Transcript Törekvések a terhességi arány növelésére az in vitro fertilizáció során
Slide 1
Dr. Kanyó Katalin PhD
Kriston Rita, Blahó Krisztina,
Dr. Konc János PhD
Szent János Kórház
Budai Meddőségi Centrum
Diagnosticum - 2014.
Slide 2
AMH
Új mérési lehetőség a petefészek kapacitásának és
stimulálhatóságának megítélésére
Diagnosticum - 2014.
Slide 3
Tények az AMH-ról
• A granulósa sejtek termelik
• Az AMH-t a 2-6 mm-s tüszők produkálják /
a > 8 mm-s tüsző kevés AMH-t termel
• Az AMH szint a korral csökken / inhibin B ↓, bazális
FSH ↑, AFC↓/
• Obes nőknél 65%-al kisebb az AMH szint
• Az AMH szint nem függ a menstruációs ciklustól,
szemben az FSH-val
Slide 4
Tények az AMH-ról
Az AMH szint előre jelzi az ovarialis választ
AMH > 3.5 ng/ml ,megnövekedett ovarium válasz,
OHSS veszélye / AFC > 16 tüsző /
Az AMH szint nem függ:
fogamzásgátló tabletta szedésétől
terhességtől
GnRH agonistától
Chemotherápia, irradiáció után csökken az AMH /
ovárium károsodás /
Slide 5
Tények
Az AMH, mint prognosztikus indikátora az IVF-nek
(4072 ciklus, 2010 ápr.-2013.jan):
+
+
+
-
Ciklus cancelláció bekövetkezte
Hány petesejt nyerhető (stimuláció)
OHSS előrejelzése
IVF kimenetele-a terhességet illetően
Reichman, Goldschlag, Rosenwaks
Fertility and Sterility 2014. Apr. 1012-1018.
Diagnosticum - 2014.
Slide 6
Tények
Cancellációs arány
Ha az AMH < 0,1ng/ml –akkor 13x nagyobb a
cancellációs arány, mint ahol az AMH>2ng/ml
Reichman, Goldschlag, Rosenwaks
Fertility and Sterility 2014. Apr. 1012-1018.
Diagnosticum - 2014.
Slide 7
AMH GenII kit – Ledger
F.S. 2014.febr. 339.
• Korábbi gyártó: Immunotech - és Diagnostics Systems
Laboratory
• Új gyártó: Beckman Coulter : Gen II. AMH assay – 2
módszer lépéseit egyesíti
Diagnosticum - 2014.
Slide 8
AMH GenII kit – Ledger
F.S. 2014.febr. 339.
Beckman Coulter:
Először csökkenő AMH érték
Instabilitás – complement cascade miatt, gyors
változtatás: premixing step-fagyasztás utáni
felengedést követően pufferbe viszi
Növekvő AMH érték– inaktiválja a complement
cascadot –interferencia csökken
Szegényes korreláció: AMH-alacsony AFC közt
Diagnosticum - 2014.
Slide 9
Nelson - Glasgow
F.S. 2014. febr. 523-529.
AMH magasabb érték a vártnál (10.984 páciens)
Összehasonlítva aDiagnostics Systems Laboratory kitt
korábbi eredményeit –a Beckman Coulter Generation
II assay
+40% növekedés
Diagnosticum - 2014.
Slide 10
Pankhurst –New Zeland
F.S 2014. march 846-850.
• A Beckman-Coulter AMH Gen II assay egybeméri a
biológiailag inaktív pro-AMH-t és a biológiailag aktív
AMH N,C-t
• Ezzel magyarázhatók a jelenleg mért átlagosan
magasabb AMH értékek a gyakorlatban, amelyek nem
mindig korrelálnak az AFC-vel
• Ajánlás: külön kellene megmérni a pro AMH-t és az
AMH N,C-t és az arányukat meghatározni, mert ez
nem biztosan konstans
Diagnosticum - 2014.
Slide 11
Reichman, Goldschlag, Rosenwaks
F.S. 2014. apr. 1012-1018.
• GenII AMH assay eredménye, mint prognosztikus
indikátor (4072 ciklus, 2010 apr.-2013.jan):
• + Ciklus cancelláció
• + Hány petesejt nyerhető (stimuláció)
• IVF kimenetele-a terhességet illetően
Diagnosticum - 2014.
Slide 12
Okok
Szérum tárolási körülményei különbözőek
Mikor kerül lefagyasztásra?
Mikor történik a pufferbe vitel?
Hány fokon történik a tárolás és meddig ?
(szobahőmérséklet, -20 C, - 80C)
X. Han, M McShane, R Sahertian, C White, W Ledger
Human Reproduction, Vol.29,No5pp.1042-48. 2014.
Slide 13
Új irányzat
ANS Labs /Webster, Tx, USA/
ultraszenzitív AMH
picoAMH (eddig mérhetetlen AMH-ra (< 0,1) fokozott
érzékenység
Diagnosticum - 2014.
Slide 14
Régi módszer
A 3. napi bazális FSH értékelése önmagában veszélyes
a termékenység megítélésére
(Pl. alacsony bazális FSH-magasabb bazális E2 =
perzisztáló petefészek ciszta és nem javuló
termékenység, vagy stimulálhatóság)
Diagnosticum - 2014.
Slide 15
Inzulin rezisztencia
A sejtek inzulinfüggő glükózfelvételének csökkenése
(norm. mennyíségű inzulin nem elegendő a hatáshoz)
Főleg PCOS-s pácienseknél
Merckformin kezelés – súly csökkentés
Inofolic ???
Mio-inozit 2000 mg + folsav 200 mg
Ovarialis aktivitás fokozása
Szerep az ivarsejtek kialakulásában
Inzulin érzékenység fokozása
Diagnosticum - 2014.
Slide 16
TSH /pajzsmirigy alulműködés/
Anti TPO (pajzsmirigy szövete lassan pusztul)
Anti-thyreoglobulin
Hashimoto-thyreodistis /idült gyulladás/
Nők: 4/1000
Férfiak: 1/1000
Diagnosticum - 2014.
Slide 17
Immunológiai paraméterek
ANA vizsgálata /auto-antitest/ - a sejtmag ellen
termelődnek- kettős szálú DNS elleni AT
Autóimmun betegségekben pl. SLE-ben emelkedett
Diagnosticum - 2014.
Slide 18
Trombofilia szűrés
Anamnézisben nem szerepel trombo-embóliás
megbetegedés
de
Infertilitás
Sikertelen IVF-ek
Koraszülés
Magzati halálozás
Diagnosticum - 2014.
Slide 19
A terhesség kimenetele
LMWH adás
nélkül
LMWH kezeléssel
Trombofiliás nők 17,4%
96,8%
APS-s nők
terhessége
83,3%
9,1%
Diagnosticum - 2014.
Slide 20
Véralvadási faktorok
Leyden mutáció – V. véralvadási faktor
Átl. népesség: 10% (heterozygóta)(8x kockázat),
trombózisos beteg: 20-30%,
A trombózis hajlam már heterozygóta formában is
megnyilvánul, homozygóta: néhány ezrelék (80x
kockázat)
APC rezisztencia (Leyden mutáció okozta aktivált
protein C rezisztencia) - megszünteti a placenta
anticoaguláns tulajdonságát
Diagnosticum - 2014.
Slide 21
Véralvadási faktorok
Protrombin – II. véralvadási faktor (több véralvadást
elősegítő fehérje képződik)(hajlamos családokban 18%)
(a trombózisos betegek közt 6%)
Homozygóta formában – habituális vetélés hátterében
van szerepe
Diagnosticum - 2014.
Slide 22
Homociszteinszint
Mérsékelt emelkedés 5-10%
Oka: MTHFR v. CBS gén pontmutációja
Homozygóta formában 5-15%/átl. népesség (gyakori)
Folsav ellátottság fontos (hiányában a homocisztein
magasabb) (sóska, spenót, saláta)
Diagnosticum - 2014.
Slide 23
Protein C, Protein S
Véralvadással egyensúlyt tartó fibrinolízist irányító
fehérje
Alacsony szintje v. hiánya trombózis hajlamot okoz
Diagnosticum - 2014.
Slide 24
Coeliakia
Meddőség, vetélés
26 éves kor után halmozódik
Glutén mentes diéta
Diagnosticum - 2014.
Slide 25
D-vitamin
Hiánya – petefészek daganatok előfordulása
Szabályozó hatás az immunrendszerre
Anovulációval meglétével is kapcsolatban áll
Pajzsmirigy megnövekedés és túlműködés
Magyarországon a felnőtt lakosság körében normál szint
alatti
Yale tanulmánya alapján az infertilis nők 93%-ban komoly
hiány van, főleg a PCOS-nál
Diagnosticum - 2014.
Slide 26
D-vitamin pótlása
Október-április : 1.000 - 2.000 NE
65 éven felülieknek egész évben
Könnyű túladagolni –
a Ca szint emelkedését okozhatja
Fokozhatja: vesekő, epekő, képződését és hasnyálmirigy
gondokat okozhat
Diagnosticum - 2014.
Slide 27
<5 millió/ml spermiumszám esetén
Y kromoszóma mikrodeléciók
X és Y kromoszóma aneuploidiák
Cisztás fibrózis
AZF faktor
Diagnosticum - 2014.
Slide 28
Cisztás fibrózis
CF-ben szenvedő férfiak 98%-a meddő
Fiú: veleszületett ondóvezeték hiány: CBAVD
Obstructive-Azoospermia (csak ürülési zavar)
Nők: sűrű méhnyakváladék – nehezített teherbeesés
Diagnosticum - 2014.
Slide 29
AZF faktor
Y kromoszóma hosszú karján lévő gének deléciója
Hímivarsejt érés v. képzés részleges v. teljes zavara
Infertilis férfiak: 7-15 %-ban deléció
Azoospermiás férfiak: 70-80 %-ban deléció
AZF régió deléciója esetén:
75% Sertoly cell only
25% érési gátlás
A nem mozaikos Y kr. Mikrodeléciót hordozó férfiak
fiai a mutációt 100%-ban öröklik
Slide 30
Oxisperm
ROS felhalmozódás
Anti-oxidáns terápia
Diagnosticum - 2014.
Slide 31
VitalScreen
Eozin festés
Mozdulatlan spermiumok vizsgálata
Ha felveszi a festék vörös színét, akkor nem él a
spermium
Diagnosticum - 2014.
Slide 32
EpiScreen
Mellékhere szekréció - Alfa-glükozidáz
Elzáródás – norm. tesztoszteron érték mellett
Mellékhere krónikus gyulladása/Epididymitis --
Hypoandrogenizmus
Diagnosticum - 2014.
Slide 33
Kariotipus meghatározás
Kromoszóma aberráció
Transzlokáció hordozás
Nemhez kötötten öröklődő betegségek
Diagnosticum - 2014.
Slide 34
Diagnosticum - 2014.
Slide 35
Páciens
Genetikai ok
ET
Grav
Szülés
CHJ
X kromoszóma
5x
+
+(fiú)
TT
Haemofilia A hordozó
1x
+
+(lány)
FK
t(11,22)
1x
-
BE
45,XY,t(13,14)(q10,q10)
3x
+
SzGK
Haemofilia A hordozó
1x
-
KE
46XX,t(2,7)(q23,q11,2)
2x
-
PLK
Izomdistrophia hordozó
2x
+,+
OE
t(6,9)
1x
-
MM
46,XX,t(6,10)
1x
-
HA
46,XY,der(13,14)(q10,q10)
3x
-
OBB
45,XYt(13,15)
1x
+
+(iker)
HI
Haemophilia A hordozó
2x
+,+
+, FER: +
PJ
Haemophilia A hordozó
1x
-
KE
46XXt(10,16)
1x
-
GyCsM
46,XY,t(10,11)(q21,p15)
2x
-
Diagnosticum - 2014.
+
AB, BK
Slide 36
Páciens
Genetikai ok
ET
Grav
MM
46,XY,t(2,5)(q21,p13)
3x
-
SKA
46,XX,t(4,20)(q21,Q13)
2x
+
BK
SJ
45XY,t(13,14)(q10,q10)
3x
++
+, +
BT
46,XX,t(3,5)(p14,p15)
1x
-
TA
45,XY,t(13,14)(q10,q10)
2x
-
SzK
46,XX,t(10,13)(q24,q34)
1x
+
RFA
47,XYY
1x
-
SzA
46,XX,t(1,19)(pter,qter)
1x
-
SzK
45XX,t(13,14)(q10,q10)
2x
-
RM
46,XX,t(2,18)(q23,q23)
1x
-
AI
46,XX,t(10,17)(p12,q22)
2x
+
+, +
DE
45,XX,t(21,22)(q10,q10)
1x
+
+
GyLA
X linked izom dysrophia
1x
+
+
JT
In.dup(15)(q11,1)
1x
-
SBB
45,XX,t(13,14)(q10,q10)
-
LG
Haemophilia A hordozó
1x
Diagnosticum - 2014.
+
Szülés
FER +
Foly.
Slide 37
Diagnosticum - 2014.
Slide 38
Diagnosticum - 2014.
Slide 39
WHO új sperma paraméterei I.
Karencia: 2-7 nap
pH > 7,2
Spermium koncentráció:≥ 15 M/ml
Spermium szám/ejakulátum: ≥ 39 M/ml
Mennyiség: > 1,5 ml
Peroxidáz teszt: < 1 M/ml
Diagnosticum - 2014.
Slide 40
WHO új sperma paraméterei II.
Motilitás: ≥ 32 %
Progresszíven mozgó: ≥ 32%
Teljes motilitás: ≥ 40%
Morfológia, strick krit. ≥ 4%
Immunológiai vizsg. /MAR teszt/: IgA, IgG
Spemaanalizátorral végzett vizsgálat
Diagnosticum - 2014.
Slide 41
WHO kritériumok
1
2
Normál
érték
2-7 nap
Karencia ideje (nap)
pH:
>7,2
Spermium
koncentráció
(M/ml):
Spermiumszám/
ejakulátum
Motilitás
≥15
M/ml
≥39 M
1
Progressziv mozgó (%)
Nem progresszív mozgó (%):
Teljes motilitás
(Progresszív és nem pr.%):
2
1
Mennyiség (ml):
Normál
érték
>1,5 ml
Viszkozitás:
(cm)
Agglutináció
ø
Peroxidáz teszt
( fvs kimutatása)
Normál Immunológiai vizsgálat
érték
(MAR teszt)
≥32,00%
≥40,00% IgA:
Nem mozgó (%):
Morfológia
WHO szerint,
Strick kr (%)
IgG:
≥4,00%
Diagnosticum - 2014.
2
< 1 M/ml
Slide 42
MAR teszt
IgA
IgG
Spermiumok mosása
Slide 43
Grádiens centrifugálás
Diagnosticum - 2014.
Slide 44
HBA teszt
Sperma Hyaluronan Binding Assay
Spermium érettségét vizsgálja – friss mintában
Érett spermiumok képesek kapcsolódni
Legfontosabb mucopolysaccharideja a:
- cumulus oophorusnak
- human folliculus folyadéknak
Diagnosticum - 2014.
Slide 45
HBA teszt
Sperma Hyaluronan Binding Assay
• Stimulálja a spermiumok mozgási képességét
• Meghosszabbítja életképességét
Diagnosticum - 2014.
Slide 46
Módszer
Az ejakulációt követően 3 órán belül végzendő a
vizsgálat
7-10 µl ondó kicseppentése a speciális tárgylemez
közepén lévő körre
Fedőlemezzel letakarjuk
10 és 20 perc közötti időszakban leszámoljuk a
kötődött mozgó spermiumokat
Diagnosticum - 2014.
Slide 47
Eredmény
% kötődés =
kötődött mozgó /
kötődött mozgó + nem kötődött mozgó spermiumok
Diagnosticum - 2014.
Slide 48
Eredmény értékelése
HBA score (% kötődés)
≥ 80% kötődés
Normál érettség és fiziológiás funkció
< 80% kötődés
Csökkent érettség és fiziológiás funkció
Diagnosticum - 2014.
Slide 49
PICSI
Diagnosticum - 2014.
Slide 50
HALO sperm
Spermium DNS fragmentációjának gyors mérése
Genetikai anyag minősége
Ismeretlen okú meddőség
Habituális vetélés
Normozoospermia – Varicocele
esetén is lehet pozitív
Antioxidáns kezelés
Diagnosticum - 2014.
Slide 51
HALO sperm
Spermium konc. hígítás 5-10 M/ml-re
Agarose pufferbe vitel
Szilárdítás
Lízis
Mosás
Dehidratáció
Fixálás
Festés
Szárítás
Diagnosticum - 2014.
Slide 52
Diagnosticum - 2014.
Slide 53
DNS fragmentáció mértéke
DNS fragmentáció (%)
Javasolt beavatkozás
15 %
IUI
15-30 %
IVF
30-40 %
ICSI
Diagnosticum - 2014.
Slide 54
IMSI
• Bartoov
• Magyarországon elsőként alkalmaztuk és alkalmazzuk
• Spermium szelekció ICSI előtt
• 400x nagyítás --- 6-8.000x nagyítás
• Akroszóma / vacuolumok
• Előzményben alacsony fertilizációs arány
• Több, mint 100 sikeres eset
Diagnosticum - 2014.
Slide 55
Diagnosticum - 2014.
Slide 56
IMSI CytoScreen - 2009
Diagnosticum - 2014.
Dr. Kanyó Katalin PhD
Kriston Rita, Blahó Krisztina,
Dr. Konc János PhD
Szent János Kórház
Budai Meddőségi Centrum
Diagnosticum - 2014.
Slide 2
AMH
Új mérési lehetőség a petefészek kapacitásának és
stimulálhatóságának megítélésére
Diagnosticum - 2014.
Slide 3
Tények az AMH-ról
• A granulósa sejtek termelik
• Az AMH-t a 2-6 mm-s tüszők produkálják /
a > 8 mm-s tüsző kevés AMH-t termel
• Az AMH szint a korral csökken / inhibin B ↓, bazális
FSH ↑, AFC↓/
• Obes nőknél 65%-al kisebb az AMH szint
• Az AMH szint nem függ a menstruációs ciklustól,
szemben az FSH-val
Slide 4
Tények az AMH-ról
Az AMH szint előre jelzi az ovarialis választ
AMH > 3.5 ng/ml ,megnövekedett ovarium válasz,
OHSS veszélye / AFC > 16 tüsző /
Az AMH szint nem függ:
fogamzásgátló tabletta szedésétől
terhességtől
GnRH agonistától
Chemotherápia, irradiáció után csökken az AMH /
ovárium károsodás /
Slide 5
Tények
Az AMH, mint prognosztikus indikátora az IVF-nek
(4072 ciklus, 2010 ápr.-2013.jan):
+
+
+
-
Ciklus cancelláció bekövetkezte
Hány petesejt nyerhető (stimuláció)
OHSS előrejelzése
IVF kimenetele-a terhességet illetően
Reichman, Goldschlag, Rosenwaks
Fertility and Sterility 2014. Apr. 1012-1018.
Diagnosticum - 2014.
Slide 6
Tények
Cancellációs arány
Ha az AMH < 0,1ng/ml –akkor 13x nagyobb a
cancellációs arány, mint ahol az AMH>2ng/ml
Reichman, Goldschlag, Rosenwaks
Fertility and Sterility 2014. Apr. 1012-1018.
Diagnosticum - 2014.
Slide 7
AMH GenII kit – Ledger
F.S. 2014.febr. 339.
• Korábbi gyártó: Immunotech - és Diagnostics Systems
Laboratory
• Új gyártó: Beckman Coulter : Gen II. AMH assay – 2
módszer lépéseit egyesíti
Diagnosticum - 2014.
Slide 8
AMH GenII kit – Ledger
F.S. 2014.febr. 339.
Beckman Coulter:
Először csökkenő AMH érték
Instabilitás – complement cascade miatt, gyors
változtatás: premixing step-fagyasztás utáni
felengedést követően pufferbe viszi
Növekvő AMH érték– inaktiválja a complement
cascadot –interferencia csökken
Szegényes korreláció: AMH-alacsony AFC közt
Diagnosticum - 2014.
Slide 9
Nelson - Glasgow
F.S. 2014. febr. 523-529.
AMH magasabb érték a vártnál (10.984 páciens)
Összehasonlítva aDiagnostics Systems Laboratory kitt
korábbi eredményeit –a Beckman Coulter Generation
II assay
+40% növekedés
Diagnosticum - 2014.
Slide 10
Pankhurst –New Zeland
F.S 2014. march 846-850.
• A Beckman-Coulter AMH Gen II assay egybeméri a
biológiailag inaktív pro-AMH-t és a biológiailag aktív
AMH N,C-t
• Ezzel magyarázhatók a jelenleg mért átlagosan
magasabb AMH értékek a gyakorlatban, amelyek nem
mindig korrelálnak az AFC-vel
• Ajánlás: külön kellene megmérni a pro AMH-t és az
AMH N,C-t és az arányukat meghatározni, mert ez
nem biztosan konstans
Diagnosticum - 2014.
Slide 11
Reichman, Goldschlag, Rosenwaks
F.S. 2014. apr. 1012-1018.
• GenII AMH assay eredménye, mint prognosztikus
indikátor (4072 ciklus, 2010 apr.-2013.jan):
• + Ciklus cancelláció
• + Hány petesejt nyerhető (stimuláció)
• IVF kimenetele-a terhességet illetően
Diagnosticum - 2014.
Slide 12
Okok
Szérum tárolási körülményei különbözőek
Mikor kerül lefagyasztásra?
Mikor történik a pufferbe vitel?
Hány fokon történik a tárolás és meddig ?
(szobahőmérséklet, -20 C, - 80C)
X. Han, M McShane, R Sahertian, C White, W Ledger
Human Reproduction, Vol.29,No5pp.1042-48. 2014.
Slide 13
Új irányzat
ANS Labs /Webster, Tx, USA/
ultraszenzitív AMH
picoAMH (eddig mérhetetlen AMH-ra (< 0,1) fokozott
érzékenység
Diagnosticum - 2014.
Slide 14
Régi módszer
A 3. napi bazális FSH értékelése önmagában veszélyes
a termékenység megítélésére
(Pl. alacsony bazális FSH-magasabb bazális E2 =
perzisztáló petefészek ciszta és nem javuló
termékenység, vagy stimulálhatóság)
Diagnosticum - 2014.
Slide 15
Inzulin rezisztencia
A sejtek inzulinfüggő glükózfelvételének csökkenése
(norm. mennyíségű inzulin nem elegendő a hatáshoz)
Főleg PCOS-s pácienseknél
Merckformin kezelés – súly csökkentés
Inofolic ???
Mio-inozit 2000 mg + folsav 200 mg
Ovarialis aktivitás fokozása
Szerep az ivarsejtek kialakulásában
Inzulin érzékenység fokozása
Diagnosticum - 2014.
Slide 16
TSH /pajzsmirigy alulműködés/
Anti TPO (pajzsmirigy szövete lassan pusztul)
Anti-thyreoglobulin
Hashimoto-thyreodistis /idült gyulladás/
Nők: 4/1000
Férfiak: 1/1000
Diagnosticum - 2014.
Slide 17
Immunológiai paraméterek
ANA vizsgálata /auto-antitest/ - a sejtmag ellen
termelődnek- kettős szálú DNS elleni AT
Autóimmun betegségekben pl. SLE-ben emelkedett
Diagnosticum - 2014.
Slide 18
Trombofilia szűrés
Anamnézisben nem szerepel trombo-embóliás
megbetegedés
de
Infertilitás
Sikertelen IVF-ek
Koraszülés
Magzati halálozás
Diagnosticum - 2014.
Slide 19
A terhesség kimenetele
LMWH adás
nélkül
LMWH kezeléssel
Trombofiliás nők 17,4%
96,8%
APS-s nők
terhessége
83,3%
9,1%
Diagnosticum - 2014.
Slide 20
Véralvadási faktorok
Leyden mutáció – V. véralvadási faktor
Átl. népesség: 10% (heterozygóta)(8x kockázat),
trombózisos beteg: 20-30%,
A trombózis hajlam már heterozygóta formában is
megnyilvánul, homozygóta: néhány ezrelék (80x
kockázat)
APC rezisztencia (Leyden mutáció okozta aktivált
protein C rezisztencia) - megszünteti a placenta
anticoaguláns tulajdonságát
Diagnosticum - 2014.
Slide 21
Véralvadási faktorok
Protrombin – II. véralvadási faktor (több véralvadást
elősegítő fehérje képződik)(hajlamos családokban 18%)
(a trombózisos betegek közt 6%)
Homozygóta formában – habituális vetélés hátterében
van szerepe
Diagnosticum - 2014.
Slide 22
Homociszteinszint
Mérsékelt emelkedés 5-10%
Oka: MTHFR v. CBS gén pontmutációja
Homozygóta formában 5-15%/átl. népesség (gyakori)
Folsav ellátottság fontos (hiányában a homocisztein
magasabb) (sóska, spenót, saláta)
Diagnosticum - 2014.
Slide 23
Protein C, Protein S
Véralvadással egyensúlyt tartó fibrinolízist irányító
fehérje
Alacsony szintje v. hiánya trombózis hajlamot okoz
Diagnosticum - 2014.
Slide 24
Coeliakia
Meddőség, vetélés
26 éves kor után halmozódik
Glutén mentes diéta
Diagnosticum - 2014.
Slide 25
D-vitamin
Hiánya – petefészek daganatok előfordulása
Szabályozó hatás az immunrendszerre
Anovulációval meglétével is kapcsolatban áll
Pajzsmirigy megnövekedés és túlműködés
Magyarországon a felnőtt lakosság körében normál szint
alatti
Yale tanulmánya alapján az infertilis nők 93%-ban komoly
hiány van, főleg a PCOS-nál
Diagnosticum - 2014.
Slide 26
D-vitamin pótlása
Október-április : 1.000 - 2.000 NE
65 éven felülieknek egész évben
Könnyű túladagolni –
a Ca szint emelkedését okozhatja
Fokozhatja: vesekő, epekő, képződését és hasnyálmirigy
gondokat okozhat
Diagnosticum - 2014.
Slide 27
<5 millió/ml spermiumszám esetén
Y kromoszóma mikrodeléciók
X és Y kromoszóma aneuploidiák
Cisztás fibrózis
AZF faktor
Diagnosticum - 2014.
Slide 28
Cisztás fibrózis
CF-ben szenvedő férfiak 98%-a meddő
Fiú: veleszületett ondóvezeték hiány: CBAVD
Obstructive-Azoospermia (csak ürülési zavar)
Nők: sűrű méhnyakváladék – nehezített teherbeesés
Diagnosticum - 2014.
Slide 29
AZF faktor
Y kromoszóma hosszú karján lévő gének deléciója
Hímivarsejt érés v. képzés részleges v. teljes zavara
Infertilis férfiak: 7-15 %-ban deléció
Azoospermiás férfiak: 70-80 %-ban deléció
AZF régió deléciója esetén:
75% Sertoly cell only
25% érési gátlás
A nem mozaikos Y kr. Mikrodeléciót hordozó férfiak
fiai a mutációt 100%-ban öröklik
Slide 30
Oxisperm
ROS felhalmozódás
Anti-oxidáns terápia
Diagnosticum - 2014.
Slide 31
VitalScreen
Eozin festés
Mozdulatlan spermiumok vizsgálata
Ha felveszi a festék vörös színét, akkor nem él a
spermium
Diagnosticum - 2014.
Slide 32
EpiScreen
Mellékhere szekréció - Alfa-glükozidáz
Elzáródás – norm. tesztoszteron érték mellett
Mellékhere krónikus gyulladása/Epididymitis --
Hypoandrogenizmus
Diagnosticum - 2014.
Slide 33
Kariotipus meghatározás
Kromoszóma aberráció
Transzlokáció hordozás
Nemhez kötötten öröklődő betegségek
Diagnosticum - 2014.
Slide 34
Diagnosticum - 2014.
Slide 35
Páciens
Genetikai ok
ET
Grav
Szülés
CHJ
X kromoszóma
5x
+
+(fiú)
TT
Haemofilia A hordozó
1x
+
+(lány)
FK
t(11,22)
1x
-
BE
45,XY,t(13,14)(q10,q10)
3x
+
SzGK
Haemofilia A hordozó
1x
-
KE
46XX,t(2,7)(q23,q11,2)
2x
-
PLK
Izomdistrophia hordozó
2x
+,+
OE
t(6,9)
1x
-
MM
46,XX,t(6,10)
1x
-
HA
46,XY,der(13,14)(q10,q10)
3x
-
OBB
45,XYt(13,15)
1x
+
+(iker)
HI
Haemophilia A hordozó
2x
+,+
+, FER: +
PJ
Haemophilia A hordozó
1x
-
KE
46XXt(10,16)
1x
-
GyCsM
46,XY,t(10,11)(q21,p15)
2x
-
Diagnosticum - 2014.
+
AB, BK
Slide 36
Páciens
Genetikai ok
ET
Grav
MM
46,XY,t(2,5)(q21,p13)
3x
-
SKA
46,XX,t(4,20)(q21,Q13)
2x
+
BK
SJ
45XY,t(13,14)(q10,q10)
3x
++
+, +
BT
46,XX,t(3,5)(p14,p15)
1x
-
TA
45,XY,t(13,14)(q10,q10)
2x
-
SzK
46,XX,t(10,13)(q24,q34)
1x
+
RFA
47,XYY
1x
-
SzA
46,XX,t(1,19)(pter,qter)
1x
-
SzK
45XX,t(13,14)(q10,q10)
2x
-
RM
46,XX,t(2,18)(q23,q23)
1x
-
AI
46,XX,t(10,17)(p12,q22)
2x
+
+, +
DE
45,XX,t(21,22)(q10,q10)
1x
+
+
GyLA
X linked izom dysrophia
1x
+
+
JT
In.dup(15)(q11,1)
1x
-
SBB
45,XX,t(13,14)(q10,q10)
-
LG
Haemophilia A hordozó
1x
Diagnosticum - 2014.
+
Szülés
FER +
Foly.
Slide 37
Diagnosticum - 2014.
Slide 38
Diagnosticum - 2014.
Slide 39
WHO új sperma paraméterei I.
Karencia: 2-7 nap
pH > 7,2
Spermium koncentráció:≥ 15 M/ml
Spermium szám/ejakulátum: ≥ 39 M/ml
Mennyiség: > 1,5 ml
Peroxidáz teszt: < 1 M/ml
Diagnosticum - 2014.
Slide 40
WHO új sperma paraméterei II.
Motilitás: ≥ 32 %
Progresszíven mozgó: ≥ 32%
Teljes motilitás: ≥ 40%
Morfológia, strick krit. ≥ 4%
Immunológiai vizsg. /MAR teszt/: IgA, IgG
Spemaanalizátorral végzett vizsgálat
Diagnosticum - 2014.
Slide 41
WHO kritériumok
1
2
Normál
érték
2-7 nap
Karencia ideje (nap)
pH:
>7,2
Spermium
koncentráció
(M/ml):
Spermiumszám/
ejakulátum
Motilitás
≥15
M/ml
≥39 M
1
Progressziv mozgó (%)
Nem progresszív mozgó (%):
Teljes motilitás
(Progresszív és nem pr.%):
2
1
Mennyiség (ml):
Normál
érték
>1,5 ml
Viszkozitás:
(cm)
Agglutináció
ø
Peroxidáz teszt
( fvs kimutatása)
Normál Immunológiai vizsgálat
érték
(MAR teszt)
≥32,00%
≥40,00% IgA:
Nem mozgó (%):
Morfológia
WHO szerint,
Strick kr (%)
IgG:
≥4,00%
Diagnosticum - 2014.
2
< 1 M/ml
Slide 42
MAR teszt
IgA
IgG
Spermiumok mosása
Slide 43
Grádiens centrifugálás
Diagnosticum - 2014.
Slide 44
HBA teszt
Sperma Hyaluronan Binding Assay
Spermium érettségét vizsgálja – friss mintában
Érett spermiumok képesek kapcsolódni
Legfontosabb mucopolysaccharideja a:
- cumulus oophorusnak
- human folliculus folyadéknak
Diagnosticum - 2014.
Slide 45
HBA teszt
Sperma Hyaluronan Binding Assay
• Stimulálja a spermiumok mozgási képességét
• Meghosszabbítja életképességét
Diagnosticum - 2014.
Slide 46
Módszer
Az ejakulációt követően 3 órán belül végzendő a
vizsgálat
7-10 µl ondó kicseppentése a speciális tárgylemez
közepén lévő körre
Fedőlemezzel letakarjuk
10 és 20 perc közötti időszakban leszámoljuk a
kötődött mozgó spermiumokat
Diagnosticum - 2014.
Slide 47
Eredmény
% kötődés =
kötődött mozgó /
kötődött mozgó + nem kötődött mozgó spermiumok
Diagnosticum - 2014.
Slide 48
Eredmény értékelése
HBA score (% kötődés)
≥ 80% kötődés
Normál érettség és fiziológiás funkció
< 80% kötődés
Csökkent érettség és fiziológiás funkció
Diagnosticum - 2014.
Slide 49
PICSI
Diagnosticum - 2014.
Slide 50
HALO sperm
Spermium DNS fragmentációjának gyors mérése
Genetikai anyag minősége
Ismeretlen okú meddőség
Habituális vetélés
Normozoospermia – Varicocele
esetén is lehet pozitív
Antioxidáns kezelés
Diagnosticum - 2014.
Slide 51
HALO sperm
Spermium konc. hígítás 5-10 M/ml-re
Agarose pufferbe vitel
Szilárdítás
Lízis
Mosás
Dehidratáció
Fixálás
Festés
Szárítás
Diagnosticum - 2014.
Slide 52
Diagnosticum - 2014.
Slide 53
DNS fragmentáció mértéke
DNS fragmentáció (%)
Javasolt beavatkozás
15 %
IUI
15-30 %
IVF
30-40 %
ICSI
Diagnosticum - 2014.
Slide 54
IMSI
• Bartoov
• Magyarországon elsőként alkalmaztuk és alkalmazzuk
• Spermium szelekció ICSI előtt
• 400x nagyítás --- 6-8.000x nagyítás
• Akroszóma / vacuolumok
• Előzményben alacsony fertilizációs arány
• Több, mint 100 sikeres eset
Diagnosticum - 2014.
Slide 55
Diagnosticum - 2014.
Slide 56
IMSI CytoScreen - 2009
Diagnosticum - 2014.