass
single file through sensing zone
4
Cell counting
5
Light scattering
• Cells counted as passed through focused beam of light( LASER)
• Sum of diffraction(bending around corners), refraction (bending
due to change in speed) and reflection (light rays turned back by
obstruction).
• Multi angle polarized scatter separation (M.A.P.S.S)




0° : indicator of cell size
10° : indicator of cell structure and complexity
90° polarized: indicates nuclear lobularity
90° depolarized: differentiate eosinophils
6
Principles of counting &sizing
• Counting and sizing red cells ,WBCs , Plts by
•
•
•
•
•
counting the number of pulses and height of
pulses
Measuring Hb by modified HiCN method
Measuring MCV by computing the mean of
height of pulses
Hct (PCV ) derived from MCV & RBC
MCH derived from Hb & RBC
MCHC derived from Hb , RBC & MCV
7
•
RDW : SD or CV of individual measurement of red
cell volume
•
HDW :The degree of variation in red cell
hemoglobinization,CV of measurements of
hemoglobin concentration of individual cells
•
NRBC : included in the WBC counting
8
WBC Differential Count :
• Impedance technology with current of various
frequencies
• Light scattering & light absorbance
9
Reticulocyte counting :
• Flourescence – based methods
10
Histograms
• RBC, PLT, and WBC
plotted on histogram
• X-Axis
 Cell size in
femtoliters (fL)
• Y-Axis
 # of cells
11
Histogram
 WBC: Distribution with three individual peaks
and valleys at specific regions representing
the lymphocytes, monocytes, and
granulocytes.
 All curves normally start and end at baseline
12
‫مشخصات شناسنامه دستگاههای شمارشگر‬
‫سلولی خودکار‬
‫•‬
‫•‬
‫•‬
‫•‬
‫•‬
‫•‬
‫‪-1‬تاريخ خريد‬
‫‪ -2‬تاريخ نصب ‪ ،‬کاليبراسيون و نام فرد راه اندازی کننده‬
‫‪ -3‬تاريخ شروع بکار‬
‫‪-3‬کارخانه و کشور سازنده‬
‫‪ -4‬مدل وشماره سلاير دستگاه‬
‫‪ -5‬شرايط دستگاه هنگام خريد (نو ‪ ،‬مستعمل ‪ ،‬بازسازی‬
‫شده )‬
‫‪13‬‬
‫•‬
‫•‬
‫•‬
‫•‬
‫•‬
‫‪14‬‬
‫‪ -6‬نام وآدرس شرکت پشتيبان‬
‫‪-7‬نام کاربر يا کاربران دستگاه‬
‫‪ -8‬مشخصات و نحوه آموزش کاربر دستگاه‬
‫توسط شرکت پشتيبان‬
‫‪-9‬ميزان عدم دقت و عدم دقت دستگاه در هنگام‬
‫نصب‬
‫ساير مستندات‬
‫ مشخصات محلولها و مواد مصرفی‬‫ تاريخ آخرين سرويس دوره ای و خدمات پشتيبانی‬‫ تاريخ آخرين کاليبراسيون‬‫ تاريخ آخرين تعمير با ذکر قطعه تعويض شده‬‫‪ -‬تاريخ آخرين مشکل و راه حل آن‬
‫‪15‬‬
‫اصول کار‬
‫ كار با دستگاه سل كانتر مي بايست بطور كامل مطابق‬‫كاتالوگ دستگاه يا آموزش كارشناسان شركت پشتيبان‬
‫صورت گيرد ‪.‬‬
‫‪16‬‬
‫اصول کار‬
‫ درصورت تعويض کاربر دستگاه ‪ ،‬می بايست از آموزش‬‫وی در مورد چگونگی کار با دستگاه و نحوه نگهداری و‬
‫اصول کنترل کيفی اطمينان حاصل نمود ‪.‬‬
‫‪17‬‬
‫اصول کار‬
‫ کليه موارد مربوط به نگهداری دستگاه ‪ ،‬از قبيل تاريخ‬‫انجام شستشوهای الزم ‪ ،‬تعمير ‪ ،‬سرويس ويا تعويض‬
‫محلولها می بايست ثبت ونگهداری شوند‪.‬‬
‫‪18‬‬
‫اصول کار‬
‫هر روز شمارش زمينه يا ‪ Back ground‬دستگاه ارزيابي و‬
‫در صورت امکان ثبت و نگهداری شود ‪.‬بطور معمول‬
‫شمارش زمينه هر دستگاه در کاتالوگ مربوطه آمده است‬
‫ولی مقادير قابل قبول سازمان جهانی بهداشت به شرح زير‬
‫می باشند ‪:‬‬
‫•‬
‫‪RBC:‬‬
‫‪<0/03 x 1012/l‬‬
‫‪• WBC: <0/04 x 109 / l‬‬
‫‪• Haemoglobin: <0/2g/dl‬‬
‫‪• Platelets: <5 x 109 /l‬‬
‫‪19‬‬
Calibration
• Calibration provides the most accurate
results possible.
• For best performance, calibrate all the CBC
parameters.
• The WBC differential is calibrated at the
factory. They do not require calibration in the
laboratory.
20
When to Calibrate
• At installation
• After the replacement of any component that
involves dilution characteristics or the primary
measurements (such as the apertures)
• When advised to do so by your service
representative
21
Calibration
Normal fresh blood samples
Calibrators
22
‫‪Accuracy‬‬
‫•‬
‫•‬
‫‪23‬‬
‫‪ ×100‬ميانگين روش دستگاهي ‪ -‬ميانگين روش دستي‬
‫ميانگين روش دستگاهی‬
‫= ‪CF‬‬
‫پايداری کاليبراسيون‬
‫•‬
‫‪/n / n-1‬‬
‫‪(∑d)2‬‬
‫)‪Sd =√ ∑(d2‬‬‫_‬
‫• ‪tn = d √n‬‬
‫• ‪sd‬‬
‫‪24‬‬
Precision check
• Purpose: check reproducibility of instrument
• Precision quick method
 Run 5 replicates of one patient’s sample free of elevated
bilirubin, lipemia, and hemoloysis
• Calculate % CV or SD
• Refer to the methodology in procedure manual for expected
% CV or SD
25
Quality Control
• Purpose of QC

Assure proper functionality of instrumentation

Monitoring the Integrity of the Calibration
26
Quality Control Methods
• Assayed stabilized material (Commercial)
• Previously analyzed patient samples



Easily obtained
Cost effective
Results and samples readily available
27
Quality control
•
•
•
•
•
•
•
Replicate tests (control samples)
Control charts
Duplicate & Check tests
Correlation system
Delta check
Daily means of MCV,MCH,MCHC
Comparison the results with reference methods
28
‫‪Replicate tests‬‬
‫• بررسي عدم دقت دستگاه‬
‫‪29‬‬
‫‪Control charts‬‬
‫• استفاده از خون كنترل‬
‫• تفسير با استفاده از قوانين سازمان جهاني بهداشت يا‬
‫وستگارد‬
‫‪30‬‬
Quality Control
• OUT OF CONTROL!!!
Repeat the assay ( One time occurrence )
 Check integrity of material
 Troubleshoot
 Verify instrumentation

31
‫‪Duplicate test‬‬
‫درهرسري کاري ‪ 3-2‬نمونه به صورت مضاعف(‪(Duplicate‬‬
‫آزمايش ميشوند تا با بررسي اختالف خوانده ها از طريق محاسبات‬
‫آماري از وجود خطاهاي تصادفي آگاه گرديد ‪ .‬افزايش اختالف بين‬
‫دو خوانده بيش از ‪ 2SD‬محاسبه شده ‪ ،‬احتمال وجود خطاي‬
‫تصادفي را مطرح مي نمايد‪.‬‬
‫‪• SD= √∑d2‬‬
‫•‬
‫‪2n‬‬
‫‪32‬‬
‫‪Check test‬‬
‫• در ابتدای سری کاری يا صبح‪2 -3‬نمونه آزمايش شده وهمان نمونه‬
‫ها در انتهاي سري كاري يا بعد از ظهرمجددا آزمايش مي شوند‪.‬‬
‫نتايج حاصل از اين دو آزمايش با استفاده از فرمول ‪Duplicate‬‬
‫‪test‬قابل مقايسه می باشند ‪ .‬اختالف نتايج در محدوده ‪ 2SD‬قابل‬
‫قبول می باشد ‪ .‬در صورت نگهداری نمونه ها در شرايط مناسب ‪،‬‬
‫هرگونه تغيير در نتايج خارج از اين محدوده نشاندهنده اشکال‬
‫درعملکرد دستگاه و يا معرفها مي باشد‪.‬‬
‫• اين آزمايش براي بررسي هموگلوبين و گلبولهای قرمز مناسب بوده‬
‫و به ميزان کمتر براي شمارش گلبولهاي قرمز و پالکت کاربرد‬
‫دارد ولي براي هماتوکريت بخصوص اگر فاصله زماني آزمايش‬
‫نمونه ها بيش از ‪ 6‬ساعت باشد کارايي ندارد‪.‬‬
‫‪33‬‬
Delta check
•
•
•
•
•
•
Hb
2
g/l
PCV
0.05
L/L
MCV
>6
fL
MCH
> 5
pg
WBC
Normal to abnormal
Platelets
Reduced or increased by
more than 50%
34
‫‪Daily means of MCV,MCH,MCHC‬‬
‫• مراکز آزمايشگاهي با پذيرش بيمار زياد (حداقل‬
‫روزی ‪ 100‬بيمار‬
‫• تفاوت مقادير بيش از ‪ ٪3‬از ميانگين‪ ،‬نشان دهنده‬
‫بروز خطا و لزوم بررسی کاليبراسيون دستگاه می‬
‫باشد‪.‬‬
‫‪35‬‬
‫‪Comparison the results with reference‬‬
‫‪methods‬‬
‫• انجام محاسبات آماري براي بررسي هم خواني نتايج‬
‫الزامي است ‪.‬‬
‫‪36‬‬
ERRORS
INACCURACY
37
Reliability of Electronic Counters
• High Precision
• Accuracy?
- Recirculation of cells
- Red cell agglutination
- Lipid droplets, Microorganisms,
- Extraneous particles
- Faulty maintenance
- Incorrectly calibration
38
Interfering substances
•
•
•
•
•
•
•
Cold Agglutinins
Cryoglobulins
Lipemia
Platelet Clumps
RBC fragments
NRBCs
Clot
39
WBC Count Interferences




Unusual RBC abnormalities that resist lysing
malarial parasites
giant platelets, platelet clumps, NRBCs
fragmented white cells, agglutinated white
cells,
 lyse-resistant red cells,
 cryoglobulin, some extremely elevate proteins,
 unlysed particles greater than 35 fL in size
40
RBC Count Interferences
• Very high WBC count,
• high concentration of very large platelets,
• Auto-agglutination
41
Hgb
• Very high WBC count,
• Severe lipemia,
• certain unusual RBC abnormalities that
resist lysing
42
MCV
• Very high WBC count,
• high concentration of very large
platelets,
• Auto-agglutination
43
Flagging
• WBC Suspect flags
Blasts
 Imm Grans
 Variant lymphs

44
More Flagging
• RBC Suspect flags





NRBCs
Macrocytic RBCs
Dimorphic RBC population
Micro RBCs/RBC fragments
RBC agglutination
Check S
lide
45
Troubleshooting Flagged Results:
• Refer to the Instrument Manual to
troubleshoot codes, flags, and messages
displayed with patient results
46
47