Función de los factores de transcripción GATA en el páncreas

Sabemos que en el ratón los factores de transcripción GATA4 y GATA6 juegan un papel importante en el desarrollo y formación del páncreas. Si inactivamos conjuntamente GATA4 y GATA6 en estadios iniciales de formación del páncreas, el páncreas NO SE FORMA!

(Carrasco et al., Journal ofClinicalInvestigation, 2012)

Ctrl esto ba du Gata4 KO Gata6 KO Gata4/6 double KO Páncreas Esto: estómago Ba: bazo Du: duodeno Páncreas?

El objetivo de nuestro proyecto consiste en determinar el papel que juegan estos factores en la célula beta de los islotes de Langerhans

Técnicas a desarrollar: -Análisis histológicos: Secciones en parafina e tejidos pancreáticos, tinciones con hematoilina y eosina, etc… -Análisis inmunohistoquímicos: Tinción con anticuerpos específicos en secciones de páncreas (incubación con anticuerpos, microscopía de fluorescencia, etc..) -Técnicas de PCR y qPCR (extracción de ARN, etc…) Anabel Rojas, CABIMER [email protected]

Tlfn:954 467 427

Inmovilización de un anticuerpo anti-

b

lactoglobulina para cromatografía de afinidad

Juan R. Tejedo beta-lactoglobulina (~65%), alfa-lactoalbumina (~25%), y seroalbúmina (~8%),

Estudios recientes han encontrado relación entre la beta Lactoglobulina y el desarrollo de diabetes tipo 1 en menores de 18 meses Hay una relación directa entre alimentación temprana con leche de vaca y alergias.

Resultados obtenidos SELECCIÓN DE HIBRIDOMAS Todos los sobrenadantes obtenidos fueron seleccionados por ELISA frente a la proteína completa BLG y frente a sus dos subunidades α y β.

Pocillos con hibridomas Hibridomas dudosos Hibridomas + BLG FUSION 1 Y 2 94 4 5 GG1A7 GG1B5 GG2C2 BLG  -BLG b -BLG

+ + + + + + + + +

Los hibridomas GG1B5 y GG1A7 no reconocen la proteína BLG en su forma natural en la leche de vaca.

GG3G7 GG4H3

+ + + + + +

Leche de vaca + + +

PROPÓSITO DE LA INVESTIGACIÓN

Optimizar el procedimiento de inmovilización de inmunoglobulina en el laboratorio Optimizar un protocolo de purificación de muestras de leche de vaca

Estudio de los efectos de BIO y sus derivados en la activación de la vía Wnt y la auto-renovación de células troncales embrionarias de ratón

ANTECEDENTES

FACTORES INTRÍNSECOS: Oct Sox2 Nanog FACTORES EXTRÍNSECOS: FGF LIF Wnt

BIO, ClLi

PLURIPOTENCIALIDAD DIFERENCIACIÓN

PROPOSITOS DEL PROYECTO

• Manejo de técnicas de laboratorio: • Cultivo de células madre embrionarias • Técnicas de biología molecular: inmunocitoquímica, citometría, PCR, WB, … • Llevar a cabo una revisión bibliográfica

LUGAR DE TRABAJO

Yolanda Aguilera García [email protected]

Área de Bioquímica y Biología Molecular

PFG_2013-2014

Investigadora responsable: Marta Artal Sanz

Antecedentes:

La falta de prohibitinas ( PHB-1 y PHB-2 ) mitocondriales produce efectos opuestos en el envejecimiento: reduce la longevidad de animales salvajes, mientras en condiciones de baja señalización por insulina ( InsR/daf-2 ), aumenta la longevidad de forma dramática. Artal-Sanz and Tavernarakis (2009)

Nature

PFG_2013-2014

DAF 2/InsR Insulin PI3K PKB/AKT FOXO/ DAF-16 P

Objetivo

Descubrir los mecanismos celulares que interfieren con la función mitocondrial y afectan al envejecimiento utilizando el nematodo C. elegans

PFG_1

Interacción mitocondria-rutas de señalización celular en la regulación del envejecimiento en C. elegans Identificación de rutas de señalización implicadas en la reducción del contenido de grasa causado por falta de PHB en animales salvajes y en mutantes de la ruta de la Insulina.

RNAi screen for fat content DIC GFP Nile red Automated sorting and analysis + fluorescent dye: Nile Red

phb-2

+/ + RNAi library

phb-2

-/-

Mutantes phb-2 muestran un fenotipo de reducción de grasa y ausencia de GFP en la faringe (panel izquierda). Los mutantes phb-2 se seleccionan utilizando el COPAS BIOSORT (panel derecha), en función de la ausencia de GFP, y distribuyen en placas (96 pozillos) que contienen bacteria que produce RNAi para cada gen del genoma de C. elegans y la prueba fluorescente Nile Red.

PFG_2

Escrutinios genómicos para identificar reguladores de la respuesta al estrés mitocondrial en C. elegans Mitochondrial stress response BF GFP Merged Automated sorting and analysis

phb-2

+/-;

hsp-6::gfp phb-2

-/-;

hsp-6::gfp

+ RNAi library

Mutantes phb-2 muestran una fuerte inducción de hsp-6::GFP, una chaperona que responde al estrés mitocondrial (panel izquierda). Mutantes phb-2 se seleccionan utilizando el COPAS BIOSORT (panel derecha), en función de la presencia de GFP en todo el cuerpo, y distribuyen en placas (96 pozillos) que contienen bacteria que produce dsRNA para cada gen del genoma de C. elegans. Animales que expresan GFP sólo en la faringe son eliminados (botella).

PFG_3

Metabolomics y envejecimiento en C. elegans Consecuencias Metabólicas de la falta de prohibitinas mitocondriales en animales salvajes y en mutantes de la ruta de la Insulina

Metabolite Extraction from C. elegans Metabolite profiling on complementary analytical platforms Multivariate statistics, pathway analysis & biomarker search

Metabolic signature

GC-EI-MS LC-QqTOF-MS LC-IT-MS LC-FT-MS

l l l Pathway analysis KEGG metacyc WormBase New Biomarkers of Aging