Slide 1

Zdravotnická škola, Hradec Králové
Stredná zdravotnícka škola, Bánská Bystrica

glukóza
klinicko-biochemická diagnostika
a metody stanovení

glukóza
monosacharid – aldohexóza
chemický vzorec: C6H12O6
zkratka:
Glc
-Dglukopyranóza

=
D-glukóza

D-glukóza

-Dglukopyranóza

glukóza
je nejdůležitější látkou metabolizmu
sacharidů, tvoří se trávením a konverzí
glykogenu v játrech
za fyziologických podmínek získává organizmus
glukózu:
potravou - přísun z vnějšího prostředí
glykogenolýzou – metabolická dráha konverze glykogenu
na glukózu (zásoby glykogenu jsou uložené hlavně
v játrech a příčně pruhovaných svalech)

glukoneogenezí - metabolická dráha syntézy glukózy
z necukernatých prekurzorů (pyruvát, laktát, aminokyseliny, meziprodukty citrátového cyklu, glycerol)

regulační systém metabolizmu glukózy
organizmus se snaží zachovat koncentraci glukózy
v krvi v úzkém rozmezí: 3,3 - 6,1 mmol/l
regulační systém:
nervová složka
hormonální složka
- inzulin
- glukagon
- adrenalin a noradrenalin
- glukokortikoidy
- růstový hormon
- hormony štítné žlázy...

poruchy v metabolizmu glukózy
glykemie, glukozemie, glukoplazmie - hladina glukózy v krvi
glykosurie - přítomnost glukózy v moči
porucha v metabolizmu se může projevit ve smyslu:
trvalého zvýšení  hladiny glukózy
- hyperglykemie
za hyperglykemii považujeme stavy, kdy koncentrace glukózy
na lačno je vyšší než horní hranice referenčního intervalu

nebo snížení  hladiny glukózy
- hypoglykemie
hypoglykemie je vážný stav, kdy koncentrace glukózy v krvi
klesne pod dolní hranici referenčního intervalu,
tj. pod 3,3 mmol/l, a je doprovázena klinickými projevy

klinicko-biochemická diagnostika
stanovení glukózy je základní biochemickou
informací o sacharidovém metabolizmu

účelem testu je:
screening diabetes mellitus

monitorování lékové nebo dietní terapie
u pacientů s DM
diagnostika při hypoglykemiích
monitorování energetického stavu a výživy hlavně
u intenzivně léčených pacientů

klinicko-biochemická diagnostika
stanovuje se:
náhodně naměřená glykemie
glykemie na lačno (FPG - Fasting Plasma Glucose)
glykemie po jídle
(postprandiální glykemie, pozátěžová glykemie )

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
glykemický profil

stanovení glukózy na lačno
nástroj laboratorní diagnózy DM
vyhledávání osob se zvýšeným rizikem DM

příprava pacienta:
odběr provádíme minimálně
po 8hodinovém lačnění,
vyloučit fyzickou námahu a kouření

odběr:
doporučuje se odebrat venózní krev
do odběrové nádobky
s antiglykolytickou směsí,
stanovit glukózu
ve stabilizované plazmě

předanalytické podmínky
pro stanovení glukózy na lačno

stabilizace antiglykolytickou směsí:
antiglykolytická směs obsahuje NaF (2,5 mg NaF/ml krve)
a protisrážlivé činidlo (např. heparin, EDTA...)
NaF stabilizuje glukózu ve vzorku blokací glykolýzy

!!! pokud není použité stabilizační činidlo, klesá bez oddělení
krevních elementů koncentrace glukózy
při pokojové teplotě za 1 hod. o 5 až 7 %

transport do laboratoře:

okamžitý

oddělení séra/plazmy od krevních elementů:
sérum/plazmu je potřeba oddělit od krevních elementů
do 60 minut od odběru

metody stanovení glukózy
neenzymové metody
oxidačně–redukční a kondenzační metody
jsou nejstarší metody stanovení
v současnosti se v klinické biochemii nepoužívají

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu (GOD) a peroxidázu (POD)
využívající enzym hexokinázu (HK)
využívající enzym glukózodehydrogenázu (GDH)

elektrochemické metody
hmotnostní spektrometrie
(ID-GC/MS – doporučená referenční metoda)

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu a peroxidázu

princip stanovení:
glukóza + O2

+ H 2O

GOD

glukonolakton

+ H 2 O2

na detekci vzniklého H2O2 se využívá reakce
katalyzované enzymem peroxidázou

H2O2 + 4-AAP+ fenol
redukovaný chromogen

POD

chinonimin

+ H 2O

oxidovaný chromogen

Trinderova reakce

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

činidla:
Enzymy lahvička 

pufer – chromogen lahvička 

peroxidáza

fosforečnanový tlumivý roztok

glukózooxidáza

3-methyl-fenol

4-aminoantipyrin

příprava pracovního roztoku
•

obsah lahvičky  se rozpustí v 6 ml destilované vody

•

vleje se do lahvičky  a promíchá se

stabilita: při +2-8 °C ve tmě 1 měsíc,

při +15-25 °C ve tmě 10 dní

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

postup analýzy:
vlnová délka (480-540 nm), s maximem při 498 nm
kyveta 1 cm
teplota +15-25 °C, nebo 37 ± 0,1 °C
ve třech zkumavkách se smíchá pracovní roztok v poměru 100 + 1
se sérem, plazmou (vzorkem), standardním roztokem glukózy (standard)
a s destilovanou vodou (reagenční blenk)
 vzorek (A1)

vzorek (sérum, plazma)

 standard (A2)

 reag. blenk

0,02 ml

standard

0,02 ml

dest. H2O

0,02 ml

pracovní roztok

2,0 ml

2,0 ml

2,0 ml

inkubace: (30 min při +15 až +25 °C nebo 15 min při 37 °C),
změří se absorbance vzorku (A1)
a standardu (A2) proti reagenčnímu blenku

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

metoda je aplikovatelná:
na manuální stanovení glukózy bez deproteinace
na manuální stanovení glukózy s deproteinací
na biochemické analyzátory

linearita: do 22,0 mmol/l
hodnoty přesahující horní hranici linearity
se ředí manuálně destilovanou vodou
a analýza se opakuje (výsledek x ředění)

interference:
hemolýza
chylozita
přítomnost redukujících látek
– kyselina askorbová, kyselina močová, bilirubin a jiné...

enzymové metody
využívající enzym hexokinázu

princip stanovení:
glukóza + ATP

hexokináza + Mg2+

glukóza-6-fosfát + ADP

glukóza-6-fosfát + NAD+

G-6-PDH

glukonát-6-fosfát + NADPH + H+

ATP: adenozintrifosfát
ADP: adenozindifosfát
G-6-PDH: glukóza-6-fosfátdehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

enzymové metody
využívající enzym glukózodehydrogenázu

princip stanovení:
glukóza + NAD+
GDH

glukonolakton

+ NADH + H+

GDH: glukózodehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

elektrochemické metody
princip stanovení je založen na:
enzymové reakci a ampérometrické detekci

produktů enzymové reakce

enzym glukózooxidáza je imobilizován na biosenzoru

vzniklý peroxid vodíku se detekuje a pomocí

převodníku převádí na elektrický signál

elektrochemické metody
vyšetření se provádí
na glukózových analyzátorech

výhodou je rychlost stanovení

na stanovení se může přímo použít
stabilizovaná kapilární krev,
bez předchozí úpravy vzorku
neinterferuje hemolýza

elektrochemické metody

glukóza + O2

glukózooxidáza

kyselina glukonová

+ H2O2
H2
elektrony

registrační
elektroda

O2

glukometry
sebekontrola diabetu

(SMBG – selfmonitoring of blood glucose)

domácí monitorování glykemie
různé typy glukometrů
odebírá se kapilární krev

pracují na principu přímého
elektrochemického stanovení
doporučuje se kontrola glukometrů
a spolupráce s OKB

algoritmus pro laboratorní screening DM
u dospělých
vyloučení
glukóza
postprandiální
(náhodný odběr)
+klinické příznaky
DM

< 5,6

< 11,1

≥ 11,1

doporučení ČDS a ČSKB
hodnoty glukózy jsou v mmol/l

glukóza
v plazmě
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

opakovat odběr
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

Diabetes mellitus
(DM)

< 7,0

≥ 5,6
a < 7,0

< 5,6l, ale
v anam. riziko
DM nebo IGT

oGTT-WHO
(zátěž 75g glukózy,
odběr žilní krve
na lačno a 2h
po zátěži)

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 11,1
2h po zátěži

Diabetes mellitus

hraniční
glukóza na lačno
(IFG)
glukóza v plazmě
žilní krve < 7,8
2h po zátěži

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 7,8
<11,1 2h po zátěži

porušená
glukózová tolerance
(IGT)

orální glukózo-toleranční test (oGTT)

je podpůrný diagnostický funkční test
pro diagnostiku DM
a porušené glukózové tolerance
(IGT – Impaired Glucose Tolerance)

sleduje se glykemie na lačno
a po zátěži glukózou,
opakovaně v určitých intervalech
za přesně definovaných podmínek

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
příprava pacienta:
3 dny před testem pacient konzumuje běžnou stravu
s dostatečným obsahem sacharidů (nejméně 150 g za den)
a normální fyzickou zátěží
test se provádí ráno po 10-14hodinovém lačnění
a fyzickém klidu bez alkoholu, kofeinu a nikotinu
doporučuje se vynechat léky, pokud je to
z klinického hlediska možné

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
provedení testu:
odebírá se venózní krev na lačno
a čeká se na výsledek glykemie

pokud je glykemie v rozmezí 5,6-6,9 mmol/l ,
oGTT se provede
pacient vypije během 5-10 minut 75 g glukózy
v 250-300 ml roztoku
další odběry venózní krve se provádějí
za 60 a 120 minut po vypití roztoku glukózy

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
diagnostická kritéria:
pro hodnotu glukózy v plazmě venózní krve 120 minut
po zátěži 75 g glukózy
vyloučení DM

< 7,8 mmol/l

porušená
glukózová tolerance (IGT )

≥ 7,8 mmol/l
až < 11,1 mmol/l

Diabetes mellitus

≥11,1 mmol/l

glykemie v mmol/l

12
11,1

11,1

10
8

7,8
6,7

6

6,7
5,6

4
2
0
0 minut

60 minut

čas

120 minut

180 minut

glykemický profil
několik stanovení glukózy v průběhu dne,

popřípadě i v noci odráží aktuální kompenzaci DM

glykemický profil zkrácený:
4 nebo 3 odběry
indikace: při DM I. a II. typu, při operacích diabetiků
nebo po porodu při DM II. typu,
pro posouzení kompenzace apod.

glykemický profil
glykemický profil úplný:
9 odběrů
indikace: je indikován při DM I. typu, při intenzivní terapii
nebo při inzulinové terapii, u gravidních diabetiček,
při těžké dekompenzaci DM všech typů,
po transplantaci pankreatu…

počet a přesné časování odběrů se v jednotlivých
diabetologických centrech liší
a závisí i na denním režimu nemocného

analýza glukózy se provádí v laboratořích, pokud pacient
je hospitalizovaný, nebo v domácích podmínkách
formou selfmonitoringu

glykemický profil
odběr materiálu:
nejčastěji se odebírá kapilární krev (z prstu) do odběrových nádob
určených na kapilární odběry s obsahem antiglykolytické směsi
(např. Sarstedt Multivette)

prevedení testu:
glykemický profil úplný
9 odběrů
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

1 hod. po snídani

3. vzorek

30 min. před obědem

4. vzorek

1 hod. po obědě

5. vzorek

30 min. před večeří

6. vzorek

1 hod. po večeři

7. vzorek

v 22.00 hod.

8. vzorek

v 01.00 hod.

9. vzorek

v 04.00 hod.

glykemický profil zkrácený
4 odběry
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

30 min. před obědem

3. vzorek

30 min. před večeří

4. vzorek

v 22.00 hod.

glykosurie
koncentrace glukózy v moči závisí
na hladině glukózy v krvi a na funkci ledvin
účel testu:
screening poruch glukózové tolerance
detekce poruch tubulární resorpce při poškození ledvin

stanovení glukózy v moči:
semikvantitativně – diagnostický proužek
kvantitativně
Poznámka:
semikvantitativní a kvantitativní stanovení glukózy v moči není
zařazené mezi základní nástroje na určení diagnózy diabetu ani
na sledovaní jeho stavu, protože individuální rozdíly ledvinného
prahu pro glukózu jsou dost velké a práh kolísá u každého jedince

• Játra přeměňují glukózu na ………. (8)
(též zásobní forma glukózy)

G

L

Y

K

O

S

U

R

I

E

L

L

2

O

2

H

J

I

C



N

6

B

Z

H

U

U

12

Ň

L

O

K

Í

6

Y

N

a

F

• Hormon, který snižuje glykémii se nazývá U G Y L P U Á
…………………………….. (7).
K
K
O
K
R
N
T
• Krev pro stanovení glukózy se odebírá
A
T
T
G
O
E
R
do nádobek s antiglykolytickým činidlem,
G
O
G
E
F
G
A
kterým je ……. (3 - vzorec).
•Jak se nazývá diagnostický funkční test
O
N
E
Z
I
E
E
pro diagnostiku diabetu mellitu a porušené N M M O L / L
glukózové tolerance? (4 – zkratka).
• Hladina glukózy v moči se nazývá …………………………..(10).
• Hormon, který zvyšuje glykémii se nazývá ……………………… (8).
• Test, kdy se stanovují glykémie několikrát během dne a popř.
i v noci se nazývá glykemický …………….. (6).
• Jednotky, v kterých se uvádí výsledky glykémie …………………… (6).
• Sumární vzorec glukózy ………………(6)
• Reakcí glukózy a GOD vzniká sloučenina ………………. ( 4 vzorec).
• Které buňky pankreatu produkují inzulín? (6)
• Zásoby glykogenu, jsou uloženy v orgánu, který se nazývá
………………………………. (5).


Slide 2

Zdravotnická škola, Hradec Králové
Stredná zdravotnícka škola, Bánská Bystrica

glukóza
klinicko-biochemická diagnostika
a metody stanovení

glukóza
monosacharid – aldohexóza
chemický vzorec: C6H12O6
zkratka:
Glc
-Dglukopyranóza

=
D-glukóza

D-glukóza

-Dglukopyranóza

glukóza
je nejdůležitější látkou metabolizmu
sacharidů, tvoří se trávením a konverzí
glykogenu v játrech
za fyziologických podmínek získává organizmus
glukózu:
potravou - přísun z vnějšího prostředí
glykogenolýzou – metabolická dráha konverze glykogenu
na glukózu (zásoby glykogenu jsou uložené hlavně
v játrech a příčně pruhovaných svalech)

glukoneogenezí - metabolická dráha syntézy glukózy
z necukernatých prekurzorů (pyruvát, laktát, aminokyseliny, meziprodukty citrátového cyklu, glycerol)

regulační systém metabolizmu glukózy
organizmus se snaží zachovat koncentraci glukózy
v krvi v úzkém rozmezí: 3,3 - 6,1 mmol/l
regulační systém:
nervová složka
hormonální složka
- inzulin
- glukagon
- adrenalin a noradrenalin
- glukokortikoidy
- růstový hormon
- hormony štítné žlázy...

poruchy v metabolizmu glukózy
glykemie, glukozemie, glukoplazmie - hladina glukózy v krvi
glykosurie - přítomnost glukózy v moči
porucha v metabolizmu se může projevit ve smyslu:
trvalého zvýšení  hladiny glukózy
- hyperglykemie
za hyperglykemii považujeme stavy, kdy koncentrace glukózy
na lačno je vyšší než horní hranice referenčního intervalu

nebo snížení  hladiny glukózy
- hypoglykemie
hypoglykemie je vážný stav, kdy koncentrace glukózy v krvi
klesne pod dolní hranici referenčního intervalu,
tj. pod 3,3 mmol/l, a je doprovázena klinickými projevy

klinicko-biochemická diagnostika
stanovení glukózy je základní biochemickou
informací o sacharidovém metabolizmu

účelem testu je:
screening diabetes mellitus

monitorování lékové nebo dietní terapie
u pacientů s DM
diagnostika při hypoglykemiích
monitorování energetického stavu a výživy hlavně
u intenzivně léčených pacientů

klinicko-biochemická diagnostika
stanovuje se:
náhodně naměřená glykemie
glykemie na lačno (FPG - Fasting Plasma Glucose)
glykemie po jídle
(postprandiální glykemie, pozátěžová glykemie )

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
glykemický profil

stanovení glukózy na lačno
nástroj laboratorní diagnózy DM
vyhledávání osob se zvýšeným rizikem DM

příprava pacienta:
odběr provádíme minimálně
po 8hodinovém lačnění,
vyloučit fyzickou námahu a kouření

odběr:
doporučuje se odebrat venózní krev
do odběrové nádobky
s antiglykolytickou směsí,
stanovit glukózu
ve stabilizované plazmě

předanalytické podmínky
pro stanovení glukózy na lačno

stabilizace antiglykolytickou směsí:
antiglykolytická směs obsahuje NaF (2,5 mg NaF/ml krve)
a protisrážlivé činidlo (např. heparin, EDTA...)
NaF stabilizuje glukózu ve vzorku blokací glykolýzy

!!! pokud není použité stabilizační činidlo, klesá bez oddělení
krevních elementů koncentrace glukózy
při pokojové teplotě za 1 hod. o 5 až 7 %

transport do laboratoře:

okamžitý

oddělení séra/plazmy od krevních elementů:
sérum/plazmu je potřeba oddělit od krevních elementů
do 60 minut od odběru

metody stanovení glukózy
neenzymové metody
oxidačně–redukční a kondenzační metody
jsou nejstarší metody stanovení
v současnosti se v klinické biochemii nepoužívají

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu (GOD) a peroxidázu (POD)
využívající enzym hexokinázu (HK)
využívající enzym glukózodehydrogenázu (GDH)

elektrochemické metody
hmotnostní spektrometrie
(ID-GC/MS – doporučená referenční metoda)

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu a peroxidázu

princip stanovení:
glukóza + O2

+ H 2O

GOD

glukonolakton

+ H 2 O2

na detekci vzniklého H2O2 se využívá reakce
katalyzované enzymem peroxidázou

H2O2 + 4-AAP+ fenol
redukovaný chromogen

POD

chinonimin

+ H 2O

oxidovaný chromogen

Trinderova reakce

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

činidla:
Enzymy lahvička 

pufer – chromogen lahvička 

peroxidáza

fosforečnanový tlumivý roztok

glukózooxidáza

3-methyl-fenol

4-aminoantipyrin

příprava pracovního roztoku
•

obsah lahvičky  se rozpustí v 6 ml destilované vody

•

vleje se do lahvičky  a promíchá se

stabilita: při +2-8 °C ve tmě 1 měsíc,

při +15-25 °C ve tmě 10 dní

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

postup analýzy:
vlnová délka (480-540 nm), s maximem při 498 nm
kyveta 1 cm
teplota +15-25 °C, nebo 37 ± 0,1 °C
ve třech zkumavkách se smíchá pracovní roztok v poměru 100 + 1
se sérem, plazmou (vzorkem), standardním roztokem glukózy (standard)
a s destilovanou vodou (reagenční blenk)
 vzorek (A1)

vzorek (sérum, plazma)

 standard (A2)

 reag. blenk

0,02 ml

standard

0,02 ml

dest. H2O

0,02 ml

pracovní roztok

2,0 ml

2,0 ml

2,0 ml

inkubace: (30 min při +15 až +25 °C nebo 15 min při 37 °C),
změří se absorbance vzorku (A1)
a standardu (A2) proti reagenčnímu blenku

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

metoda je aplikovatelná:
na manuální stanovení glukózy bez deproteinace
na manuální stanovení glukózy s deproteinací
na biochemické analyzátory

linearita: do 22,0 mmol/l
hodnoty přesahující horní hranici linearity
se ředí manuálně destilovanou vodou
a analýza se opakuje (výsledek x ředění)

interference:
hemolýza
chylozita
přítomnost redukujících látek
– kyselina askorbová, kyselina močová, bilirubin a jiné...

enzymové metody
využívající enzym hexokinázu

princip stanovení:
glukóza + ATP

hexokináza + Mg2+

glukóza-6-fosfát + ADP

glukóza-6-fosfát + NAD+

G-6-PDH

glukonát-6-fosfát + NADPH + H+

ATP: adenozintrifosfát
ADP: adenozindifosfát
G-6-PDH: glukóza-6-fosfátdehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

enzymové metody
využívající enzym glukózodehydrogenázu

princip stanovení:
glukóza + NAD+
GDH

glukonolakton

+ NADH + H+

GDH: glukózodehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

elektrochemické metody
princip stanovení je založen na:
enzymové reakci a ampérometrické detekci

produktů enzymové reakce

enzym glukózooxidáza je imobilizován na biosenzoru

vzniklý peroxid vodíku se detekuje a pomocí

převodníku převádí na elektrický signál

elektrochemické metody
vyšetření se provádí
na glukózových analyzátorech

výhodou je rychlost stanovení

na stanovení se může přímo použít
stabilizovaná kapilární krev,
bez předchozí úpravy vzorku
neinterferuje hemolýza

elektrochemické metody

glukóza + O2

glukózooxidáza

kyselina glukonová

+ H2O2
H2
elektrony

registrační
elektroda

O2

glukometry
sebekontrola diabetu

(SMBG – selfmonitoring of blood glucose)

domácí monitorování glykemie
různé typy glukometrů
odebírá se kapilární krev

pracují na principu přímého
elektrochemického stanovení
doporučuje se kontrola glukometrů
a spolupráce s OKB

algoritmus pro laboratorní screening DM
u dospělých
vyloučení
glukóza
postprandiální
(náhodný odběr)
+klinické příznaky
DM

< 5,6

< 11,1

≥ 11,1

doporučení ČDS a ČSKB
hodnoty glukózy jsou v mmol/l

glukóza
v plazmě
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

opakovat odběr
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

Diabetes mellitus
(DM)

< 7,0

≥ 5,6
a < 7,0

< 5,6l, ale
v anam. riziko
DM nebo IGT

oGTT-WHO
(zátěž 75g glukózy,
odběr žilní krve
na lačno a 2h
po zátěži)

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 11,1
2h po zátěži

Diabetes mellitus

hraniční
glukóza na lačno
(IFG)
glukóza v plazmě
žilní krve < 7,8
2h po zátěži

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 7,8
<11,1 2h po zátěži

porušená
glukózová tolerance
(IGT)

orální glukózo-toleranční test (oGTT)

je podpůrný diagnostický funkční test
pro diagnostiku DM
a porušené glukózové tolerance
(IGT – Impaired Glucose Tolerance)

sleduje se glykemie na lačno
a po zátěži glukózou,
opakovaně v určitých intervalech
za přesně definovaných podmínek

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
příprava pacienta:
3 dny před testem pacient konzumuje běžnou stravu
s dostatečným obsahem sacharidů (nejméně 150 g za den)
a normální fyzickou zátěží
test se provádí ráno po 10-14hodinovém lačnění
a fyzickém klidu bez alkoholu, kofeinu a nikotinu
doporučuje se vynechat léky, pokud je to
z klinického hlediska možné

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
provedení testu:
odebírá se venózní krev na lačno
a čeká se na výsledek glykemie

pokud je glykemie v rozmezí 5,6-6,9 mmol/l ,
oGTT se provede
pacient vypije během 5-10 minut 75 g glukózy
v 250-300 ml roztoku
další odběry venózní krve se provádějí
za 60 a 120 minut po vypití roztoku glukózy

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
diagnostická kritéria:
pro hodnotu glukózy v plazmě venózní krve 120 minut
po zátěži 75 g glukózy
vyloučení DM

< 7,8 mmol/l

porušená
glukózová tolerance (IGT )

≥ 7,8 mmol/l
až < 11,1 mmol/l

Diabetes mellitus

≥11,1 mmol/l

glykemie v mmol/l

12
11,1

11,1

10
8

7,8
6,7

6

6,7
5,6

4
2
0
0 minut

60 minut

čas

120 minut

180 minut

glykemický profil
několik stanovení glukózy v průběhu dne,

popřípadě i v noci odráží aktuální kompenzaci DM

glykemický profil zkrácený:
4 nebo 3 odběry
indikace: při DM I. a II. typu, při operacích diabetiků
nebo po porodu při DM II. typu,
pro posouzení kompenzace apod.

glykemický profil
glykemický profil úplný:
9 odběrů
indikace: je indikován při DM I. typu, při intenzivní terapii
nebo při inzulinové terapii, u gravidních diabetiček,
při těžké dekompenzaci DM všech typů,
po transplantaci pankreatu…

počet a přesné časování odběrů se v jednotlivých
diabetologických centrech liší
a závisí i na denním režimu nemocného

analýza glukózy se provádí v laboratořích, pokud pacient
je hospitalizovaný, nebo v domácích podmínkách
formou selfmonitoringu

glykemický profil
odběr materiálu:
nejčastěji se odebírá kapilární krev (z prstu) do odběrových nádob
určených na kapilární odběry s obsahem antiglykolytické směsi
(např. Sarstedt Multivette)

prevedení testu:
glykemický profil úplný
9 odběrů
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

1 hod. po snídani

3. vzorek

30 min. před obědem

4. vzorek

1 hod. po obědě

5. vzorek

30 min. před večeří

6. vzorek

1 hod. po večeři

7. vzorek

v 22.00 hod.

8. vzorek

v 01.00 hod.

9. vzorek

v 04.00 hod.

glykemický profil zkrácený
4 odběry
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

30 min. před obědem

3. vzorek

30 min. před večeří

4. vzorek

v 22.00 hod.

glykosurie
koncentrace glukózy v moči závisí
na hladině glukózy v krvi a na funkci ledvin
účel testu:
screening poruch glukózové tolerance
detekce poruch tubulární resorpce při poškození ledvin

stanovení glukózy v moči:
semikvantitativně – diagnostický proužek
kvantitativně
Poznámka:
semikvantitativní a kvantitativní stanovení glukózy v moči není
zařazené mezi základní nástroje na určení diagnózy diabetu ani
na sledovaní jeho stavu, protože individuální rozdíly ledvinného
prahu pro glukózu jsou dost velké a práh kolísá u každého jedince

• Játra přeměňují glukózu na ………. (8)
(též zásobní forma glukózy)

G

L

Y

K

O

S

U

R

I

E

L

L

2

O

2

H

J

I

C



N

6

B

Z

H

U

U

12

Ň

L

O

K

Í

6

Y

N

a

F

• Hormon, který snižuje glykémii se nazývá U G Y L P U Á
…………………………….. (7).
K
K
O
K
R
N
T
• Krev pro stanovení glukózy se odebírá
A
T
T
G
O
E
R
do nádobek s antiglykolytickým činidlem,
G
O
G
E
F
G
A
kterým je ……. (3 - vzorec).
•Jak se nazývá diagnostický funkční test
O
N
E
Z
I
E
E
pro diagnostiku diabetu mellitu a porušené N M M O L / L
glukózové tolerance? (4 – zkratka).
• Hladina glukózy v moči se nazývá …………………………..(10).
• Hormon, který zvyšuje glykémii se nazývá ……………………… (8).
• Test, kdy se stanovují glykémie několikrát během dne a popř.
i v noci se nazývá glykemický …………….. (6).
• Jednotky, v kterých se uvádí výsledky glykémie …………………… (6).
• Sumární vzorec glukózy ………………(6)
• Reakcí glukózy a GOD vzniká sloučenina ………………. ( 4 vzorec).
• Které buňky pankreatu produkují inzulín? (6)
• Zásoby glykogenu, jsou uloženy v orgánu, který se nazývá
………………………………. (5).


Slide 3

Zdravotnická škola, Hradec Králové
Stredná zdravotnícka škola, Bánská Bystrica

glukóza
klinicko-biochemická diagnostika
a metody stanovení

glukóza
monosacharid – aldohexóza
chemický vzorec: C6H12O6
zkratka:
Glc
-Dglukopyranóza

=
D-glukóza

D-glukóza

-Dglukopyranóza

glukóza
je nejdůležitější látkou metabolizmu
sacharidů, tvoří se trávením a konverzí
glykogenu v játrech
za fyziologických podmínek získává organizmus
glukózu:
potravou - přísun z vnějšího prostředí
glykogenolýzou – metabolická dráha konverze glykogenu
na glukózu (zásoby glykogenu jsou uložené hlavně
v játrech a příčně pruhovaných svalech)

glukoneogenezí - metabolická dráha syntézy glukózy
z necukernatých prekurzorů (pyruvát, laktát, aminokyseliny, meziprodukty citrátového cyklu, glycerol)

regulační systém metabolizmu glukózy
organizmus se snaží zachovat koncentraci glukózy
v krvi v úzkém rozmezí: 3,3 - 6,1 mmol/l
regulační systém:
nervová složka
hormonální složka
- inzulin
- glukagon
- adrenalin a noradrenalin
- glukokortikoidy
- růstový hormon
- hormony štítné žlázy...

poruchy v metabolizmu glukózy
glykemie, glukozemie, glukoplazmie - hladina glukózy v krvi
glykosurie - přítomnost glukózy v moči
porucha v metabolizmu se může projevit ve smyslu:
trvalého zvýšení  hladiny glukózy
- hyperglykemie
za hyperglykemii považujeme stavy, kdy koncentrace glukózy
na lačno je vyšší než horní hranice referenčního intervalu

nebo snížení  hladiny glukózy
- hypoglykemie
hypoglykemie je vážný stav, kdy koncentrace glukózy v krvi
klesne pod dolní hranici referenčního intervalu,
tj. pod 3,3 mmol/l, a je doprovázena klinickými projevy

klinicko-biochemická diagnostika
stanovení glukózy je základní biochemickou
informací o sacharidovém metabolizmu

účelem testu je:
screening diabetes mellitus

monitorování lékové nebo dietní terapie
u pacientů s DM
diagnostika při hypoglykemiích
monitorování energetického stavu a výživy hlavně
u intenzivně léčených pacientů

klinicko-biochemická diagnostika
stanovuje se:
náhodně naměřená glykemie
glykemie na lačno (FPG - Fasting Plasma Glucose)
glykemie po jídle
(postprandiální glykemie, pozátěžová glykemie )

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
glykemický profil

stanovení glukózy na lačno
nástroj laboratorní diagnózy DM
vyhledávání osob se zvýšeným rizikem DM

příprava pacienta:
odběr provádíme minimálně
po 8hodinovém lačnění,
vyloučit fyzickou námahu a kouření

odběr:
doporučuje se odebrat venózní krev
do odběrové nádobky
s antiglykolytickou směsí,
stanovit glukózu
ve stabilizované plazmě

předanalytické podmínky
pro stanovení glukózy na lačno

stabilizace antiglykolytickou směsí:
antiglykolytická směs obsahuje NaF (2,5 mg NaF/ml krve)
a protisrážlivé činidlo (např. heparin, EDTA...)
NaF stabilizuje glukózu ve vzorku blokací glykolýzy

!!! pokud není použité stabilizační činidlo, klesá bez oddělení
krevních elementů koncentrace glukózy
při pokojové teplotě za 1 hod. o 5 až 7 %

transport do laboratoře:

okamžitý

oddělení séra/plazmy od krevních elementů:
sérum/plazmu je potřeba oddělit od krevních elementů
do 60 minut od odběru

metody stanovení glukózy
neenzymové metody
oxidačně–redukční a kondenzační metody
jsou nejstarší metody stanovení
v současnosti se v klinické biochemii nepoužívají

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu (GOD) a peroxidázu (POD)
využívající enzym hexokinázu (HK)
využívající enzym glukózodehydrogenázu (GDH)

elektrochemické metody
hmotnostní spektrometrie
(ID-GC/MS – doporučená referenční metoda)

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu a peroxidázu

princip stanovení:
glukóza + O2

+ H 2O

GOD

glukonolakton

+ H 2 O2

na detekci vzniklého H2O2 se využívá reakce
katalyzované enzymem peroxidázou

H2O2 + 4-AAP+ fenol
redukovaný chromogen

POD

chinonimin

+ H 2O

oxidovaný chromogen

Trinderova reakce

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

činidla:
Enzymy lahvička 

pufer – chromogen lahvička 

peroxidáza

fosforečnanový tlumivý roztok

glukózooxidáza

3-methyl-fenol

4-aminoantipyrin

příprava pracovního roztoku
•

obsah lahvičky  se rozpustí v 6 ml destilované vody

•

vleje se do lahvičky  a promíchá se

stabilita: při +2-8 °C ve tmě 1 měsíc,

při +15-25 °C ve tmě 10 dní

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

postup analýzy:
vlnová délka (480-540 nm), s maximem při 498 nm
kyveta 1 cm
teplota +15-25 °C, nebo 37 ± 0,1 °C
ve třech zkumavkách se smíchá pracovní roztok v poměru 100 + 1
se sérem, plazmou (vzorkem), standardním roztokem glukózy (standard)
a s destilovanou vodou (reagenční blenk)
 vzorek (A1)

vzorek (sérum, plazma)

 standard (A2)

 reag. blenk

0,02 ml

standard

0,02 ml

dest. H2O

0,02 ml

pracovní roztok

2,0 ml

2,0 ml

2,0 ml

inkubace: (30 min při +15 až +25 °C nebo 15 min při 37 °C),
změří se absorbance vzorku (A1)
a standardu (A2) proti reagenčnímu blenku

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

metoda je aplikovatelná:
na manuální stanovení glukózy bez deproteinace
na manuální stanovení glukózy s deproteinací
na biochemické analyzátory

linearita: do 22,0 mmol/l
hodnoty přesahující horní hranici linearity
se ředí manuálně destilovanou vodou
a analýza se opakuje (výsledek x ředění)

interference:
hemolýza
chylozita
přítomnost redukujících látek
– kyselina askorbová, kyselina močová, bilirubin a jiné...

enzymové metody
využívající enzym hexokinázu

princip stanovení:
glukóza + ATP

hexokináza + Mg2+

glukóza-6-fosfát + ADP

glukóza-6-fosfát + NAD+

G-6-PDH

glukonát-6-fosfát + NADPH + H+

ATP: adenozintrifosfát
ADP: adenozindifosfát
G-6-PDH: glukóza-6-fosfátdehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

enzymové metody
využívající enzym glukózodehydrogenázu

princip stanovení:
glukóza + NAD+
GDH

glukonolakton

+ NADH + H+

GDH: glukózodehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

elektrochemické metody
princip stanovení je založen na:
enzymové reakci a ampérometrické detekci

produktů enzymové reakce

enzym glukózooxidáza je imobilizován na biosenzoru

vzniklý peroxid vodíku se detekuje a pomocí

převodníku převádí na elektrický signál

elektrochemické metody
vyšetření se provádí
na glukózových analyzátorech

výhodou je rychlost stanovení

na stanovení se může přímo použít
stabilizovaná kapilární krev,
bez předchozí úpravy vzorku
neinterferuje hemolýza

elektrochemické metody

glukóza + O2

glukózooxidáza

kyselina glukonová

+ H2O2
H2
elektrony

registrační
elektroda

O2

glukometry
sebekontrola diabetu

(SMBG – selfmonitoring of blood glucose)

domácí monitorování glykemie
různé typy glukometrů
odebírá se kapilární krev

pracují na principu přímého
elektrochemického stanovení
doporučuje se kontrola glukometrů
a spolupráce s OKB

algoritmus pro laboratorní screening DM
u dospělých
vyloučení
glukóza
postprandiální
(náhodný odběr)
+klinické příznaky
DM

< 5,6

< 11,1

≥ 11,1

doporučení ČDS a ČSKB
hodnoty glukózy jsou v mmol/l

glukóza
v plazmě
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

opakovat odběr
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

Diabetes mellitus
(DM)

< 7,0

≥ 5,6
a < 7,0

< 5,6l, ale
v anam. riziko
DM nebo IGT

oGTT-WHO
(zátěž 75g glukózy,
odběr žilní krve
na lačno a 2h
po zátěži)

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 11,1
2h po zátěži

Diabetes mellitus

hraniční
glukóza na lačno
(IFG)
glukóza v plazmě
žilní krve < 7,8
2h po zátěži

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 7,8
<11,1 2h po zátěži

porušená
glukózová tolerance
(IGT)

orální glukózo-toleranční test (oGTT)

je podpůrný diagnostický funkční test
pro diagnostiku DM
a porušené glukózové tolerance
(IGT – Impaired Glucose Tolerance)

sleduje se glykemie na lačno
a po zátěži glukózou,
opakovaně v určitých intervalech
za přesně definovaných podmínek

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
příprava pacienta:
3 dny před testem pacient konzumuje běžnou stravu
s dostatečným obsahem sacharidů (nejméně 150 g za den)
a normální fyzickou zátěží
test se provádí ráno po 10-14hodinovém lačnění
a fyzickém klidu bez alkoholu, kofeinu a nikotinu
doporučuje se vynechat léky, pokud je to
z klinického hlediska možné

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
provedení testu:
odebírá se venózní krev na lačno
a čeká se na výsledek glykemie

pokud je glykemie v rozmezí 5,6-6,9 mmol/l ,
oGTT se provede
pacient vypije během 5-10 minut 75 g glukózy
v 250-300 ml roztoku
další odběry venózní krve se provádějí
za 60 a 120 minut po vypití roztoku glukózy

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
diagnostická kritéria:
pro hodnotu glukózy v plazmě venózní krve 120 minut
po zátěži 75 g glukózy
vyloučení DM

< 7,8 mmol/l

porušená
glukózová tolerance (IGT )

≥ 7,8 mmol/l
až < 11,1 mmol/l

Diabetes mellitus

≥11,1 mmol/l

glykemie v mmol/l

12
11,1

11,1

10
8

7,8
6,7

6

6,7
5,6

4
2
0
0 minut

60 minut

čas

120 minut

180 minut

glykemický profil
několik stanovení glukózy v průběhu dne,

popřípadě i v noci odráží aktuální kompenzaci DM

glykemický profil zkrácený:
4 nebo 3 odběry
indikace: při DM I. a II. typu, při operacích diabetiků
nebo po porodu při DM II. typu,
pro posouzení kompenzace apod.

glykemický profil
glykemický profil úplný:
9 odběrů
indikace: je indikován při DM I. typu, při intenzivní terapii
nebo při inzulinové terapii, u gravidních diabetiček,
při těžké dekompenzaci DM všech typů,
po transplantaci pankreatu…

počet a přesné časování odběrů se v jednotlivých
diabetologických centrech liší
a závisí i na denním režimu nemocného

analýza glukózy se provádí v laboratořích, pokud pacient
je hospitalizovaný, nebo v domácích podmínkách
formou selfmonitoringu

glykemický profil
odběr materiálu:
nejčastěji se odebírá kapilární krev (z prstu) do odběrových nádob
určených na kapilární odběry s obsahem antiglykolytické směsi
(např. Sarstedt Multivette)

prevedení testu:
glykemický profil úplný
9 odběrů
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

1 hod. po snídani

3. vzorek

30 min. před obědem

4. vzorek

1 hod. po obědě

5. vzorek

30 min. před večeří

6. vzorek

1 hod. po večeři

7. vzorek

v 22.00 hod.

8. vzorek

v 01.00 hod.

9. vzorek

v 04.00 hod.

glykemický profil zkrácený
4 odběry
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

30 min. před obědem

3. vzorek

30 min. před večeří

4. vzorek

v 22.00 hod.

glykosurie
koncentrace glukózy v moči závisí
na hladině glukózy v krvi a na funkci ledvin
účel testu:
screening poruch glukózové tolerance
detekce poruch tubulární resorpce při poškození ledvin

stanovení glukózy v moči:
semikvantitativně – diagnostický proužek
kvantitativně
Poznámka:
semikvantitativní a kvantitativní stanovení glukózy v moči není
zařazené mezi základní nástroje na určení diagnózy diabetu ani
na sledovaní jeho stavu, protože individuální rozdíly ledvinného
prahu pro glukózu jsou dost velké a práh kolísá u každého jedince

• Játra přeměňují glukózu na ………. (8)
(též zásobní forma glukózy)

G

L

Y

K

O

S

U

R

I

E

L

L

2

O

2

H

J

I

C



N

6

B

Z

H

U

U

12

Ň

L

O

K

Í

6

Y

N

a

F

• Hormon, který snižuje glykémii se nazývá U G Y L P U Á
…………………………….. (7).
K
K
O
K
R
N
T
• Krev pro stanovení glukózy se odebírá
A
T
T
G
O
E
R
do nádobek s antiglykolytickým činidlem,
G
O
G
E
F
G
A
kterým je ……. (3 - vzorec).
•Jak se nazývá diagnostický funkční test
O
N
E
Z
I
E
E
pro diagnostiku diabetu mellitu a porušené N M M O L / L
glukózové tolerance? (4 – zkratka).
• Hladina glukózy v moči se nazývá …………………………..(10).
• Hormon, který zvyšuje glykémii se nazývá ……………………… (8).
• Test, kdy se stanovují glykémie několikrát během dne a popř.
i v noci se nazývá glykemický …………….. (6).
• Jednotky, v kterých se uvádí výsledky glykémie …………………… (6).
• Sumární vzorec glukózy ………………(6)
• Reakcí glukózy a GOD vzniká sloučenina ………………. ( 4 vzorec).
• Které buňky pankreatu produkují inzulín? (6)
• Zásoby glykogenu, jsou uloženy v orgánu, který se nazývá
………………………………. (5).


Slide 4

Zdravotnická škola, Hradec Králové
Stredná zdravotnícka škola, Bánská Bystrica

glukóza
klinicko-biochemická diagnostika
a metody stanovení

glukóza
monosacharid – aldohexóza
chemický vzorec: C6H12O6
zkratka:
Glc
-Dglukopyranóza

=
D-glukóza

D-glukóza

-Dglukopyranóza

glukóza
je nejdůležitější látkou metabolizmu
sacharidů, tvoří se trávením a konverzí
glykogenu v játrech
za fyziologických podmínek získává organizmus
glukózu:
potravou - přísun z vnějšího prostředí
glykogenolýzou – metabolická dráha konverze glykogenu
na glukózu (zásoby glykogenu jsou uložené hlavně
v játrech a příčně pruhovaných svalech)

glukoneogenezí - metabolická dráha syntézy glukózy
z necukernatých prekurzorů (pyruvát, laktát, aminokyseliny, meziprodukty citrátového cyklu, glycerol)

regulační systém metabolizmu glukózy
organizmus se snaží zachovat koncentraci glukózy
v krvi v úzkém rozmezí: 3,3 - 6,1 mmol/l
regulační systém:
nervová složka
hormonální složka
- inzulin
- glukagon
- adrenalin a noradrenalin
- glukokortikoidy
- růstový hormon
- hormony štítné žlázy...

poruchy v metabolizmu glukózy
glykemie, glukozemie, glukoplazmie - hladina glukózy v krvi
glykosurie - přítomnost glukózy v moči
porucha v metabolizmu se může projevit ve smyslu:
trvalého zvýšení  hladiny glukózy
- hyperglykemie
za hyperglykemii považujeme stavy, kdy koncentrace glukózy
na lačno je vyšší než horní hranice referenčního intervalu

nebo snížení  hladiny glukózy
- hypoglykemie
hypoglykemie je vážný stav, kdy koncentrace glukózy v krvi
klesne pod dolní hranici referenčního intervalu,
tj. pod 3,3 mmol/l, a je doprovázena klinickými projevy

klinicko-biochemická diagnostika
stanovení glukózy je základní biochemickou
informací o sacharidovém metabolizmu

účelem testu je:
screening diabetes mellitus

monitorování lékové nebo dietní terapie
u pacientů s DM
diagnostika při hypoglykemiích
monitorování energetického stavu a výživy hlavně
u intenzivně léčených pacientů

klinicko-biochemická diagnostika
stanovuje se:
náhodně naměřená glykemie
glykemie na lačno (FPG - Fasting Plasma Glucose)
glykemie po jídle
(postprandiální glykemie, pozátěžová glykemie )

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
glykemický profil

stanovení glukózy na lačno
nástroj laboratorní diagnózy DM
vyhledávání osob se zvýšeným rizikem DM

příprava pacienta:
odběr provádíme minimálně
po 8hodinovém lačnění,
vyloučit fyzickou námahu a kouření

odběr:
doporučuje se odebrat venózní krev
do odběrové nádobky
s antiglykolytickou směsí,
stanovit glukózu
ve stabilizované plazmě

předanalytické podmínky
pro stanovení glukózy na lačno

stabilizace antiglykolytickou směsí:
antiglykolytická směs obsahuje NaF (2,5 mg NaF/ml krve)
a protisrážlivé činidlo (např. heparin, EDTA...)
NaF stabilizuje glukózu ve vzorku blokací glykolýzy

!!! pokud není použité stabilizační činidlo, klesá bez oddělení
krevních elementů koncentrace glukózy
při pokojové teplotě za 1 hod. o 5 až 7 %

transport do laboratoře:

okamžitý

oddělení séra/plazmy od krevních elementů:
sérum/plazmu je potřeba oddělit od krevních elementů
do 60 minut od odběru

metody stanovení glukózy
neenzymové metody
oxidačně–redukční a kondenzační metody
jsou nejstarší metody stanovení
v současnosti se v klinické biochemii nepoužívají

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu (GOD) a peroxidázu (POD)
využívající enzym hexokinázu (HK)
využívající enzym glukózodehydrogenázu (GDH)

elektrochemické metody
hmotnostní spektrometrie
(ID-GC/MS – doporučená referenční metoda)

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu a peroxidázu

princip stanovení:
glukóza + O2

+ H 2O

GOD

glukonolakton

+ H 2 O2

na detekci vzniklého H2O2 se využívá reakce
katalyzované enzymem peroxidázou

H2O2 + 4-AAP+ fenol
redukovaný chromogen

POD

chinonimin

+ H 2O

oxidovaný chromogen

Trinderova reakce

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

činidla:
Enzymy lahvička 

pufer – chromogen lahvička 

peroxidáza

fosforečnanový tlumivý roztok

glukózooxidáza

3-methyl-fenol

4-aminoantipyrin

příprava pracovního roztoku
•

obsah lahvičky  se rozpustí v 6 ml destilované vody

•

vleje se do lahvičky  a promíchá se

stabilita: při +2-8 °C ve tmě 1 měsíc,

při +15-25 °C ve tmě 10 dní

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

postup analýzy:
vlnová délka (480-540 nm), s maximem při 498 nm
kyveta 1 cm
teplota +15-25 °C, nebo 37 ± 0,1 °C
ve třech zkumavkách se smíchá pracovní roztok v poměru 100 + 1
se sérem, plazmou (vzorkem), standardním roztokem glukózy (standard)
a s destilovanou vodou (reagenční blenk)
 vzorek (A1)

vzorek (sérum, plazma)

 standard (A2)

 reag. blenk

0,02 ml

standard

0,02 ml

dest. H2O

0,02 ml

pracovní roztok

2,0 ml

2,0 ml

2,0 ml

inkubace: (30 min při +15 až +25 °C nebo 15 min při 37 °C),
změří se absorbance vzorku (A1)
a standardu (A2) proti reagenčnímu blenku

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

metoda je aplikovatelná:
na manuální stanovení glukózy bez deproteinace
na manuální stanovení glukózy s deproteinací
na biochemické analyzátory

linearita: do 22,0 mmol/l
hodnoty přesahující horní hranici linearity
se ředí manuálně destilovanou vodou
a analýza se opakuje (výsledek x ředění)

interference:
hemolýza
chylozita
přítomnost redukujících látek
– kyselina askorbová, kyselina močová, bilirubin a jiné...

enzymové metody
využívající enzym hexokinázu

princip stanovení:
glukóza + ATP

hexokináza + Mg2+

glukóza-6-fosfát + ADP

glukóza-6-fosfát + NAD+

G-6-PDH

glukonát-6-fosfát + NADPH + H+

ATP: adenozintrifosfát
ADP: adenozindifosfát
G-6-PDH: glukóza-6-fosfátdehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

enzymové metody
využívající enzym glukózodehydrogenázu

princip stanovení:
glukóza + NAD+
GDH

glukonolakton

+ NADH + H+

GDH: glukózodehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

elektrochemické metody
princip stanovení je založen na:
enzymové reakci a ampérometrické detekci

produktů enzymové reakce

enzym glukózooxidáza je imobilizován na biosenzoru

vzniklý peroxid vodíku se detekuje a pomocí

převodníku převádí na elektrický signál

elektrochemické metody
vyšetření se provádí
na glukózových analyzátorech

výhodou je rychlost stanovení

na stanovení se může přímo použít
stabilizovaná kapilární krev,
bez předchozí úpravy vzorku
neinterferuje hemolýza

elektrochemické metody

glukóza + O2

glukózooxidáza

kyselina glukonová

+ H2O2
H2
elektrony

registrační
elektroda

O2

glukometry
sebekontrola diabetu

(SMBG – selfmonitoring of blood glucose)

domácí monitorování glykemie
různé typy glukometrů
odebírá se kapilární krev

pracují na principu přímého
elektrochemického stanovení
doporučuje se kontrola glukometrů
a spolupráce s OKB

algoritmus pro laboratorní screening DM
u dospělých
vyloučení
glukóza
postprandiální
(náhodný odběr)
+klinické příznaky
DM

< 5,6

< 11,1

≥ 11,1

doporučení ČDS a ČSKB
hodnoty glukózy jsou v mmol/l

glukóza
v plazmě
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

opakovat odběr
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

Diabetes mellitus
(DM)

< 7,0

≥ 5,6
a < 7,0

< 5,6l, ale
v anam. riziko
DM nebo IGT

oGTT-WHO
(zátěž 75g glukózy,
odběr žilní krve
na lačno a 2h
po zátěži)

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 11,1
2h po zátěži

Diabetes mellitus

hraniční
glukóza na lačno
(IFG)
glukóza v plazmě
žilní krve < 7,8
2h po zátěži

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 7,8
<11,1 2h po zátěži

porušená
glukózová tolerance
(IGT)

orální glukózo-toleranční test (oGTT)

je podpůrný diagnostický funkční test
pro diagnostiku DM
a porušené glukózové tolerance
(IGT – Impaired Glucose Tolerance)

sleduje se glykemie na lačno
a po zátěži glukózou,
opakovaně v určitých intervalech
za přesně definovaných podmínek

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
příprava pacienta:
3 dny před testem pacient konzumuje běžnou stravu
s dostatečným obsahem sacharidů (nejméně 150 g za den)
a normální fyzickou zátěží
test se provádí ráno po 10-14hodinovém lačnění
a fyzickém klidu bez alkoholu, kofeinu a nikotinu
doporučuje se vynechat léky, pokud je to
z klinického hlediska možné

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
provedení testu:
odebírá se venózní krev na lačno
a čeká se na výsledek glykemie

pokud je glykemie v rozmezí 5,6-6,9 mmol/l ,
oGTT se provede
pacient vypije během 5-10 minut 75 g glukózy
v 250-300 ml roztoku
další odběry venózní krve se provádějí
za 60 a 120 minut po vypití roztoku glukózy

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
diagnostická kritéria:
pro hodnotu glukózy v plazmě venózní krve 120 minut
po zátěži 75 g glukózy
vyloučení DM

< 7,8 mmol/l

porušená
glukózová tolerance (IGT )

≥ 7,8 mmol/l
až < 11,1 mmol/l

Diabetes mellitus

≥11,1 mmol/l

glykemie v mmol/l

12
11,1

11,1

10
8

7,8
6,7

6

6,7
5,6

4
2
0
0 minut

60 minut

čas

120 minut

180 minut

glykemický profil
několik stanovení glukózy v průběhu dne,

popřípadě i v noci odráží aktuální kompenzaci DM

glykemický profil zkrácený:
4 nebo 3 odběry
indikace: při DM I. a II. typu, při operacích diabetiků
nebo po porodu při DM II. typu,
pro posouzení kompenzace apod.

glykemický profil
glykemický profil úplný:
9 odběrů
indikace: je indikován při DM I. typu, při intenzivní terapii
nebo při inzulinové terapii, u gravidních diabetiček,
při těžké dekompenzaci DM všech typů,
po transplantaci pankreatu…

počet a přesné časování odběrů se v jednotlivých
diabetologických centrech liší
a závisí i na denním režimu nemocného

analýza glukózy se provádí v laboratořích, pokud pacient
je hospitalizovaný, nebo v domácích podmínkách
formou selfmonitoringu

glykemický profil
odběr materiálu:
nejčastěji se odebírá kapilární krev (z prstu) do odběrových nádob
určených na kapilární odběry s obsahem antiglykolytické směsi
(např. Sarstedt Multivette)

prevedení testu:
glykemický profil úplný
9 odběrů
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

1 hod. po snídani

3. vzorek

30 min. před obědem

4. vzorek

1 hod. po obědě

5. vzorek

30 min. před večeří

6. vzorek

1 hod. po večeři

7. vzorek

v 22.00 hod.

8. vzorek

v 01.00 hod.

9. vzorek

v 04.00 hod.

glykemický profil zkrácený
4 odběry
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

30 min. před obědem

3. vzorek

30 min. před večeří

4. vzorek

v 22.00 hod.

glykosurie
koncentrace glukózy v moči závisí
na hladině glukózy v krvi a na funkci ledvin
účel testu:
screening poruch glukózové tolerance
detekce poruch tubulární resorpce při poškození ledvin

stanovení glukózy v moči:
semikvantitativně – diagnostický proužek
kvantitativně
Poznámka:
semikvantitativní a kvantitativní stanovení glukózy v moči není
zařazené mezi základní nástroje na určení diagnózy diabetu ani
na sledovaní jeho stavu, protože individuální rozdíly ledvinného
prahu pro glukózu jsou dost velké a práh kolísá u každého jedince

• Játra přeměňují glukózu na ………. (8)
(též zásobní forma glukózy)

G

L

Y

K

O

S

U

R

I

E

L

L

2

O

2

H

J

I

C



N

6

B

Z

H

U

U

12

Ň

L

O

K

Í

6

Y

N

a

F

• Hormon, který snižuje glykémii se nazývá U G Y L P U Á
…………………………….. (7).
K
K
O
K
R
N
T
• Krev pro stanovení glukózy se odebírá
A
T
T
G
O
E
R
do nádobek s antiglykolytickým činidlem,
G
O
G
E
F
G
A
kterým je ……. (3 - vzorec).
•Jak se nazývá diagnostický funkční test
O
N
E
Z
I
E
E
pro diagnostiku diabetu mellitu a porušené N M M O L / L
glukózové tolerance? (4 – zkratka).
• Hladina glukózy v moči se nazývá …………………………..(10).
• Hormon, který zvyšuje glykémii se nazývá ……………………… (8).
• Test, kdy se stanovují glykémie několikrát během dne a popř.
i v noci se nazývá glykemický …………….. (6).
• Jednotky, v kterých se uvádí výsledky glykémie …………………… (6).
• Sumární vzorec glukózy ………………(6)
• Reakcí glukózy a GOD vzniká sloučenina ………………. ( 4 vzorec).
• Které buňky pankreatu produkují inzulín? (6)
• Zásoby glykogenu, jsou uloženy v orgánu, který se nazývá
………………………………. (5).


Slide 5

Zdravotnická škola, Hradec Králové
Stredná zdravotnícka škola, Bánská Bystrica

glukóza
klinicko-biochemická diagnostika
a metody stanovení

glukóza
monosacharid – aldohexóza
chemický vzorec: C6H12O6
zkratka:
Glc
-Dglukopyranóza

=
D-glukóza

D-glukóza

-Dglukopyranóza

glukóza
je nejdůležitější látkou metabolizmu
sacharidů, tvoří se trávením a konverzí
glykogenu v játrech
za fyziologických podmínek získává organizmus
glukózu:
potravou - přísun z vnějšího prostředí
glykogenolýzou – metabolická dráha konverze glykogenu
na glukózu (zásoby glykogenu jsou uložené hlavně
v játrech a příčně pruhovaných svalech)

glukoneogenezí - metabolická dráha syntézy glukózy
z necukernatých prekurzorů (pyruvát, laktát, aminokyseliny, meziprodukty citrátového cyklu, glycerol)

regulační systém metabolizmu glukózy
organizmus se snaží zachovat koncentraci glukózy
v krvi v úzkém rozmezí: 3,3 - 6,1 mmol/l
regulační systém:
nervová složka
hormonální složka
- inzulin
- glukagon
- adrenalin a noradrenalin
- glukokortikoidy
- růstový hormon
- hormony štítné žlázy...

poruchy v metabolizmu glukózy
glykemie, glukozemie, glukoplazmie - hladina glukózy v krvi
glykosurie - přítomnost glukózy v moči
porucha v metabolizmu se může projevit ve smyslu:
trvalého zvýšení  hladiny glukózy
- hyperglykemie
za hyperglykemii považujeme stavy, kdy koncentrace glukózy
na lačno je vyšší než horní hranice referenčního intervalu

nebo snížení  hladiny glukózy
- hypoglykemie
hypoglykemie je vážný stav, kdy koncentrace glukózy v krvi
klesne pod dolní hranici referenčního intervalu,
tj. pod 3,3 mmol/l, a je doprovázena klinickými projevy

klinicko-biochemická diagnostika
stanovení glukózy je základní biochemickou
informací o sacharidovém metabolizmu

účelem testu je:
screening diabetes mellitus

monitorování lékové nebo dietní terapie
u pacientů s DM
diagnostika při hypoglykemiích
monitorování energetického stavu a výživy hlavně
u intenzivně léčených pacientů

klinicko-biochemická diagnostika
stanovuje se:
náhodně naměřená glykemie
glykemie na lačno (FPG - Fasting Plasma Glucose)
glykemie po jídle
(postprandiální glykemie, pozátěžová glykemie )

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
glykemický profil

stanovení glukózy na lačno
nástroj laboratorní diagnózy DM
vyhledávání osob se zvýšeným rizikem DM

příprava pacienta:
odběr provádíme minimálně
po 8hodinovém lačnění,
vyloučit fyzickou námahu a kouření

odběr:
doporučuje se odebrat venózní krev
do odběrové nádobky
s antiglykolytickou směsí,
stanovit glukózu
ve stabilizované plazmě

předanalytické podmínky
pro stanovení glukózy na lačno

stabilizace antiglykolytickou směsí:
antiglykolytická směs obsahuje NaF (2,5 mg NaF/ml krve)
a protisrážlivé činidlo (např. heparin, EDTA...)
NaF stabilizuje glukózu ve vzorku blokací glykolýzy

!!! pokud není použité stabilizační činidlo, klesá bez oddělení
krevních elementů koncentrace glukózy
při pokojové teplotě za 1 hod. o 5 až 7 %

transport do laboratoře:

okamžitý

oddělení séra/plazmy od krevních elementů:
sérum/plazmu je potřeba oddělit od krevních elementů
do 60 minut od odběru

metody stanovení glukózy
neenzymové metody
oxidačně–redukční a kondenzační metody
jsou nejstarší metody stanovení
v současnosti se v klinické biochemii nepoužívají

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu (GOD) a peroxidázu (POD)
využívající enzym hexokinázu (HK)
využívající enzym glukózodehydrogenázu (GDH)

elektrochemické metody
hmotnostní spektrometrie
(ID-GC/MS – doporučená referenční metoda)

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu a peroxidázu

princip stanovení:
glukóza + O2

+ H 2O

GOD

glukonolakton

+ H 2 O2

na detekci vzniklého H2O2 se využívá reakce
katalyzované enzymem peroxidázou

H2O2 + 4-AAP+ fenol
redukovaný chromogen

POD

chinonimin

+ H 2O

oxidovaný chromogen

Trinderova reakce

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

činidla:
Enzymy lahvička 

pufer – chromogen lahvička 

peroxidáza

fosforečnanový tlumivý roztok

glukózooxidáza

3-methyl-fenol

4-aminoantipyrin

příprava pracovního roztoku
•

obsah lahvičky  se rozpustí v 6 ml destilované vody

•

vleje se do lahvičky  a promíchá se

stabilita: při +2-8 °C ve tmě 1 měsíc,

při +15-25 °C ve tmě 10 dní

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

postup analýzy:
vlnová délka (480-540 nm), s maximem při 498 nm
kyveta 1 cm
teplota +15-25 °C, nebo 37 ± 0,1 °C
ve třech zkumavkách se smíchá pracovní roztok v poměru 100 + 1
se sérem, plazmou (vzorkem), standardním roztokem glukózy (standard)
a s destilovanou vodou (reagenční blenk)
 vzorek (A1)

vzorek (sérum, plazma)

 standard (A2)

 reag. blenk

0,02 ml

standard

0,02 ml

dest. H2O

0,02 ml

pracovní roztok

2,0 ml

2,0 ml

2,0 ml

inkubace: (30 min při +15 až +25 °C nebo 15 min při 37 °C),
změří se absorbance vzorku (A1)
a standardu (A2) proti reagenčnímu blenku

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

metoda je aplikovatelná:
na manuální stanovení glukózy bez deproteinace
na manuální stanovení glukózy s deproteinací
na biochemické analyzátory

linearita: do 22,0 mmol/l
hodnoty přesahující horní hranici linearity
se ředí manuálně destilovanou vodou
a analýza se opakuje (výsledek x ředění)

interference:
hemolýza
chylozita
přítomnost redukujících látek
– kyselina askorbová, kyselina močová, bilirubin a jiné...

enzymové metody
využívající enzym hexokinázu

princip stanovení:
glukóza + ATP

hexokináza + Mg2+

glukóza-6-fosfát + ADP

glukóza-6-fosfát + NAD+

G-6-PDH

glukonát-6-fosfát + NADPH + H+

ATP: adenozintrifosfát
ADP: adenozindifosfát
G-6-PDH: glukóza-6-fosfátdehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

enzymové metody
využívající enzym glukózodehydrogenázu

princip stanovení:
glukóza + NAD+
GDH

glukonolakton

+ NADH + H+

GDH: glukózodehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

elektrochemické metody
princip stanovení je založen na:
enzymové reakci a ampérometrické detekci

produktů enzymové reakce

enzym glukózooxidáza je imobilizován na biosenzoru

vzniklý peroxid vodíku se detekuje a pomocí

převodníku převádí na elektrický signál

elektrochemické metody
vyšetření se provádí
na glukózových analyzátorech

výhodou je rychlost stanovení

na stanovení se může přímo použít
stabilizovaná kapilární krev,
bez předchozí úpravy vzorku
neinterferuje hemolýza

elektrochemické metody

glukóza + O2

glukózooxidáza

kyselina glukonová

+ H2O2
H2
elektrony

registrační
elektroda

O2

glukometry
sebekontrola diabetu

(SMBG – selfmonitoring of blood glucose)

domácí monitorování glykemie
různé typy glukometrů
odebírá se kapilární krev

pracují na principu přímého
elektrochemického stanovení
doporučuje se kontrola glukometrů
a spolupráce s OKB

algoritmus pro laboratorní screening DM
u dospělých
vyloučení
glukóza
postprandiální
(náhodný odběr)
+klinické příznaky
DM

< 5,6

< 11,1

≥ 11,1

doporučení ČDS a ČSKB
hodnoty glukózy jsou v mmol/l

glukóza
v plazmě
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

opakovat odběr
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

Diabetes mellitus
(DM)

< 7,0

≥ 5,6
a < 7,0

< 5,6l, ale
v anam. riziko
DM nebo IGT

oGTT-WHO
(zátěž 75g glukózy,
odběr žilní krve
na lačno a 2h
po zátěži)

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 11,1
2h po zátěži

Diabetes mellitus

hraniční
glukóza na lačno
(IFG)
glukóza v plazmě
žilní krve < 7,8
2h po zátěži

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 7,8
<11,1 2h po zátěži

porušená
glukózová tolerance
(IGT)

orální glukózo-toleranční test (oGTT)

je podpůrný diagnostický funkční test
pro diagnostiku DM
a porušené glukózové tolerance
(IGT – Impaired Glucose Tolerance)

sleduje se glykemie na lačno
a po zátěži glukózou,
opakovaně v určitých intervalech
za přesně definovaných podmínek

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
příprava pacienta:
3 dny před testem pacient konzumuje běžnou stravu
s dostatečným obsahem sacharidů (nejméně 150 g za den)
a normální fyzickou zátěží
test se provádí ráno po 10-14hodinovém lačnění
a fyzickém klidu bez alkoholu, kofeinu a nikotinu
doporučuje se vynechat léky, pokud je to
z klinického hlediska možné

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
provedení testu:
odebírá se venózní krev na lačno
a čeká se na výsledek glykemie

pokud je glykemie v rozmezí 5,6-6,9 mmol/l ,
oGTT se provede
pacient vypije během 5-10 minut 75 g glukózy
v 250-300 ml roztoku
další odběry venózní krve se provádějí
za 60 a 120 minut po vypití roztoku glukózy

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
diagnostická kritéria:
pro hodnotu glukózy v plazmě venózní krve 120 minut
po zátěži 75 g glukózy
vyloučení DM

< 7,8 mmol/l

porušená
glukózová tolerance (IGT )

≥ 7,8 mmol/l
až < 11,1 mmol/l

Diabetes mellitus

≥11,1 mmol/l

glykemie v mmol/l

12
11,1

11,1

10
8

7,8
6,7

6

6,7
5,6

4
2
0
0 minut

60 minut

čas

120 minut

180 minut

glykemický profil
několik stanovení glukózy v průběhu dne,

popřípadě i v noci odráží aktuální kompenzaci DM

glykemický profil zkrácený:
4 nebo 3 odběry
indikace: při DM I. a II. typu, při operacích diabetiků
nebo po porodu při DM II. typu,
pro posouzení kompenzace apod.

glykemický profil
glykemický profil úplný:
9 odběrů
indikace: je indikován při DM I. typu, při intenzivní terapii
nebo při inzulinové terapii, u gravidních diabetiček,
při těžké dekompenzaci DM všech typů,
po transplantaci pankreatu…

počet a přesné časování odběrů se v jednotlivých
diabetologických centrech liší
a závisí i na denním režimu nemocného

analýza glukózy se provádí v laboratořích, pokud pacient
je hospitalizovaný, nebo v domácích podmínkách
formou selfmonitoringu

glykemický profil
odběr materiálu:
nejčastěji se odebírá kapilární krev (z prstu) do odběrových nádob
určených na kapilární odběry s obsahem antiglykolytické směsi
(např. Sarstedt Multivette)

prevedení testu:
glykemický profil úplný
9 odběrů
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

1 hod. po snídani

3. vzorek

30 min. před obědem

4. vzorek

1 hod. po obědě

5. vzorek

30 min. před večeří

6. vzorek

1 hod. po večeři

7. vzorek

v 22.00 hod.

8. vzorek

v 01.00 hod.

9. vzorek

v 04.00 hod.

glykemický profil zkrácený
4 odběry
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

30 min. před obědem

3. vzorek

30 min. před večeří

4. vzorek

v 22.00 hod.

glykosurie
koncentrace glukózy v moči závisí
na hladině glukózy v krvi a na funkci ledvin
účel testu:
screening poruch glukózové tolerance
detekce poruch tubulární resorpce při poškození ledvin

stanovení glukózy v moči:
semikvantitativně – diagnostický proužek
kvantitativně
Poznámka:
semikvantitativní a kvantitativní stanovení glukózy v moči není
zařazené mezi základní nástroje na určení diagnózy diabetu ani
na sledovaní jeho stavu, protože individuální rozdíly ledvinného
prahu pro glukózu jsou dost velké a práh kolísá u každého jedince

• Játra přeměňují glukózu na ………. (8)
(též zásobní forma glukózy)

G

L

Y

K

O

S

U

R

I

E

L

L

2

O

2

H

J

I

C



N

6

B

Z

H

U

U

12

Ň

L

O

K

Í

6

Y

N

a

F

• Hormon, který snižuje glykémii se nazývá U G Y L P U Á
…………………………….. (7).
K
K
O
K
R
N
T
• Krev pro stanovení glukózy se odebírá
A
T
T
G
O
E
R
do nádobek s antiglykolytickým činidlem,
G
O
G
E
F
G
A
kterým je ……. (3 - vzorec).
•Jak se nazývá diagnostický funkční test
O
N
E
Z
I
E
E
pro diagnostiku diabetu mellitu a porušené N M M O L / L
glukózové tolerance? (4 – zkratka).
• Hladina glukózy v moči se nazývá …………………………..(10).
• Hormon, který zvyšuje glykémii se nazývá ……………………… (8).
• Test, kdy se stanovují glykémie několikrát během dne a popř.
i v noci se nazývá glykemický …………….. (6).
• Jednotky, v kterých se uvádí výsledky glykémie …………………… (6).
• Sumární vzorec glukózy ………………(6)
• Reakcí glukózy a GOD vzniká sloučenina ………………. ( 4 vzorec).
• Které buňky pankreatu produkují inzulín? (6)
• Zásoby glykogenu, jsou uloženy v orgánu, který se nazývá
………………………………. (5).


Slide 6

Zdravotnická škola, Hradec Králové
Stredná zdravotnícka škola, Bánská Bystrica

glukóza
klinicko-biochemická diagnostika
a metody stanovení

glukóza
monosacharid – aldohexóza
chemický vzorec: C6H12O6
zkratka:
Glc
-Dglukopyranóza

=
D-glukóza

D-glukóza

-Dglukopyranóza

glukóza
je nejdůležitější látkou metabolizmu
sacharidů, tvoří se trávením a konverzí
glykogenu v játrech
za fyziologických podmínek získává organizmus
glukózu:
potravou - přísun z vnějšího prostředí
glykogenolýzou – metabolická dráha konverze glykogenu
na glukózu (zásoby glykogenu jsou uložené hlavně
v játrech a příčně pruhovaných svalech)

glukoneogenezí - metabolická dráha syntézy glukózy
z necukernatých prekurzorů (pyruvát, laktát, aminokyseliny, meziprodukty citrátového cyklu, glycerol)

regulační systém metabolizmu glukózy
organizmus se snaží zachovat koncentraci glukózy
v krvi v úzkém rozmezí: 3,3 - 6,1 mmol/l
regulační systém:
nervová složka
hormonální složka
- inzulin
- glukagon
- adrenalin a noradrenalin
- glukokortikoidy
- růstový hormon
- hormony štítné žlázy...

poruchy v metabolizmu glukózy
glykemie, glukozemie, glukoplazmie - hladina glukózy v krvi
glykosurie - přítomnost glukózy v moči
porucha v metabolizmu se může projevit ve smyslu:
trvalého zvýšení  hladiny glukózy
- hyperglykemie
za hyperglykemii považujeme stavy, kdy koncentrace glukózy
na lačno je vyšší než horní hranice referenčního intervalu

nebo snížení  hladiny glukózy
- hypoglykemie
hypoglykemie je vážný stav, kdy koncentrace glukózy v krvi
klesne pod dolní hranici referenčního intervalu,
tj. pod 3,3 mmol/l, a je doprovázena klinickými projevy

klinicko-biochemická diagnostika
stanovení glukózy je základní biochemickou
informací o sacharidovém metabolizmu

účelem testu je:
screening diabetes mellitus

monitorování lékové nebo dietní terapie
u pacientů s DM
diagnostika při hypoglykemiích
monitorování energetického stavu a výživy hlavně
u intenzivně léčených pacientů

klinicko-biochemická diagnostika
stanovuje se:
náhodně naměřená glykemie
glykemie na lačno (FPG - Fasting Plasma Glucose)
glykemie po jídle
(postprandiální glykemie, pozátěžová glykemie )

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
glykemický profil

stanovení glukózy na lačno
nástroj laboratorní diagnózy DM
vyhledávání osob se zvýšeným rizikem DM

příprava pacienta:
odběr provádíme minimálně
po 8hodinovém lačnění,
vyloučit fyzickou námahu a kouření

odběr:
doporučuje se odebrat venózní krev
do odběrové nádobky
s antiglykolytickou směsí,
stanovit glukózu
ve stabilizované plazmě

předanalytické podmínky
pro stanovení glukózy na lačno

stabilizace antiglykolytickou směsí:
antiglykolytická směs obsahuje NaF (2,5 mg NaF/ml krve)
a protisrážlivé činidlo (např. heparin, EDTA...)
NaF stabilizuje glukózu ve vzorku blokací glykolýzy

!!! pokud není použité stabilizační činidlo, klesá bez oddělení
krevních elementů koncentrace glukózy
při pokojové teplotě za 1 hod. o 5 až 7 %

transport do laboratoře:

okamžitý

oddělení séra/plazmy od krevních elementů:
sérum/plazmu je potřeba oddělit od krevních elementů
do 60 minut od odběru

metody stanovení glukózy
neenzymové metody
oxidačně–redukční a kondenzační metody
jsou nejstarší metody stanovení
v současnosti se v klinické biochemii nepoužívají

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu (GOD) a peroxidázu (POD)
využívající enzym hexokinázu (HK)
využívající enzym glukózodehydrogenázu (GDH)

elektrochemické metody
hmotnostní spektrometrie
(ID-GC/MS – doporučená referenční metoda)

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu a peroxidázu

princip stanovení:
glukóza + O2

+ H 2O

GOD

glukonolakton

+ H 2 O2

na detekci vzniklého H2O2 se využívá reakce
katalyzované enzymem peroxidázou

H2O2 + 4-AAP+ fenol
redukovaný chromogen

POD

chinonimin

+ H 2O

oxidovaný chromogen

Trinderova reakce

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

činidla:
Enzymy lahvička 

pufer – chromogen lahvička 

peroxidáza

fosforečnanový tlumivý roztok

glukózooxidáza

3-methyl-fenol

4-aminoantipyrin

příprava pracovního roztoku
•

obsah lahvičky  se rozpustí v 6 ml destilované vody

•

vleje se do lahvičky  a promíchá se

stabilita: při +2-8 °C ve tmě 1 měsíc,

při +15-25 °C ve tmě 10 dní

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

postup analýzy:
vlnová délka (480-540 nm), s maximem při 498 nm
kyveta 1 cm
teplota +15-25 °C, nebo 37 ± 0,1 °C
ve třech zkumavkách se smíchá pracovní roztok v poměru 100 + 1
se sérem, plazmou (vzorkem), standardním roztokem glukózy (standard)
a s destilovanou vodou (reagenční blenk)
 vzorek (A1)

vzorek (sérum, plazma)

 standard (A2)

 reag. blenk

0,02 ml

standard

0,02 ml

dest. H2O

0,02 ml

pracovní roztok

2,0 ml

2,0 ml

2,0 ml

inkubace: (30 min při +15 až +25 °C nebo 15 min při 37 °C),
změří se absorbance vzorku (A1)
a standardu (A2) proti reagenčnímu blenku

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

metoda je aplikovatelná:
na manuální stanovení glukózy bez deproteinace
na manuální stanovení glukózy s deproteinací
na biochemické analyzátory

linearita: do 22,0 mmol/l
hodnoty přesahující horní hranici linearity
se ředí manuálně destilovanou vodou
a analýza se opakuje (výsledek x ředění)

interference:
hemolýza
chylozita
přítomnost redukujících látek
– kyselina askorbová, kyselina močová, bilirubin a jiné...

enzymové metody
využívající enzym hexokinázu

princip stanovení:
glukóza + ATP

hexokináza + Mg2+

glukóza-6-fosfát + ADP

glukóza-6-fosfát + NAD+

G-6-PDH

glukonát-6-fosfát + NADPH + H+

ATP: adenozintrifosfát
ADP: adenozindifosfát
G-6-PDH: glukóza-6-fosfátdehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

enzymové metody
využívající enzym glukózodehydrogenázu

princip stanovení:
glukóza + NAD+
GDH

glukonolakton

+ NADH + H+

GDH: glukózodehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

elektrochemické metody
princip stanovení je založen na:
enzymové reakci a ampérometrické detekci

produktů enzymové reakce

enzym glukózooxidáza je imobilizován na biosenzoru

vzniklý peroxid vodíku se detekuje a pomocí

převodníku převádí na elektrický signál

elektrochemické metody
vyšetření se provádí
na glukózových analyzátorech

výhodou je rychlost stanovení

na stanovení se může přímo použít
stabilizovaná kapilární krev,
bez předchozí úpravy vzorku
neinterferuje hemolýza

elektrochemické metody

glukóza + O2

glukózooxidáza

kyselina glukonová

+ H2O2
H2
elektrony

registrační
elektroda

O2

glukometry
sebekontrola diabetu

(SMBG – selfmonitoring of blood glucose)

domácí monitorování glykemie
různé typy glukometrů
odebírá se kapilární krev

pracují na principu přímého
elektrochemického stanovení
doporučuje se kontrola glukometrů
a spolupráce s OKB

algoritmus pro laboratorní screening DM
u dospělých
vyloučení
glukóza
postprandiální
(náhodný odběr)
+klinické příznaky
DM

< 5,6

< 11,1

≥ 11,1

doporučení ČDS a ČSKB
hodnoty glukózy jsou v mmol/l

glukóza
v plazmě
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

opakovat odběr
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

Diabetes mellitus
(DM)

< 7,0

≥ 5,6
a < 7,0

< 5,6l, ale
v anam. riziko
DM nebo IGT

oGTT-WHO
(zátěž 75g glukózy,
odběr žilní krve
na lačno a 2h
po zátěži)

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 11,1
2h po zátěži

Diabetes mellitus

hraniční
glukóza na lačno
(IFG)
glukóza v plazmě
žilní krve < 7,8
2h po zátěži

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 7,8
<11,1 2h po zátěži

porušená
glukózová tolerance
(IGT)

orální glukózo-toleranční test (oGTT)

je podpůrný diagnostický funkční test
pro diagnostiku DM
a porušené glukózové tolerance
(IGT – Impaired Glucose Tolerance)

sleduje se glykemie na lačno
a po zátěži glukózou,
opakovaně v určitých intervalech
za přesně definovaných podmínek

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
příprava pacienta:
3 dny před testem pacient konzumuje běžnou stravu
s dostatečným obsahem sacharidů (nejméně 150 g za den)
a normální fyzickou zátěží
test se provádí ráno po 10-14hodinovém lačnění
a fyzickém klidu bez alkoholu, kofeinu a nikotinu
doporučuje se vynechat léky, pokud je to
z klinického hlediska možné

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
provedení testu:
odebírá se venózní krev na lačno
a čeká se na výsledek glykemie

pokud je glykemie v rozmezí 5,6-6,9 mmol/l ,
oGTT se provede
pacient vypije během 5-10 minut 75 g glukózy
v 250-300 ml roztoku
další odběry venózní krve se provádějí
za 60 a 120 minut po vypití roztoku glukózy

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
diagnostická kritéria:
pro hodnotu glukózy v plazmě venózní krve 120 minut
po zátěži 75 g glukózy
vyloučení DM

< 7,8 mmol/l

porušená
glukózová tolerance (IGT )

≥ 7,8 mmol/l
až < 11,1 mmol/l

Diabetes mellitus

≥11,1 mmol/l

glykemie v mmol/l

12
11,1

11,1

10
8

7,8
6,7

6

6,7
5,6

4
2
0
0 minut

60 minut

čas

120 minut

180 minut

glykemický profil
několik stanovení glukózy v průběhu dne,

popřípadě i v noci odráží aktuální kompenzaci DM

glykemický profil zkrácený:
4 nebo 3 odběry
indikace: při DM I. a II. typu, při operacích diabetiků
nebo po porodu při DM II. typu,
pro posouzení kompenzace apod.

glykemický profil
glykemický profil úplný:
9 odběrů
indikace: je indikován při DM I. typu, při intenzivní terapii
nebo při inzulinové terapii, u gravidních diabetiček,
při těžké dekompenzaci DM všech typů,
po transplantaci pankreatu…

počet a přesné časování odběrů se v jednotlivých
diabetologických centrech liší
a závisí i na denním režimu nemocného

analýza glukózy se provádí v laboratořích, pokud pacient
je hospitalizovaný, nebo v domácích podmínkách
formou selfmonitoringu

glykemický profil
odběr materiálu:
nejčastěji se odebírá kapilární krev (z prstu) do odběrových nádob
určených na kapilární odběry s obsahem antiglykolytické směsi
(např. Sarstedt Multivette)

prevedení testu:
glykemický profil úplný
9 odběrů
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

1 hod. po snídani

3. vzorek

30 min. před obědem

4. vzorek

1 hod. po obědě

5. vzorek

30 min. před večeří

6. vzorek

1 hod. po večeři

7. vzorek

v 22.00 hod.

8. vzorek

v 01.00 hod.

9. vzorek

v 04.00 hod.

glykemický profil zkrácený
4 odběry
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

30 min. před obědem

3. vzorek

30 min. před večeří

4. vzorek

v 22.00 hod.

glykosurie
koncentrace glukózy v moči závisí
na hladině glukózy v krvi a na funkci ledvin
účel testu:
screening poruch glukózové tolerance
detekce poruch tubulární resorpce při poškození ledvin

stanovení glukózy v moči:
semikvantitativně – diagnostický proužek
kvantitativně
Poznámka:
semikvantitativní a kvantitativní stanovení glukózy v moči není
zařazené mezi základní nástroje na určení diagnózy diabetu ani
na sledovaní jeho stavu, protože individuální rozdíly ledvinného
prahu pro glukózu jsou dost velké a práh kolísá u každého jedince

• Játra přeměňují glukózu na ………. (8)
(též zásobní forma glukózy)

G

L

Y

K

O

S

U

R

I

E

L

L

2

O

2

H

J

I

C



N

6

B

Z

H

U

U

12

Ň

L

O

K

Í

6

Y

N

a

F

• Hormon, který snižuje glykémii se nazývá U G Y L P U Á
…………………………….. (7).
K
K
O
K
R
N
T
• Krev pro stanovení glukózy se odebírá
A
T
T
G
O
E
R
do nádobek s antiglykolytickým činidlem,
G
O
G
E
F
G
A
kterým je ……. (3 - vzorec).
•Jak se nazývá diagnostický funkční test
O
N
E
Z
I
E
E
pro diagnostiku diabetu mellitu a porušené N M M O L / L
glukózové tolerance? (4 – zkratka).
• Hladina glukózy v moči se nazývá …………………………..(10).
• Hormon, který zvyšuje glykémii se nazývá ……………………… (8).
• Test, kdy se stanovují glykémie několikrát během dne a popř.
i v noci se nazývá glykemický …………….. (6).
• Jednotky, v kterých se uvádí výsledky glykémie …………………… (6).
• Sumární vzorec glukózy ………………(6)
• Reakcí glukózy a GOD vzniká sloučenina ………………. ( 4 vzorec).
• Které buňky pankreatu produkují inzulín? (6)
• Zásoby glykogenu, jsou uloženy v orgánu, který se nazývá
………………………………. (5).


Slide 7

Zdravotnická škola, Hradec Králové
Stredná zdravotnícka škola, Bánská Bystrica

glukóza
klinicko-biochemická diagnostika
a metody stanovení

glukóza
monosacharid – aldohexóza
chemický vzorec: C6H12O6
zkratka:
Glc
-Dglukopyranóza

=
D-glukóza

D-glukóza

-Dglukopyranóza

glukóza
je nejdůležitější látkou metabolizmu
sacharidů, tvoří se trávením a konverzí
glykogenu v játrech
za fyziologických podmínek získává organizmus
glukózu:
potravou - přísun z vnějšího prostředí
glykogenolýzou – metabolická dráha konverze glykogenu
na glukózu (zásoby glykogenu jsou uložené hlavně
v játrech a příčně pruhovaných svalech)

glukoneogenezí - metabolická dráha syntézy glukózy
z necukernatých prekurzorů (pyruvát, laktát, aminokyseliny, meziprodukty citrátového cyklu, glycerol)

regulační systém metabolizmu glukózy
organizmus se snaží zachovat koncentraci glukózy
v krvi v úzkém rozmezí: 3,3 - 6,1 mmol/l
regulační systém:
nervová složka
hormonální složka
- inzulin
- glukagon
- adrenalin a noradrenalin
- glukokortikoidy
- růstový hormon
- hormony štítné žlázy...

poruchy v metabolizmu glukózy
glykemie, glukozemie, glukoplazmie - hladina glukózy v krvi
glykosurie - přítomnost glukózy v moči
porucha v metabolizmu se může projevit ve smyslu:
trvalého zvýšení  hladiny glukózy
- hyperglykemie
za hyperglykemii považujeme stavy, kdy koncentrace glukózy
na lačno je vyšší než horní hranice referenčního intervalu

nebo snížení  hladiny glukózy
- hypoglykemie
hypoglykemie je vážný stav, kdy koncentrace glukózy v krvi
klesne pod dolní hranici referenčního intervalu,
tj. pod 3,3 mmol/l, a je doprovázena klinickými projevy

klinicko-biochemická diagnostika
stanovení glukózy je základní biochemickou
informací o sacharidovém metabolizmu

účelem testu je:
screening diabetes mellitus

monitorování lékové nebo dietní terapie
u pacientů s DM
diagnostika při hypoglykemiích
monitorování energetického stavu a výživy hlavně
u intenzivně léčených pacientů

klinicko-biochemická diagnostika
stanovuje se:
náhodně naměřená glykemie
glykemie na lačno (FPG - Fasting Plasma Glucose)
glykemie po jídle
(postprandiální glykemie, pozátěžová glykemie )

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
glykemický profil

stanovení glukózy na lačno
nástroj laboratorní diagnózy DM
vyhledávání osob se zvýšeným rizikem DM

příprava pacienta:
odběr provádíme minimálně
po 8hodinovém lačnění,
vyloučit fyzickou námahu a kouření

odběr:
doporučuje se odebrat venózní krev
do odběrové nádobky
s antiglykolytickou směsí,
stanovit glukózu
ve stabilizované plazmě

předanalytické podmínky
pro stanovení glukózy na lačno

stabilizace antiglykolytickou směsí:
antiglykolytická směs obsahuje NaF (2,5 mg NaF/ml krve)
a protisrážlivé činidlo (např. heparin, EDTA...)
NaF stabilizuje glukózu ve vzorku blokací glykolýzy

!!! pokud není použité stabilizační činidlo, klesá bez oddělení
krevních elementů koncentrace glukózy
při pokojové teplotě za 1 hod. o 5 až 7 %

transport do laboratoře:

okamžitý

oddělení séra/plazmy od krevních elementů:
sérum/plazmu je potřeba oddělit od krevních elementů
do 60 minut od odběru

metody stanovení glukózy
neenzymové metody
oxidačně–redukční a kondenzační metody
jsou nejstarší metody stanovení
v současnosti se v klinické biochemii nepoužívají

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu (GOD) a peroxidázu (POD)
využívající enzym hexokinázu (HK)
využívající enzym glukózodehydrogenázu (GDH)

elektrochemické metody
hmotnostní spektrometrie
(ID-GC/MS – doporučená referenční metoda)

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu a peroxidázu

princip stanovení:
glukóza + O2

+ H 2O

GOD

glukonolakton

+ H 2 O2

na detekci vzniklého H2O2 se využívá reakce
katalyzované enzymem peroxidázou

H2O2 + 4-AAP+ fenol
redukovaný chromogen

POD

chinonimin

+ H 2O

oxidovaný chromogen

Trinderova reakce

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

činidla:
Enzymy lahvička 

pufer – chromogen lahvička 

peroxidáza

fosforečnanový tlumivý roztok

glukózooxidáza

3-methyl-fenol

4-aminoantipyrin

příprava pracovního roztoku
•

obsah lahvičky  se rozpustí v 6 ml destilované vody

•

vleje se do lahvičky  a promíchá se

stabilita: při +2-8 °C ve tmě 1 měsíc,

při +15-25 °C ve tmě 10 dní

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

postup analýzy:
vlnová délka (480-540 nm), s maximem při 498 nm
kyveta 1 cm
teplota +15-25 °C, nebo 37 ± 0,1 °C
ve třech zkumavkách se smíchá pracovní roztok v poměru 100 + 1
se sérem, plazmou (vzorkem), standardním roztokem glukózy (standard)
a s destilovanou vodou (reagenční blenk)
 vzorek (A1)

vzorek (sérum, plazma)

 standard (A2)

 reag. blenk

0,02 ml

standard

0,02 ml

dest. H2O

0,02 ml

pracovní roztok

2,0 ml

2,0 ml

2,0 ml

inkubace: (30 min při +15 až +25 °C nebo 15 min při 37 °C),
změří se absorbance vzorku (A1)
a standardu (A2) proti reagenčnímu blenku

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

metoda je aplikovatelná:
na manuální stanovení glukózy bez deproteinace
na manuální stanovení glukózy s deproteinací
na biochemické analyzátory

linearita: do 22,0 mmol/l
hodnoty přesahující horní hranici linearity
se ředí manuálně destilovanou vodou
a analýza se opakuje (výsledek x ředění)

interference:
hemolýza
chylozita
přítomnost redukujících látek
– kyselina askorbová, kyselina močová, bilirubin a jiné...

enzymové metody
využívající enzym hexokinázu

princip stanovení:
glukóza + ATP

hexokináza + Mg2+

glukóza-6-fosfát + ADP

glukóza-6-fosfát + NAD+

G-6-PDH

glukonát-6-fosfát + NADPH + H+

ATP: adenozintrifosfát
ADP: adenozindifosfát
G-6-PDH: glukóza-6-fosfátdehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

enzymové metody
využívající enzym glukózodehydrogenázu

princip stanovení:
glukóza + NAD+
GDH

glukonolakton

+ NADH + H+

GDH: glukózodehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

elektrochemické metody
princip stanovení je založen na:
enzymové reakci a ampérometrické detekci

produktů enzymové reakce

enzym glukózooxidáza je imobilizován na biosenzoru

vzniklý peroxid vodíku se detekuje a pomocí

převodníku převádí na elektrický signál

elektrochemické metody
vyšetření se provádí
na glukózových analyzátorech

výhodou je rychlost stanovení

na stanovení se může přímo použít
stabilizovaná kapilární krev,
bez předchozí úpravy vzorku
neinterferuje hemolýza

elektrochemické metody

glukóza + O2

glukózooxidáza

kyselina glukonová

+ H2O2
H2
elektrony

registrační
elektroda

O2

glukometry
sebekontrola diabetu

(SMBG – selfmonitoring of blood glucose)

domácí monitorování glykemie
různé typy glukometrů
odebírá se kapilární krev

pracují na principu přímého
elektrochemického stanovení
doporučuje se kontrola glukometrů
a spolupráce s OKB

algoritmus pro laboratorní screening DM
u dospělých
vyloučení
glukóza
postprandiální
(náhodný odběr)
+klinické příznaky
DM

< 5,6

< 11,1

≥ 11,1

doporučení ČDS a ČSKB
hodnoty glukózy jsou v mmol/l

glukóza
v plazmě
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

opakovat odběr
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

Diabetes mellitus
(DM)

< 7,0

≥ 5,6
a < 7,0

< 5,6l, ale
v anam. riziko
DM nebo IGT

oGTT-WHO
(zátěž 75g glukózy,
odběr žilní krve
na lačno a 2h
po zátěži)

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 11,1
2h po zátěži

Diabetes mellitus

hraniční
glukóza na lačno
(IFG)
glukóza v plazmě
žilní krve < 7,8
2h po zátěži

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 7,8
<11,1 2h po zátěži

porušená
glukózová tolerance
(IGT)

orální glukózo-toleranční test (oGTT)

je podpůrný diagnostický funkční test
pro diagnostiku DM
a porušené glukózové tolerance
(IGT – Impaired Glucose Tolerance)

sleduje se glykemie na lačno
a po zátěži glukózou,
opakovaně v určitých intervalech
za přesně definovaných podmínek

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
příprava pacienta:
3 dny před testem pacient konzumuje běžnou stravu
s dostatečným obsahem sacharidů (nejméně 150 g za den)
a normální fyzickou zátěží
test se provádí ráno po 10-14hodinovém lačnění
a fyzickém klidu bez alkoholu, kofeinu a nikotinu
doporučuje se vynechat léky, pokud je to
z klinického hlediska možné

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
provedení testu:
odebírá se venózní krev na lačno
a čeká se na výsledek glykemie

pokud je glykemie v rozmezí 5,6-6,9 mmol/l ,
oGTT se provede
pacient vypije během 5-10 minut 75 g glukózy
v 250-300 ml roztoku
další odběry venózní krve se provádějí
za 60 a 120 minut po vypití roztoku glukózy

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
diagnostická kritéria:
pro hodnotu glukózy v plazmě venózní krve 120 minut
po zátěži 75 g glukózy
vyloučení DM

< 7,8 mmol/l

porušená
glukózová tolerance (IGT )

≥ 7,8 mmol/l
až < 11,1 mmol/l

Diabetes mellitus

≥11,1 mmol/l

glykemie v mmol/l

12
11,1

11,1

10
8

7,8
6,7

6

6,7
5,6

4
2
0
0 minut

60 minut

čas

120 minut

180 minut

glykemický profil
několik stanovení glukózy v průběhu dne,

popřípadě i v noci odráží aktuální kompenzaci DM

glykemický profil zkrácený:
4 nebo 3 odběry
indikace: při DM I. a II. typu, při operacích diabetiků
nebo po porodu při DM II. typu,
pro posouzení kompenzace apod.

glykemický profil
glykemický profil úplný:
9 odběrů
indikace: je indikován při DM I. typu, při intenzivní terapii
nebo při inzulinové terapii, u gravidních diabetiček,
při těžké dekompenzaci DM všech typů,
po transplantaci pankreatu…

počet a přesné časování odběrů se v jednotlivých
diabetologických centrech liší
a závisí i na denním režimu nemocného

analýza glukózy se provádí v laboratořích, pokud pacient
je hospitalizovaný, nebo v domácích podmínkách
formou selfmonitoringu

glykemický profil
odběr materiálu:
nejčastěji se odebírá kapilární krev (z prstu) do odběrových nádob
určených na kapilární odběry s obsahem antiglykolytické směsi
(např. Sarstedt Multivette)

prevedení testu:
glykemický profil úplný
9 odběrů
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

1 hod. po snídani

3. vzorek

30 min. před obědem

4. vzorek

1 hod. po obědě

5. vzorek

30 min. před večeří

6. vzorek

1 hod. po večeři

7. vzorek

v 22.00 hod.

8. vzorek

v 01.00 hod.

9. vzorek

v 04.00 hod.

glykemický profil zkrácený
4 odběry
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

30 min. před obědem

3. vzorek

30 min. před večeří

4. vzorek

v 22.00 hod.

glykosurie
koncentrace glukózy v moči závisí
na hladině glukózy v krvi a na funkci ledvin
účel testu:
screening poruch glukózové tolerance
detekce poruch tubulární resorpce při poškození ledvin

stanovení glukózy v moči:
semikvantitativně – diagnostický proužek
kvantitativně
Poznámka:
semikvantitativní a kvantitativní stanovení glukózy v moči není
zařazené mezi základní nástroje na určení diagnózy diabetu ani
na sledovaní jeho stavu, protože individuální rozdíly ledvinného
prahu pro glukózu jsou dost velké a práh kolísá u každého jedince

• Játra přeměňují glukózu na ………. (8)
(též zásobní forma glukózy)

G

L

Y

K

O

S

U

R

I

E

L

L

2

O

2

H

J

I

C



N

6

B

Z

H

U

U

12

Ň

L

O

K

Í

6

Y

N

a

F

• Hormon, který snižuje glykémii se nazývá U G Y L P U Á
…………………………….. (7).
K
K
O
K
R
N
T
• Krev pro stanovení glukózy se odebírá
A
T
T
G
O
E
R
do nádobek s antiglykolytickým činidlem,
G
O
G
E
F
G
A
kterým je ……. (3 - vzorec).
•Jak se nazývá diagnostický funkční test
O
N
E
Z
I
E
E
pro diagnostiku diabetu mellitu a porušené N M M O L / L
glukózové tolerance? (4 – zkratka).
• Hladina glukózy v moči se nazývá …………………………..(10).
• Hormon, který zvyšuje glykémii se nazývá ……………………… (8).
• Test, kdy se stanovují glykémie několikrát během dne a popř.
i v noci se nazývá glykemický …………….. (6).
• Jednotky, v kterých se uvádí výsledky glykémie …………………… (6).
• Sumární vzorec glukózy ………………(6)
• Reakcí glukózy a GOD vzniká sloučenina ………………. ( 4 vzorec).
• Které buňky pankreatu produkují inzulín? (6)
• Zásoby glykogenu, jsou uloženy v orgánu, který se nazývá
………………………………. (5).


Slide 8

Zdravotnická škola, Hradec Králové
Stredná zdravotnícka škola, Bánská Bystrica

glukóza
klinicko-biochemická diagnostika
a metody stanovení

glukóza
monosacharid – aldohexóza
chemický vzorec: C6H12O6
zkratka:
Glc
-Dglukopyranóza

=
D-glukóza

D-glukóza

-Dglukopyranóza

glukóza
je nejdůležitější látkou metabolizmu
sacharidů, tvoří se trávením a konverzí
glykogenu v játrech
za fyziologických podmínek získává organizmus
glukózu:
potravou - přísun z vnějšího prostředí
glykogenolýzou – metabolická dráha konverze glykogenu
na glukózu (zásoby glykogenu jsou uložené hlavně
v játrech a příčně pruhovaných svalech)

glukoneogenezí - metabolická dráha syntézy glukózy
z necukernatých prekurzorů (pyruvát, laktát, aminokyseliny, meziprodukty citrátového cyklu, glycerol)

regulační systém metabolizmu glukózy
organizmus se snaží zachovat koncentraci glukózy
v krvi v úzkém rozmezí: 3,3 - 6,1 mmol/l
regulační systém:
nervová složka
hormonální složka
- inzulin
- glukagon
- adrenalin a noradrenalin
- glukokortikoidy
- růstový hormon
- hormony štítné žlázy...

poruchy v metabolizmu glukózy
glykemie, glukozemie, glukoplazmie - hladina glukózy v krvi
glykosurie - přítomnost glukózy v moči
porucha v metabolizmu se může projevit ve smyslu:
trvalého zvýšení  hladiny glukózy
- hyperglykemie
za hyperglykemii považujeme stavy, kdy koncentrace glukózy
na lačno je vyšší než horní hranice referenčního intervalu

nebo snížení  hladiny glukózy
- hypoglykemie
hypoglykemie je vážný stav, kdy koncentrace glukózy v krvi
klesne pod dolní hranici referenčního intervalu,
tj. pod 3,3 mmol/l, a je doprovázena klinickými projevy

klinicko-biochemická diagnostika
stanovení glukózy je základní biochemickou
informací o sacharidovém metabolizmu

účelem testu je:
screening diabetes mellitus

monitorování lékové nebo dietní terapie
u pacientů s DM
diagnostika při hypoglykemiích
monitorování energetického stavu a výživy hlavně
u intenzivně léčených pacientů

klinicko-biochemická diagnostika
stanovuje se:
náhodně naměřená glykemie
glykemie na lačno (FPG - Fasting Plasma Glucose)
glykemie po jídle
(postprandiální glykemie, pozátěžová glykemie )

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
glykemický profil

stanovení glukózy na lačno
nástroj laboratorní diagnózy DM
vyhledávání osob se zvýšeným rizikem DM

příprava pacienta:
odběr provádíme minimálně
po 8hodinovém lačnění,
vyloučit fyzickou námahu a kouření

odběr:
doporučuje se odebrat venózní krev
do odběrové nádobky
s antiglykolytickou směsí,
stanovit glukózu
ve stabilizované plazmě

předanalytické podmínky
pro stanovení glukózy na lačno

stabilizace antiglykolytickou směsí:
antiglykolytická směs obsahuje NaF (2,5 mg NaF/ml krve)
a protisrážlivé činidlo (např. heparin, EDTA...)
NaF stabilizuje glukózu ve vzorku blokací glykolýzy

!!! pokud není použité stabilizační činidlo, klesá bez oddělení
krevních elementů koncentrace glukózy
při pokojové teplotě za 1 hod. o 5 až 7 %

transport do laboratoře:

okamžitý

oddělení séra/plazmy od krevních elementů:
sérum/plazmu je potřeba oddělit od krevních elementů
do 60 minut od odběru

metody stanovení glukózy
neenzymové metody
oxidačně–redukční a kondenzační metody
jsou nejstarší metody stanovení
v současnosti se v klinické biochemii nepoužívají

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu (GOD) a peroxidázu (POD)
využívající enzym hexokinázu (HK)
využívající enzym glukózodehydrogenázu (GDH)

elektrochemické metody
hmotnostní spektrometrie
(ID-GC/MS – doporučená referenční metoda)

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu a peroxidázu

princip stanovení:
glukóza + O2

+ H 2O

GOD

glukonolakton

+ H 2 O2

na detekci vzniklého H2O2 se využívá reakce
katalyzované enzymem peroxidázou

H2O2 + 4-AAP+ fenol
redukovaný chromogen

POD

chinonimin

+ H 2O

oxidovaný chromogen

Trinderova reakce

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

činidla:
Enzymy lahvička 

pufer – chromogen lahvička 

peroxidáza

fosforečnanový tlumivý roztok

glukózooxidáza

3-methyl-fenol

4-aminoantipyrin

příprava pracovního roztoku
•

obsah lahvičky  se rozpustí v 6 ml destilované vody

•

vleje se do lahvičky  a promíchá se

stabilita: při +2-8 °C ve tmě 1 měsíc,

při +15-25 °C ve tmě 10 dní

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

postup analýzy:
vlnová délka (480-540 nm), s maximem při 498 nm
kyveta 1 cm
teplota +15-25 °C, nebo 37 ± 0,1 °C
ve třech zkumavkách se smíchá pracovní roztok v poměru 100 + 1
se sérem, plazmou (vzorkem), standardním roztokem glukózy (standard)
a s destilovanou vodou (reagenční blenk)
 vzorek (A1)

vzorek (sérum, plazma)

 standard (A2)

 reag. blenk

0,02 ml

standard

0,02 ml

dest. H2O

0,02 ml

pracovní roztok

2,0 ml

2,0 ml

2,0 ml

inkubace: (30 min při +15 až +25 °C nebo 15 min při 37 °C),
změří se absorbance vzorku (A1)
a standardu (A2) proti reagenčnímu blenku

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

metoda je aplikovatelná:
na manuální stanovení glukózy bez deproteinace
na manuální stanovení glukózy s deproteinací
na biochemické analyzátory

linearita: do 22,0 mmol/l
hodnoty přesahující horní hranici linearity
se ředí manuálně destilovanou vodou
a analýza se opakuje (výsledek x ředění)

interference:
hemolýza
chylozita
přítomnost redukujících látek
– kyselina askorbová, kyselina močová, bilirubin a jiné...

enzymové metody
využívající enzym hexokinázu

princip stanovení:
glukóza + ATP

hexokináza + Mg2+

glukóza-6-fosfát + ADP

glukóza-6-fosfát + NAD+

G-6-PDH

glukonát-6-fosfát + NADPH + H+

ATP: adenozintrifosfát
ADP: adenozindifosfát
G-6-PDH: glukóza-6-fosfátdehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

enzymové metody
využívající enzym glukózodehydrogenázu

princip stanovení:
glukóza + NAD+
GDH

glukonolakton

+ NADH + H+

GDH: glukózodehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

elektrochemické metody
princip stanovení je založen na:
enzymové reakci a ampérometrické detekci

produktů enzymové reakce

enzym glukózooxidáza je imobilizován na biosenzoru

vzniklý peroxid vodíku se detekuje a pomocí

převodníku převádí na elektrický signál

elektrochemické metody
vyšetření se provádí
na glukózových analyzátorech

výhodou je rychlost stanovení

na stanovení se může přímo použít
stabilizovaná kapilární krev,
bez předchozí úpravy vzorku
neinterferuje hemolýza

elektrochemické metody

glukóza + O2

glukózooxidáza

kyselina glukonová

+ H2O2
H2
elektrony

registrační
elektroda

O2

glukometry
sebekontrola diabetu

(SMBG – selfmonitoring of blood glucose)

domácí monitorování glykemie
různé typy glukometrů
odebírá se kapilární krev

pracují na principu přímého
elektrochemického stanovení
doporučuje se kontrola glukometrů
a spolupráce s OKB

algoritmus pro laboratorní screening DM
u dospělých
vyloučení
glukóza
postprandiální
(náhodný odběr)
+klinické příznaky
DM

< 5,6

< 11,1

≥ 11,1

doporučení ČDS a ČSKB
hodnoty glukózy jsou v mmol/l

glukóza
v plazmě
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

opakovat odběr
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

Diabetes mellitus
(DM)

< 7,0

≥ 5,6
a < 7,0

< 5,6l, ale
v anam. riziko
DM nebo IGT

oGTT-WHO
(zátěž 75g glukózy,
odběr žilní krve
na lačno a 2h
po zátěži)

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 11,1
2h po zátěži

Diabetes mellitus

hraniční
glukóza na lačno
(IFG)
glukóza v plazmě
žilní krve < 7,8
2h po zátěži

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 7,8
<11,1 2h po zátěži

porušená
glukózová tolerance
(IGT)

orální glukózo-toleranční test (oGTT)

je podpůrný diagnostický funkční test
pro diagnostiku DM
a porušené glukózové tolerance
(IGT – Impaired Glucose Tolerance)

sleduje se glykemie na lačno
a po zátěži glukózou,
opakovaně v určitých intervalech
za přesně definovaných podmínek

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
příprava pacienta:
3 dny před testem pacient konzumuje běžnou stravu
s dostatečným obsahem sacharidů (nejméně 150 g za den)
a normální fyzickou zátěží
test se provádí ráno po 10-14hodinovém lačnění
a fyzickém klidu bez alkoholu, kofeinu a nikotinu
doporučuje se vynechat léky, pokud je to
z klinického hlediska možné

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
provedení testu:
odebírá se venózní krev na lačno
a čeká se na výsledek glykemie

pokud je glykemie v rozmezí 5,6-6,9 mmol/l ,
oGTT se provede
pacient vypije během 5-10 minut 75 g glukózy
v 250-300 ml roztoku
další odběry venózní krve se provádějí
za 60 a 120 minut po vypití roztoku glukózy

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
diagnostická kritéria:
pro hodnotu glukózy v plazmě venózní krve 120 minut
po zátěži 75 g glukózy
vyloučení DM

< 7,8 mmol/l

porušená
glukózová tolerance (IGT )

≥ 7,8 mmol/l
až < 11,1 mmol/l

Diabetes mellitus

≥11,1 mmol/l

glykemie v mmol/l

12
11,1

11,1

10
8

7,8
6,7

6

6,7
5,6

4
2
0
0 minut

60 minut

čas

120 minut

180 minut

glykemický profil
několik stanovení glukózy v průběhu dne,

popřípadě i v noci odráží aktuální kompenzaci DM

glykemický profil zkrácený:
4 nebo 3 odběry
indikace: při DM I. a II. typu, při operacích diabetiků
nebo po porodu při DM II. typu,
pro posouzení kompenzace apod.

glykemický profil
glykemický profil úplný:
9 odběrů
indikace: je indikován při DM I. typu, při intenzivní terapii
nebo při inzulinové terapii, u gravidních diabetiček,
při těžké dekompenzaci DM všech typů,
po transplantaci pankreatu…

počet a přesné časování odběrů se v jednotlivých
diabetologických centrech liší
a závisí i na denním režimu nemocného

analýza glukózy se provádí v laboratořích, pokud pacient
je hospitalizovaný, nebo v domácích podmínkách
formou selfmonitoringu

glykemický profil
odběr materiálu:
nejčastěji se odebírá kapilární krev (z prstu) do odběrových nádob
určených na kapilární odběry s obsahem antiglykolytické směsi
(např. Sarstedt Multivette)

prevedení testu:
glykemický profil úplný
9 odběrů
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

1 hod. po snídani

3. vzorek

30 min. před obědem

4. vzorek

1 hod. po obědě

5. vzorek

30 min. před večeří

6. vzorek

1 hod. po večeři

7. vzorek

v 22.00 hod.

8. vzorek

v 01.00 hod.

9. vzorek

v 04.00 hod.

glykemický profil zkrácený
4 odběry
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

30 min. před obědem

3. vzorek

30 min. před večeří

4. vzorek

v 22.00 hod.

glykosurie
koncentrace glukózy v moči závisí
na hladině glukózy v krvi a na funkci ledvin
účel testu:
screening poruch glukózové tolerance
detekce poruch tubulární resorpce při poškození ledvin

stanovení glukózy v moči:
semikvantitativně – diagnostický proužek
kvantitativně
Poznámka:
semikvantitativní a kvantitativní stanovení glukózy v moči není
zařazené mezi základní nástroje na určení diagnózy diabetu ani
na sledovaní jeho stavu, protože individuální rozdíly ledvinného
prahu pro glukózu jsou dost velké a práh kolísá u každého jedince

• Játra přeměňují glukózu na ………. (8)
(též zásobní forma glukózy)

G

L

Y

K

O

S

U

R

I

E

L

L

2

O

2

H

J

I

C



N

6

B

Z

H

U

U

12

Ň

L

O

K

Í

6

Y

N

a

F

• Hormon, který snižuje glykémii se nazývá U G Y L P U Á
…………………………….. (7).
K
K
O
K
R
N
T
• Krev pro stanovení glukózy se odebírá
A
T
T
G
O
E
R
do nádobek s antiglykolytickým činidlem,
G
O
G
E
F
G
A
kterým je ……. (3 - vzorec).
•Jak se nazývá diagnostický funkční test
O
N
E
Z
I
E
E
pro diagnostiku diabetu mellitu a porušené N M M O L / L
glukózové tolerance? (4 – zkratka).
• Hladina glukózy v moči se nazývá …………………………..(10).
• Hormon, který zvyšuje glykémii se nazývá ……………………… (8).
• Test, kdy se stanovují glykémie několikrát během dne a popř.
i v noci se nazývá glykemický …………….. (6).
• Jednotky, v kterých se uvádí výsledky glykémie …………………… (6).
• Sumární vzorec glukózy ………………(6)
• Reakcí glukózy a GOD vzniká sloučenina ………………. ( 4 vzorec).
• Které buňky pankreatu produkují inzulín? (6)
• Zásoby glykogenu, jsou uloženy v orgánu, který se nazývá
………………………………. (5).


Slide 9

Zdravotnická škola, Hradec Králové
Stredná zdravotnícka škola, Bánská Bystrica

glukóza
klinicko-biochemická diagnostika
a metody stanovení

glukóza
monosacharid – aldohexóza
chemický vzorec: C6H12O6
zkratka:
Glc
-Dglukopyranóza

=
D-glukóza

D-glukóza

-Dglukopyranóza

glukóza
je nejdůležitější látkou metabolizmu
sacharidů, tvoří se trávením a konverzí
glykogenu v játrech
za fyziologických podmínek získává organizmus
glukózu:
potravou - přísun z vnějšího prostředí
glykogenolýzou – metabolická dráha konverze glykogenu
na glukózu (zásoby glykogenu jsou uložené hlavně
v játrech a příčně pruhovaných svalech)

glukoneogenezí - metabolická dráha syntézy glukózy
z necukernatých prekurzorů (pyruvát, laktát, aminokyseliny, meziprodukty citrátového cyklu, glycerol)

regulační systém metabolizmu glukózy
organizmus se snaží zachovat koncentraci glukózy
v krvi v úzkém rozmezí: 3,3 - 6,1 mmol/l
regulační systém:
nervová složka
hormonální složka
- inzulin
- glukagon
- adrenalin a noradrenalin
- glukokortikoidy
- růstový hormon
- hormony štítné žlázy...

poruchy v metabolizmu glukózy
glykemie, glukozemie, glukoplazmie - hladina glukózy v krvi
glykosurie - přítomnost glukózy v moči
porucha v metabolizmu se může projevit ve smyslu:
trvalého zvýšení  hladiny glukózy
- hyperglykemie
za hyperglykemii považujeme stavy, kdy koncentrace glukózy
na lačno je vyšší než horní hranice referenčního intervalu

nebo snížení  hladiny glukózy
- hypoglykemie
hypoglykemie je vážný stav, kdy koncentrace glukózy v krvi
klesne pod dolní hranici referenčního intervalu,
tj. pod 3,3 mmol/l, a je doprovázena klinickými projevy

klinicko-biochemická diagnostika
stanovení glukózy je základní biochemickou
informací o sacharidovém metabolizmu

účelem testu je:
screening diabetes mellitus

monitorování lékové nebo dietní terapie
u pacientů s DM
diagnostika při hypoglykemiích
monitorování energetického stavu a výživy hlavně
u intenzivně léčených pacientů

klinicko-biochemická diagnostika
stanovuje se:
náhodně naměřená glykemie
glykemie na lačno (FPG - Fasting Plasma Glucose)
glykemie po jídle
(postprandiální glykemie, pozátěžová glykemie )

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
glykemický profil

stanovení glukózy na lačno
nástroj laboratorní diagnózy DM
vyhledávání osob se zvýšeným rizikem DM

příprava pacienta:
odběr provádíme minimálně
po 8hodinovém lačnění,
vyloučit fyzickou námahu a kouření

odběr:
doporučuje se odebrat venózní krev
do odběrové nádobky
s antiglykolytickou směsí,
stanovit glukózu
ve stabilizované plazmě

předanalytické podmínky
pro stanovení glukózy na lačno

stabilizace antiglykolytickou směsí:
antiglykolytická směs obsahuje NaF (2,5 mg NaF/ml krve)
a protisrážlivé činidlo (např. heparin, EDTA...)
NaF stabilizuje glukózu ve vzorku blokací glykolýzy

!!! pokud není použité stabilizační činidlo, klesá bez oddělení
krevních elementů koncentrace glukózy
při pokojové teplotě za 1 hod. o 5 až 7 %

transport do laboratoře:

okamžitý

oddělení séra/plazmy od krevních elementů:
sérum/plazmu je potřeba oddělit od krevních elementů
do 60 minut od odběru

metody stanovení glukózy
neenzymové metody
oxidačně–redukční a kondenzační metody
jsou nejstarší metody stanovení
v současnosti se v klinické biochemii nepoužívají

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu (GOD) a peroxidázu (POD)
využívající enzym hexokinázu (HK)
využívající enzym glukózodehydrogenázu (GDH)

elektrochemické metody
hmotnostní spektrometrie
(ID-GC/MS – doporučená referenční metoda)

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu a peroxidázu

princip stanovení:
glukóza + O2

+ H 2O

GOD

glukonolakton

+ H 2 O2

na detekci vzniklého H2O2 se využívá reakce
katalyzované enzymem peroxidázou

H2O2 + 4-AAP+ fenol
redukovaný chromogen

POD

chinonimin

+ H 2O

oxidovaný chromogen

Trinderova reakce

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

činidla:
Enzymy lahvička 

pufer – chromogen lahvička 

peroxidáza

fosforečnanový tlumivý roztok

glukózooxidáza

3-methyl-fenol

4-aminoantipyrin

příprava pracovního roztoku
•

obsah lahvičky  se rozpustí v 6 ml destilované vody

•

vleje se do lahvičky  a promíchá se

stabilita: při +2-8 °C ve tmě 1 měsíc,

při +15-25 °C ve tmě 10 dní

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

postup analýzy:
vlnová délka (480-540 nm), s maximem při 498 nm
kyveta 1 cm
teplota +15-25 °C, nebo 37 ± 0,1 °C
ve třech zkumavkách se smíchá pracovní roztok v poměru 100 + 1
se sérem, plazmou (vzorkem), standardním roztokem glukózy (standard)
a s destilovanou vodou (reagenční blenk)
 vzorek (A1)

vzorek (sérum, plazma)

 standard (A2)

 reag. blenk

0,02 ml

standard

0,02 ml

dest. H2O

0,02 ml

pracovní roztok

2,0 ml

2,0 ml

2,0 ml

inkubace: (30 min při +15 až +25 °C nebo 15 min při 37 °C),
změří se absorbance vzorku (A1)
a standardu (A2) proti reagenčnímu blenku

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

metoda je aplikovatelná:
na manuální stanovení glukózy bez deproteinace
na manuální stanovení glukózy s deproteinací
na biochemické analyzátory

linearita: do 22,0 mmol/l
hodnoty přesahující horní hranici linearity
se ředí manuálně destilovanou vodou
a analýza se opakuje (výsledek x ředění)

interference:
hemolýza
chylozita
přítomnost redukujících látek
– kyselina askorbová, kyselina močová, bilirubin a jiné...

enzymové metody
využívající enzym hexokinázu

princip stanovení:
glukóza + ATP

hexokináza + Mg2+

glukóza-6-fosfát + ADP

glukóza-6-fosfát + NAD+

G-6-PDH

glukonát-6-fosfát + NADPH + H+

ATP: adenozintrifosfát
ADP: adenozindifosfát
G-6-PDH: glukóza-6-fosfátdehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

enzymové metody
využívající enzym glukózodehydrogenázu

princip stanovení:
glukóza + NAD+
GDH

glukonolakton

+ NADH + H+

GDH: glukózodehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

elektrochemické metody
princip stanovení je založen na:
enzymové reakci a ampérometrické detekci

produktů enzymové reakce

enzym glukózooxidáza je imobilizován na biosenzoru

vzniklý peroxid vodíku se detekuje a pomocí

převodníku převádí na elektrický signál

elektrochemické metody
vyšetření se provádí
na glukózových analyzátorech

výhodou je rychlost stanovení

na stanovení se může přímo použít
stabilizovaná kapilární krev,
bez předchozí úpravy vzorku
neinterferuje hemolýza

elektrochemické metody

glukóza + O2

glukózooxidáza

kyselina glukonová

+ H2O2
H2
elektrony

registrační
elektroda

O2

glukometry
sebekontrola diabetu

(SMBG – selfmonitoring of blood glucose)

domácí monitorování glykemie
různé typy glukometrů
odebírá se kapilární krev

pracují na principu přímého
elektrochemického stanovení
doporučuje se kontrola glukometrů
a spolupráce s OKB

algoritmus pro laboratorní screening DM
u dospělých
vyloučení
glukóza
postprandiální
(náhodný odběr)
+klinické příznaky
DM

< 5,6

< 11,1

≥ 11,1

doporučení ČDS a ČSKB
hodnoty glukózy jsou v mmol/l

glukóza
v plazmě
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

opakovat odběr
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

Diabetes mellitus
(DM)

< 7,0

≥ 5,6
a < 7,0

< 5,6l, ale
v anam. riziko
DM nebo IGT

oGTT-WHO
(zátěž 75g glukózy,
odběr žilní krve
na lačno a 2h
po zátěži)

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 11,1
2h po zátěži

Diabetes mellitus

hraniční
glukóza na lačno
(IFG)
glukóza v plazmě
žilní krve < 7,8
2h po zátěži

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 7,8
<11,1 2h po zátěži

porušená
glukózová tolerance
(IGT)

orální glukózo-toleranční test (oGTT)

je podpůrný diagnostický funkční test
pro diagnostiku DM
a porušené glukózové tolerance
(IGT – Impaired Glucose Tolerance)

sleduje se glykemie na lačno
a po zátěži glukózou,
opakovaně v určitých intervalech
za přesně definovaných podmínek

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
příprava pacienta:
3 dny před testem pacient konzumuje běžnou stravu
s dostatečným obsahem sacharidů (nejméně 150 g za den)
a normální fyzickou zátěží
test se provádí ráno po 10-14hodinovém lačnění
a fyzickém klidu bez alkoholu, kofeinu a nikotinu
doporučuje se vynechat léky, pokud je to
z klinického hlediska možné

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
provedení testu:
odebírá se venózní krev na lačno
a čeká se na výsledek glykemie

pokud je glykemie v rozmezí 5,6-6,9 mmol/l ,
oGTT se provede
pacient vypije během 5-10 minut 75 g glukózy
v 250-300 ml roztoku
další odběry venózní krve se provádějí
za 60 a 120 minut po vypití roztoku glukózy

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
diagnostická kritéria:
pro hodnotu glukózy v plazmě venózní krve 120 minut
po zátěži 75 g glukózy
vyloučení DM

< 7,8 mmol/l

porušená
glukózová tolerance (IGT )

≥ 7,8 mmol/l
až < 11,1 mmol/l

Diabetes mellitus

≥11,1 mmol/l

glykemie v mmol/l

12
11,1

11,1

10
8

7,8
6,7

6

6,7
5,6

4
2
0
0 minut

60 minut

čas

120 minut

180 minut

glykemický profil
několik stanovení glukózy v průběhu dne,

popřípadě i v noci odráží aktuální kompenzaci DM

glykemický profil zkrácený:
4 nebo 3 odběry
indikace: při DM I. a II. typu, při operacích diabetiků
nebo po porodu při DM II. typu,
pro posouzení kompenzace apod.

glykemický profil
glykemický profil úplný:
9 odběrů
indikace: je indikován při DM I. typu, při intenzivní terapii
nebo při inzulinové terapii, u gravidních diabetiček,
při těžké dekompenzaci DM všech typů,
po transplantaci pankreatu…

počet a přesné časování odběrů se v jednotlivých
diabetologických centrech liší
a závisí i na denním režimu nemocného

analýza glukózy se provádí v laboratořích, pokud pacient
je hospitalizovaný, nebo v domácích podmínkách
formou selfmonitoringu

glykemický profil
odběr materiálu:
nejčastěji se odebírá kapilární krev (z prstu) do odběrových nádob
určených na kapilární odběry s obsahem antiglykolytické směsi
(např. Sarstedt Multivette)

prevedení testu:
glykemický profil úplný
9 odběrů
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

1 hod. po snídani

3. vzorek

30 min. před obědem

4. vzorek

1 hod. po obědě

5. vzorek

30 min. před večeří

6. vzorek

1 hod. po večeři

7. vzorek

v 22.00 hod.

8. vzorek

v 01.00 hod.

9. vzorek

v 04.00 hod.

glykemický profil zkrácený
4 odběry
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

30 min. před obědem

3. vzorek

30 min. před večeří

4. vzorek

v 22.00 hod.

glykosurie
koncentrace glukózy v moči závisí
na hladině glukózy v krvi a na funkci ledvin
účel testu:
screening poruch glukózové tolerance
detekce poruch tubulární resorpce při poškození ledvin

stanovení glukózy v moči:
semikvantitativně – diagnostický proužek
kvantitativně
Poznámka:
semikvantitativní a kvantitativní stanovení glukózy v moči není
zařazené mezi základní nástroje na určení diagnózy diabetu ani
na sledovaní jeho stavu, protože individuální rozdíly ledvinného
prahu pro glukózu jsou dost velké a práh kolísá u každého jedince

• Játra přeměňují glukózu na ………. (8)
(též zásobní forma glukózy)

G

L

Y

K

O

S

U

R

I

E

L

L

2

O

2

H

J

I

C



N

6

B

Z

H

U

U

12

Ň

L

O

K

Í

6

Y

N

a

F

• Hormon, který snižuje glykémii se nazývá U G Y L P U Á
…………………………….. (7).
K
K
O
K
R
N
T
• Krev pro stanovení glukózy se odebírá
A
T
T
G
O
E
R
do nádobek s antiglykolytickým činidlem,
G
O
G
E
F
G
A
kterým je ……. (3 - vzorec).
•Jak se nazývá diagnostický funkční test
O
N
E
Z
I
E
E
pro diagnostiku diabetu mellitu a porušené N M M O L / L
glukózové tolerance? (4 – zkratka).
• Hladina glukózy v moči se nazývá …………………………..(10).
• Hormon, který zvyšuje glykémii se nazývá ……………………… (8).
• Test, kdy se stanovují glykémie několikrát během dne a popř.
i v noci se nazývá glykemický …………….. (6).
• Jednotky, v kterých se uvádí výsledky glykémie …………………… (6).
• Sumární vzorec glukózy ………………(6)
• Reakcí glukózy a GOD vzniká sloučenina ………………. ( 4 vzorec).
• Které buňky pankreatu produkují inzulín? (6)
• Zásoby glykogenu, jsou uloženy v orgánu, který se nazývá
………………………………. (5).


Slide 10

Zdravotnická škola, Hradec Králové
Stredná zdravotnícka škola, Bánská Bystrica

glukóza
klinicko-biochemická diagnostika
a metody stanovení

glukóza
monosacharid – aldohexóza
chemický vzorec: C6H12O6
zkratka:
Glc
-Dglukopyranóza

=
D-glukóza

D-glukóza

-Dglukopyranóza

glukóza
je nejdůležitější látkou metabolizmu
sacharidů, tvoří se trávením a konverzí
glykogenu v játrech
za fyziologických podmínek získává organizmus
glukózu:
potravou - přísun z vnějšího prostředí
glykogenolýzou – metabolická dráha konverze glykogenu
na glukózu (zásoby glykogenu jsou uložené hlavně
v játrech a příčně pruhovaných svalech)

glukoneogenezí - metabolická dráha syntézy glukózy
z necukernatých prekurzorů (pyruvát, laktát, aminokyseliny, meziprodukty citrátového cyklu, glycerol)

regulační systém metabolizmu glukózy
organizmus se snaží zachovat koncentraci glukózy
v krvi v úzkém rozmezí: 3,3 - 6,1 mmol/l
regulační systém:
nervová složka
hormonální složka
- inzulin
- glukagon
- adrenalin a noradrenalin
- glukokortikoidy
- růstový hormon
- hormony štítné žlázy...

poruchy v metabolizmu glukózy
glykemie, glukozemie, glukoplazmie - hladina glukózy v krvi
glykosurie - přítomnost glukózy v moči
porucha v metabolizmu se může projevit ve smyslu:
trvalého zvýšení  hladiny glukózy
- hyperglykemie
za hyperglykemii považujeme stavy, kdy koncentrace glukózy
na lačno je vyšší než horní hranice referenčního intervalu

nebo snížení  hladiny glukózy
- hypoglykemie
hypoglykemie je vážný stav, kdy koncentrace glukózy v krvi
klesne pod dolní hranici referenčního intervalu,
tj. pod 3,3 mmol/l, a je doprovázena klinickými projevy

klinicko-biochemická diagnostika
stanovení glukózy je základní biochemickou
informací o sacharidovém metabolizmu

účelem testu je:
screening diabetes mellitus

monitorování lékové nebo dietní terapie
u pacientů s DM
diagnostika při hypoglykemiích
monitorování energetického stavu a výživy hlavně
u intenzivně léčených pacientů

klinicko-biochemická diagnostika
stanovuje se:
náhodně naměřená glykemie
glykemie na lačno (FPG - Fasting Plasma Glucose)
glykemie po jídle
(postprandiální glykemie, pozátěžová glykemie )

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
glykemický profil

stanovení glukózy na lačno
nástroj laboratorní diagnózy DM
vyhledávání osob se zvýšeným rizikem DM

příprava pacienta:
odběr provádíme minimálně
po 8hodinovém lačnění,
vyloučit fyzickou námahu a kouření

odběr:
doporučuje se odebrat venózní krev
do odběrové nádobky
s antiglykolytickou směsí,
stanovit glukózu
ve stabilizované plazmě

předanalytické podmínky
pro stanovení glukózy na lačno

stabilizace antiglykolytickou směsí:
antiglykolytická směs obsahuje NaF (2,5 mg NaF/ml krve)
a protisrážlivé činidlo (např. heparin, EDTA...)
NaF stabilizuje glukózu ve vzorku blokací glykolýzy

!!! pokud není použité stabilizační činidlo, klesá bez oddělení
krevních elementů koncentrace glukózy
při pokojové teplotě za 1 hod. o 5 až 7 %

transport do laboratoře:

okamžitý

oddělení séra/plazmy od krevních elementů:
sérum/plazmu je potřeba oddělit od krevních elementů
do 60 minut od odběru

metody stanovení glukózy
neenzymové metody
oxidačně–redukční a kondenzační metody
jsou nejstarší metody stanovení
v současnosti se v klinické biochemii nepoužívají

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu (GOD) a peroxidázu (POD)
využívající enzym hexokinázu (HK)
využívající enzym glukózodehydrogenázu (GDH)

elektrochemické metody
hmotnostní spektrometrie
(ID-GC/MS – doporučená referenční metoda)

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu a peroxidázu

princip stanovení:
glukóza + O2

+ H 2O

GOD

glukonolakton

+ H 2 O2

na detekci vzniklého H2O2 se využívá reakce
katalyzované enzymem peroxidázou

H2O2 + 4-AAP+ fenol
redukovaný chromogen

POD

chinonimin

+ H 2O

oxidovaný chromogen

Trinderova reakce

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

činidla:
Enzymy lahvička 

pufer – chromogen lahvička 

peroxidáza

fosforečnanový tlumivý roztok

glukózooxidáza

3-methyl-fenol

4-aminoantipyrin

příprava pracovního roztoku
•

obsah lahvičky  se rozpustí v 6 ml destilované vody

•

vleje se do lahvičky  a promíchá se

stabilita: při +2-8 °C ve tmě 1 měsíc,

při +15-25 °C ve tmě 10 dní

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

postup analýzy:
vlnová délka (480-540 nm), s maximem při 498 nm
kyveta 1 cm
teplota +15-25 °C, nebo 37 ± 0,1 °C
ve třech zkumavkách se smíchá pracovní roztok v poměru 100 + 1
se sérem, plazmou (vzorkem), standardním roztokem glukózy (standard)
a s destilovanou vodou (reagenční blenk)
 vzorek (A1)

vzorek (sérum, plazma)

 standard (A2)

 reag. blenk

0,02 ml

standard

0,02 ml

dest. H2O

0,02 ml

pracovní roztok

2,0 ml

2,0 ml

2,0 ml

inkubace: (30 min při +15 až +25 °C nebo 15 min při 37 °C),
změří se absorbance vzorku (A1)
a standardu (A2) proti reagenčnímu blenku

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

metoda je aplikovatelná:
na manuální stanovení glukózy bez deproteinace
na manuální stanovení glukózy s deproteinací
na biochemické analyzátory

linearita: do 22,0 mmol/l
hodnoty přesahující horní hranici linearity
se ředí manuálně destilovanou vodou
a analýza se opakuje (výsledek x ředění)

interference:
hemolýza
chylozita
přítomnost redukujících látek
– kyselina askorbová, kyselina močová, bilirubin a jiné...

enzymové metody
využívající enzym hexokinázu

princip stanovení:
glukóza + ATP

hexokináza + Mg2+

glukóza-6-fosfát + ADP

glukóza-6-fosfát + NAD+

G-6-PDH

glukonát-6-fosfát + NADPH + H+

ATP: adenozintrifosfát
ADP: adenozindifosfát
G-6-PDH: glukóza-6-fosfátdehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

enzymové metody
využívající enzym glukózodehydrogenázu

princip stanovení:
glukóza + NAD+
GDH

glukonolakton

+ NADH + H+

GDH: glukózodehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

elektrochemické metody
princip stanovení je založen na:
enzymové reakci a ampérometrické detekci

produktů enzymové reakce

enzym glukózooxidáza je imobilizován na biosenzoru

vzniklý peroxid vodíku se detekuje a pomocí

převodníku převádí na elektrický signál

elektrochemické metody
vyšetření se provádí
na glukózových analyzátorech

výhodou je rychlost stanovení

na stanovení se může přímo použít
stabilizovaná kapilární krev,
bez předchozí úpravy vzorku
neinterferuje hemolýza

elektrochemické metody

glukóza + O2

glukózooxidáza

kyselina glukonová

+ H2O2
H2
elektrony

registrační
elektroda

O2

glukometry
sebekontrola diabetu

(SMBG – selfmonitoring of blood glucose)

domácí monitorování glykemie
různé typy glukometrů
odebírá se kapilární krev

pracují na principu přímého
elektrochemického stanovení
doporučuje se kontrola glukometrů
a spolupráce s OKB

algoritmus pro laboratorní screening DM
u dospělých
vyloučení
glukóza
postprandiální
(náhodný odběr)
+klinické příznaky
DM

< 5,6

< 11,1

≥ 11,1

doporučení ČDS a ČSKB
hodnoty glukózy jsou v mmol/l

glukóza
v plazmě
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

opakovat odběr
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

Diabetes mellitus
(DM)

< 7,0

≥ 5,6
a < 7,0

< 5,6l, ale
v anam. riziko
DM nebo IGT

oGTT-WHO
(zátěž 75g glukózy,
odběr žilní krve
na lačno a 2h
po zátěži)

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 11,1
2h po zátěži

Diabetes mellitus

hraniční
glukóza na lačno
(IFG)
glukóza v plazmě
žilní krve < 7,8
2h po zátěži

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 7,8
<11,1 2h po zátěži

porušená
glukózová tolerance
(IGT)

orální glukózo-toleranční test (oGTT)

je podpůrný diagnostický funkční test
pro diagnostiku DM
a porušené glukózové tolerance
(IGT – Impaired Glucose Tolerance)

sleduje se glykemie na lačno
a po zátěži glukózou,
opakovaně v určitých intervalech
za přesně definovaných podmínek

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
příprava pacienta:
3 dny před testem pacient konzumuje běžnou stravu
s dostatečným obsahem sacharidů (nejméně 150 g za den)
a normální fyzickou zátěží
test se provádí ráno po 10-14hodinovém lačnění
a fyzickém klidu bez alkoholu, kofeinu a nikotinu
doporučuje se vynechat léky, pokud je to
z klinického hlediska možné

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
provedení testu:
odebírá se venózní krev na lačno
a čeká se na výsledek glykemie

pokud je glykemie v rozmezí 5,6-6,9 mmol/l ,
oGTT se provede
pacient vypije během 5-10 minut 75 g glukózy
v 250-300 ml roztoku
další odběry venózní krve se provádějí
za 60 a 120 minut po vypití roztoku glukózy

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
diagnostická kritéria:
pro hodnotu glukózy v plazmě venózní krve 120 minut
po zátěži 75 g glukózy
vyloučení DM

< 7,8 mmol/l

porušená
glukózová tolerance (IGT )

≥ 7,8 mmol/l
až < 11,1 mmol/l

Diabetes mellitus

≥11,1 mmol/l

glykemie v mmol/l

12
11,1

11,1

10
8

7,8
6,7

6

6,7
5,6

4
2
0
0 minut

60 minut

čas

120 minut

180 minut

glykemický profil
několik stanovení glukózy v průběhu dne,

popřípadě i v noci odráží aktuální kompenzaci DM

glykemický profil zkrácený:
4 nebo 3 odběry
indikace: při DM I. a II. typu, při operacích diabetiků
nebo po porodu při DM II. typu,
pro posouzení kompenzace apod.

glykemický profil
glykemický profil úplný:
9 odběrů
indikace: je indikován při DM I. typu, při intenzivní terapii
nebo při inzulinové terapii, u gravidních diabetiček,
při těžké dekompenzaci DM všech typů,
po transplantaci pankreatu…

počet a přesné časování odběrů se v jednotlivých
diabetologických centrech liší
a závisí i na denním režimu nemocného

analýza glukózy se provádí v laboratořích, pokud pacient
je hospitalizovaný, nebo v domácích podmínkách
formou selfmonitoringu

glykemický profil
odběr materiálu:
nejčastěji se odebírá kapilární krev (z prstu) do odběrových nádob
určených na kapilární odběry s obsahem antiglykolytické směsi
(např. Sarstedt Multivette)

prevedení testu:
glykemický profil úplný
9 odběrů
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

1 hod. po snídani

3. vzorek

30 min. před obědem

4. vzorek

1 hod. po obědě

5. vzorek

30 min. před večeří

6. vzorek

1 hod. po večeři

7. vzorek

v 22.00 hod.

8. vzorek

v 01.00 hod.

9. vzorek

v 04.00 hod.

glykemický profil zkrácený
4 odběry
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

30 min. před obědem

3. vzorek

30 min. před večeří

4. vzorek

v 22.00 hod.

glykosurie
koncentrace glukózy v moči závisí
na hladině glukózy v krvi a na funkci ledvin
účel testu:
screening poruch glukózové tolerance
detekce poruch tubulární resorpce při poškození ledvin

stanovení glukózy v moči:
semikvantitativně – diagnostický proužek
kvantitativně
Poznámka:
semikvantitativní a kvantitativní stanovení glukózy v moči není
zařazené mezi základní nástroje na určení diagnózy diabetu ani
na sledovaní jeho stavu, protože individuální rozdíly ledvinného
prahu pro glukózu jsou dost velké a práh kolísá u každého jedince

• Játra přeměňují glukózu na ………. (8)
(též zásobní forma glukózy)

G

L

Y

K

O

S

U

R

I

E

L

L

2

O

2

H

J

I

C



N

6

B

Z

H

U

U

12

Ň

L

O

K

Í

6

Y

N

a

F

• Hormon, který snižuje glykémii se nazývá U G Y L P U Á
…………………………….. (7).
K
K
O
K
R
N
T
• Krev pro stanovení glukózy se odebírá
A
T
T
G
O
E
R
do nádobek s antiglykolytickým činidlem,
G
O
G
E
F
G
A
kterým je ……. (3 - vzorec).
•Jak se nazývá diagnostický funkční test
O
N
E
Z
I
E
E
pro diagnostiku diabetu mellitu a porušené N M M O L / L
glukózové tolerance? (4 – zkratka).
• Hladina glukózy v moči se nazývá …………………………..(10).
• Hormon, který zvyšuje glykémii se nazývá ……………………… (8).
• Test, kdy se stanovují glykémie několikrát během dne a popř.
i v noci se nazývá glykemický …………….. (6).
• Jednotky, v kterých se uvádí výsledky glykémie …………………… (6).
• Sumární vzorec glukózy ………………(6)
• Reakcí glukózy a GOD vzniká sloučenina ………………. ( 4 vzorec).
• Které buňky pankreatu produkují inzulín? (6)
• Zásoby glykogenu, jsou uloženy v orgánu, který se nazývá
………………………………. (5).


Slide 11

Zdravotnická škola, Hradec Králové
Stredná zdravotnícka škola, Bánská Bystrica

glukóza
klinicko-biochemická diagnostika
a metody stanovení

glukóza
monosacharid – aldohexóza
chemický vzorec: C6H12O6
zkratka:
Glc
-Dglukopyranóza

=
D-glukóza

D-glukóza

-Dglukopyranóza

glukóza
je nejdůležitější látkou metabolizmu
sacharidů, tvoří se trávením a konverzí
glykogenu v játrech
za fyziologických podmínek získává organizmus
glukózu:
potravou - přísun z vnějšího prostředí
glykogenolýzou – metabolická dráha konverze glykogenu
na glukózu (zásoby glykogenu jsou uložené hlavně
v játrech a příčně pruhovaných svalech)

glukoneogenezí - metabolická dráha syntézy glukózy
z necukernatých prekurzorů (pyruvát, laktát, aminokyseliny, meziprodukty citrátového cyklu, glycerol)

regulační systém metabolizmu glukózy
organizmus se snaží zachovat koncentraci glukózy
v krvi v úzkém rozmezí: 3,3 - 6,1 mmol/l
regulační systém:
nervová složka
hormonální složka
- inzulin
- glukagon
- adrenalin a noradrenalin
- glukokortikoidy
- růstový hormon
- hormony štítné žlázy...

poruchy v metabolizmu glukózy
glykemie, glukozemie, glukoplazmie - hladina glukózy v krvi
glykosurie - přítomnost glukózy v moči
porucha v metabolizmu se může projevit ve smyslu:
trvalého zvýšení  hladiny glukózy
- hyperglykemie
za hyperglykemii považujeme stavy, kdy koncentrace glukózy
na lačno je vyšší než horní hranice referenčního intervalu

nebo snížení  hladiny glukózy
- hypoglykemie
hypoglykemie je vážný stav, kdy koncentrace glukózy v krvi
klesne pod dolní hranici referenčního intervalu,
tj. pod 3,3 mmol/l, a je doprovázena klinickými projevy

klinicko-biochemická diagnostika
stanovení glukózy je základní biochemickou
informací o sacharidovém metabolizmu

účelem testu je:
screening diabetes mellitus

monitorování lékové nebo dietní terapie
u pacientů s DM
diagnostika při hypoglykemiích
monitorování energetického stavu a výživy hlavně
u intenzivně léčených pacientů

klinicko-biochemická diagnostika
stanovuje se:
náhodně naměřená glykemie
glykemie na lačno (FPG - Fasting Plasma Glucose)
glykemie po jídle
(postprandiální glykemie, pozátěžová glykemie )

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
glykemický profil

stanovení glukózy na lačno
nástroj laboratorní diagnózy DM
vyhledávání osob se zvýšeným rizikem DM

příprava pacienta:
odběr provádíme minimálně
po 8hodinovém lačnění,
vyloučit fyzickou námahu a kouření

odběr:
doporučuje se odebrat venózní krev
do odběrové nádobky
s antiglykolytickou směsí,
stanovit glukózu
ve stabilizované plazmě

předanalytické podmínky
pro stanovení glukózy na lačno

stabilizace antiglykolytickou směsí:
antiglykolytická směs obsahuje NaF (2,5 mg NaF/ml krve)
a protisrážlivé činidlo (např. heparin, EDTA...)
NaF stabilizuje glukózu ve vzorku blokací glykolýzy

!!! pokud není použité stabilizační činidlo, klesá bez oddělení
krevních elementů koncentrace glukózy
při pokojové teplotě za 1 hod. o 5 až 7 %

transport do laboratoře:

okamžitý

oddělení séra/plazmy od krevních elementů:
sérum/plazmu je potřeba oddělit od krevních elementů
do 60 minut od odběru

metody stanovení glukózy
neenzymové metody
oxidačně–redukční a kondenzační metody
jsou nejstarší metody stanovení
v současnosti se v klinické biochemii nepoužívají

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu (GOD) a peroxidázu (POD)
využívající enzym hexokinázu (HK)
využívající enzym glukózodehydrogenázu (GDH)

elektrochemické metody
hmotnostní spektrometrie
(ID-GC/MS – doporučená referenční metoda)

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu a peroxidázu

princip stanovení:
glukóza + O2

+ H 2O

GOD

glukonolakton

+ H 2 O2

na detekci vzniklého H2O2 se využívá reakce
katalyzované enzymem peroxidázou

H2O2 + 4-AAP+ fenol
redukovaný chromogen

POD

chinonimin

+ H 2O

oxidovaný chromogen

Trinderova reakce

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

činidla:
Enzymy lahvička 

pufer – chromogen lahvička 

peroxidáza

fosforečnanový tlumivý roztok

glukózooxidáza

3-methyl-fenol

4-aminoantipyrin

příprava pracovního roztoku
•

obsah lahvičky  se rozpustí v 6 ml destilované vody

•

vleje se do lahvičky  a promíchá se

stabilita: při +2-8 °C ve tmě 1 měsíc,

při +15-25 °C ve tmě 10 dní

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

postup analýzy:
vlnová délka (480-540 nm), s maximem při 498 nm
kyveta 1 cm
teplota +15-25 °C, nebo 37 ± 0,1 °C
ve třech zkumavkách se smíchá pracovní roztok v poměru 100 + 1
se sérem, plazmou (vzorkem), standardním roztokem glukózy (standard)
a s destilovanou vodou (reagenční blenk)
 vzorek (A1)

vzorek (sérum, plazma)

 standard (A2)

 reag. blenk

0,02 ml

standard

0,02 ml

dest. H2O

0,02 ml

pracovní roztok

2,0 ml

2,0 ml

2,0 ml

inkubace: (30 min při +15 až +25 °C nebo 15 min při 37 °C),
změří se absorbance vzorku (A1)
a standardu (A2) proti reagenčnímu blenku

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

metoda je aplikovatelná:
na manuální stanovení glukózy bez deproteinace
na manuální stanovení glukózy s deproteinací
na biochemické analyzátory

linearita: do 22,0 mmol/l
hodnoty přesahující horní hranici linearity
se ředí manuálně destilovanou vodou
a analýza se opakuje (výsledek x ředění)

interference:
hemolýza
chylozita
přítomnost redukujících látek
– kyselina askorbová, kyselina močová, bilirubin a jiné...

enzymové metody
využívající enzym hexokinázu

princip stanovení:
glukóza + ATP

hexokináza + Mg2+

glukóza-6-fosfát + ADP

glukóza-6-fosfát + NAD+

G-6-PDH

glukonát-6-fosfát + NADPH + H+

ATP: adenozintrifosfát
ADP: adenozindifosfát
G-6-PDH: glukóza-6-fosfátdehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

enzymové metody
využívající enzym glukózodehydrogenázu

princip stanovení:
glukóza + NAD+
GDH

glukonolakton

+ NADH + H+

GDH: glukózodehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

elektrochemické metody
princip stanovení je založen na:
enzymové reakci a ampérometrické detekci

produktů enzymové reakce

enzym glukózooxidáza je imobilizován na biosenzoru

vzniklý peroxid vodíku se detekuje a pomocí

převodníku převádí na elektrický signál

elektrochemické metody
vyšetření se provádí
na glukózových analyzátorech

výhodou je rychlost stanovení

na stanovení se může přímo použít
stabilizovaná kapilární krev,
bez předchozí úpravy vzorku
neinterferuje hemolýza

elektrochemické metody

glukóza + O2

glukózooxidáza

kyselina glukonová

+ H2O2
H2
elektrony

registrační
elektroda

O2

glukometry
sebekontrola diabetu

(SMBG – selfmonitoring of blood glucose)

domácí monitorování glykemie
různé typy glukometrů
odebírá se kapilární krev

pracují na principu přímého
elektrochemického stanovení
doporučuje se kontrola glukometrů
a spolupráce s OKB

algoritmus pro laboratorní screening DM
u dospělých
vyloučení
glukóza
postprandiální
(náhodný odběr)
+klinické příznaky
DM

< 5,6

< 11,1

≥ 11,1

doporučení ČDS a ČSKB
hodnoty glukózy jsou v mmol/l

glukóza
v plazmě
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

opakovat odběr
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

Diabetes mellitus
(DM)

< 7,0

≥ 5,6
a < 7,0

< 5,6l, ale
v anam. riziko
DM nebo IGT

oGTT-WHO
(zátěž 75g glukózy,
odběr žilní krve
na lačno a 2h
po zátěži)

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 11,1
2h po zátěži

Diabetes mellitus

hraniční
glukóza na lačno
(IFG)
glukóza v plazmě
žilní krve < 7,8
2h po zátěži

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 7,8
<11,1 2h po zátěži

porušená
glukózová tolerance
(IGT)

orální glukózo-toleranční test (oGTT)

je podpůrný diagnostický funkční test
pro diagnostiku DM
a porušené glukózové tolerance
(IGT – Impaired Glucose Tolerance)

sleduje se glykemie na lačno
a po zátěži glukózou,
opakovaně v určitých intervalech
za přesně definovaných podmínek

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
příprava pacienta:
3 dny před testem pacient konzumuje běžnou stravu
s dostatečným obsahem sacharidů (nejméně 150 g za den)
a normální fyzickou zátěží
test se provádí ráno po 10-14hodinovém lačnění
a fyzickém klidu bez alkoholu, kofeinu a nikotinu
doporučuje se vynechat léky, pokud je to
z klinického hlediska možné

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
provedení testu:
odebírá se venózní krev na lačno
a čeká se na výsledek glykemie

pokud je glykemie v rozmezí 5,6-6,9 mmol/l ,
oGTT se provede
pacient vypije během 5-10 minut 75 g glukózy
v 250-300 ml roztoku
další odběry venózní krve se provádějí
za 60 a 120 minut po vypití roztoku glukózy

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
diagnostická kritéria:
pro hodnotu glukózy v plazmě venózní krve 120 minut
po zátěži 75 g glukózy
vyloučení DM

< 7,8 mmol/l

porušená
glukózová tolerance (IGT )

≥ 7,8 mmol/l
až < 11,1 mmol/l

Diabetes mellitus

≥11,1 mmol/l

glykemie v mmol/l

12
11,1

11,1

10
8

7,8
6,7

6

6,7
5,6

4
2
0
0 minut

60 minut

čas

120 minut

180 minut

glykemický profil
několik stanovení glukózy v průběhu dne,

popřípadě i v noci odráží aktuální kompenzaci DM

glykemický profil zkrácený:
4 nebo 3 odběry
indikace: při DM I. a II. typu, při operacích diabetiků
nebo po porodu při DM II. typu,
pro posouzení kompenzace apod.

glykemický profil
glykemický profil úplný:
9 odběrů
indikace: je indikován při DM I. typu, při intenzivní terapii
nebo při inzulinové terapii, u gravidních diabetiček,
při těžké dekompenzaci DM všech typů,
po transplantaci pankreatu…

počet a přesné časování odběrů se v jednotlivých
diabetologických centrech liší
a závisí i na denním režimu nemocného

analýza glukózy se provádí v laboratořích, pokud pacient
je hospitalizovaný, nebo v domácích podmínkách
formou selfmonitoringu

glykemický profil
odběr materiálu:
nejčastěji se odebírá kapilární krev (z prstu) do odběrových nádob
určených na kapilární odběry s obsahem antiglykolytické směsi
(např. Sarstedt Multivette)

prevedení testu:
glykemický profil úplný
9 odběrů
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

1 hod. po snídani

3. vzorek

30 min. před obědem

4. vzorek

1 hod. po obědě

5. vzorek

30 min. před večeří

6. vzorek

1 hod. po večeři

7. vzorek

v 22.00 hod.

8. vzorek

v 01.00 hod.

9. vzorek

v 04.00 hod.

glykemický profil zkrácený
4 odběry
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

30 min. před obědem

3. vzorek

30 min. před večeří

4. vzorek

v 22.00 hod.

glykosurie
koncentrace glukózy v moči závisí
na hladině glukózy v krvi a na funkci ledvin
účel testu:
screening poruch glukózové tolerance
detekce poruch tubulární resorpce při poškození ledvin

stanovení glukózy v moči:
semikvantitativně – diagnostický proužek
kvantitativně
Poznámka:
semikvantitativní a kvantitativní stanovení glukózy v moči není
zařazené mezi základní nástroje na určení diagnózy diabetu ani
na sledovaní jeho stavu, protože individuální rozdíly ledvinného
prahu pro glukózu jsou dost velké a práh kolísá u každého jedince

• Játra přeměňují glukózu na ………. (8)
(též zásobní forma glukózy)

G

L

Y

K

O

S

U

R

I

E

L

L

2

O

2

H

J

I

C



N

6

B

Z

H

U

U

12

Ň

L

O

K

Í

6

Y

N

a

F

• Hormon, který snižuje glykémii se nazývá U G Y L P U Á
…………………………….. (7).
K
K
O
K
R
N
T
• Krev pro stanovení glukózy se odebírá
A
T
T
G
O
E
R
do nádobek s antiglykolytickým činidlem,
G
O
G
E
F
G
A
kterým je ……. (3 - vzorec).
•Jak se nazývá diagnostický funkční test
O
N
E
Z
I
E
E
pro diagnostiku diabetu mellitu a porušené N M M O L / L
glukózové tolerance? (4 – zkratka).
• Hladina glukózy v moči se nazývá …………………………..(10).
• Hormon, který zvyšuje glykémii se nazývá ……………………… (8).
• Test, kdy se stanovují glykémie několikrát během dne a popř.
i v noci se nazývá glykemický …………….. (6).
• Jednotky, v kterých se uvádí výsledky glykémie …………………… (6).
• Sumární vzorec glukózy ………………(6)
• Reakcí glukózy a GOD vzniká sloučenina ………………. ( 4 vzorec).
• Které buňky pankreatu produkují inzulín? (6)
• Zásoby glykogenu, jsou uloženy v orgánu, který se nazývá
………………………………. (5).


Slide 12

Zdravotnická škola, Hradec Králové
Stredná zdravotnícka škola, Bánská Bystrica

glukóza
klinicko-biochemická diagnostika
a metody stanovení

glukóza
monosacharid – aldohexóza
chemický vzorec: C6H12O6
zkratka:
Glc
-Dglukopyranóza

=
D-glukóza

D-glukóza

-Dglukopyranóza

glukóza
je nejdůležitější látkou metabolizmu
sacharidů, tvoří se trávením a konverzí
glykogenu v játrech
za fyziologických podmínek získává organizmus
glukózu:
potravou - přísun z vnějšího prostředí
glykogenolýzou – metabolická dráha konverze glykogenu
na glukózu (zásoby glykogenu jsou uložené hlavně
v játrech a příčně pruhovaných svalech)

glukoneogenezí - metabolická dráha syntézy glukózy
z necukernatých prekurzorů (pyruvát, laktát, aminokyseliny, meziprodukty citrátového cyklu, glycerol)

regulační systém metabolizmu glukózy
organizmus se snaží zachovat koncentraci glukózy
v krvi v úzkém rozmezí: 3,3 - 6,1 mmol/l
regulační systém:
nervová složka
hormonální složka
- inzulin
- glukagon
- adrenalin a noradrenalin
- glukokortikoidy
- růstový hormon
- hormony štítné žlázy...

poruchy v metabolizmu glukózy
glykemie, glukozemie, glukoplazmie - hladina glukózy v krvi
glykosurie - přítomnost glukózy v moči
porucha v metabolizmu se může projevit ve smyslu:
trvalého zvýšení  hladiny glukózy
- hyperglykemie
za hyperglykemii považujeme stavy, kdy koncentrace glukózy
na lačno je vyšší než horní hranice referenčního intervalu

nebo snížení  hladiny glukózy
- hypoglykemie
hypoglykemie je vážný stav, kdy koncentrace glukózy v krvi
klesne pod dolní hranici referenčního intervalu,
tj. pod 3,3 mmol/l, a je doprovázena klinickými projevy

klinicko-biochemická diagnostika
stanovení glukózy je základní biochemickou
informací o sacharidovém metabolizmu

účelem testu je:
screening diabetes mellitus

monitorování lékové nebo dietní terapie
u pacientů s DM
diagnostika při hypoglykemiích
monitorování energetického stavu a výživy hlavně
u intenzivně léčených pacientů

klinicko-biochemická diagnostika
stanovuje se:
náhodně naměřená glykemie
glykemie na lačno (FPG - Fasting Plasma Glucose)
glykemie po jídle
(postprandiální glykemie, pozátěžová glykemie )

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
glykemický profil

stanovení glukózy na lačno
nástroj laboratorní diagnózy DM
vyhledávání osob se zvýšeným rizikem DM

příprava pacienta:
odběr provádíme minimálně
po 8hodinovém lačnění,
vyloučit fyzickou námahu a kouření

odběr:
doporučuje se odebrat venózní krev
do odběrové nádobky
s antiglykolytickou směsí,
stanovit glukózu
ve stabilizované plazmě

předanalytické podmínky
pro stanovení glukózy na lačno

stabilizace antiglykolytickou směsí:
antiglykolytická směs obsahuje NaF (2,5 mg NaF/ml krve)
a protisrážlivé činidlo (např. heparin, EDTA...)
NaF stabilizuje glukózu ve vzorku blokací glykolýzy

!!! pokud není použité stabilizační činidlo, klesá bez oddělení
krevních elementů koncentrace glukózy
při pokojové teplotě za 1 hod. o 5 až 7 %

transport do laboratoře:

okamžitý

oddělení séra/plazmy od krevních elementů:
sérum/plazmu je potřeba oddělit od krevních elementů
do 60 minut od odběru

metody stanovení glukózy
neenzymové metody
oxidačně–redukční a kondenzační metody
jsou nejstarší metody stanovení
v současnosti se v klinické biochemii nepoužívají

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu (GOD) a peroxidázu (POD)
využívající enzym hexokinázu (HK)
využívající enzym glukózodehydrogenázu (GDH)

elektrochemické metody
hmotnostní spektrometrie
(ID-GC/MS – doporučená referenční metoda)

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu a peroxidázu

princip stanovení:
glukóza + O2

+ H 2O

GOD

glukonolakton

+ H 2 O2

na detekci vzniklého H2O2 se využívá reakce
katalyzované enzymem peroxidázou

H2O2 + 4-AAP+ fenol
redukovaný chromogen

POD

chinonimin

+ H 2O

oxidovaný chromogen

Trinderova reakce

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

činidla:
Enzymy lahvička 

pufer – chromogen lahvička 

peroxidáza

fosforečnanový tlumivý roztok

glukózooxidáza

3-methyl-fenol

4-aminoantipyrin

příprava pracovního roztoku
•

obsah lahvičky  se rozpustí v 6 ml destilované vody

•

vleje se do lahvičky  a promíchá se

stabilita: při +2-8 °C ve tmě 1 měsíc,

při +15-25 °C ve tmě 10 dní

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

postup analýzy:
vlnová délka (480-540 nm), s maximem při 498 nm
kyveta 1 cm
teplota +15-25 °C, nebo 37 ± 0,1 °C
ve třech zkumavkách se smíchá pracovní roztok v poměru 100 + 1
se sérem, plazmou (vzorkem), standardním roztokem glukózy (standard)
a s destilovanou vodou (reagenční blenk)
 vzorek (A1)

vzorek (sérum, plazma)

 standard (A2)

 reag. blenk

0,02 ml

standard

0,02 ml

dest. H2O

0,02 ml

pracovní roztok

2,0 ml

2,0 ml

2,0 ml

inkubace: (30 min při +15 až +25 °C nebo 15 min při 37 °C),
změří se absorbance vzorku (A1)
a standardu (A2) proti reagenčnímu blenku

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

metoda je aplikovatelná:
na manuální stanovení glukózy bez deproteinace
na manuální stanovení glukózy s deproteinací
na biochemické analyzátory

linearita: do 22,0 mmol/l
hodnoty přesahující horní hranici linearity
se ředí manuálně destilovanou vodou
a analýza se opakuje (výsledek x ředění)

interference:
hemolýza
chylozita
přítomnost redukujících látek
– kyselina askorbová, kyselina močová, bilirubin a jiné...

enzymové metody
využívající enzym hexokinázu

princip stanovení:
glukóza + ATP

hexokináza + Mg2+

glukóza-6-fosfát + ADP

glukóza-6-fosfát + NAD+

G-6-PDH

glukonát-6-fosfát + NADPH + H+

ATP: adenozintrifosfát
ADP: adenozindifosfát
G-6-PDH: glukóza-6-fosfátdehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

enzymové metody
využívající enzym glukózodehydrogenázu

princip stanovení:
glukóza + NAD+
GDH

glukonolakton

+ NADH + H+

GDH: glukózodehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

elektrochemické metody
princip stanovení je založen na:
enzymové reakci a ampérometrické detekci

produktů enzymové reakce

enzym glukózooxidáza je imobilizován na biosenzoru

vzniklý peroxid vodíku se detekuje a pomocí

převodníku převádí na elektrický signál

elektrochemické metody
vyšetření se provádí
na glukózových analyzátorech

výhodou je rychlost stanovení

na stanovení se může přímo použít
stabilizovaná kapilární krev,
bez předchozí úpravy vzorku
neinterferuje hemolýza

elektrochemické metody

glukóza + O2

glukózooxidáza

kyselina glukonová

+ H2O2
H2
elektrony

registrační
elektroda

O2

glukometry
sebekontrola diabetu

(SMBG – selfmonitoring of blood glucose)

domácí monitorování glykemie
různé typy glukometrů
odebírá se kapilární krev

pracují na principu přímého
elektrochemického stanovení
doporučuje se kontrola glukometrů
a spolupráce s OKB

algoritmus pro laboratorní screening DM
u dospělých
vyloučení
glukóza
postprandiální
(náhodný odběr)
+klinické příznaky
DM

< 5,6

< 11,1

≥ 11,1

doporučení ČDS a ČSKB
hodnoty glukózy jsou v mmol/l

glukóza
v plazmě
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

opakovat odběr
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

Diabetes mellitus
(DM)

< 7,0

≥ 5,6
a < 7,0

< 5,6l, ale
v anam. riziko
DM nebo IGT

oGTT-WHO
(zátěž 75g glukózy,
odběr žilní krve
na lačno a 2h
po zátěži)

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 11,1
2h po zátěži

Diabetes mellitus

hraniční
glukóza na lačno
(IFG)
glukóza v plazmě
žilní krve < 7,8
2h po zátěži

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 7,8
<11,1 2h po zátěži

porušená
glukózová tolerance
(IGT)

orální glukózo-toleranční test (oGTT)

je podpůrný diagnostický funkční test
pro diagnostiku DM
a porušené glukózové tolerance
(IGT – Impaired Glucose Tolerance)

sleduje se glykemie na lačno
a po zátěži glukózou,
opakovaně v určitých intervalech
za přesně definovaných podmínek

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
příprava pacienta:
3 dny před testem pacient konzumuje běžnou stravu
s dostatečným obsahem sacharidů (nejméně 150 g za den)
a normální fyzickou zátěží
test se provádí ráno po 10-14hodinovém lačnění
a fyzickém klidu bez alkoholu, kofeinu a nikotinu
doporučuje se vynechat léky, pokud je to
z klinického hlediska možné

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
provedení testu:
odebírá se venózní krev na lačno
a čeká se na výsledek glykemie

pokud je glykemie v rozmezí 5,6-6,9 mmol/l ,
oGTT se provede
pacient vypije během 5-10 minut 75 g glukózy
v 250-300 ml roztoku
další odběry venózní krve se provádějí
za 60 a 120 minut po vypití roztoku glukózy

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
diagnostická kritéria:
pro hodnotu glukózy v plazmě venózní krve 120 minut
po zátěži 75 g glukózy
vyloučení DM

< 7,8 mmol/l

porušená
glukózová tolerance (IGT )

≥ 7,8 mmol/l
až < 11,1 mmol/l

Diabetes mellitus

≥11,1 mmol/l

glykemie v mmol/l

12
11,1

11,1

10
8

7,8
6,7

6

6,7
5,6

4
2
0
0 minut

60 minut

čas

120 minut

180 minut

glykemický profil
několik stanovení glukózy v průběhu dne,

popřípadě i v noci odráží aktuální kompenzaci DM

glykemický profil zkrácený:
4 nebo 3 odběry
indikace: při DM I. a II. typu, při operacích diabetiků
nebo po porodu při DM II. typu,
pro posouzení kompenzace apod.

glykemický profil
glykemický profil úplný:
9 odběrů
indikace: je indikován při DM I. typu, při intenzivní terapii
nebo při inzulinové terapii, u gravidních diabetiček,
při těžké dekompenzaci DM všech typů,
po transplantaci pankreatu…

počet a přesné časování odběrů se v jednotlivých
diabetologických centrech liší
a závisí i na denním režimu nemocného

analýza glukózy se provádí v laboratořích, pokud pacient
je hospitalizovaný, nebo v domácích podmínkách
formou selfmonitoringu

glykemický profil
odběr materiálu:
nejčastěji se odebírá kapilární krev (z prstu) do odběrových nádob
určených na kapilární odběry s obsahem antiglykolytické směsi
(např. Sarstedt Multivette)

prevedení testu:
glykemický profil úplný
9 odběrů
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

1 hod. po snídani

3. vzorek

30 min. před obědem

4. vzorek

1 hod. po obědě

5. vzorek

30 min. před večeří

6. vzorek

1 hod. po večeři

7. vzorek

v 22.00 hod.

8. vzorek

v 01.00 hod.

9. vzorek

v 04.00 hod.

glykemický profil zkrácený
4 odběry
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

30 min. před obědem

3. vzorek

30 min. před večeří

4. vzorek

v 22.00 hod.

glykosurie
koncentrace glukózy v moči závisí
na hladině glukózy v krvi a na funkci ledvin
účel testu:
screening poruch glukózové tolerance
detekce poruch tubulární resorpce při poškození ledvin

stanovení glukózy v moči:
semikvantitativně – diagnostický proužek
kvantitativně
Poznámka:
semikvantitativní a kvantitativní stanovení glukózy v moči není
zařazené mezi základní nástroje na určení diagnózy diabetu ani
na sledovaní jeho stavu, protože individuální rozdíly ledvinného
prahu pro glukózu jsou dost velké a práh kolísá u každého jedince

• Játra přeměňují glukózu na ………. (8)
(též zásobní forma glukózy)

G

L

Y

K

O

S

U

R

I

E

L

L

2

O

2

H

J

I

C



N

6

B

Z

H

U

U

12

Ň

L

O

K

Í

6

Y

N

a

F

• Hormon, který snižuje glykémii se nazývá U G Y L P U Á
…………………………….. (7).
K
K
O
K
R
N
T
• Krev pro stanovení glukózy se odebírá
A
T
T
G
O
E
R
do nádobek s antiglykolytickým činidlem,
G
O
G
E
F
G
A
kterým je ……. (3 - vzorec).
•Jak se nazývá diagnostický funkční test
O
N
E
Z
I
E
E
pro diagnostiku diabetu mellitu a porušené N M M O L / L
glukózové tolerance? (4 – zkratka).
• Hladina glukózy v moči se nazývá …………………………..(10).
• Hormon, který zvyšuje glykémii se nazývá ……………………… (8).
• Test, kdy se stanovují glykémie několikrát během dne a popř.
i v noci se nazývá glykemický …………….. (6).
• Jednotky, v kterých se uvádí výsledky glykémie …………………… (6).
• Sumární vzorec glukózy ………………(6)
• Reakcí glukózy a GOD vzniká sloučenina ………………. ( 4 vzorec).
• Které buňky pankreatu produkují inzulín? (6)
• Zásoby glykogenu, jsou uloženy v orgánu, který se nazývá
………………………………. (5).


Slide 13

Zdravotnická škola, Hradec Králové
Stredná zdravotnícka škola, Bánská Bystrica

glukóza
klinicko-biochemická diagnostika
a metody stanovení

glukóza
monosacharid – aldohexóza
chemický vzorec: C6H12O6
zkratka:
Glc
-Dglukopyranóza

=
D-glukóza

D-glukóza

-Dglukopyranóza

glukóza
je nejdůležitější látkou metabolizmu
sacharidů, tvoří se trávením a konverzí
glykogenu v játrech
za fyziologických podmínek získává organizmus
glukózu:
potravou - přísun z vnějšího prostředí
glykogenolýzou – metabolická dráha konverze glykogenu
na glukózu (zásoby glykogenu jsou uložené hlavně
v játrech a příčně pruhovaných svalech)

glukoneogenezí - metabolická dráha syntézy glukózy
z necukernatých prekurzorů (pyruvát, laktát, aminokyseliny, meziprodukty citrátového cyklu, glycerol)

regulační systém metabolizmu glukózy
organizmus se snaží zachovat koncentraci glukózy
v krvi v úzkém rozmezí: 3,3 - 6,1 mmol/l
regulační systém:
nervová složka
hormonální složka
- inzulin
- glukagon
- adrenalin a noradrenalin
- glukokortikoidy
- růstový hormon
- hormony štítné žlázy...

poruchy v metabolizmu glukózy
glykemie, glukozemie, glukoplazmie - hladina glukózy v krvi
glykosurie - přítomnost glukózy v moči
porucha v metabolizmu se může projevit ve smyslu:
trvalého zvýšení  hladiny glukózy
- hyperglykemie
za hyperglykemii považujeme stavy, kdy koncentrace glukózy
na lačno je vyšší než horní hranice referenčního intervalu

nebo snížení  hladiny glukózy
- hypoglykemie
hypoglykemie je vážný stav, kdy koncentrace glukózy v krvi
klesne pod dolní hranici referenčního intervalu,
tj. pod 3,3 mmol/l, a je doprovázena klinickými projevy

klinicko-biochemická diagnostika
stanovení glukózy je základní biochemickou
informací o sacharidovém metabolizmu

účelem testu je:
screening diabetes mellitus

monitorování lékové nebo dietní terapie
u pacientů s DM
diagnostika při hypoglykemiích
monitorování energetického stavu a výživy hlavně
u intenzivně léčených pacientů

klinicko-biochemická diagnostika
stanovuje se:
náhodně naměřená glykemie
glykemie na lačno (FPG - Fasting Plasma Glucose)
glykemie po jídle
(postprandiální glykemie, pozátěžová glykemie )

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
glykemický profil

stanovení glukózy na lačno
nástroj laboratorní diagnózy DM
vyhledávání osob se zvýšeným rizikem DM

příprava pacienta:
odběr provádíme minimálně
po 8hodinovém lačnění,
vyloučit fyzickou námahu a kouření

odběr:
doporučuje se odebrat venózní krev
do odběrové nádobky
s antiglykolytickou směsí,
stanovit glukózu
ve stabilizované plazmě

předanalytické podmínky
pro stanovení glukózy na lačno

stabilizace antiglykolytickou směsí:
antiglykolytická směs obsahuje NaF (2,5 mg NaF/ml krve)
a protisrážlivé činidlo (např. heparin, EDTA...)
NaF stabilizuje glukózu ve vzorku blokací glykolýzy

!!! pokud není použité stabilizační činidlo, klesá bez oddělení
krevních elementů koncentrace glukózy
při pokojové teplotě za 1 hod. o 5 až 7 %

transport do laboratoře:

okamžitý

oddělení séra/plazmy od krevních elementů:
sérum/plazmu je potřeba oddělit od krevních elementů
do 60 minut od odběru

metody stanovení glukózy
neenzymové metody
oxidačně–redukční a kondenzační metody
jsou nejstarší metody stanovení
v současnosti se v klinické biochemii nepoužívají

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu (GOD) a peroxidázu (POD)
využívající enzym hexokinázu (HK)
využívající enzym glukózodehydrogenázu (GDH)

elektrochemické metody
hmotnostní spektrometrie
(ID-GC/MS – doporučená referenční metoda)

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu a peroxidázu

princip stanovení:
glukóza + O2

+ H 2O

GOD

glukonolakton

+ H 2 O2

na detekci vzniklého H2O2 se využívá reakce
katalyzované enzymem peroxidázou

H2O2 + 4-AAP+ fenol
redukovaný chromogen

POD

chinonimin

+ H 2O

oxidovaný chromogen

Trinderova reakce

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

činidla:
Enzymy lahvička 

pufer – chromogen lahvička 

peroxidáza

fosforečnanový tlumivý roztok

glukózooxidáza

3-methyl-fenol

4-aminoantipyrin

příprava pracovního roztoku
•

obsah lahvičky  se rozpustí v 6 ml destilované vody

•

vleje se do lahvičky  a promíchá se

stabilita: při +2-8 °C ve tmě 1 měsíc,

při +15-25 °C ve tmě 10 dní

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

postup analýzy:
vlnová délka (480-540 nm), s maximem při 498 nm
kyveta 1 cm
teplota +15-25 °C, nebo 37 ± 0,1 °C
ve třech zkumavkách se smíchá pracovní roztok v poměru 100 + 1
se sérem, plazmou (vzorkem), standardním roztokem glukózy (standard)
a s destilovanou vodou (reagenční blenk)
 vzorek (A1)

vzorek (sérum, plazma)

 standard (A2)

 reag. blenk

0,02 ml

standard

0,02 ml

dest. H2O

0,02 ml

pracovní roztok

2,0 ml

2,0 ml

2,0 ml

inkubace: (30 min při +15 až +25 °C nebo 15 min při 37 °C),
změří se absorbance vzorku (A1)
a standardu (A2) proti reagenčnímu blenku

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

metoda je aplikovatelná:
na manuální stanovení glukózy bez deproteinace
na manuální stanovení glukózy s deproteinací
na biochemické analyzátory

linearita: do 22,0 mmol/l
hodnoty přesahující horní hranici linearity
se ředí manuálně destilovanou vodou
a analýza se opakuje (výsledek x ředění)

interference:
hemolýza
chylozita
přítomnost redukujících látek
– kyselina askorbová, kyselina močová, bilirubin a jiné...

enzymové metody
využívající enzym hexokinázu

princip stanovení:
glukóza + ATP

hexokináza + Mg2+

glukóza-6-fosfát + ADP

glukóza-6-fosfát + NAD+

G-6-PDH

glukonát-6-fosfát + NADPH + H+

ATP: adenozintrifosfát
ADP: adenozindifosfát
G-6-PDH: glukóza-6-fosfátdehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

enzymové metody
využívající enzym glukózodehydrogenázu

princip stanovení:
glukóza + NAD+
GDH

glukonolakton

+ NADH + H+

GDH: glukózodehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

elektrochemické metody
princip stanovení je založen na:
enzymové reakci a ampérometrické detekci

produktů enzymové reakce

enzym glukózooxidáza je imobilizován na biosenzoru

vzniklý peroxid vodíku se detekuje a pomocí

převodníku převádí na elektrický signál

elektrochemické metody
vyšetření se provádí
na glukózových analyzátorech

výhodou je rychlost stanovení

na stanovení se může přímo použít
stabilizovaná kapilární krev,
bez předchozí úpravy vzorku
neinterferuje hemolýza

elektrochemické metody

glukóza + O2

glukózooxidáza

kyselina glukonová

+ H2O2
H2
elektrony

registrační
elektroda

O2

glukometry
sebekontrola diabetu

(SMBG – selfmonitoring of blood glucose)

domácí monitorování glykemie
různé typy glukometrů
odebírá se kapilární krev

pracují na principu přímého
elektrochemického stanovení
doporučuje se kontrola glukometrů
a spolupráce s OKB

algoritmus pro laboratorní screening DM
u dospělých
vyloučení
glukóza
postprandiální
(náhodný odběr)
+klinické příznaky
DM

< 5,6

< 11,1

≥ 11,1

doporučení ČDS a ČSKB
hodnoty glukózy jsou v mmol/l

glukóza
v plazmě
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

opakovat odběr
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

Diabetes mellitus
(DM)

< 7,0

≥ 5,6
a < 7,0

< 5,6l, ale
v anam. riziko
DM nebo IGT

oGTT-WHO
(zátěž 75g glukózy,
odběr žilní krve
na lačno a 2h
po zátěži)

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 11,1
2h po zátěži

Diabetes mellitus

hraniční
glukóza na lačno
(IFG)
glukóza v plazmě
žilní krve < 7,8
2h po zátěži

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 7,8
<11,1 2h po zátěži

porušená
glukózová tolerance
(IGT)

orální glukózo-toleranční test (oGTT)

je podpůrný diagnostický funkční test
pro diagnostiku DM
a porušené glukózové tolerance
(IGT – Impaired Glucose Tolerance)

sleduje se glykemie na lačno
a po zátěži glukózou,
opakovaně v určitých intervalech
za přesně definovaných podmínek

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
příprava pacienta:
3 dny před testem pacient konzumuje běžnou stravu
s dostatečným obsahem sacharidů (nejméně 150 g za den)
a normální fyzickou zátěží
test se provádí ráno po 10-14hodinovém lačnění
a fyzickém klidu bez alkoholu, kofeinu a nikotinu
doporučuje se vynechat léky, pokud je to
z klinického hlediska možné

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
provedení testu:
odebírá se venózní krev na lačno
a čeká se na výsledek glykemie

pokud je glykemie v rozmezí 5,6-6,9 mmol/l ,
oGTT se provede
pacient vypije během 5-10 minut 75 g glukózy
v 250-300 ml roztoku
další odběry venózní krve se provádějí
za 60 a 120 minut po vypití roztoku glukózy

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
diagnostická kritéria:
pro hodnotu glukózy v plazmě venózní krve 120 minut
po zátěži 75 g glukózy
vyloučení DM

< 7,8 mmol/l

porušená
glukózová tolerance (IGT )

≥ 7,8 mmol/l
až < 11,1 mmol/l

Diabetes mellitus

≥11,1 mmol/l

glykemie v mmol/l

12
11,1

11,1

10
8

7,8
6,7

6

6,7
5,6

4
2
0
0 minut

60 minut

čas

120 minut

180 minut

glykemický profil
několik stanovení glukózy v průběhu dne,

popřípadě i v noci odráží aktuální kompenzaci DM

glykemický profil zkrácený:
4 nebo 3 odběry
indikace: při DM I. a II. typu, při operacích diabetiků
nebo po porodu při DM II. typu,
pro posouzení kompenzace apod.

glykemický profil
glykemický profil úplný:
9 odběrů
indikace: je indikován při DM I. typu, při intenzivní terapii
nebo při inzulinové terapii, u gravidních diabetiček,
při těžké dekompenzaci DM všech typů,
po transplantaci pankreatu…

počet a přesné časování odběrů se v jednotlivých
diabetologických centrech liší
a závisí i na denním režimu nemocného

analýza glukózy se provádí v laboratořích, pokud pacient
je hospitalizovaný, nebo v domácích podmínkách
formou selfmonitoringu

glykemický profil
odběr materiálu:
nejčastěji se odebírá kapilární krev (z prstu) do odběrových nádob
určených na kapilární odběry s obsahem antiglykolytické směsi
(např. Sarstedt Multivette)

prevedení testu:
glykemický profil úplný
9 odběrů
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

1 hod. po snídani

3. vzorek

30 min. před obědem

4. vzorek

1 hod. po obědě

5. vzorek

30 min. před večeří

6. vzorek

1 hod. po večeři

7. vzorek

v 22.00 hod.

8. vzorek

v 01.00 hod.

9. vzorek

v 04.00 hod.

glykemický profil zkrácený
4 odběry
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

30 min. před obědem

3. vzorek

30 min. před večeří

4. vzorek

v 22.00 hod.

glykosurie
koncentrace glukózy v moči závisí
na hladině glukózy v krvi a na funkci ledvin
účel testu:
screening poruch glukózové tolerance
detekce poruch tubulární resorpce při poškození ledvin

stanovení glukózy v moči:
semikvantitativně – diagnostický proužek
kvantitativně
Poznámka:
semikvantitativní a kvantitativní stanovení glukózy v moči není
zařazené mezi základní nástroje na určení diagnózy diabetu ani
na sledovaní jeho stavu, protože individuální rozdíly ledvinného
prahu pro glukózu jsou dost velké a práh kolísá u každého jedince

• Játra přeměňují glukózu na ………. (8)
(též zásobní forma glukózy)

G

L

Y

K

O

S

U

R

I

E

L

L

2

O

2

H

J

I

C



N

6

B

Z

H

U

U

12

Ň

L

O

K

Í

6

Y

N

a

F

• Hormon, který snižuje glykémii se nazývá U G Y L P U Á
…………………………….. (7).
K
K
O
K
R
N
T
• Krev pro stanovení glukózy se odebírá
A
T
T
G
O
E
R
do nádobek s antiglykolytickým činidlem,
G
O
G
E
F
G
A
kterým je ……. (3 - vzorec).
•Jak se nazývá diagnostický funkční test
O
N
E
Z
I
E
E
pro diagnostiku diabetu mellitu a porušené N M M O L / L
glukózové tolerance? (4 – zkratka).
• Hladina glukózy v moči se nazývá …………………………..(10).
• Hormon, který zvyšuje glykémii se nazývá ……………………… (8).
• Test, kdy se stanovují glykémie několikrát během dne a popř.
i v noci se nazývá glykemický …………….. (6).
• Jednotky, v kterých se uvádí výsledky glykémie …………………… (6).
• Sumární vzorec glukózy ………………(6)
• Reakcí glukózy a GOD vzniká sloučenina ………………. ( 4 vzorec).
• Které buňky pankreatu produkují inzulín? (6)
• Zásoby glykogenu, jsou uloženy v orgánu, který se nazývá
………………………………. (5).


Slide 14

Zdravotnická škola, Hradec Králové
Stredná zdravotnícka škola, Bánská Bystrica

glukóza
klinicko-biochemická diagnostika
a metody stanovení

glukóza
monosacharid – aldohexóza
chemický vzorec: C6H12O6
zkratka:
Glc
-Dglukopyranóza

=
D-glukóza

D-glukóza

-Dglukopyranóza

glukóza
je nejdůležitější látkou metabolizmu
sacharidů, tvoří se trávením a konverzí
glykogenu v játrech
za fyziologických podmínek získává organizmus
glukózu:
potravou - přísun z vnějšího prostředí
glykogenolýzou – metabolická dráha konverze glykogenu
na glukózu (zásoby glykogenu jsou uložené hlavně
v játrech a příčně pruhovaných svalech)

glukoneogenezí - metabolická dráha syntézy glukózy
z necukernatých prekurzorů (pyruvát, laktát, aminokyseliny, meziprodukty citrátového cyklu, glycerol)

regulační systém metabolizmu glukózy
organizmus se snaží zachovat koncentraci glukózy
v krvi v úzkém rozmezí: 3,3 - 6,1 mmol/l
regulační systém:
nervová složka
hormonální složka
- inzulin
- glukagon
- adrenalin a noradrenalin
- glukokortikoidy
- růstový hormon
- hormony štítné žlázy...

poruchy v metabolizmu glukózy
glykemie, glukozemie, glukoplazmie - hladina glukózy v krvi
glykosurie - přítomnost glukózy v moči
porucha v metabolizmu se může projevit ve smyslu:
trvalého zvýšení  hladiny glukózy
- hyperglykemie
za hyperglykemii považujeme stavy, kdy koncentrace glukózy
na lačno je vyšší než horní hranice referenčního intervalu

nebo snížení  hladiny glukózy
- hypoglykemie
hypoglykemie je vážný stav, kdy koncentrace glukózy v krvi
klesne pod dolní hranici referenčního intervalu,
tj. pod 3,3 mmol/l, a je doprovázena klinickými projevy

klinicko-biochemická diagnostika
stanovení glukózy je základní biochemickou
informací o sacharidovém metabolizmu

účelem testu je:
screening diabetes mellitus

monitorování lékové nebo dietní terapie
u pacientů s DM
diagnostika při hypoglykemiích
monitorování energetického stavu a výživy hlavně
u intenzivně léčených pacientů

klinicko-biochemická diagnostika
stanovuje se:
náhodně naměřená glykemie
glykemie na lačno (FPG - Fasting Plasma Glucose)
glykemie po jídle
(postprandiální glykemie, pozátěžová glykemie )

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
glykemický profil

stanovení glukózy na lačno
nástroj laboratorní diagnózy DM
vyhledávání osob se zvýšeným rizikem DM

příprava pacienta:
odběr provádíme minimálně
po 8hodinovém lačnění,
vyloučit fyzickou námahu a kouření

odběr:
doporučuje se odebrat venózní krev
do odběrové nádobky
s antiglykolytickou směsí,
stanovit glukózu
ve stabilizované plazmě

předanalytické podmínky
pro stanovení glukózy na lačno

stabilizace antiglykolytickou směsí:
antiglykolytická směs obsahuje NaF (2,5 mg NaF/ml krve)
a protisrážlivé činidlo (např. heparin, EDTA...)
NaF stabilizuje glukózu ve vzorku blokací glykolýzy

!!! pokud není použité stabilizační činidlo, klesá bez oddělení
krevních elementů koncentrace glukózy
při pokojové teplotě za 1 hod. o 5 až 7 %

transport do laboratoře:

okamžitý

oddělení séra/plazmy od krevních elementů:
sérum/plazmu je potřeba oddělit od krevních elementů
do 60 minut od odběru

metody stanovení glukózy
neenzymové metody
oxidačně–redukční a kondenzační metody
jsou nejstarší metody stanovení
v současnosti se v klinické biochemii nepoužívají

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu (GOD) a peroxidázu (POD)
využívající enzym hexokinázu (HK)
využívající enzym glukózodehydrogenázu (GDH)

elektrochemické metody
hmotnostní spektrometrie
(ID-GC/MS – doporučená referenční metoda)

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu a peroxidázu

princip stanovení:
glukóza + O2

+ H 2O

GOD

glukonolakton

+ H 2 O2

na detekci vzniklého H2O2 se využívá reakce
katalyzované enzymem peroxidázou

H2O2 + 4-AAP+ fenol
redukovaný chromogen

POD

chinonimin

+ H 2O

oxidovaný chromogen

Trinderova reakce

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

činidla:
Enzymy lahvička 

pufer – chromogen lahvička 

peroxidáza

fosforečnanový tlumivý roztok

glukózooxidáza

3-methyl-fenol

4-aminoantipyrin

příprava pracovního roztoku
•

obsah lahvičky  se rozpustí v 6 ml destilované vody

•

vleje se do lahvičky  a promíchá se

stabilita: při +2-8 °C ve tmě 1 měsíc,

při +15-25 °C ve tmě 10 dní

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

postup analýzy:
vlnová délka (480-540 nm), s maximem při 498 nm
kyveta 1 cm
teplota +15-25 °C, nebo 37 ± 0,1 °C
ve třech zkumavkách se smíchá pracovní roztok v poměru 100 + 1
se sérem, plazmou (vzorkem), standardním roztokem glukózy (standard)
a s destilovanou vodou (reagenční blenk)
 vzorek (A1)

vzorek (sérum, plazma)

 standard (A2)

 reag. blenk

0,02 ml

standard

0,02 ml

dest. H2O

0,02 ml

pracovní roztok

2,0 ml

2,0 ml

2,0 ml

inkubace: (30 min při +15 až +25 °C nebo 15 min při 37 °C),
změří se absorbance vzorku (A1)
a standardu (A2) proti reagenčnímu blenku

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

metoda je aplikovatelná:
na manuální stanovení glukózy bez deproteinace
na manuální stanovení glukózy s deproteinací
na biochemické analyzátory

linearita: do 22,0 mmol/l
hodnoty přesahující horní hranici linearity
se ředí manuálně destilovanou vodou
a analýza se opakuje (výsledek x ředění)

interference:
hemolýza
chylozita
přítomnost redukujících látek
– kyselina askorbová, kyselina močová, bilirubin a jiné...

enzymové metody
využívající enzym hexokinázu

princip stanovení:
glukóza + ATP

hexokináza + Mg2+

glukóza-6-fosfát + ADP

glukóza-6-fosfát + NAD+

G-6-PDH

glukonát-6-fosfát + NADPH + H+

ATP: adenozintrifosfát
ADP: adenozindifosfát
G-6-PDH: glukóza-6-fosfátdehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

enzymové metody
využívající enzym glukózodehydrogenázu

princip stanovení:
glukóza + NAD+
GDH

glukonolakton

+ NADH + H+

GDH: glukózodehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

elektrochemické metody
princip stanovení je založen na:
enzymové reakci a ampérometrické detekci

produktů enzymové reakce

enzym glukózooxidáza je imobilizován na biosenzoru

vzniklý peroxid vodíku se detekuje a pomocí

převodníku převádí na elektrický signál

elektrochemické metody
vyšetření se provádí
na glukózových analyzátorech

výhodou je rychlost stanovení

na stanovení se může přímo použít
stabilizovaná kapilární krev,
bez předchozí úpravy vzorku
neinterferuje hemolýza

elektrochemické metody

glukóza + O2

glukózooxidáza

kyselina glukonová

+ H2O2
H2
elektrony

registrační
elektroda

O2

glukometry
sebekontrola diabetu

(SMBG – selfmonitoring of blood glucose)

domácí monitorování glykemie
různé typy glukometrů
odebírá se kapilární krev

pracují na principu přímého
elektrochemického stanovení
doporučuje se kontrola glukometrů
a spolupráce s OKB

algoritmus pro laboratorní screening DM
u dospělých
vyloučení
glukóza
postprandiální
(náhodný odběr)
+klinické příznaky
DM

< 5,6

< 11,1

≥ 11,1

doporučení ČDS a ČSKB
hodnoty glukózy jsou v mmol/l

glukóza
v plazmě
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

opakovat odběr
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

Diabetes mellitus
(DM)

< 7,0

≥ 5,6
a < 7,0

< 5,6l, ale
v anam. riziko
DM nebo IGT

oGTT-WHO
(zátěž 75g glukózy,
odběr žilní krve
na lačno a 2h
po zátěži)

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 11,1
2h po zátěži

Diabetes mellitus

hraniční
glukóza na lačno
(IFG)
glukóza v plazmě
žilní krve < 7,8
2h po zátěži

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 7,8
<11,1 2h po zátěži

porušená
glukózová tolerance
(IGT)

orální glukózo-toleranční test (oGTT)

je podpůrný diagnostický funkční test
pro diagnostiku DM
a porušené glukózové tolerance
(IGT – Impaired Glucose Tolerance)

sleduje se glykemie na lačno
a po zátěži glukózou,
opakovaně v určitých intervalech
za přesně definovaných podmínek

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
příprava pacienta:
3 dny před testem pacient konzumuje běžnou stravu
s dostatečným obsahem sacharidů (nejméně 150 g za den)
a normální fyzickou zátěží
test se provádí ráno po 10-14hodinovém lačnění
a fyzickém klidu bez alkoholu, kofeinu a nikotinu
doporučuje se vynechat léky, pokud je to
z klinického hlediska možné

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
provedení testu:
odebírá se venózní krev na lačno
a čeká se na výsledek glykemie

pokud je glykemie v rozmezí 5,6-6,9 mmol/l ,
oGTT se provede
pacient vypije během 5-10 minut 75 g glukózy
v 250-300 ml roztoku
další odběry venózní krve se provádějí
za 60 a 120 minut po vypití roztoku glukózy

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
diagnostická kritéria:
pro hodnotu glukózy v plazmě venózní krve 120 minut
po zátěži 75 g glukózy
vyloučení DM

< 7,8 mmol/l

porušená
glukózová tolerance (IGT )

≥ 7,8 mmol/l
až < 11,1 mmol/l

Diabetes mellitus

≥11,1 mmol/l

glykemie v mmol/l

12
11,1

11,1

10
8

7,8
6,7

6

6,7
5,6

4
2
0
0 minut

60 minut

čas

120 minut

180 minut

glykemický profil
několik stanovení glukózy v průběhu dne,

popřípadě i v noci odráží aktuální kompenzaci DM

glykemický profil zkrácený:
4 nebo 3 odběry
indikace: při DM I. a II. typu, při operacích diabetiků
nebo po porodu při DM II. typu,
pro posouzení kompenzace apod.

glykemický profil
glykemický profil úplný:
9 odběrů
indikace: je indikován při DM I. typu, při intenzivní terapii
nebo při inzulinové terapii, u gravidních diabetiček,
při těžké dekompenzaci DM všech typů,
po transplantaci pankreatu…

počet a přesné časování odběrů se v jednotlivých
diabetologických centrech liší
a závisí i na denním režimu nemocného

analýza glukózy se provádí v laboratořích, pokud pacient
je hospitalizovaný, nebo v domácích podmínkách
formou selfmonitoringu

glykemický profil
odběr materiálu:
nejčastěji se odebírá kapilární krev (z prstu) do odběrových nádob
určených na kapilární odběry s obsahem antiglykolytické směsi
(např. Sarstedt Multivette)

prevedení testu:
glykemický profil úplný
9 odběrů
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

1 hod. po snídani

3. vzorek

30 min. před obědem

4. vzorek

1 hod. po obědě

5. vzorek

30 min. před večeří

6. vzorek

1 hod. po večeři

7. vzorek

v 22.00 hod.

8. vzorek

v 01.00 hod.

9. vzorek

v 04.00 hod.

glykemický profil zkrácený
4 odběry
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

30 min. před obědem

3. vzorek

30 min. před večeří

4. vzorek

v 22.00 hod.

glykosurie
koncentrace glukózy v moči závisí
na hladině glukózy v krvi a na funkci ledvin
účel testu:
screening poruch glukózové tolerance
detekce poruch tubulární resorpce při poškození ledvin

stanovení glukózy v moči:
semikvantitativně – diagnostický proužek
kvantitativně
Poznámka:
semikvantitativní a kvantitativní stanovení glukózy v moči není
zařazené mezi základní nástroje na určení diagnózy diabetu ani
na sledovaní jeho stavu, protože individuální rozdíly ledvinného
prahu pro glukózu jsou dost velké a práh kolísá u každého jedince

• Játra přeměňují glukózu na ………. (8)
(též zásobní forma glukózy)

G

L

Y

K

O

S

U

R

I

E

L

L

2

O

2

H

J

I

C



N

6

B

Z

H

U

U

12

Ň

L

O

K

Í

6

Y

N

a

F

• Hormon, který snižuje glykémii se nazývá U G Y L P U Á
…………………………….. (7).
K
K
O
K
R
N
T
• Krev pro stanovení glukózy se odebírá
A
T
T
G
O
E
R
do nádobek s antiglykolytickým činidlem,
G
O
G
E
F
G
A
kterým je ……. (3 - vzorec).
•Jak se nazývá diagnostický funkční test
O
N
E
Z
I
E
E
pro diagnostiku diabetu mellitu a porušené N M M O L / L
glukózové tolerance? (4 – zkratka).
• Hladina glukózy v moči se nazývá …………………………..(10).
• Hormon, který zvyšuje glykémii se nazývá ……………………… (8).
• Test, kdy se stanovují glykémie několikrát během dne a popř.
i v noci se nazývá glykemický …………….. (6).
• Jednotky, v kterých se uvádí výsledky glykémie …………………… (6).
• Sumární vzorec glukózy ………………(6)
• Reakcí glukózy a GOD vzniká sloučenina ………………. ( 4 vzorec).
• Které buňky pankreatu produkují inzulín? (6)
• Zásoby glykogenu, jsou uloženy v orgánu, který se nazývá
………………………………. (5).


Slide 15

Zdravotnická škola, Hradec Králové
Stredná zdravotnícka škola, Bánská Bystrica

glukóza
klinicko-biochemická diagnostika
a metody stanovení

glukóza
monosacharid – aldohexóza
chemický vzorec: C6H12O6
zkratka:
Glc
-Dglukopyranóza

=
D-glukóza

D-glukóza

-Dglukopyranóza

glukóza
je nejdůležitější látkou metabolizmu
sacharidů, tvoří se trávením a konverzí
glykogenu v játrech
za fyziologických podmínek získává organizmus
glukózu:
potravou - přísun z vnějšího prostředí
glykogenolýzou – metabolická dráha konverze glykogenu
na glukózu (zásoby glykogenu jsou uložené hlavně
v játrech a příčně pruhovaných svalech)

glukoneogenezí - metabolická dráha syntézy glukózy
z necukernatých prekurzorů (pyruvát, laktát, aminokyseliny, meziprodukty citrátového cyklu, glycerol)

regulační systém metabolizmu glukózy
organizmus se snaží zachovat koncentraci glukózy
v krvi v úzkém rozmezí: 3,3 - 6,1 mmol/l
regulační systém:
nervová složka
hormonální složka
- inzulin
- glukagon
- adrenalin a noradrenalin
- glukokortikoidy
- růstový hormon
- hormony štítné žlázy...

poruchy v metabolizmu glukózy
glykemie, glukozemie, glukoplazmie - hladina glukózy v krvi
glykosurie - přítomnost glukózy v moči
porucha v metabolizmu se může projevit ve smyslu:
trvalého zvýšení  hladiny glukózy
- hyperglykemie
za hyperglykemii považujeme stavy, kdy koncentrace glukózy
na lačno je vyšší než horní hranice referenčního intervalu

nebo snížení  hladiny glukózy
- hypoglykemie
hypoglykemie je vážný stav, kdy koncentrace glukózy v krvi
klesne pod dolní hranici referenčního intervalu,
tj. pod 3,3 mmol/l, a je doprovázena klinickými projevy

klinicko-biochemická diagnostika
stanovení glukózy je základní biochemickou
informací o sacharidovém metabolizmu

účelem testu je:
screening diabetes mellitus

monitorování lékové nebo dietní terapie
u pacientů s DM
diagnostika při hypoglykemiích
monitorování energetického stavu a výživy hlavně
u intenzivně léčených pacientů

klinicko-biochemická diagnostika
stanovuje se:
náhodně naměřená glykemie
glykemie na lačno (FPG - Fasting Plasma Glucose)
glykemie po jídle
(postprandiální glykemie, pozátěžová glykemie )

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
glykemický profil

stanovení glukózy na lačno
nástroj laboratorní diagnózy DM
vyhledávání osob se zvýšeným rizikem DM

příprava pacienta:
odběr provádíme minimálně
po 8hodinovém lačnění,
vyloučit fyzickou námahu a kouření

odběr:
doporučuje se odebrat venózní krev
do odběrové nádobky
s antiglykolytickou směsí,
stanovit glukózu
ve stabilizované plazmě

předanalytické podmínky
pro stanovení glukózy na lačno

stabilizace antiglykolytickou směsí:
antiglykolytická směs obsahuje NaF (2,5 mg NaF/ml krve)
a protisrážlivé činidlo (např. heparin, EDTA...)
NaF stabilizuje glukózu ve vzorku blokací glykolýzy

!!! pokud není použité stabilizační činidlo, klesá bez oddělení
krevních elementů koncentrace glukózy
při pokojové teplotě za 1 hod. o 5 až 7 %

transport do laboratoře:

okamžitý

oddělení séra/plazmy od krevních elementů:
sérum/plazmu je potřeba oddělit od krevních elementů
do 60 minut od odběru

metody stanovení glukózy
neenzymové metody
oxidačně–redukční a kondenzační metody
jsou nejstarší metody stanovení
v současnosti se v klinické biochemii nepoužívají

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu (GOD) a peroxidázu (POD)
využívající enzym hexokinázu (HK)
využívající enzym glukózodehydrogenázu (GDH)

elektrochemické metody
hmotnostní spektrometrie
(ID-GC/MS – doporučená referenční metoda)

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu a peroxidázu

princip stanovení:
glukóza + O2

+ H 2O

GOD

glukonolakton

+ H 2 O2

na detekci vzniklého H2O2 se využívá reakce
katalyzované enzymem peroxidázou

H2O2 + 4-AAP+ fenol
redukovaný chromogen

POD

chinonimin

+ H 2O

oxidovaný chromogen

Trinderova reakce

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

činidla:
Enzymy lahvička 

pufer – chromogen lahvička 

peroxidáza

fosforečnanový tlumivý roztok

glukózooxidáza

3-methyl-fenol

4-aminoantipyrin

příprava pracovního roztoku
•

obsah lahvičky  se rozpustí v 6 ml destilované vody

•

vleje se do lahvičky  a promíchá se

stabilita: při +2-8 °C ve tmě 1 měsíc,

při +15-25 °C ve tmě 10 dní

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

postup analýzy:
vlnová délka (480-540 nm), s maximem při 498 nm
kyveta 1 cm
teplota +15-25 °C, nebo 37 ± 0,1 °C
ve třech zkumavkách se smíchá pracovní roztok v poměru 100 + 1
se sérem, plazmou (vzorkem), standardním roztokem glukózy (standard)
a s destilovanou vodou (reagenční blenk)
 vzorek (A1)

vzorek (sérum, plazma)

 standard (A2)

 reag. blenk

0,02 ml

standard

0,02 ml

dest. H2O

0,02 ml

pracovní roztok

2,0 ml

2,0 ml

2,0 ml

inkubace: (30 min při +15 až +25 °C nebo 15 min při 37 °C),
změří se absorbance vzorku (A1)
a standardu (A2) proti reagenčnímu blenku

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

metoda je aplikovatelná:
na manuální stanovení glukózy bez deproteinace
na manuální stanovení glukózy s deproteinací
na biochemické analyzátory

linearita: do 22,0 mmol/l
hodnoty přesahující horní hranici linearity
se ředí manuálně destilovanou vodou
a analýza se opakuje (výsledek x ředění)

interference:
hemolýza
chylozita
přítomnost redukujících látek
– kyselina askorbová, kyselina močová, bilirubin a jiné...

enzymové metody
využívající enzym hexokinázu

princip stanovení:
glukóza + ATP

hexokináza + Mg2+

glukóza-6-fosfát + ADP

glukóza-6-fosfát + NAD+

G-6-PDH

glukonát-6-fosfát + NADPH + H+

ATP: adenozintrifosfát
ADP: adenozindifosfát
G-6-PDH: glukóza-6-fosfátdehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

enzymové metody
využívající enzym glukózodehydrogenázu

princip stanovení:
glukóza + NAD+
GDH

glukonolakton

+ NADH + H+

GDH: glukózodehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

elektrochemické metody
princip stanovení je založen na:
enzymové reakci a ampérometrické detekci

produktů enzymové reakce

enzym glukózooxidáza je imobilizován na biosenzoru

vzniklý peroxid vodíku se detekuje a pomocí

převodníku převádí na elektrický signál

elektrochemické metody
vyšetření se provádí
na glukózových analyzátorech

výhodou je rychlost stanovení

na stanovení se může přímo použít
stabilizovaná kapilární krev,
bez předchozí úpravy vzorku
neinterferuje hemolýza

elektrochemické metody

glukóza + O2

glukózooxidáza

kyselina glukonová

+ H2O2
H2
elektrony

registrační
elektroda

O2

glukometry
sebekontrola diabetu

(SMBG – selfmonitoring of blood glucose)

domácí monitorování glykemie
různé typy glukometrů
odebírá se kapilární krev

pracují na principu přímého
elektrochemického stanovení
doporučuje se kontrola glukometrů
a spolupráce s OKB

algoritmus pro laboratorní screening DM
u dospělých
vyloučení
glukóza
postprandiální
(náhodný odběr)
+klinické příznaky
DM

< 5,6

< 11,1

≥ 11,1

doporučení ČDS a ČSKB
hodnoty glukózy jsou v mmol/l

glukóza
v plazmě
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

opakovat odběr
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

Diabetes mellitus
(DM)

< 7,0

≥ 5,6
a < 7,0

< 5,6l, ale
v anam. riziko
DM nebo IGT

oGTT-WHO
(zátěž 75g glukózy,
odběr žilní krve
na lačno a 2h
po zátěži)

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 11,1
2h po zátěži

Diabetes mellitus

hraniční
glukóza na lačno
(IFG)
glukóza v plazmě
žilní krve < 7,8
2h po zátěži

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 7,8
<11,1 2h po zátěži

porušená
glukózová tolerance
(IGT)

orální glukózo-toleranční test (oGTT)

je podpůrný diagnostický funkční test
pro diagnostiku DM
a porušené glukózové tolerance
(IGT – Impaired Glucose Tolerance)

sleduje se glykemie na lačno
a po zátěži glukózou,
opakovaně v určitých intervalech
za přesně definovaných podmínek

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
příprava pacienta:
3 dny před testem pacient konzumuje běžnou stravu
s dostatečným obsahem sacharidů (nejméně 150 g za den)
a normální fyzickou zátěží
test se provádí ráno po 10-14hodinovém lačnění
a fyzickém klidu bez alkoholu, kofeinu a nikotinu
doporučuje se vynechat léky, pokud je to
z klinického hlediska možné

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
provedení testu:
odebírá se venózní krev na lačno
a čeká se na výsledek glykemie

pokud je glykemie v rozmezí 5,6-6,9 mmol/l ,
oGTT se provede
pacient vypije během 5-10 minut 75 g glukózy
v 250-300 ml roztoku
další odběry venózní krve se provádějí
za 60 a 120 minut po vypití roztoku glukózy

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
diagnostická kritéria:
pro hodnotu glukózy v plazmě venózní krve 120 minut
po zátěži 75 g glukózy
vyloučení DM

< 7,8 mmol/l

porušená
glukózová tolerance (IGT )

≥ 7,8 mmol/l
až < 11,1 mmol/l

Diabetes mellitus

≥11,1 mmol/l

glykemie v mmol/l

12
11,1

11,1

10
8

7,8
6,7

6

6,7
5,6

4
2
0
0 minut

60 minut

čas

120 minut

180 minut

glykemický profil
několik stanovení glukózy v průběhu dne,

popřípadě i v noci odráží aktuální kompenzaci DM

glykemický profil zkrácený:
4 nebo 3 odběry
indikace: při DM I. a II. typu, při operacích diabetiků
nebo po porodu při DM II. typu,
pro posouzení kompenzace apod.

glykemický profil
glykemický profil úplný:
9 odběrů
indikace: je indikován při DM I. typu, při intenzivní terapii
nebo při inzulinové terapii, u gravidních diabetiček,
při těžké dekompenzaci DM všech typů,
po transplantaci pankreatu…

počet a přesné časování odběrů se v jednotlivých
diabetologických centrech liší
a závisí i na denním režimu nemocného

analýza glukózy se provádí v laboratořích, pokud pacient
je hospitalizovaný, nebo v domácích podmínkách
formou selfmonitoringu

glykemický profil
odběr materiálu:
nejčastěji se odebírá kapilární krev (z prstu) do odběrových nádob
určených na kapilární odběry s obsahem antiglykolytické směsi
(např. Sarstedt Multivette)

prevedení testu:
glykemický profil úplný
9 odběrů
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

1 hod. po snídani

3. vzorek

30 min. před obědem

4. vzorek

1 hod. po obědě

5. vzorek

30 min. před večeří

6. vzorek

1 hod. po večeři

7. vzorek

v 22.00 hod.

8. vzorek

v 01.00 hod.

9. vzorek

v 04.00 hod.

glykemický profil zkrácený
4 odběry
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

30 min. před obědem

3. vzorek

30 min. před večeří

4. vzorek

v 22.00 hod.

glykosurie
koncentrace glukózy v moči závisí
na hladině glukózy v krvi a na funkci ledvin
účel testu:
screening poruch glukózové tolerance
detekce poruch tubulární resorpce při poškození ledvin

stanovení glukózy v moči:
semikvantitativně – diagnostický proužek
kvantitativně
Poznámka:
semikvantitativní a kvantitativní stanovení glukózy v moči není
zařazené mezi základní nástroje na určení diagnózy diabetu ani
na sledovaní jeho stavu, protože individuální rozdíly ledvinného
prahu pro glukózu jsou dost velké a práh kolísá u každého jedince

• Játra přeměňují glukózu na ………. (8)
(též zásobní forma glukózy)

G

L

Y

K

O

S

U

R

I

E

L

L

2

O

2

H

J

I

C



N

6

B

Z

H

U

U

12

Ň

L

O

K

Í

6

Y

N

a

F

• Hormon, který snižuje glykémii se nazývá U G Y L P U Á
…………………………….. (7).
K
K
O
K
R
N
T
• Krev pro stanovení glukózy se odebírá
A
T
T
G
O
E
R
do nádobek s antiglykolytickým činidlem,
G
O
G
E
F
G
A
kterým je ……. (3 - vzorec).
•Jak se nazývá diagnostický funkční test
O
N
E
Z
I
E
E
pro diagnostiku diabetu mellitu a porušené N M M O L / L
glukózové tolerance? (4 – zkratka).
• Hladina glukózy v moči se nazývá …………………………..(10).
• Hormon, který zvyšuje glykémii se nazývá ……………………… (8).
• Test, kdy se stanovují glykémie několikrát během dne a popř.
i v noci se nazývá glykemický …………….. (6).
• Jednotky, v kterých se uvádí výsledky glykémie …………………… (6).
• Sumární vzorec glukózy ………………(6)
• Reakcí glukózy a GOD vzniká sloučenina ………………. ( 4 vzorec).
• Které buňky pankreatu produkují inzulín? (6)
• Zásoby glykogenu, jsou uloženy v orgánu, který se nazývá
………………………………. (5).


Slide 16

Zdravotnická škola, Hradec Králové
Stredná zdravotnícka škola, Bánská Bystrica

glukóza
klinicko-biochemická diagnostika
a metody stanovení

glukóza
monosacharid – aldohexóza
chemický vzorec: C6H12O6
zkratka:
Glc
-Dglukopyranóza

=
D-glukóza

D-glukóza

-Dglukopyranóza

glukóza
je nejdůležitější látkou metabolizmu
sacharidů, tvoří se trávením a konverzí
glykogenu v játrech
za fyziologických podmínek získává organizmus
glukózu:
potravou - přísun z vnějšího prostředí
glykogenolýzou – metabolická dráha konverze glykogenu
na glukózu (zásoby glykogenu jsou uložené hlavně
v játrech a příčně pruhovaných svalech)

glukoneogenezí - metabolická dráha syntézy glukózy
z necukernatých prekurzorů (pyruvát, laktát, aminokyseliny, meziprodukty citrátového cyklu, glycerol)

regulační systém metabolizmu glukózy
organizmus se snaží zachovat koncentraci glukózy
v krvi v úzkém rozmezí: 3,3 - 6,1 mmol/l
regulační systém:
nervová složka
hormonální složka
- inzulin
- glukagon
- adrenalin a noradrenalin
- glukokortikoidy
- růstový hormon
- hormony štítné žlázy...

poruchy v metabolizmu glukózy
glykemie, glukozemie, glukoplazmie - hladina glukózy v krvi
glykosurie - přítomnost glukózy v moči
porucha v metabolizmu se může projevit ve smyslu:
trvalého zvýšení  hladiny glukózy
- hyperglykemie
za hyperglykemii považujeme stavy, kdy koncentrace glukózy
na lačno je vyšší než horní hranice referenčního intervalu

nebo snížení  hladiny glukózy
- hypoglykemie
hypoglykemie je vážný stav, kdy koncentrace glukózy v krvi
klesne pod dolní hranici referenčního intervalu,
tj. pod 3,3 mmol/l, a je doprovázena klinickými projevy

klinicko-biochemická diagnostika
stanovení glukózy je základní biochemickou
informací o sacharidovém metabolizmu

účelem testu je:
screening diabetes mellitus

monitorování lékové nebo dietní terapie
u pacientů s DM
diagnostika při hypoglykemiích
monitorování energetického stavu a výživy hlavně
u intenzivně léčených pacientů

klinicko-biochemická diagnostika
stanovuje se:
náhodně naměřená glykemie
glykemie na lačno (FPG - Fasting Plasma Glucose)
glykemie po jídle
(postprandiální glykemie, pozátěžová glykemie )

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
glykemický profil

stanovení glukózy na lačno
nástroj laboratorní diagnózy DM
vyhledávání osob se zvýšeným rizikem DM

příprava pacienta:
odběr provádíme minimálně
po 8hodinovém lačnění,
vyloučit fyzickou námahu a kouření

odběr:
doporučuje se odebrat venózní krev
do odběrové nádobky
s antiglykolytickou směsí,
stanovit glukózu
ve stabilizované plazmě

předanalytické podmínky
pro stanovení glukózy na lačno

stabilizace antiglykolytickou směsí:
antiglykolytická směs obsahuje NaF (2,5 mg NaF/ml krve)
a protisrážlivé činidlo (např. heparin, EDTA...)
NaF stabilizuje glukózu ve vzorku blokací glykolýzy

!!! pokud není použité stabilizační činidlo, klesá bez oddělení
krevních elementů koncentrace glukózy
při pokojové teplotě za 1 hod. o 5 až 7 %

transport do laboratoře:

okamžitý

oddělení séra/plazmy od krevních elementů:
sérum/plazmu je potřeba oddělit od krevních elementů
do 60 minut od odběru

metody stanovení glukózy
neenzymové metody
oxidačně–redukční a kondenzační metody
jsou nejstarší metody stanovení
v současnosti se v klinické biochemii nepoužívají

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu (GOD) a peroxidázu (POD)
využívající enzym hexokinázu (HK)
využívající enzym glukózodehydrogenázu (GDH)

elektrochemické metody
hmotnostní spektrometrie
(ID-GC/MS – doporučená referenční metoda)

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu a peroxidázu

princip stanovení:
glukóza + O2

+ H 2O

GOD

glukonolakton

+ H 2 O2

na detekci vzniklého H2O2 se využívá reakce
katalyzované enzymem peroxidázou

H2O2 + 4-AAP+ fenol
redukovaný chromogen

POD

chinonimin

+ H 2O

oxidovaný chromogen

Trinderova reakce

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

činidla:
Enzymy lahvička 

pufer – chromogen lahvička 

peroxidáza

fosforečnanový tlumivý roztok

glukózooxidáza

3-methyl-fenol

4-aminoantipyrin

příprava pracovního roztoku
•

obsah lahvičky  se rozpustí v 6 ml destilované vody

•

vleje se do lahvičky  a promíchá se

stabilita: při +2-8 °C ve tmě 1 měsíc,

při +15-25 °C ve tmě 10 dní

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

postup analýzy:
vlnová délka (480-540 nm), s maximem při 498 nm
kyveta 1 cm
teplota +15-25 °C, nebo 37 ± 0,1 °C
ve třech zkumavkách se smíchá pracovní roztok v poměru 100 + 1
se sérem, plazmou (vzorkem), standardním roztokem glukózy (standard)
a s destilovanou vodou (reagenční blenk)
 vzorek (A1)

vzorek (sérum, plazma)

 standard (A2)

 reag. blenk

0,02 ml

standard

0,02 ml

dest. H2O

0,02 ml

pracovní roztok

2,0 ml

2,0 ml

2,0 ml

inkubace: (30 min při +15 až +25 °C nebo 15 min při 37 °C),
změří se absorbance vzorku (A1)
a standardu (A2) proti reagenčnímu blenku

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

metoda je aplikovatelná:
na manuální stanovení glukózy bez deproteinace
na manuální stanovení glukózy s deproteinací
na biochemické analyzátory

linearita: do 22,0 mmol/l
hodnoty přesahující horní hranici linearity
se ředí manuálně destilovanou vodou
a analýza se opakuje (výsledek x ředění)

interference:
hemolýza
chylozita
přítomnost redukujících látek
– kyselina askorbová, kyselina močová, bilirubin a jiné...

enzymové metody
využívající enzym hexokinázu

princip stanovení:
glukóza + ATP

hexokináza + Mg2+

glukóza-6-fosfát + ADP

glukóza-6-fosfát + NAD+

G-6-PDH

glukonát-6-fosfát + NADPH + H+

ATP: adenozintrifosfát
ADP: adenozindifosfát
G-6-PDH: glukóza-6-fosfátdehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

enzymové metody
využívající enzym glukózodehydrogenázu

princip stanovení:
glukóza + NAD+
GDH

glukonolakton

+ NADH + H+

GDH: glukózodehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

elektrochemické metody
princip stanovení je založen na:
enzymové reakci a ampérometrické detekci

produktů enzymové reakce

enzym glukózooxidáza je imobilizován na biosenzoru

vzniklý peroxid vodíku se detekuje a pomocí

převodníku převádí na elektrický signál

elektrochemické metody
vyšetření se provádí
na glukózových analyzátorech

výhodou je rychlost stanovení

na stanovení se může přímo použít
stabilizovaná kapilární krev,
bez předchozí úpravy vzorku
neinterferuje hemolýza

elektrochemické metody

glukóza + O2

glukózooxidáza

kyselina glukonová

+ H2O2
H2
elektrony

registrační
elektroda

O2

glukometry
sebekontrola diabetu

(SMBG – selfmonitoring of blood glucose)

domácí monitorování glykemie
různé typy glukometrů
odebírá se kapilární krev

pracují na principu přímého
elektrochemického stanovení
doporučuje se kontrola glukometrů
a spolupráce s OKB

algoritmus pro laboratorní screening DM
u dospělých
vyloučení
glukóza
postprandiální
(náhodný odběr)
+klinické příznaky
DM

< 5,6

< 11,1

≥ 11,1

doporučení ČDS a ČSKB
hodnoty glukózy jsou v mmol/l

glukóza
v plazmě
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

opakovat odběr
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

Diabetes mellitus
(DM)

< 7,0

≥ 5,6
a < 7,0

< 5,6l, ale
v anam. riziko
DM nebo IGT

oGTT-WHO
(zátěž 75g glukózy,
odběr žilní krve
na lačno a 2h
po zátěži)

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 11,1
2h po zátěži

Diabetes mellitus

hraniční
glukóza na lačno
(IFG)
glukóza v plazmě
žilní krve < 7,8
2h po zátěži

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 7,8
<11,1 2h po zátěži

porušená
glukózová tolerance
(IGT)

orální glukózo-toleranční test (oGTT)

je podpůrný diagnostický funkční test
pro diagnostiku DM
a porušené glukózové tolerance
(IGT – Impaired Glucose Tolerance)

sleduje se glykemie na lačno
a po zátěži glukózou,
opakovaně v určitých intervalech
za přesně definovaných podmínek

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
příprava pacienta:
3 dny před testem pacient konzumuje běžnou stravu
s dostatečným obsahem sacharidů (nejméně 150 g za den)
a normální fyzickou zátěží
test se provádí ráno po 10-14hodinovém lačnění
a fyzickém klidu bez alkoholu, kofeinu a nikotinu
doporučuje se vynechat léky, pokud je to
z klinického hlediska možné

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
provedení testu:
odebírá se venózní krev na lačno
a čeká se na výsledek glykemie

pokud je glykemie v rozmezí 5,6-6,9 mmol/l ,
oGTT se provede
pacient vypije během 5-10 minut 75 g glukózy
v 250-300 ml roztoku
další odběry venózní krve se provádějí
za 60 a 120 minut po vypití roztoku glukózy

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
diagnostická kritéria:
pro hodnotu glukózy v plazmě venózní krve 120 minut
po zátěži 75 g glukózy
vyloučení DM

< 7,8 mmol/l

porušená
glukózová tolerance (IGT )

≥ 7,8 mmol/l
až < 11,1 mmol/l

Diabetes mellitus

≥11,1 mmol/l

glykemie v mmol/l

12
11,1

11,1

10
8

7,8
6,7

6

6,7
5,6

4
2
0
0 minut

60 minut

čas

120 minut

180 minut

glykemický profil
několik stanovení glukózy v průběhu dne,

popřípadě i v noci odráží aktuální kompenzaci DM

glykemický profil zkrácený:
4 nebo 3 odběry
indikace: při DM I. a II. typu, při operacích diabetiků
nebo po porodu při DM II. typu,
pro posouzení kompenzace apod.

glykemický profil
glykemický profil úplný:
9 odběrů
indikace: je indikován při DM I. typu, při intenzivní terapii
nebo při inzulinové terapii, u gravidních diabetiček,
při těžké dekompenzaci DM všech typů,
po transplantaci pankreatu…

počet a přesné časování odběrů se v jednotlivých
diabetologických centrech liší
a závisí i na denním režimu nemocného

analýza glukózy se provádí v laboratořích, pokud pacient
je hospitalizovaný, nebo v domácích podmínkách
formou selfmonitoringu

glykemický profil
odběr materiálu:
nejčastěji se odebírá kapilární krev (z prstu) do odběrových nádob
určených na kapilární odběry s obsahem antiglykolytické směsi
(např. Sarstedt Multivette)

prevedení testu:
glykemický profil úplný
9 odběrů
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

1 hod. po snídani

3. vzorek

30 min. před obědem

4. vzorek

1 hod. po obědě

5. vzorek

30 min. před večeří

6. vzorek

1 hod. po večeři

7. vzorek

v 22.00 hod.

8. vzorek

v 01.00 hod.

9. vzorek

v 04.00 hod.

glykemický profil zkrácený
4 odběry
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

30 min. před obědem

3. vzorek

30 min. před večeří

4. vzorek

v 22.00 hod.

glykosurie
koncentrace glukózy v moči závisí
na hladině glukózy v krvi a na funkci ledvin
účel testu:
screening poruch glukózové tolerance
detekce poruch tubulární resorpce při poškození ledvin

stanovení glukózy v moči:
semikvantitativně – diagnostický proužek
kvantitativně
Poznámka:
semikvantitativní a kvantitativní stanovení glukózy v moči není
zařazené mezi základní nástroje na určení diagnózy diabetu ani
na sledovaní jeho stavu, protože individuální rozdíly ledvinného
prahu pro glukózu jsou dost velké a práh kolísá u každého jedince

• Játra přeměňují glukózu na ………. (8)
(též zásobní forma glukózy)

G

L

Y

K

O

S

U

R

I

E

L

L

2

O

2

H

J

I

C



N

6

B

Z

H

U

U

12

Ň

L

O

K

Í

6

Y

N

a

F

• Hormon, který snižuje glykémii se nazývá U G Y L P U Á
…………………………….. (7).
K
K
O
K
R
N
T
• Krev pro stanovení glukózy se odebírá
A
T
T
G
O
E
R
do nádobek s antiglykolytickým činidlem,
G
O
G
E
F
G
A
kterým je ……. (3 - vzorec).
•Jak se nazývá diagnostický funkční test
O
N
E
Z
I
E
E
pro diagnostiku diabetu mellitu a porušené N M M O L / L
glukózové tolerance? (4 – zkratka).
• Hladina glukózy v moči se nazývá …………………………..(10).
• Hormon, který zvyšuje glykémii se nazývá ……………………… (8).
• Test, kdy se stanovují glykémie několikrát během dne a popř.
i v noci se nazývá glykemický …………….. (6).
• Jednotky, v kterých se uvádí výsledky glykémie …………………… (6).
• Sumární vzorec glukózy ………………(6)
• Reakcí glukózy a GOD vzniká sloučenina ………………. ( 4 vzorec).
• Které buňky pankreatu produkují inzulín? (6)
• Zásoby glykogenu, jsou uloženy v orgánu, který se nazývá
………………………………. (5).


Slide 17

Zdravotnická škola, Hradec Králové
Stredná zdravotnícka škola, Bánská Bystrica

glukóza
klinicko-biochemická diagnostika
a metody stanovení

glukóza
monosacharid – aldohexóza
chemický vzorec: C6H12O6
zkratka:
Glc
-Dglukopyranóza

=
D-glukóza

D-glukóza

-Dglukopyranóza

glukóza
je nejdůležitější látkou metabolizmu
sacharidů, tvoří se trávením a konverzí
glykogenu v játrech
za fyziologických podmínek získává organizmus
glukózu:
potravou - přísun z vnějšího prostředí
glykogenolýzou – metabolická dráha konverze glykogenu
na glukózu (zásoby glykogenu jsou uložené hlavně
v játrech a příčně pruhovaných svalech)

glukoneogenezí - metabolická dráha syntézy glukózy
z necukernatých prekurzorů (pyruvát, laktát, aminokyseliny, meziprodukty citrátového cyklu, glycerol)

regulační systém metabolizmu glukózy
organizmus se snaží zachovat koncentraci glukózy
v krvi v úzkém rozmezí: 3,3 - 6,1 mmol/l
regulační systém:
nervová složka
hormonální složka
- inzulin
- glukagon
- adrenalin a noradrenalin
- glukokortikoidy
- růstový hormon
- hormony štítné žlázy...

poruchy v metabolizmu glukózy
glykemie, glukozemie, glukoplazmie - hladina glukózy v krvi
glykosurie - přítomnost glukózy v moči
porucha v metabolizmu se může projevit ve smyslu:
trvalého zvýšení  hladiny glukózy
- hyperglykemie
za hyperglykemii považujeme stavy, kdy koncentrace glukózy
na lačno je vyšší než horní hranice referenčního intervalu

nebo snížení  hladiny glukózy
- hypoglykemie
hypoglykemie je vážný stav, kdy koncentrace glukózy v krvi
klesne pod dolní hranici referenčního intervalu,
tj. pod 3,3 mmol/l, a je doprovázena klinickými projevy

klinicko-biochemická diagnostika
stanovení glukózy je základní biochemickou
informací o sacharidovém metabolizmu

účelem testu je:
screening diabetes mellitus

monitorování lékové nebo dietní terapie
u pacientů s DM
diagnostika při hypoglykemiích
monitorování energetického stavu a výživy hlavně
u intenzivně léčených pacientů

klinicko-biochemická diagnostika
stanovuje se:
náhodně naměřená glykemie
glykemie na lačno (FPG - Fasting Plasma Glucose)
glykemie po jídle
(postprandiální glykemie, pozátěžová glykemie )

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
glykemický profil

stanovení glukózy na lačno
nástroj laboratorní diagnózy DM
vyhledávání osob se zvýšeným rizikem DM

příprava pacienta:
odběr provádíme minimálně
po 8hodinovém lačnění,
vyloučit fyzickou námahu a kouření

odběr:
doporučuje se odebrat venózní krev
do odběrové nádobky
s antiglykolytickou směsí,
stanovit glukózu
ve stabilizované plazmě

předanalytické podmínky
pro stanovení glukózy na lačno

stabilizace antiglykolytickou směsí:
antiglykolytická směs obsahuje NaF (2,5 mg NaF/ml krve)
a protisrážlivé činidlo (např. heparin, EDTA...)
NaF stabilizuje glukózu ve vzorku blokací glykolýzy

!!! pokud není použité stabilizační činidlo, klesá bez oddělení
krevních elementů koncentrace glukózy
při pokojové teplotě za 1 hod. o 5 až 7 %

transport do laboratoře:

okamžitý

oddělení séra/plazmy od krevních elementů:
sérum/plazmu je potřeba oddělit od krevních elementů
do 60 minut od odběru

metody stanovení glukózy
neenzymové metody
oxidačně–redukční a kondenzační metody
jsou nejstarší metody stanovení
v současnosti se v klinické biochemii nepoužívají

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu (GOD) a peroxidázu (POD)
využívající enzym hexokinázu (HK)
využívající enzym glukózodehydrogenázu (GDH)

elektrochemické metody
hmotnostní spektrometrie
(ID-GC/MS – doporučená referenční metoda)

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu a peroxidázu

princip stanovení:
glukóza + O2

+ H 2O

GOD

glukonolakton

+ H 2 O2

na detekci vzniklého H2O2 se využívá reakce
katalyzované enzymem peroxidázou

H2O2 + 4-AAP+ fenol
redukovaný chromogen

POD

chinonimin

+ H 2O

oxidovaný chromogen

Trinderova reakce

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

činidla:
Enzymy lahvička 

pufer – chromogen lahvička 

peroxidáza

fosforečnanový tlumivý roztok

glukózooxidáza

3-methyl-fenol

4-aminoantipyrin

příprava pracovního roztoku
•

obsah lahvičky  se rozpustí v 6 ml destilované vody

•

vleje se do lahvičky  a promíchá se

stabilita: při +2-8 °C ve tmě 1 měsíc,

při +15-25 °C ve tmě 10 dní

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

postup analýzy:
vlnová délka (480-540 nm), s maximem při 498 nm
kyveta 1 cm
teplota +15-25 °C, nebo 37 ± 0,1 °C
ve třech zkumavkách se smíchá pracovní roztok v poměru 100 + 1
se sérem, plazmou (vzorkem), standardním roztokem glukózy (standard)
a s destilovanou vodou (reagenční blenk)
 vzorek (A1)

vzorek (sérum, plazma)

 standard (A2)

 reag. blenk

0,02 ml

standard

0,02 ml

dest. H2O

0,02 ml

pracovní roztok

2,0 ml

2,0 ml

2,0 ml

inkubace: (30 min při +15 až +25 °C nebo 15 min při 37 °C),
změří se absorbance vzorku (A1)
a standardu (A2) proti reagenčnímu blenku

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

metoda je aplikovatelná:
na manuální stanovení glukózy bez deproteinace
na manuální stanovení glukózy s deproteinací
na biochemické analyzátory

linearita: do 22,0 mmol/l
hodnoty přesahující horní hranici linearity
se ředí manuálně destilovanou vodou
a analýza se opakuje (výsledek x ředění)

interference:
hemolýza
chylozita
přítomnost redukujících látek
– kyselina askorbová, kyselina močová, bilirubin a jiné...

enzymové metody
využívající enzym hexokinázu

princip stanovení:
glukóza + ATP

hexokináza + Mg2+

glukóza-6-fosfát + ADP

glukóza-6-fosfát + NAD+

G-6-PDH

glukonát-6-fosfát + NADPH + H+

ATP: adenozintrifosfát
ADP: adenozindifosfát
G-6-PDH: glukóza-6-fosfátdehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

enzymové metody
využívající enzym glukózodehydrogenázu

princip stanovení:
glukóza + NAD+
GDH

glukonolakton

+ NADH + H+

GDH: glukózodehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

elektrochemické metody
princip stanovení je založen na:
enzymové reakci a ampérometrické detekci

produktů enzymové reakce

enzym glukózooxidáza je imobilizován na biosenzoru

vzniklý peroxid vodíku se detekuje a pomocí

převodníku převádí na elektrický signál

elektrochemické metody
vyšetření se provádí
na glukózových analyzátorech

výhodou je rychlost stanovení

na stanovení se může přímo použít
stabilizovaná kapilární krev,
bez předchozí úpravy vzorku
neinterferuje hemolýza

elektrochemické metody

glukóza + O2

glukózooxidáza

kyselina glukonová

+ H2O2
H2
elektrony

registrační
elektroda

O2

glukometry
sebekontrola diabetu

(SMBG – selfmonitoring of blood glucose)

domácí monitorování glykemie
různé typy glukometrů
odebírá se kapilární krev

pracují na principu přímého
elektrochemického stanovení
doporučuje se kontrola glukometrů
a spolupráce s OKB

algoritmus pro laboratorní screening DM
u dospělých
vyloučení
glukóza
postprandiální
(náhodný odběr)
+klinické příznaky
DM

< 5,6

< 11,1

≥ 11,1

doporučení ČDS a ČSKB
hodnoty glukózy jsou v mmol/l

glukóza
v plazmě
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

opakovat odběr
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

Diabetes mellitus
(DM)

< 7,0

≥ 5,6
a < 7,0

< 5,6l, ale
v anam. riziko
DM nebo IGT

oGTT-WHO
(zátěž 75g glukózy,
odběr žilní krve
na lačno a 2h
po zátěži)

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 11,1
2h po zátěži

Diabetes mellitus

hraniční
glukóza na lačno
(IFG)
glukóza v plazmě
žilní krve < 7,8
2h po zátěži

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 7,8
<11,1 2h po zátěži

porušená
glukózová tolerance
(IGT)

orální glukózo-toleranční test (oGTT)

je podpůrný diagnostický funkční test
pro diagnostiku DM
a porušené glukózové tolerance
(IGT – Impaired Glucose Tolerance)

sleduje se glykemie na lačno
a po zátěži glukózou,
opakovaně v určitých intervalech
za přesně definovaných podmínek

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
příprava pacienta:
3 dny před testem pacient konzumuje běžnou stravu
s dostatečným obsahem sacharidů (nejméně 150 g za den)
a normální fyzickou zátěží
test se provádí ráno po 10-14hodinovém lačnění
a fyzickém klidu bez alkoholu, kofeinu a nikotinu
doporučuje se vynechat léky, pokud je to
z klinického hlediska možné

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
provedení testu:
odebírá se venózní krev na lačno
a čeká se na výsledek glykemie

pokud je glykemie v rozmezí 5,6-6,9 mmol/l ,
oGTT se provede
pacient vypije během 5-10 minut 75 g glukózy
v 250-300 ml roztoku
další odběry venózní krve se provádějí
za 60 a 120 minut po vypití roztoku glukózy

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
diagnostická kritéria:
pro hodnotu glukózy v plazmě venózní krve 120 minut
po zátěži 75 g glukózy
vyloučení DM

< 7,8 mmol/l

porušená
glukózová tolerance (IGT )

≥ 7,8 mmol/l
až < 11,1 mmol/l

Diabetes mellitus

≥11,1 mmol/l

glykemie v mmol/l

12
11,1

11,1

10
8

7,8
6,7

6

6,7
5,6

4
2
0
0 minut

60 minut

čas

120 minut

180 minut

glykemický profil
několik stanovení glukózy v průběhu dne,

popřípadě i v noci odráží aktuální kompenzaci DM

glykemický profil zkrácený:
4 nebo 3 odběry
indikace: při DM I. a II. typu, při operacích diabetiků
nebo po porodu při DM II. typu,
pro posouzení kompenzace apod.

glykemický profil
glykemický profil úplný:
9 odběrů
indikace: je indikován při DM I. typu, při intenzivní terapii
nebo při inzulinové terapii, u gravidních diabetiček,
při těžké dekompenzaci DM všech typů,
po transplantaci pankreatu…

počet a přesné časování odběrů se v jednotlivých
diabetologických centrech liší
a závisí i na denním režimu nemocného

analýza glukózy se provádí v laboratořích, pokud pacient
je hospitalizovaný, nebo v domácích podmínkách
formou selfmonitoringu

glykemický profil
odběr materiálu:
nejčastěji se odebírá kapilární krev (z prstu) do odběrových nádob
určených na kapilární odběry s obsahem antiglykolytické směsi
(např. Sarstedt Multivette)

prevedení testu:
glykemický profil úplný
9 odběrů
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

1 hod. po snídani

3. vzorek

30 min. před obědem

4. vzorek

1 hod. po obědě

5. vzorek

30 min. před večeří

6. vzorek

1 hod. po večeři

7. vzorek

v 22.00 hod.

8. vzorek

v 01.00 hod.

9. vzorek

v 04.00 hod.

glykemický profil zkrácený
4 odběry
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

30 min. před obědem

3. vzorek

30 min. před večeří

4. vzorek

v 22.00 hod.

glykosurie
koncentrace glukózy v moči závisí
na hladině glukózy v krvi a na funkci ledvin
účel testu:
screening poruch glukózové tolerance
detekce poruch tubulární resorpce při poškození ledvin

stanovení glukózy v moči:
semikvantitativně – diagnostický proužek
kvantitativně
Poznámka:
semikvantitativní a kvantitativní stanovení glukózy v moči není
zařazené mezi základní nástroje na určení diagnózy diabetu ani
na sledovaní jeho stavu, protože individuální rozdíly ledvinného
prahu pro glukózu jsou dost velké a práh kolísá u každého jedince

• Játra přeměňují glukózu na ………. (8)
(též zásobní forma glukózy)

G

L

Y

K

O

S

U

R

I

E

L

L

2

O

2

H

J

I

C



N

6

B

Z

H

U

U

12

Ň

L

O

K

Í

6

Y

N

a

F

• Hormon, který snižuje glykémii se nazývá U G Y L P U Á
…………………………….. (7).
K
K
O
K
R
N
T
• Krev pro stanovení glukózy se odebírá
A
T
T
G
O
E
R
do nádobek s antiglykolytickým činidlem,
G
O
G
E
F
G
A
kterým je ……. (3 - vzorec).
•Jak se nazývá diagnostický funkční test
O
N
E
Z
I
E
E
pro diagnostiku diabetu mellitu a porušené N M M O L / L
glukózové tolerance? (4 – zkratka).
• Hladina glukózy v moči se nazývá …………………………..(10).
• Hormon, který zvyšuje glykémii se nazývá ……………………… (8).
• Test, kdy se stanovují glykémie několikrát během dne a popř.
i v noci se nazývá glykemický …………….. (6).
• Jednotky, v kterých se uvádí výsledky glykémie …………………… (6).
• Sumární vzorec glukózy ………………(6)
• Reakcí glukózy a GOD vzniká sloučenina ………………. ( 4 vzorec).
• Které buňky pankreatu produkují inzulín? (6)
• Zásoby glykogenu, jsou uloženy v orgánu, který se nazývá
………………………………. (5).


Slide 18

Zdravotnická škola, Hradec Králové
Stredná zdravotnícka škola, Bánská Bystrica

glukóza
klinicko-biochemická diagnostika
a metody stanovení

glukóza
monosacharid – aldohexóza
chemický vzorec: C6H12O6
zkratka:
Glc
-Dglukopyranóza

=
D-glukóza

D-glukóza

-Dglukopyranóza

glukóza
je nejdůležitější látkou metabolizmu
sacharidů, tvoří se trávením a konverzí
glykogenu v játrech
za fyziologických podmínek získává organizmus
glukózu:
potravou - přísun z vnějšího prostředí
glykogenolýzou – metabolická dráha konverze glykogenu
na glukózu (zásoby glykogenu jsou uložené hlavně
v játrech a příčně pruhovaných svalech)

glukoneogenezí - metabolická dráha syntézy glukózy
z necukernatých prekurzorů (pyruvát, laktát, aminokyseliny, meziprodukty citrátového cyklu, glycerol)

regulační systém metabolizmu glukózy
organizmus se snaží zachovat koncentraci glukózy
v krvi v úzkém rozmezí: 3,3 - 6,1 mmol/l
regulační systém:
nervová složka
hormonální složka
- inzulin
- glukagon
- adrenalin a noradrenalin
- glukokortikoidy
- růstový hormon
- hormony štítné žlázy...

poruchy v metabolizmu glukózy
glykemie, glukozemie, glukoplazmie - hladina glukózy v krvi
glykosurie - přítomnost glukózy v moči
porucha v metabolizmu se může projevit ve smyslu:
trvalého zvýšení  hladiny glukózy
- hyperglykemie
za hyperglykemii považujeme stavy, kdy koncentrace glukózy
na lačno je vyšší než horní hranice referenčního intervalu

nebo snížení  hladiny glukózy
- hypoglykemie
hypoglykemie je vážný stav, kdy koncentrace glukózy v krvi
klesne pod dolní hranici referenčního intervalu,
tj. pod 3,3 mmol/l, a je doprovázena klinickými projevy

klinicko-biochemická diagnostika
stanovení glukózy je základní biochemickou
informací o sacharidovém metabolizmu

účelem testu je:
screening diabetes mellitus

monitorování lékové nebo dietní terapie
u pacientů s DM
diagnostika při hypoglykemiích
monitorování energetického stavu a výživy hlavně
u intenzivně léčených pacientů

klinicko-biochemická diagnostika
stanovuje se:
náhodně naměřená glykemie
glykemie na lačno (FPG - Fasting Plasma Glucose)
glykemie po jídle
(postprandiální glykemie, pozátěžová glykemie )

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
glykemický profil

stanovení glukózy na lačno
nástroj laboratorní diagnózy DM
vyhledávání osob se zvýšeným rizikem DM

příprava pacienta:
odběr provádíme minimálně
po 8hodinovém lačnění,
vyloučit fyzickou námahu a kouření

odběr:
doporučuje se odebrat venózní krev
do odběrové nádobky
s antiglykolytickou směsí,
stanovit glukózu
ve stabilizované plazmě

předanalytické podmínky
pro stanovení glukózy na lačno

stabilizace antiglykolytickou směsí:
antiglykolytická směs obsahuje NaF (2,5 mg NaF/ml krve)
a protisrážlivé činidlo (např. heparin, EDTA...)
NaF stabilizuje glukózu ve vzorku blokací glykolýzy

!!! pokud není použité stabilizační činidlo, klesá bez oddělení
krevních elementů koncentrace glukózy
při pokojové teplotě za 1 hod. o 5 až 7 %

transport do laboratoře:

okamžitý

oddělení séra/plazmy od krevních elementů:
sérum/plazmu je potřeba oddělit od krevních elementů
do 60 minut od odběru

metody stanovení glukózy
neenzymové metody
oxidačně–redukční a kondenzační metody
jsou nejstarší metody stanovení
v současnosti se v klinické biochemii nepoužívají

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu (GOD) a peroxidázu (POD)
využívající enzym hexokinázu (HK)
využívající enzym glukózodehydrogenázu (GDH)

elektrochemické metody
hmotnostní spektrometrie
(ID-GC/MS – doporučená referenční metoda)

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu a peroxidázu

princip stanovení:
glukóza + O2

+ H 2O

GOD

glukonolakton

+ H 2 O2

na detekci vzniklého H2O2 se využívá reakce
katalyzované enzymem peroxidázou

H2O2 + 4-AAP+ fenol
redukovaný chromogen

POD

chinonimin

+ H 2O

oxidovaný chromogen

Trinderova reakce

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

činidla:
Enzymy lahvička 

pufer – chromogen lahvička 

peroxidáza

fosforečnanový tlumivý roztok

glukózooxidáza

3-methyl-fenol

4-aminoantipyrin

příprava pracovního roztoku
•

obsah lahvičky  se rozpustí v 6 ml destilované vody

•

vleje se do lahvičky  a promíchá se

stabilita: při +2-8 °C ve tmě 1 měsíc,

při +15-25 °C ve tmě 10 dní

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

postup analýzy:
vlnová délka (480-540 nm), s maximem při 498 nm
kyveta 1 cm
teplota +15-25 °C, nebo 37 ± 0,1 °C
ve třech zkumavkách se smíchá pracovní roztok v poměru 100 + 1
se sérem, plazmou (vzorkem), standardním roztokem glukózy (standard)
a s destilovanou vodou (reagenční blenk)
 vzorek (A1)

vzorek (sérum, plazma)

 standard (A2)

 reag. blenk

0,02 ml

standard

0,02 ml

dest. H2O

0,02 ml

pracovní roztok

2,0 ml

2,0 ml

2,0 ml

inkubace: (30 min při +15 až +25 °C nebo 15 min při 37 °C),
změří se absorbance vzorku (A1)
a standardu (A2) proti reagenčnímu blenku

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

metoda je aplikovatelná:
na manuální stanovení glukózy bez deproteinace
na manuální stanovení glukózy s deproteinací
na biochemické analyzátory

linearita: do 22,0 mmol/l
hodnoty přesahující horní hranici linearity
se ředí manuálně destilovanou vodou
a analýza se opakuje (výsledek x ředění)

interference:
hemolýza
chylozita
přítomnost redukujících látek
– kyselina askorbová, kyselina močová, bilirubin a jiné...

enzymové metody
využívající enzym hexokinázu

princip stanovení:
glukóza + ATP

hexokináza + Mg2+

glukóza-6-fosfát + ADP

glukóza-6-fosfát + NAD+

G-6-PDH

glukonát-6-fosfát + NADPH + H+

ATP: adenozintrifosfát
ADP: adenozindifosfát
G-6-PDH: glukóza-6-fosfátdehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

enzymové metody
využívající enzym glukózodehydrogenázu

princip stanovení:
glukóza + NAD+
GDH

glukonolakton

+ NADH + H+

GDH: glukózodehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

elektrochemické metody
princip stanovení je založen na:
enzymové reakci a ampérometrické detekci

produktů enzymové reakce

enzym glukózooxidáza je imobilizován na biosenzoru

vzniklý peroxid vodíku se detekuje a pomocí

převodníku převádí na elektrický signál

elektrochemické metody
vyšetření se provádí
na glukózových analyzátorech

výhodou je rychlost stanovení

na stanovení se může přímo použít
stabilizovaná kapilární krev,
bez předchozí úpravy vzorku
neinterferuje hemolýza

elektrochemické metody

glukóza + O2

glukózooxidáza

kyselina glukonová

+ H2O2
H2
elektrony

registrační
elektroda

O2

glukometry
sebekontrola diabetu

(SMBG – selfmonitoring of blood glucose)

domácí monitorování glykemie
různé typy glukometrů
odebírá se kapilární krev

pracují na principu přímého
elektrochemického stanovení
doporučuje se kontrola glukometrů
a spolupráce s OKB

algoritmus pro laboratorní screening DM
u dospělých
vyloučení
glukóza
postprandiální
(náhodný odběr)
+klinické příznaky
DM

< 5,6

< 11,1

≥ 11,1

doporučení ČDS a ČSKB
hodnoty glukózy jsou v mmol/l

glukóza
v plazmě
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

opakovat odběr
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

Diabetes mellitus
(DM)

< 7,0

≥ 5,6
a < 7,0

< 5,6l, ale
v anam. riziko
DM nebo IGT

oGTT-WHO
(zátěž 75g glukózy,
odběr žilní krve
na lačno a 2h
po zátěži)

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 11,1
2h po zátěži

Diabetes mellitus

hraniční
glukóza na lačno
(IFG)
glukóza v plazmě
žilní krve < 7,8
2h po zátěži

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 7,8
<11,1 2h po zátěži

porušená
glukózová tolerance
(IGT)

orální glukózo-toleranční test (oGTT)

je podpůrný diagnostický funkční test
pro diagnostiku DM
a porušené glukózové tolerance
(IGT – Impaired Glucose Tolerance)

sleduje se glykemie na lačno
a po zátěži glukózou,
opakovaně v určitých intervalech
za přesně definovaných podmínek

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
příprava pacienta:
3 dny před testem pacient konzumuje běžnou stravu
s dostatečným obsahem sacharidů (nejméně 150 g za den)
a normální fyzickou zátěží
test se provádí ráno po 10-14hodinovém lačnění
a fyzickém klidu bez alkoholu, kofeinu a nikotinu
doporučuje se vynechat léky, pokud je to
z klinického hlediska možné

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
provedení testu:
odebírá se venózní krev na lačno
a čeká se na výsledek glykemie

pokud je glykemie v rozmezí 5,6-6,9 mmol/l ,
oGTT se provede
pacient vypije během 5-10 minut 75 g glukózy
v 250-300 ml roztoku
další odběry venózní krve se provádějí
za 60 a 120 minut po vypití roztoku glukózy

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
diagnostická kritéria:
pro hodnotu glukózy v plazmě venózní krve 120 minut
po zátěži 75 g glukózy
vyloučení DM

< 7,8 mmol/l

porušená
glukózová tolerance (IGT )

≥ 7,8 mmol/l
až < 11,1 mmol/l

Diabetes mellitus

≥11,1 mmol/l

glykemie v mmol/l

12
11,1

11,1

10
8

7,8
6,7

6

6,7
5,6

4
2
0
0 minut

60 minut

čas

120 minut

180 minut

glykemický profil
několik stanovení glukózy v průběhu dne,

popřípadě i v noci odráží aktuální kompenzaci DM

glykemický profil zkrácený:
4 nebo 3 odběry
indikace: při DM I. a II. typu, při operacích diabetiků
nebo po porodu při DM II. typu,
pro posouzení kompenzace apod.

glykemický profil
glykemický profil úplný:
9 odběrů
indikace: je indikován při DM I. typu, při intenzivní terapii
nebo při inzulinové terapii, u gravidních diabetiček,
při těžké dekompenzaci DM všech typů,
po transplantaci pankreatu…

počet a přesné časování odběrů se v jednotlivých
diabetologických centrech liší
a závisí i na denním režimu nemocného

analýza glukózy se provádí v laboratořích, pokud pacient
je hospitalizovaný, nebo v domácích podmínkách
formou selfmonitoringu

glykemický profil
odběr materiálu:
nejčastěji se odebírá kapilární krev (z prstu) do odběrových nádob
určených na kapilární odběry s obsahem antiglykolytické směsi
(např. Sarstedt Multivette)

prevedení testu:
glykemický profil úplný
9 odběrů
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

1 hod. po snídani

3. vzorek

30 min. před obědem

4. vzorek

1 hod. po obědě

5. vzorek

30 min. před večeří

6. vzorek

1 hod. po večeři

7. vzorek

v 22.00 hod.

8. vzorek

v 01.00 hod.

9. vzorek

v 04.00 hod.

glykemický profil zkrácený
4 odběry
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

30 min. před obědem

3. vzorek

30 min. před večeří

4. vzorek

v 22.00 hod.

glykosurie
koncentrace glukózy v moči závisí
na hladině glukózy v krvi a na funkci ledvin
účel testu:
screening poruch glukózové tolerance
detekce poruch tubulární resorpce při poškození ledvin

stanovení glukózy v moči:
semikvantitativně – diagnostický proužek
kvantitativně
Poznámka:
semikvantitativní a kvantitativní stanovení glukózy v moči není
zařazené mezi základní nástroje na určení diagnózy diabetu ani
na sledovaní jeho stavu, protože individuální rozdíly ledvinného
prahu pro glukózu jsou dost velké a práh kolísá u každého jedince

• Játra přeměňují glukózu na ………. (8)
(též zásobní forma glukózy)

G

L

Y

K

O

S

U

R

I

E

L

L

2

O

2

H

J

I

C



N

6

B

Z

H

U

U

12

Ň

L

O

K

Í

6

Y

N

a

F

• Hormon, který snižuje glykémii se nazývá U G Y L P U Á
…………………………….. (7).
K
K
O
K
R
N
T
• Krev pro stanovení glukózy se odebírá
A
T
T
G
O
E
R
do nádobek s antiglykolytickým činidlem,
G
O
G
E
F
G
A
kterým je ……. (3 - vzorec).
•Jak se nazývá diagnostický funkční test
O
N
E
Z
I
E
E
pro diagnostiku diabetu mellitu a porušené N M M O L / L
glukózové tolerance? (4 – zkratka).
• Hladina glukózy v moči se nazývá …………………………..(10).
• Hormon, který zvyšuje glykémii se nazývá ……………………… (8).
• Test, kdy se stanovují glykémie několikrát během dne a popř.
i v noci se nazývá glykemický …………….. (6).
• Jednotky, v kterých se uvádí výsledky glykémie …………………… (6).
• Sumární vzorec glukózy ………………(6)
• Reakcí glukózy a GOD vzniká sloučenina ………………. ( 4 vzorec).
• Které buňky pankreatu produkují inzulín? (6)
• Zásoby glykogenu, jsou uloženy v orgánu, který se nazývá
………………………………. (5).


Slide 19

Zdravotnická škola, Hradec Králové
Stredná zdravotnícka škola, Bánská Bystrica

glukóza
klinicko-biochemická diagnostika
a metody stanovení

glukóza
monosacharid – aldohexóza
chemický vzorec: C6H12O6
zkratka:
Glc
-Dglukopyranóza

=
D-glukóza

D-glukóza

-Dglukopyranóza

glukóza
je nejdůležitější látkou metabolizmu
sacharidů, tvoří se trávením a konverzí
glykogenu v játrech
za fyziologických podmínek získává organizmus
glukózu:
potravou - přísun z vnějšího prostředí
glykogenolýzou – metabolická dráha konverze glykogenu
na glukózu (zásoby glykogenu jsou uložené hlavně
v játrech a příčně pruhovaných svalech)

glukoneogenezí - metabolická dráha syntézy glukózy
z necukernatých prekurzorů (pyruvát, laktát, aminokyseliny, meziprodukty citrátového cyklu, glycerol)

regulační systém metabolizmu glukózy
organizmus se snaží zachovat koncentraci glukózy
v krvi v úzkém rozmezí: 3,3 - 6,1 mmol/l
regulační systém:
nervová složka
hormonální složka
- inzulin
- glukagon
- adrenalin a noradrenalin
- glukokortikoidy
- růstový hormon
- hormony štítné žlázy...

poruchy v metabolizmu glukózy
glykemie, glukozemie, glukoplazmie - hladina glukózy v krvi
glykosurie - přítomnost glukózy v moči
porucha v metabolizmu se může projevit ve smyslu:
trvalého zvýšení  hladiny glukózy
- hyperglykemie
za hyperglykemii považujeme stavy, kdy koncentrace glukózy
na lačno je vyšší než horní hranice referenčního intervalu

nebo snížení  hladiny glukózy
- hypoglykemie
hypoglykemie je vážný stav, kdy koncentrace glukózy v krvi
klesne pod dolní hranici referenčního intervalu,
tj. pod 3,3 mmol/l, a je doprovázena klinickými projevy

klinicko-biochemická diagnostika
stanovení glukózy je základní biochemickou
informací o sacharidovém metabolizmu

účelem testu je:
screening diabetes mellitus

monitorování lékové nebo dietní terapie
u pacientů s DM
diagnostika při hypoglykemiích
monitorování energetického stavu a výživy hlavně
u intenzivně léčených pacientů

klinicko-biochemická diagnostika
stanovuje se:
náhodně naměřená glykemie
glykemie na lačno (FPG - Fasting Plasma Glucose)
glykemie po jídle
(postprandiální glykemie, pozátěžová glykemie )

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
glykemický profil

stanovení glukózy na lačno
nástroj laboratorní diagnózy DM
vyhledávání osob se zvýšeným rizikem DM

příprava pacienta:
odběr provádíme minimálně
po 8hodinovém lačnění,
vyloučit fyzickou námahu a kouření

odběr:
doporučuje se odebrat venózní krev
do odběrové nádobky
s antiglykolytickou směsí,
stanovit glukózu
ve stabilizované plazmě

předanalytické podmínky
pro stanovení glukózy na lačno

stabilizace antiglykolytickou směsí:
antiglykolytická směs obsahuje NaF (2,5 mg NaF/ml krve)
a protisrážlivé činidlo (např. heparin, EDTA...)
NaF stabilizuje glukózu ve vzorku blokací glykolýzy

!!! pokud není použité stabilizační činidlo, klesá bez oddělení
krevních elementů koncentrace glukózy
při pokojové teplotě za 1 hod. o 5 až 7 %

transport do laboratoře:

okamžitý

oddělení séra/plazmy od krevních elementů:
sérum/plazmu je potřeba oddělit od krevních elementů
do 60 minut od odběru

metody stanovení glukózy
neenzymové metody
oxidačně–redukční a kondenzační metody
jsou nejstarší metody stanovení
v současnosti se v klinické biochemii nepoužívají

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu (GOD) a peroxidázu (POD)
využívající enzym hexokinázu (HK)
využívající enzym glukózodehydrogenázu (GDH)

elektrochemické metody
hmotnostní spektrometrie
(ID-GC/MS – doporučená referenční metoda)

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu a peroxidázu

princip stanovení:
glukóza + O2

+ H 2O

GOD

glukonolakton

+ H 2 O2

na detekci vzniklého H2O2 se využívá reakce
katalyzované enzymem peroxidázou

H2O2 + 4-AAP+ fenol
redukovaný chromogen

POD

chinonimin

+ H 2O

oxidovaný chromogen

Trinderova reakce

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

činidla:
Enzymy lahvička 

pufer – chromogen lahvička 

peroxidáza

fosforečnanový tlumivý roztok

glukózooxidáza

3-methyl-fenol

4-aminoantipyrin

příprava pracovního roztoku
•

obsah lahvičky  se rozpustí v 6 ml destilované vody

•

vleje se do lahvičky  a promíchá se

stabilita: při +2-8 °C ve tmě 1 měsíc,

při +15-25 °C ve tmě 10 dní

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

postup analýzy:
vlnová délka (480-540 nm), s maximem při 498 nm
kyveta 1 cm
teplota +15-25 °C, nebo 37 ± 0,1 °C
ve třech zkumavkách se smíchá pracovní roztok v poměru 100 + 1
se sérem, plazmou (vzorkem), standardním roztokem glukózy (standard)
a s destilovanou vodou (reagenční blenk)
 vzorek (A1)

vzorek (sérum, plazma)

 standard (A2)

 reag. blenk

0,02 ml

standard

0,02 ml

dest. H2O

0,02 ml

pracovní roztok

2,0 ml

2,0 ml

2,0 ml

inkubace: (30 min při +15 až +25 °C nebo 15 min při 37 °C),
změří se absorbance vzorku (A1)
a standardu (A2) proti reagenčnímu blenku

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

metoda je aplikovatelná:
na manuální stanovení glukózy bez deproteinace
na manuální stanovení glukózy s deproteinací
na biochemické analyzátory

linearita: do 22,0 mmol/l
hodnoty přesahující horní hranici linearity
se ředí manuálně destilovanou vodou
a analýza se opakuje (výsledek x ředění)

interference:
hemolýza
chylozita
přítomnost redukujících látek
– kyselina askorbová, kyselina močová, bilirubin a jiné...

enzymové metody
využívající enzym hexokinázu

princip stanovení:
glukóza + ATP

hexokináza + Mg2+

glukóza-6-fosfát + ADP

glukóza-6-fosfát + NAD+

G-6-PDH

glukonát-6-fosfát + NADPH + H+

ATP: adenozintrifosfát
ADP: adenozindifosfát
G-6-PDH: glukóza-6-fosfátdehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

enzymové metody
využívající enzym glukózodehydrogenázu

princip stanovení:
glukóza + NAD+
GDH

glukonolakton

+ NADH + H+

GDH: glukózodehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

elektrochemické metody
princip stanovení je založen na:
enzymové reakci a ampérometrické detekci

produktů enzymové reakce

enzym glukózooxidáza je imobilizován na biosenzoru

vzniklý peroxid vodíku se detekuje a pomocí

převodníku převádí na elektrický signál

elektrochemické metody
vyšetření se provádí
na glukózových analyzátorech

výhodou je rychlost stanovení

na stanovení se může přímo použít
stabilizovaná kapilární krev,
bez předchozí úpravy vzorku
neinterferuje hemolýza

elektrochemické metody

glukóza + O2

glukózooxidáza

kyselina glukonová

+ H2O2
H2
elektrony

registrační
elektroda

O2

glukometry
sebekontrola diabetu

(SMBG – selfmonitoring of blood glucose)

domácí monitorování glykemie
různé typy glukometrů
odebírá se kapilární krev

pracují na principu přímého
elektrochemického stanovení
doporučuje se kontrola glukometrů
a spolupráce s OKB

algoritmus pro laboratorní screening DM
u dospělých
vyloučení
glukóza
postprandiální
(náhodný odběr)
+klinické příznaky
DM

< 5,6

< 11,1

≥ 11,1

doporučení ČDS a ČSKB
hodnoty glukózy jsou v mmol/l

glukóza
v plazmě
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

opakovat odběr
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

Diabetes mellitus
(DM)

< 7,0

≥ 5,6
a < 7,0

< 5,6l, ale
v anam. riziko
DM nebo IGT

oGTT-WHO
(zátěž 75g glukózy,
odběr žilní krve
na lačno a 2h
po zátěži)

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 11,1
2h po zátěži

Diabetes mellitus

hraniční
glukóza na lačno
(IFG)
glukóza v plazmě
žilní krve < 7,8
2h po zátěži

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 7,8
<11,1 2h po zátěži

porušená
glukózová tolerance
(IGT)

orální glukózo-toleranční test (oGTT)

je podpůrný diagnostický funkční test
pro diagnostiku DM
a porušené glukózové tolerance
(IGT – Impaired Glucose Tolerance)

sleduje se glykemie na lačno
a po zátěži glukózou,
opakovaně v určitých intervalech
za přesně definovaných podmínek

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
příprava pacienta:
3 dny před testem pacient konzumuje běžnou stravu
s dostatečným obsahem sacharidů (nejméně 150 g za den)
a normální fyzickou zátěží
test se provádí ráno po 10-14hodinovém lačnění
a fyzickém klidu bez alkoholu, kofeinu a nikotinu
doporučuje se vynechat léky, pokud je to
z klinického hlediska možné

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
provedení testu:
odebírá se venózní krev na lačno
a čeká se na výsledek glykemie

pokud je glykemie v rozmezí 5,6-6,9 mmol/l ,
oGTT se provede
pacient vypije během 5-10 minut 75 g glukózy
v 250-300 ml roztoku
další odběry venózní krve se provádějí
za 60 a 120 minut po vypití roztoku glukózy

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
diagnostická kritéria:
pro hodnotu glukózy v plazmě venózní krve 120 minut
po zátěži 75 g glukózy
vyloučení DM

< 7,8 mmol/l

porušená
glukózová tolerance (IGT )

≥ 7,8 mmol/l
až < 11,1 mmol/l

Diabetes mellitus

≥11,1 mmol/l

glykemie v mmol/l

12
11,1

11,1

10
8

7,8
6,7

6

6,7
5,6

4
2
0
0 minut

60 minut

čas

120 minut

180 minut

glykemický profil
několik stanovení glukózy v průběhu dne,

popřípadě i v noci odráží aktuální kompenzaci DM

glykemický profil zkrácený:
4 nebo 3 odběry
indikace: při DM I. a II. typu, při operacích diabetiků
nebo po porodu při DM II. typu,
pro posouzení kompenzace apod.

glykemický profil
glykemický profil úplný:
9 odběrů
indikace: je indikován při DM I. typu, při intenzivní terapii
nebo při inzulinové terapii, u gravidních diabetiček,
při těžké dekompenzaci DM všech typů,
po transplantaci pankreatu…

počet a přesné časování odběrů se v jednotlivých
diabetologických centrech liší
a závisí i na denním režimu nemocného

analýza glukózy se provádí v laboratořích, pokud pacient
je hospitalizovaný, nebo v domácích podmínkách
formou selfmonitoringu

glykemický profil
odběr materiálu:
nejčastěji se odebírá kapilární krev (z prstu) do odběrových nádob
určených na kapilární odběry s obsahem antiglykolytické směsi
(např. Sarstedt Multivette)

prevedení testu:
glykemický profil úplný
9 odběrů
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

1 hod. po snídani

3. vzorek

30 min. před obědem

4. vzorek

1 hod. po obědě

5. vzorek

30 min. před večeří

6. vzorek

1 hod. po večeři

7. vzorek

v 22.00 hod.

8. vzorek

v 01.00 hod.

9. vzorek

v 04.00 hod.

glykemický profil zkrácený
4 odběry
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

30 min. před obědem

3. vzorek

30 min. před večeří

4. vzorek

v 22.00 hod.

glykosurie
koncentrace glukózy v moči závisí
na hladině glukózy v krvi a na funkci ledvin
účel testu:
screening poruch glukózové tolerance
detekce poruch tubulární resorpce při poškození ledvin

stanovení glukózy v moči:
semikvantitativně – diagnostický proužek
kvantitativně
Poznámka:
semikvantitativní a kvantitativní stanovení glukózy v moči není
zařazené mezi základní nástroje na určení diagnózy diabetu ani
na sledovaní jeho stavu, protože individuální rozdíly ledvinného
prahu pro glukózu jsou dost velké a práh kolísá u každého jedince

• Játra přeměňují glukózu na ………. (8)
(též zásobní forma glukózy)

G

L

Y

K

O

S

U

R

I

E

L

L

2

O

2

H

J

I

C



N

6

B

Z

H

U

U

12

Ň

L

O

K

Í

6

Y

N

a

F

• Hormon, který snižuje glykémii se nazývá U G Y L P U Á
…………………………….. (7).
K
K
O
K
R
N
T
• Krev pro stanovení glukózy se odebírá
A
T
T
G
O
E
R
do nádobek s antiglykolytickým činidlem,
G
O
G
E
F
G
A
kterým je ……. (3 - vzorec).
•Jak se nazývá diagnostický funkční test
O
N
E
Z
I
E
E
pro diagnostiku diabetu mellitu a porušené N M M O L / L
glukózové tolerance? (4 – zkratka).
• Hladina glukózy v moči se nazývá …………………………..(10).
• Hormon, který zvyšuje glykémii se nazývá ……………………… (8).
• Test, kdy se stanovují glykémie několikrát během dne a popř.
i v noci se nazývá glykemický …………….. (6).
• Jednotky, v kterých se uvádí výsledky glykémie …………………… (6).
• Sumární vzorec glukózy ………………(6)
• Reakcí glukózy a GOD vzniká sloučenina ………………. ( 4 vzorec).
• Které buňky pankreatu produkují inzulín? (6)
• Zásoby glykogenu, jsou uloženy v orgánu, který se nazývá
………………………………. (5).


Slide 20

Zdravotnická škola, Hradec Králové
Stredná zdravotnícka škola, Bánská Bystrica

glukóza
klinicko-biochemická diagnostika
a metody stanovení

glukóza
monosacharid – aldohexóza
chemický vzorec: C6H12O6
zkratka:
Glc
-Dglukopyranóza

=
D-glukóza

D-glukóza

-Dglukopyranóza

glukóza
je nejdůležitější látkou metabolizmu
sacharidů, tvoří se trávením a konverzí
glykogenu v játrech
za fyziologických podmínek získává organizmus
glukózu:
potravou - přísun z vnějšího prostředí
glykogenolýzou – metabolická dráha konverze glykogenu
na glukózu (zásoby glykogenu jsou uložené hlavně
v játrech a příčně pruhovaných svalech)

glukoneogenezí - metabolická dráha syntézy glukózy
z necukernatých prekurzorů (pyruvát, laktát, aminokyseliny, meziprodukty citrátového cyklu, glycerol)

regulační systém metabolizmu glukózy
organizmus se snaží zachovat koncentraci glukózy
v krvi v úzkém rozmezí: 3,3 - 6,1 mmol/l
regulační systém:
nervová složka
hormonální složka
- inzulin
- glukagon
- adrenalin a noradrenalin
- glukokortikoidy
- růstový hormon
- hormony štítné žlázy...

poruchy v metabolizmu glukózy
glykemie, glukozemie, glukoplazmie - hladina glukózy v krvi
glykosurie - přítomnost glukózy v moči
porucha v metabolizmu se může projevit ve smyslu:
trvalého zvýšení  hladiny glukózy
- hyperglykemie
za hyperglykemii považujeme stavy, kdy koncentrace glukózy
na lačno je vyšší než horní hranice referenčního intervalu

nebo snížení  hladiny glukózy
- hypoglykemie
hypoglykemie je vážný stav, kdy koncentrace glukózy v krvi
klesne pod dolní hranici referenčního intervalu,
tj. pod 3,3 mmol/l, a je doprovázena klinickými projevy

klinicko-biochemická diagnostika
stanovení glukózy je základní biochemickou
informací o sacharidovém metabolizmu

účelem testu je:
screening diabetes mellitus

monitorování lékové nebo dietní terapie
u pacientů s DM
diagnostika při hypoglykemiích
monitorování energetického stavu a výživy hlavně
u intenzivně léčených pacientů

klinicko-biochemická diagnostika
stanovuje se:
náhodně naměřená glykemie
glykemie na lačno (FPG - Fasting Plasma Glucose)
glykemie po jídle
(postprandiální glykemie, pozátěžová glykemie )

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
glykemický profil

stanovení glukózy na lačno
nástroj laboratorní diagnózy DM
vyhledávání osob se zvýšeným rizikem DM

příprava pacienta:
odběr provádíme minimálně
po 8hodinovém lačnění,
vyloučit fyzickou námahu a kouření

odběr:
doporučuje se odebrat venózní krev
do odběrové nádobky
s antiglykolytickou směsí,
stanovit glukózu
ve stabilizované plazmě

předanalytické podmínky
pro stanovení glukózy na lačno

stabilizace antiglykolytickou směsí:
antiglykolytická směs obsahuje NaF (2,5 mg NaF/ml krve)
a protisrážlivé činidlo (např. heparin, EDTA...)
NaF stabilizuje glukózu ve vzorku blokací glykolýzy

!!! pokud není použité stabilizační činidlo, klesá bez oddělení
krevních elementů koncentrace glukózy
při pokojové teplotě za 1 hod. o 5 až 7 %

transport do laboratoře:

okamžitý

oddělení séra/plazmy od krevních elementů:
sérum/plazmu je potřeba oddělit od krevních elementů
do 60 minut od odběru

metody stanovení glukózy
neenzymové metody
oxidačně–redukční a kondenzační metody
jsou nejstarší metody stanovení
v současnosti se v klinické biochemii nepoužívají

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu (GOD) a peroxidázu (POD)
využívající enzym hexokinázu (HK)
využívající enzym glukózodehydrogenázu (GDH)

elektrochemické metody
hmotnostní spektrometrie
(ID-GC/MS – doporučená referenční metoda)

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu a peroxidázu

princip stanovení:
glukóza + O2

+ H 2O

GOD

glukonolakton

+ H 2 O2

na detekci vzniklého H2O2 se využívá reakce
katalyzované enzymem peroxidázou

H2O2 + 4-AAP+ fenol
redukovaný chromogen

POD

chinonimin

+ H 2O

oxidovaný chromogen

Trinderova reakce

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

činidla:
Enzymy lahvička 

pufer – chromogen lahvička 

peroxidáza

fosforečnanový tlumivý roztok

glukózooxidáza

3-methyl-fenol

4-aminoantipyrin

příprava pracovního roztoku
•

obsah lahvičky  se rozpustí v 6 ml destilované vody

•

vleje se do lahvičky  a promíchá se

stabilita: při +2-8 °C ve tmě 1 měsíc,

při +15-25 °C ve tmě 10 dní

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

postup analýzy:
vlnová délka (480-540 nm), s maximem při 498 nm
kyveta 1 cm
teplota +15-25 °C, nebo 37 ± 0,1 °C
ve třech zkumavkách se smíchá pracovní roztok v poměru 100 + 1
se sérem, plazmou (vzorkem), standardním roztokem glukózy (standard)
a s destilovanou vodou (reagenční blenk)
 vzorek (A1)

vzorek (sérum, plazma)

 standard (A2)

 reag. blenk

0,02 ml

standard

0,02 ml

dest. H2O

0,02 ml

pracovní roztok

2,0 ml

2,0 ml

2,0 ml

inkubace: (30 min při +15 až +25 °C nebo 15 min při 37 °C),
změří se absorbance vzorku (A1)
a standardu (A2) proti reagenčnímu blenku

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

metoda je aplikovatelná:
na manuální stanovení glukózy bez deproteinace
na manuální stanovení glukózy s deproteinací
na biochemické analyzátory

linearita: do 22,0 mmol/l
hodnoty přesahující horní hranici linearity
se ředí manuálně destilovanou vodou
a analýza se opakuje (výsledek x ředění)

interference:
hemolýza
chylozita
přítomnost redukujících látek
– kyselina askorbová, kyselina močová, bilirubin a jiné...

enzymové metody
využívající enzym hexokinázu

princip stanovení:
glukóza + ATP

hexokináza + Mg2+

glukóza-6-fosfát + ADP

glukóza-6-fosfát + NAD+

G-6-PDH

glukonát-6-fosfát + NADPH + H+

ATP: adenozintrifosfát
ADP: adenozindifosfát
G-6-PDH: glukóza-6-fosfátdehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

enzymové metody
využívající enzym glukózodehydrogenázu

princip stanovení:
glukóza + NAD+
GDH

glukonolakton

+ NADH + H+

GDH: glukózodehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

elektrochemické metody
princip stanovení je založen na:
enzymové reakci a ampérometrické detekci

produktů enzymové reakce

enzym glukózooxidáza je imobilizován na biosenzoru

vzniklý peroxid vodíku se detekuje a pomocí

převodníku převádí na elektrický signál

elektrochemické metody
vyšetření se provádí
na glukózových analyzátorech

výhodou je rychlost stanovení

na stanovení se může přímo použít
stabilizovaná kapilární krev,
bez předchozí úpravy vzorku
neinterferuje hemolýza

elektrochemické metody

glukóza + O2

glukózooxidáza

kyselina glukonová

+ H2O2
H2
elektrony

registrační
elektroda

O2

glukometry
sebekontrola diabetu

(SMBG – selfmonitoring of blood glucose)

domácí monitorování glykemie
různé typy glukometrů
odebírá se kapilární krev

pracují na principu přímého
elektrochemického stanovení
doporučuje se kontrola glukometrů
a spolupráce s OKB

algoritmus pro laboratorní screening DM
u dospělých
vyloučení
glukóza
postprandiální
(náhodný odběr)
+klinické příznaky
DM

< 5,6

< 11,1

≥ 11,1

doporučení ČDS a ČSKB
hodnoty glukózy jsou v mmol/l

glukóza
v plazmě
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

opakovat odběr
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

Diabetes mellitus
(DM)

< 7,0

≥ 5,6
a < 7,0

< 5,6l, ale
v anam. riziko
DM nebo IGT

oGTT-WHO
(zátěž 75g glukózy,
odběr žilní krve
na lačno a 2h
po zátěži)

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 11,1
2h po zátěži

Diabetes mellitus

hraniční
glukóza na lačno
(IFG)
glukóza v plazmě
žilní krve < 7,8
2h po zátěži

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 7,8
<11,1 2h po zátěži

porušená
glukózová tolerance
(IGT)

orální glukózo-toleranční test (oGTT)

je podpůrný diagnostický funkční test
pro diagnostiku DM
a porušené glukózové tolerance
(IGT – Impaired Glucose Tolerance)

sleduje se glykemie na lačno
a po zátěži glukózou,
opakovaně v určitých intervalech
za přesně definovaných podmínek

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
příprava pacienta:
3 dny před testem pacient konzumuje běžnou stravu
s dostatečným obsahem sacharidů (nejméně 150 g za den)
a normální fyzickou zátěží
test se provádí ráno po 10-14hodinovém lačnění
a fyzickém klidu bez alkoholu, kofeinu a nikotinu
doporučuje se vynechat léky, pokud je to
z klinického hlediska možné

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
provedení testu:
odebírá se venózní krev na lačno
a čeká se na výsledek glykemie

pokud je glykemie v rozmezí 5,6-6,9 mmol/l ,
oGTT se provede
pacient vypije během 5-10 minut 75 g glukózy
v 250-300 ml roztoku
další odběry venózní krve se provádějí
za 60 a 120 minut po vypití roztoku glukózy

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
diagnostická kritéria:
pro hodnotu glukózy v plazmě venózní krve 120 minut
po zátěži 75 g glukózy
vyloučení DM

< 7,8 mmol/l

porušená
glukózová tolerance (IGT )

≥ 7,8 mmol/l
až < 11,1 mmol/l

Diabetes mellitus

≥11,1 mmol/l

glykemie v mmol/l

12
11,1

11,1

10
8

7,8
6,7

6

6,7
5,6

4
2
0
0 minut

60 minut

čas

120 minut

180 minut

glykemický profil
několik stanovení glukózy v průběhu dne,

popřípadě i v noci odráží aktuální kompenzaci DM

glykemický profil zkrácený:
4 nebo 3 odběry
indikace: při DM I. a II. typu, při operacích diabetiků
nebo po porodu při DM II. typu,
pro posouzení kompenzace apod.

glykemický profil
glykemický profil úplný:
9 odběrů
indikace: je indikován při DM I. typu, při intenzivní terapii
nebo při inzulinové terapii, u gravidních diabetiček,
při těžké dekompenzaci DM všech typů,
po transplantaci pankreatu…

počet a přesné časování odběrů se v jednotlivých
diabetologických centrech liší
a závisí i na denním režimu nemocného

analýza glukózy se provádí v laboratořích, pokud pacient
je hospitalizovaný, nebo v domácích podmínkách
formou selfmonitoringu

glykemický profil
odběr materiálu:
nejčastěji se odebírá kapilární krev (z prstu) do odběrových nádob
určených na kapilární odběry s obsahem antiglykolytické směsi
(např. Sarstedt Multivette)

prevedení testu:
glykemický profil úplný
9 odběrů
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

1 hod. po snídani

3. vzorek

30 min. před obědem

4. vzorek

1 hod. po obědě

5. vzorek

30 min. před večeří

6. vzorek

1 hod. po večeři

7. vzorek

v 22.00 hod.

8. vzorek

v 01.00 hod.

9. vzorek

v 04.00 hod.

glykemický profil zkrácený
4 odběry
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

30 min. před obědem

3. vzorek

30 min. před večeří

4. vzorek

v 22.00 hod.

glykosurie
koncentrace glukózy v moči závisí
na hladině glukózy v krvi a na funkci ledvin
účel testu:
screening poruch glukózové tolerance
detekce poruch tubulární resorpce při poškození ledvin

stanovení glukózy v moči:
semikvantitativně – diagnostický proužek
kvantitativně
Poznámka:
semikvantitativní a kvantitativní stanovení glukózy v moči není
zařazené mezi základní nástroje na určení diagnózy diabetu ani
na sledovaní jeho stavu, protože individuální rozdíly ledvinného
prahu pro glukózu jsou dost velké a práh kolísá u každého jedince

• Játra přeměňují glukózu na ………. (8)
(též zásobní forma glukózy)

G

L

Y

K

O

S

U

R

I

E

L

L

2

O

2

H

J

I

C



N

6

B

Z

H

U

U

12

Ň

L

O

K

Í

6

Y

N

a

F

• Hormon, který snižuje glykémii se nazývá U G Y L P U Á
…………………………….. (7).
K
K
O
K
R
N
T
• Krev pro stanovení glukózy se odebírá
A
T
T
G
O
E
R
do nádobek s antiglykolytickým činidlem,
G
O
G
E
F
G
A
kterým je ……. (3 - vzorec).
•Jak se nazývá diagnostický funkční test
O
N
E
Z
I
E
E
pro diagnostiku diabetu mellitu a porušené N M M O L / L
glukózové tolerance? (4 – zkratka).
• Hladina glukózy v moči se nazývá …………………………..(10).
• Hormon, který zvyšuje glykémii se nazývá ……………………… (8).
• Test, kdy se stanovují glykémie několikrát během dne a popř.
i v noci se nazývá glykemický …………….. (6).
• Jednotky, v kterých se uvádí výsledky glykémie …………………… (6).
• Sumární vzorec glukózy ………………(6)
• Reakcí glukózy a GOD vzniká sloučenina ………………. ( 4 vzorec).
• Které buňky pankreatu produkují inzulín? (6)
• Zásoby glykogenu, jsou uloženy v orgánu, který se nazývá
………………………………. (5).


Slide 21

Zdravotnická škola, Hradec Králové
Stredná zdravotnícka škola, Bánská Bystrica

glukóza
klinicko-biochemická diagnostika
a metody stanovení

glukóza
monosacharid – aldohexóza
chemický vzorec: C6H12O6
zkratka:
Glc
-Dglukopyranóza

=
D-glukóza

D-glukóza

-Dglukopyranóza

glukóza
je nejdůležitější látkou metabolizmu
sacharidů, tvoří se trávením a konverzí
glykogenu v játrech
za fyziologických podmínek získává organizmus
glukózu:
potravou - přísun z vnějšího prostředí
glykogenolýzou – metabolická dráha konverze glykogenu
na glukózu (zásoby glykogenu jsou uložené hlavně
v játrech a příčně pruhovaných svalech)

glukoneogenezí - metabolická dráha syntézy glukózy
z necukernatých prekurzorů (pyruvát, laktát, aminokyseliny, meziprodukty citrátového cyklu, glycerol)

regulační systém metabolizmu glukózy
organizmus se snaží zachovat koncentraci glukózy
v krvi v úzkém rozmezí: 3,3 - 6,1 mmol/l
regulační systém:
nervová složka
hormonální složka
- inzulin
- glukagon
- adrenalin a noradrenalin
- glukokortikoidy
- růstový hormon
- hormony štítné žlázy...

poruchy v metabolizmu glukózy
glykemie, glukozemie, glukoplazmie - hladina glukózy v krvi
glykosurie - přítomnost glukózy v moči
porucha v metabolizmu se může projevit ve smyslu:
trvalého zvýšení  hladiny glukózy
- hyperglykemie
za hyperglykemii považujeme stavy, kdy koncentrace glukózy
na lačno je vyšší než horní hranice referenčního intervalu

nebo snížení  hladiny glukózy
- hypoglykemie
hypoglykemie je vážný stav, kdy koncentrace glukózy v krvi
klesne pod dolní hranici referenčního intervalu,
tj. pod 3,3 mmol/l, a je doprovázena klinickými projevy

klinicko-biochemická diagnostika
stanovení glukózy je základní biochemickou
informací o sacharidovém metabolizmu

účelem testu je:
screening diabetes mellitus

monitorování lékové nebo dietní terapie
u pacientů s DM
diagnostika při hypoglykemiích
monitorování energetického stavu a výživy hlavně
u intenzivně léčených pacientů

klinicko-biochemická diagnostika
stanovuje se:
náhodně naměřená glykemie
glykemie na lačno (FPG - Fasting Plasma Glucose)
glykemie po jídle
(postprandiální glykemie, pozátěžová glykemie )

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
glykemický profil

stanovení glukózy na lačno
nástroj laboratorní diagnózy DM
vyhledávání osob se zvýšeným rizikem DM

příprava pacienta:
odběr provádíme minimálně
po 8hodinovém lačnění,
vyloučit fyzickou námahu a kouření

odběr:
doporučuje se odebrat venózní krev
do odběrové nádobky
s antiglykolytickou směsí,
stanovit glukózu
ve stabilizované plazmě

předanalytické podmínky
pro stanovení glukózy na lačno

stabilizace antiglykolytickou směsí:
antiglykolytická směs obsahuje NaF (2,5 mg NaF/ml krve)
a protisrážlivé činidlo (např. heparin, EDTA...)
NaF stabilizuje glukózu ve vzorku blokací glykolýzy

!!! pokud není použité stabilizační činidlo, klesá bez oddělení
krevních elementů koncentrace glukózy
při pokojové teplotě za 1 hod. o 5 až 7 %

transport do laboratoře:

okamžitý

oddělení séra/plazmy od krevních elementů:
sérum/plazmu je potřeba oddělit od krevních elementů
do 60 minut od odběru

metody stanovení glukózy
neenzymové metody
oxidačně–redukční a kondenzační metody
jsou nejstarší metody stanovení
v současnosti se v klinické biochemii nepoužívají

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu (GOD) a peroxidázu (POD)
využívající enzym hexokinázu (HK)
využívající enzym glukózodehydrogenázu (GDH)

elektrochemické metody
hmotnostní spektrometrie
(ID-GC/MS – doporučená referenční metoda)

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu a peroxidázu

princip stanovení:
glukóza + O2

+ H 2O

GOD

glukonolakton

+ H 2 O2

na detekci vzniklého H2O2 se využívá reakce
katalyzované enzymem peroxidázou

H2O2 + 4-AAP+ fenol
redukovaný chromogen

POD

chinonimin

+ H 2O

oxidovaný chromogen

Trinderova reakce

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

činidla:
Enzymy lahvička 

pufer – chromogen lahvička 

peroxidáza

fosforečnanový tlumivý roztok

glukózooxidáza

3-methyl-fenol

4-aminoantipyrin

příprava pracovního roztoku
•

obsah lahvičky  se rozpustí v 6 ml destilované vody

•

vleje se do lahvičky  a promíchá se

stabilita: při +2-8 °C ve tmě 1 měsíc,

při +15-25 °C ve tmě 10 dní

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

postup analýzy:
vlnová délka (480-540 nm), s maximem při 498 nm
kyveta 1 cm
teplota +15-25 °C, nebo 37 ± 0,1 °C
ve třech zkumavkách se smíchá pracovní roztok v poměru 100 + 1
se sérem, plazmou (vzorkem), standardním roztokem glukózy (standard)
a s destilovanou vodou (reagenční blenk)
 vzorek (A1)

vzorek (sérum, plazma)

 standard (A2)

 reag. blenk

0,02 ml

standard

0,02 ml

dest. H2O

0,02 ml

pracovní roztok

2,0 ml

2,0 ml

2,0 ml

inkubace: (30 min při +15 až +25 °C nebo 15 min při 37 °C),
změří se absorbance vzorku (A1)
a standardu (A2) proti reagenčnímu blenku

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

metoda je aplikovatelná:
na manuální stanovení glukózy bez deproteinace
na manuální stanovení glukózy s deproteinací
na biochemické analyzátory

linearita: do 22,0 mmol/l
hodnoty přesahující horní hranici linearity
se ředí manuálně destilovanou vodou
a analýza se opakuje (výsledek x ředění)

interference:
hemolýza
chylozita
přítomnost redukujících látek
– kyselina askorbová, kyselina močová, bilirubin a jiné...

enzymové metody
využívající enzym hexokinázu

princip stanovení:
glukóza + ATP

hexokináza + Mg2+

glukóza-6-fosfát + ADP

glukóza-6-fosfát + NAD+

G-6-PDH

glukonát-6-fosfát + NADPH + H+

ATP: adenozintrifosfát
ADP: adenozindifosfát
G-6-PDH: glukóza-6-fosfátdehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

enzymové metody
využívající enzym glukózodehydrogenázu

princip stanovení:
glukóza + NAD+
GDH

glukonolakton

+ NADH + H+

GDH: glukózodehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

elektrochemické metody
princip stanovení je založen na:
enzymové reakci a ampérometrické detekci

produktů enzymové reakce

enzym glukózooxidáza je imobilizován na biosenzoru

vzniklý peroxid vodíku se detekuje a pomocí

převodníku převádí na elektrický signál

elektrochemické metody
vyšetření se provádí
na glukózových analyzátorech

výhodou je rychlost stanovení

na stanovení se může přímo použít
stabilizovaná kapilární krev,
bez předchozí úpravy vzorku
neinterferuje hemolýza

elektrochemické metody

glukóza + O2

glukózooxidáza

kyselina glukonová

+ H2O2
H2
elektrony

registrační
elektroda

O2

glukometry
sebekontrola diabetu

(SMBG – selfmonitoring of blood glucose)

domácí monitorování glykemie
různé typy glukometrů
odebírá se kapilární krev

pracují na principu přímého
elektrochemického stanovení
doporučuje se kontrola glukometrů
a spolupráce s OKB

algoritmus pro laboratorní screening DM
u dospělých
vyloučení
glukóza
postprandiální
(náhodný odběr)
+klinické příznaky
DM

< 5,6

< 11,1

≥ 11,1

doporučení ČDS a ČSKB
hodnoty glukózy jsou v mmol/l

glukóza
v plazmě
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

opakovat odběr
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

Diabetes mellitus
(DM)

< 7,0

≥ 5,6
a < 7,0

< 5,6l, ale
v anam. riziko
DM nebo IGT

oGTT-WHO
(zátěž 75g glukózy,
odběr žilní krve
na lačno a 2h
po zátěži)

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 11,1
2h po zátěži

Diabetes mellitus

hraniční
glukóza na lačno
(IFG)
glukóza v plazmě
žilní krve < 7,8
2h po zátěži

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 7,8
<11,1 2h po zátěži

porušená
glukózová tolerance
(IGT)

orální glukózo-toleranční test (oGTT)

je podpůrný diagnostický funkční test
pro diagnostiku DM
a porušené glukózové tolerance
(IGT – Impaired Glucose Tolerance)

sleduje se glykemie na lačno
a po zátěži glukózou,
opakovaně v určitých intervalech
za přesně definovaných podmínek

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
příprava pacienta:
3 dny před testem pacient konzumuje běžnou stravu
s dostatečným obsahem sacharidů (nejméně 150 g za den)
a normální fyzickou zátěží
test se provádí ráno po 10-14hodinovém lačnění
a fyzickém klidu bez alkoholu, kofeinu a nikotinu
doporučuje se vynechat léky, pokud je to
z klinického hlediska možné

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
provedení testu:
odebírá se venózní krev na lačno
a čeká se na výsledek glykemie

pokud je glykemie v rozmezí 5,6-6,9 mmol/l ,
oGTT se provede
pacient vypije během 5-10 minut 75 g glukózy
v 250-300 ml roztoku
další odběry venózní krve se provádějí
za 60 a 120 minut po vypití roztoku glukózy

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
diagnostická kritéria:
pro hodnotu glukózy v plazmě venózní krve 120 minut
po zátěži 75 g glukózy
vyloučení DM

< 7,8 mmol/l

porušená
glukózová tolerance (IGT )

≥ 7,8 mmol/l
až < 11,1 mmol/l

Diabetes mellitus

≥11,1 mmol/l

glykemie v mmol/l

12
11,1

11,1

10
8

7,8
6,7

6

6,7
5,6

4
2
0
0 minut

60 minut

čas

120 minut

180 minut

glykemický profil
několik stanovení glukózy v průběhu dne,

popřípadě i v noci odráží aktuální kompenzaci DM

glykemický profil zkrácený:
4 nebo 3 odběry
indikace: při DM I. a II. typu, při operacích diabetiků
nebo po porodu při DM II. typu,
pro posouzení kompenzace apod.

glykemický profil
glykemický profil úplný:
9 odběrů
indikace: je indikován při DM I. typu, při intenzivní terapii
nebo při inzulinové terapii, u gravidních diabetiček,
při těžké dekompenzaci DM všech typů,
po transplantaci pankreatu…

počet a přesné časování odběrů se v jednotlivých
diabetologických centrech liší
a závisí i na denním režimu nemocného

analýza glukózy se provádí v laboratořích, pokud pacient
je hospitalizovaný, nebo v domácích podmínkách
formou selfmonitoringu

glykemický profil
odběr materiálu:
nejčastěji se odebírá kapilární krev (z prstu) do odběrových nádob
určených na kapilární odběry s obsahem antiglykolytické směsi
(např. Sarstedt Multivette)

prevedení testu:
glykemický profil úplný
9 odběrů
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

1 hod. po snídani

3. vzorek

30 min. před obědem

4. vzorek

1 hod. po obědě

5. vzorek

30 min. před večeří

6. vzorek

1 hod. po večeři

7. vzorek

v 22.00 hod.

8. vzorek

v 01.00 hod.

9. vzorek

v 04.00 hod.

glykemický profil zkrácený
4 odběry
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

30 min. před obědem

3. vzorek

30 min. před večeří

4. vzorek

v 22.00 hod.

glykosurie
koncentrace glukózy v moči závisí
na hladině glukózy v krvi a na funkci ledvin
účel testu:
screening poruch glukózové tolerance
detekce poruch tubulární resorpce při poškození ledvin

stanovení glukózy v moči:
semikvantitativně – diagnostický proužek
kvantitativně
Poznámka:
semikvantitativní a kvantitativní stanovení glukózy v moči není
zařazené mezi základní nástroje na určení diagnózy diabetu ani
na sledovaní jeho stavu, protože individuální rozdíly ledvinného
prahu pro glukózu jsou dost velké a práh kolísá u každého jedince

• Játra přeměňují glukózu na ………. (8)
(též zásobní forma glukózy)

G

L

Y

K

O

S

U

R

I

E

L

L

2

O

2

H

J

I

C



N

6

B

Z

H

U

U

12

Ň

L

O

K

Í

6

Y

N

a

F

• Hormon, který snižuje glykémii se nazývá U G Y L P U Á
…………………………….. (7).
K
K
O
K
R
N
T
• Krev pro stanovení glukózy se odebírá
A
T
T
G
O
E
R
do nádobek s antiglykolytickým činidlem,
G
O
G
E
F
G
A
kterým je ……. (3 - vzorec).
•Jak se nazývá diagnostický funkční test
O
N
E
Z
I
E
E
pro diagnostiku diabetu mellitu a porušené N M M O L / L
glukózové tolerance? (4 – zkratka).
• Hladina glukózy v moči se nazývá …………………………..(10).
• Hormon, který zvyšuje glykémii se nazývá ……………………… (8).
• Test, kdy se stanovují glykémie několikrát během dne a popř.
i v noci se nazývá glykemický …………….. (6).
• Jednotky, v kterých se uvádí výsledky glykémie …………………… (6).
• Sumární vzorec glukózy ………………(6)
• Reakcí glukózy a GOD vzniká sloučenina ………………. ( 4 vzorec).
• Které buňky pankreatu produkují inzulín? (6)
• Zásoby glykogenu, jsou uloženy v orgánu, který se nazývá
………………………………. (5).


Slide 22

Zdravotnická škola, Hradec Králové
Stredná zdravotnícka škola, Bánská Bystrica

glukóza
klinicko-biochemická diagnostika
a metody stanovení

glukóza
monosacharid – aldohexóza
chemický vzorec: C6H12O6
zkratka:
Glc
-Dglukopyranóza

=
D-glukóza

D-glukóza

-Dglukopyranóza

glukóza
je nejdůležitější látkou metabolizmu
sacharidů, tvoří se trávením a konverzí
glykogenu v játrech
za fyziologických podmínek získává organizmus
glukózu:
potravou - přísun z vnějšího prostředí
glykogenolýzou – metabolická dráha konverze glykogenu
na glukózu (zásoby glykogenu jsou uložené hlavně
v játrech a příčně pruhovaných svalech)

glukoneogenezí - metabolická dráha syntézy glukózy
z necukernatých prekurzorů (pyruvát, laktát, aminokyseliny, meziprodukty citrátového cyklu, glycerol)

regulační systém metabolizmu glukózy
organizmus se snaží zachovat koncentraci glukózy
v krvi v úzkém rozmezí: 3,3 - 6,1 mmol/l
regulační systém:
nervová složka
hormonální složka
- inzulin
- glukagon
- adrenalin a noradrenalin
- glukokortikoidy
- růstový hormon
- hormony štítné žlázy...

poruchy v metabolizmu glukózy
glykemie, glukozemie, glukoplazmie - hladina glukózy v krvi
glykosurie - přítomnost glukózy v moči
porucha v metabolizmu se může projevit ve smyslu:
trvalého zvýšení  hladiny glukózy
- hyperglykemie
za hyperglykemii považujeme stavy, kdy koncentrace glukózy
na lačno je vyšší než horní hranice referenčního intervalu

nebo snížení  hladiny glukózy
- hypoglykemie
hypoglykemie je vážný stav, kdy koncentrace glukózy v krvi
klesne pod dolní hranici referenčního intervalu,
tj. pod 3,3 mmol/l, a je doprovázena klinickými projevy

klinicko-biochemická diagnostika
stanovení glukózy je základní biochemickou
informací o sacharidovém metabolizmu

účelem testu je:
screening diabetes mellitus

monitorování lékové nebo dietní terapie
u pacientů s DM
diagnostika při hypoglykemiích
monitorování energetického stavu a výživy hlavně
u intenzivně léčených pacientů

klinicko-biochemická diagnostika
stanovuje se:
náhodně naměřená glykemie
glykemie na lačno (FPG - Fasting Plasma Glucose)
glykemie po jídle
(postprandiální glykemie, pozátěžová glykemie )

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
glykemický profil

stanovení glukózy na lačno
nástroj laboratorní diagnózy DM
vyhledávání osob se zvýšeným rizikem DM

příprava pacienta:
odběr provádíme minimálně
po 8hodinovém lačnění,
vyloučit fyzickou námahu a kouření

odběr:
doporučuje se odebrat venózní krev
do odběrové nádobky
s antiglykolytickou směsí,
stanovit glukózu
ve stabilizované plazmě

předanalytické podmínky
pro stanovení glukózy na lačno

stabilizace antiglykolytickou směsí:
antiglykolytická směs obsahuje NaF (2,5 mg NaF/ml krve)
a protisrážlivé činidlo (např. heparin, EDTA...)
NaF stabilizuje glukózu ve vzorku blokací glykolýzy

!!! pokud není použité stabilizační činidlo, klesá bez oddělení
krevních elementů koncentrace glukózy
při pokojové teplotě za 1 hod. o 5 až 7 %

transport do laboratoře:

okamžitý

oddělení séra/plazmy od krevních elementů:
sérum/plazmu je potřeba oddělit od krevních elementů
do 60 minut od odběru

metody stanovení glukózy
neenzymové metody
oxidačně–redukční a kondenzační metody
jsou nejstarší metody stanovení
v současnosti se v klinické biochemii nepoužívají

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu (GOD) a peroxidázu (POD)
využívající enzym hexokinázu (HK)
využívající enzym glukózodehydrogenázu (GDH)

elektrochemické metody
hmotnostní spektrometrie
(ID-GC/MS – doporučená referenční metoda)

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu a peroxidázu

princip stanovení:
glukóza + O2

+ H 2O

GOD

glukonolakton

+ H 2 O2

na detekci vzniklého H2O2 se využívá reakce
katalyzované enzymem peroxidázou

H2O2 + 4-AAP+ fenol
redukovaný chromogen

POD

chinonimin

+ H 2O

oxidovaný chromogen

Trinderova reakce

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

činidla:
Enzymy lahvička 

pufer – chromogen lahvička 

peroxidáza

fosforečnanový tlumivý roztok

glukózooxidáza

3-methyl-fenol

4-aminoantipyrin

příprava pracovního roztoku
•

obsah lahvičky  se rozpustí v 6 ml destilované vody

•

vleje se do lahvičky  a promíchá se

stabilita: při +2-8 °C ve tmě 1 měsíc,

při +15-25 °C ve tmě 10 dní

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

postup analýzy:
vlnová délka (480-540 nm), s maximem při 498 nm
kyveta 1 cm
teplota +15-25 °C, nebo 37 ± 0,1 °C
ve třech zkumavkách se smíchá pracovní roztok v poměru 100 + 1
se sérem, plazmou (vzorkem), standardním roztokem glukózy (standard)
a s destilovanou vodou (reagenční blenk)
 vzorek (A1)

vzorek (sérum, plazma)

 standard (A2)

 reag. blenk

0,02 ml

standard

0,02 ml

dest. H2O

0,02 ml

pracovní roztok

2,0 ml

2,0 ml

2,0 ml

inkubace: (30 min při +15 až +25 °C nebo 15 min při 37 °C),
změří se absorbance vzorku (A1)
a standardu (A2) proti reagenčnímu blenku

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

metoda je aplikovatelná:
na manuální stanovení glukózy bez deproteinace
na manuální stanovení glukózy s deproteinací
na biochemické analyzátory

linearita: do 22,0 mmol/l
hodnoty přesahující horní hranici linearity
se ředí manuálně destilovanou vodou
a analýza se opakuje (výsledek x ředění)

interference:
hemolýza
chylozita
přítomnost redukujících látek
– kyselina askorbová, kyselina močová, bilirubin a jiné...

enzymové metody
využívající enzym hexokinázu

princip stanovení:
glukóza + ATP

hexokináza + Mg2+

glukóza-6-fosfát + ADP

glukóza-6-fosfát + NAD+

G-6-PDH

glukonát-6-fosfát + NADPH + H+

ATP: adenozintrifosfát
ADP: adenozindifosfát
G-6-PDH: glukóza-6-fosfátdehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

enzymové metody
využívající enzym glukózodehydrogenázu

princip stanovení:
glukóza + NAD+
GDH

glukonolakton

+ NADH + H+

GDH: glukózodehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

elektrochemické metody
princip stanovení je založen na:
enzymové reakci a ampérometrické detekci

produktů enzymové reakce

enzym glukózooxidáza je imobilizován na biosenzoru

vzniklý peroxid vodíku se detekuje a pomocí

převodníku převádí na elektrický signál

elektrochemické metody
vyšetření se provádí
na glukózových analyzátorech

výhodou je rychlost stanovení

na stanovení se může přímo použít
stabilizovaná kapilární krev,
bez předchozí úpravy vzorku
neinterferuje hemolýza

elektrochemické metody

glukóza + O2

glukózooxidáza

kyselina glukonová

+ H2O2
H2
elektrony

registrační
elektroda

O2

glukometry
sebekontrola diabetu

(SMBG – selfmonitoring of blood glucose)

domácí monitorování glykemie
různé typy glukometrů
odebírá se kapilární krev

pracují na principu přímého
elektrochemického stanovení
doporučuje se kontrola glukometrů
a spolupráce s OKB

algoritmus pro laboratorní screening DM
u dospělých
vyloučení
glukóza
postprandiální
(náhodný odběr)
+klinické příznaky
DM

< 5,6

< 11,1

≥ 11,1

doporučení ČDS a ČSKB
hodnoty glukózy jsou v mmol/l

glukóza
v plazmě
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

opakovat odběr
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

Diabetes mellitus
(DM)

< 7,0

≥ 5,6
a < 7,0

< 5,6l, ale
v anam. riziko
DM nebo IGT

oGTT-WHO
(zátěž 75g glukózy,
odběr žilní krve
na lačno a 2h
po zátěži)

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 11,1
2h po zátěži

Diabetes mellitus

hraniční
glukóza na lačno
(IFG)
glukóza v plazmě
žilní krve < 7,8
2h po zátěži

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 7,8
<11,1 2h po zátěži

porušená
glukózová tolerance
(IGT)

orální glukózo-toleranční test (oGTT)

je podpůrný diagnostický funkční test
pro diagnostiku DM
a porušené glukózové tolerance
(IGT – Impaired Glucose Tolerance)

sleduje se glykemie na lačno
a po zátěži glukózou,
opakovaně v určitých intervalech
za přesně definovaných podmínek

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
příprava pacienta:
3 dny před testem pacient konzumuje běžnou stravu
s dostatečným obsahem sacharidů (nejméně 150 g za den)
a normální fyzickou zátěží
test se provádí ráno po 10-14hodinovém lačnění
a fyzickém klidu bez alkoholu, kofeinu a nikotinu
doporučuje se vynechat léky, pokud je to
z klinického hlediska možné

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
provedení testu:
odebírá se venózní krev na lačno
a čeká se na výsledek glykemie

pokud je glykemie v rozmezí 5,6-6,9 mmol/l ,
oGTT se provede
pacient vypije během 5-10 minut 75 g glukózy
v 250-300 ml roztoku
další odběry venózní krve se provádějí
za 60 a 120 minut po vypití roztoku glukózy

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
diagnostická kritéria:
pro hodnotu glukózy v plazmě venózní krve 120 minut
po zátěži 75 g glukózy
vyloučení DM

< 7,8 mmol/l

porušená
glukózová tolerance (IGT )

≥ 7,8 mmol/l
až < 11,1 mmol/l

Diabetes mellitus

≥11,1 mmol/l

glykemie v mmol/l

12
11,1

11,1

10
8

7,8
6,7

6

6,7
5,6

4
2
0
0 minut

60 minut

čas

120 minut

180 minut

glykemický profil
několik stanovení glukózy v průběhu dne,

popřípadě i v noci odráží aktuální kompenzaci DM

glykemický profil zkrácený:
4 nebo 3 odběry
indikace: při DM I. a II. typu, při operacích diabetiků
nebo po porodu při DM II. typu,
pro posouzení kompenzace apod.

glykemický profil
glykemický profil úplný:
9 odběrů
indikace: je indikován při DM I. typu, při intenzivní terapii
nebo při inzulinové terapii, u gravidních diabetiček,
při těžké dekompenzaci DM všech typů,
po transplantaci pankreatu…

počet a přesné časování odběrů se v jednotlivých
diabetologických centrech liší
a závisí i na denním režimu nemocného

analýza glukózy se provádí v laboratořích, pokud pacient
je hospitalizovaný, nebo v domácích podmínkách
formou selfmonitoringu

glykemický profil
odběr materiálu:
nejčastěji se odebírá kapilární krev (z prstu) do odběrových nádob
určených na kapilární odběry s obsahem antiglykolytické směsi
(např. Sarstedt Multivette)

prevedení testu:
glykemický profil úplný
9 odběrů
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

1 hod. po snídani

3. vzorek

30 min. před obědem

4. vzorek

1 hod. po obědě

5. vzorek

30 min. před večeří

6. vzorek

1 hod. po večeři

7. vzorek

v 22.00 hod.

8. vzorek

v 01.00 hod.

9. vzorek

v 04.00 hod.

glykemický profil zkrácený
4 odběry
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

30 min. před obědem

3. vzorek

30 min. před večeří

4. vzorek

v 22.00 hod.

glykosurie
koncentrace glukózy v moči závisí
na hladině glukózy v krvi a na funkci ledvin
účel testu:
screening poruch glukózové tolerance
detekce poruch tubulární resorpce při poškození ledvin

stanovení glukózy v moči:
semikvantitativně – diagnostický proužek
kvantitativně
Poznámka:
semikvantitativní a kvantitativní stanovení glukózy v moči není
zařazené mezi základní nástroje na určení diagnózy diabetu ani
na sledovaní jeho stavu, protože individuální rozdíly ledvinného
prahu pro glukózu jsou dost velké a práh kolísá u každého jedince

• Játra přeměňují glukózu na ………. (8)
(též zásobní forma glukózy)

G

L

Y

K

O

S

U

R

I

E

L

L

2

O

2

H

J

I

C



N

6

B

Z

H

U

U

12

Ň

L

O

K

Í

6

Y

N

a

F

• Hormon, který snižuje glykémii se nazývá U G Y L P U Á
…………………………….. (7).
K
K
O
K
R
N
T
• Krev pro stanovení glukózy se odebírá
A
T
T
G
O
E
R
do nádobek s antiglykolytickým činidlem,
G
O
G
E
F
G
A
kterým je ……. (3 - vzorec).
•Jak se nazývá diagnostický funkční test
O
N
E
Z
I
E
E
pro diagnostiku diabetu mellitu a porušené N M M O L / L
glukózové tolerance? (4 – zkratka).
• Hladina glukózy v moči se nazývá …………………………..(10).
• Hormon, který zvyšuje glykémii se nazývá ……………………… (8).
• Test, kdy se stanovují glykémie několikrát během dne a popř.
i v noci se nazývá glykemický …………….. (6).
• Jednotky, v kterých se uvádí výsledky glykémie …………………… (6).
• Sumární vzorec glukózy ………………(6)
• Reakcí glukózy a GOD vzniká sloučenina ………………. ( 4 vzorec).
• Které buňky pankreatu produkují inzulín? (6)
• Zásoby glykogenu, jsou uloženy v orgánu, který se nazývá
………………………………. (5).


Slide 23

Zdravotnická škola, Hradec Králové
Stredná zdravotnícka škola, Bánská Bystrica

glukóza
klinicko-biochemická diagnostika
a metody stanovení

glukóza
monosacharid – aldohexóza
chemický vzorec: C6H12O6
zkratka:
Glc
-Dglukopyranóza

=
D-glukóza

D-glukóza

-Dglukopyranóza

glukóza
je nejdůležitější látkou metabolizmu
sacharidů, tvoří se trávením a konverzí
glykogenu v játrech
za fyziologických podmínek získává organizmus
glukózu:
potravou - přísun z vnějšího prostředí
glykogenolýzou – metabolická dráha konverze glykogenu
na glukózu (zásoby glykogenu jsou uložené hlavně
v játrech a příčně pruhovaných svalech)

glukoneogenezí - metabolická dráha syntézy glukózy
z necukernatých prekurzorů (pyruvát, laktát, aminokyseliny, meziprodukty citrátového cyklu, glycerol)

regulační systém metabolizmu glukózy
organizmus se snaží zachovat koncentraci glukózy
v krvi v úzkém rozmezí: 3,3 - 6,1 mmol/l
regulační systém:
nervová složka
hormonální složka
- inzulin
- glukagon
- adrenalin a noradrenalin
- glukokortikoidy
- růstový hormon
- hormony štítné žlázy...

poruchy v metabolizmu glukózy
glykemie, glukozemie, glukoplazmie - hladina glukózy v krvi
glykosurie - přítomnost glukózy v moči
porucha v metabolizmu se může projevit ve smyslu:
trvalého zvýšení  hladiny glukózy
- hyperglykemie
za hyperglykemii považujeme stavy, kdy koncentrace glukózy
na lačno je vyšší než horní hranice referenčního intervalu

nebo snížení  hladiny glukózy
- hypoglykemie
hypoglykemie je vážný stav, kdy koncentrace glukózy v krvi
klesne pod dolní hranici referenčního intervalu,
tj. pod 3,3 mmol/l, a je doprovázena klinickými projevy

klinicko-biochemická diagnostika
stanovení glukózy je základní biochemickou
informací o sacharidovém metabolizmu

účelem testu je:
screening diabetes mellitus

monitorování lékové nebo dietní terapie
u pacientů s DM
diagnostika při hypoglykemiích
monitorování energetického stavu a výživy hlavně
u intenzivně léčených pacientů

klinicko-biochemická diagnostika
stanovuje se:
náhodně naměřená glykemie
glykemie na lačno (FPG - Fasting Plasma Glucose)
glykemie po jídle
(postprandiální glykemie, pozátěžová glykemie )

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
glykemický profil

stanovení glukózy na lačno
nástroj laboratorní diagnózy DM
vyhledávání osob se zvýšeným rizikem DM

příprava pacienta:
odběr provádíme minimálně
po 8hodinovém lačnění,
vyloučit fyzickou námahu a kouření

odběr:
doporučuje se odebrat venózní krev
do odběrové nádobky
s antiglykolytickou směsí,
stanovit glukózu
ve stabilizované plazmě

předanalytické podmínky
pro stanovení glukózy na lačno

stabilizace antiglykolytickou směsí:
antiglykolytická směs obsahuje NaF (2,5 mg NaF/ml krve)
a protisrážlivé činidlo (např. heparin, EDTA...)
NaF stabilizuje glukózu ve vzorku blokací glykolýzy

!!! pokud není použité stabilizační činidlo, klesá bez oddělení
krevních elementů koncentrace glukózy
při pokojové teplotě za 1 hod. o 5 až 7 %

transport do laboratoře:

okamžitý

oddělení séra/plazmy od krevních elementů:
sérum/plazmu je potřeba oddělit od krevních elementů
do 60 minut od odběru

metody stanovení glukózy
neenzymové metody
oxidačně–redukční a kondenzační metody
jsou nejstarší metody stanovení
v současnosti se v klinické biochemii nepoužívají

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu (GOD) a peroxidázu (POD)
využívající enzym hexokinázu (HK)
využívající enzym glukózodehydrogenázu (GDH)

elektrochemické metody
hmotnostní spektrometrie
(ID-GC/MS – doporučená referenční metoda)

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu a peroxidázu

princip stanovení:
glukóza + O2

+ H 2O

GOD

glukonolakton

+ H 2 O2

na detekci vzniklého H2O2 se využívá reakce
katalyzované enzymem peroxidázou

H2O2 + 4-AAP+ fenol
redukovaný chromogen

POD

chinonimin

+ H 2O

oxidovaný chromogen

Trinderova reakce

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

činidla:
Enzymy lahvička 

pufer – chromogen lahvička 

peroxidáza

fosforečnanový tlumivý roztok

glukózooxidáza

3-methyl-fenol

4-aminoantipyrin

příprava pracovního roztoku
•

obsah lahvičky  se rozpustí v 6 ml destilované vody

•

vleje se do lahvičky  a promíchá se

stabilita: při +2-8 °C ve tmě 1 měsíc,

při +15-25 °C ve tmě 10 dní

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

postup analýzy:
vlnová délka (480-540 nm), s maximem při 498 nm
kyveta 1 cm
teplota +15-25 °C, nebo 37 ± 0,1 °C
ve třech zkumavkách se smíchá pracovní roztok v poměru 100 + 1
se sérem, plazmou (vzorkem), standardním roztokem glukózy (standard)
a s destilovanou vodou (reagenční blenk)
 vzorek (A1)

vzorek (sérum, plazma)

 standard (A2)

 reag. blenk

0,02 ml

standard

0,02 ml

dest. H2O

0,02 ml

pracovní roztok

2,0 ml

2,0 ml

2,0 ml

inkubace: (30 min při +15 až +25 °C nebo 15 min při 37 °C),
změří se absorbance vzorku (A1)
a standardu (A2) proti reagenčnímu blenku

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

metoda je aplikovatelná:
na manuální stanovení glukózy bez deproteinace
na manuální stanovení glukózy s deproteinací
na biochemické analyzátory

linearita: do 22,0 mmol/l
hodnoty přesahující horní hranici linearity
se ředí manuálně destilovanou vodou
a analýza se opakuje (výsledek x ředění)

interference:
hemolýza
chylozita
přítomnost redukujících látek
– kyselina askorbová, kyselina močová, bilirubin a jiné...

enzymové metody
využívající enzym hexokinázu

princip stanovení:
glukóza + ATP

hexokináza + Mg2+

glukóza-6-fosfát + ADP

glukóza-6-fosfát + NAD+

G-6-PDH

glukonát-6-fosfát + NADPH + H+

ATP: adenozintrifosfát
ADP: adenozindifosfát
G-6-PDH: glukóza-6-fosfátdehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

enzymové metody
využívající enzym glukózodehydrogenázu

princip stanovení:
glukóza + NAD+
GDH

glukonolakton

+ NADH + H+

GDH: glukózodehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

elektrochemické metody
princip stanovení je založen na:
enzymové reakci a ampérometrické detekci

produktů enzymové reakce

enzym glukózooxidáza je imobilizován na biosenzoru

vzniklý peroxid vodíku se detekuje a pomocí

převodníku převádí na elektrický signál

elektrochemické metody
vyšetření se provádí
na glukózových analyzátorech

výhodou je rychlost stanovení

na stanovení se může přímo použít
stabilizovaná kapilární krev,
bez předchozí úpravy vzorku
neinterferuje hemolýza

elektrochemické metody

glukóza + O2

glukózooxidáza

kyselina glukonová

+ H2O2
H2
elektrony

registrační
elektroda

O2

glukometry
sebekontrola diabetu

(SMBG – selfmonitoring of blood glucose)

domácí monitorování glykemie
různé typy glukometrů
odebírá se kapilární krev

pracují na principu přímého
elektrochemického stanovení
doporučuje se kontrola glukometrů
a spolupráce s OKB

algoritmus pro laboratorní screening DM
u dospělých
vyloučení
glukóza
postprandiální
(náhodný odběr)
+klinické příznaky
DM

< 5,6

< 11,1

≥ 11,1

doporučení ČDS a ČSKB
hodnoty glukózy jsou v mmol/l

glukóza
v plazmě
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

opakovat odběr
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

Diabetes mellitus
(DM)

< 7,0

≥ 5,6
a < 7,0

< 5,6l, ale
v anam. riziko
DM nebo IGT

oGTT-WHO
(zátěž 75g glukózy,
odběr žilní krve
na lačno a 2h
po zátěži)

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 11,1
2h po zátěži

Diabetes mellitus

hraniční
glukóza na lačno
(IFG)
glukóza v plazmě
žilní krve < 7,8
2h po zátěži

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 7,8
<11,1 2h po zátěži

porušená
glukózová tolerance
(IGT)

orální glukózo-toleranční test (oGTT)

je podpůrný diagnostický funkční test
pro diagnostiku DM
a porušené glukózové tolerance
(IGT – Impaired Glucose Tolerance)

sleduje se glykemie na lačno
a po zátěži glukózou,
opakovaně v určitých intervalech
za přesně definovaných podmínek

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
příprava pacienta:
3 dny před testem pacient konzumuje běžnou stravu
s dostatečným obsahem sacharidů (nejméně 150 g za den)
a normální fyzickou zátěží
test se provádí ráno po 10-14hodinovém lačnění
a fyzickém klidu bez alkoholu, kofeinu a nikotinu
doporučuje se vynechat léky, pokud je to
z klinického hlediska možné

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
provedení testu:
odebírá se venózní krev na lačno
a čeká se na výsledek glykemie

pokud je glykemie v rozmezí 5,6-6,9 mmol/l ,
oGTT se provede
pacient vypije během 5-10 minut 75 g glukózy
v 250-300 ml roztoku
další odběry venózní krve se provádějí
za 60 a 120 minut po vypití roztoku glukózy

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
diagnostická kritéria:
pro hodnotu glukózy v plazmě venózní krve 120 minut
po zátěži 75 g glukózy
vyloučení DM

< 7,8 mmol/l

porušená
glukózová tolerance (IGT )

≥ 7,8 mmol/l
až < 11,1 mmol/l

Diabetes mellitus

≥11,1 mmol/l

glykemie v mmol/l

12
11,1

11,1

10
8

7,8
6,7

6

6,7
5,6

4
2
0
0 minut

60 minut

čas

120 minut

180 minut

glykemický profil
několik stanovení glukózy v průběhu dne,

popřípadě i v noci odráží aktuální kompenzaci DM

glykemický profil zkrácený:
4 nebo 3 odběry
indikace: při DM I. a II. typu, při operacích diabetiků
nebo po porodu při DM II. typu,
pro posouzení kompenzace apod.

glykemický profil
glykemický profil úplný:
9 odběrů
indikace: je indikován při DM I. typu, při intenzivní terapii
nebo při inzulinové terapii, u gravidních diabetiček,
při těžké dekompenzaci DM všech typů,
po transplantaci pankreatu…

počet a přesné časování odběrů se v jednotlivých
diabetologických centrech liší
a závisí i na denním režimu nemocného

analýza glukózy se provádí v laboratořích, pokud pacient
je hospitalizovaný, nebo v domácích podmínkách
formou selfmonitoringu

glykemický profil
odběr materiálu:
nejčastěji se odebírá kapilární krev (z prstu) do odběrových nádob
určených na kapilární odběry s obsahem antiglykolytické směsi
(např. Sarstedt Multivette)

prevedení testu:
glykemický profil úplný
9 odběrů
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

1 hod. po snídani

3. vzorek

30 min. před obědem

4. vzorek

1 hod. po obědě

5. vzorek

30 min. před večeří

6. vzorek

1 hod. po večeři

7. vzorek

v 22.00 hod.

8. vzorek

v 01.00 hod.

9. vzorek

v 04.00 hod.

glykemický profil zkrácený
4 odběry
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

30 min. před obědem

3. vzorek

30 min. před večeří

4. vzorek

v 22.00 hod.

glykosurie
koncentrace glukózy v moči závisí
na hladině glukózy v krvi a na funkci ledvin
účel testu:
screening poruch glukózové tolerance
detekce poruch tubulární resorpce při poškození ledvin

stanovení glukózy v moči:
semikvantitativně – diagnostický proužek
kvantitativně
Poznámka:
semikvantitativní a kvantitativní stanovení glukózy v moči není
zařazené mezi základní nástroje na určení diagnózy diabetu ani
na sledovaní jeho stavu, protože individuální rozdíly ledvinného
prahu pro glukózu jsou dost velké a práh kolísá u každého jedince

• Játra přeměňují glukózu na ………. (8)
(též zásobní forma glukózy)

G

L

Y

K

O

S

U

R

I

E

L

L

2

O

2

H

J

I

C



N

6

B

Z

H

U

U

12

Ň

L

O

K

Í

6

Y

N

a

F

• Hormon, který snižuje glykémii se nazývá U G Y L P U Á
…………………………….. (7).
K
K
O
K
R
N
T
• Krev pro stanovení glukózy se odebírá
A
T
T
G
O
E
R
do nádobek s antiglykolytickým činidlem,
G
O
G
E
F
G
A
kterým je ……. (3 - vzorec).
•Jak se nazývá diagnostický funkční test
O
N
E
Z
I
E
E
pro diagnostiku diabetu mellitu a porušené N M M O L / L
glukózové tolerance? (4 – zkratka).
• Hladina glukózy v moči se nazývá …………………………..(10).
• Hormon, který zvyšuje glykémii se nazývá ……………………… (8).
• Test, kdy se stanovují glykémie několikrát během dne a popř.
i v noci se nazývá glykemický …………….. (6).
• Jednotky, v kterých se uvádí výsledky glykémie …………………… (6).
• Sumární vzorec glukózy ………………(6)
• Reakcí glukózy a GOD vzniká sloučenina ………………. ( 4 vzorec).
• Které buňky pankreatu produkují inzulín? (6)
• Zásoby glykogenu, jsou uloženy v orgánu, který se nazývá
………………………………. (5).


Slide 24

Zdravotnická škola, Hradec Králové
Stredná zdravotnícka škola, Bánská Bystrica

glukóza
klinicko-biochemická diagnostika
a metody stanovení

glukóza
monosacharid – aldohexóza
chemický vzorec: C6H12O6
zkratka:
Glc
-Dglukopyranóza

=
D-glukóza

D-glukóza

-Dglukopyranóza

glukóza
je nejdůležitější látkou metabolizmu
sacharidů, tvoří se trávením a konverzí
glykogenu v játrech
za fyziologických podmínek získává organizmus
glukózu:
potravou - přísun z vnějšího prostředí
glykogenolýzou – metabolická dráha konverze glykogenu
na glukózu (zásoby glykogenu jsou uložené hlavně
v játrech a příčně pruhovaných svalech)

glukoneogenezí - metabolická dráha syntézy glukózy
z necukernatých prekurzorů (pyruvát, laktát, aminokyseliny, meziprodukty citrátového cyklu, glycerol)

regulační systém metabolizmu glukózy
organizmus se snaží zachovat koncentraci glukózy
v krvi v úzkém rozmezí: 3,3 - 6,1 mmol/l
regulační systém:
nervová složka
hormonální složka
- inzulin
- glukagon
- adrenalin a noradrenalin
- glukokortikoidy
- růstový hormon
- hormony štítné žlázy...

poruchy v metabolizmu glukózy
glykemie, glukozemie, glukoplazmie - hladina glukózy v krvi
glykosurie - přítomnost glukózy v moči
porucha v metabolizmu se může projevit ve smyslu:
trvalého zvýšení  hladiny glukózy
- hyperglykemie
za hyperglykemii považujeme stavy, kdy koncentrace glukózy
na lačno je vyšší než horní hranice referenčního intervalu

nebo snížení  hladiny glukózy
- hypoglykemie
hypoglykemie je vážný stav, kdy koncentrace glukózy v krvi
klesne pod dolní hranici referenčního intervalu,
tj. pod 3,3 mmol/l, a je doprovázena klinickými projevy

klinicko-biochemická diagnostika
stanovení glukózy je základní biochemickou
informací o sacharidovém metabolizmu

účelem testu je:
screening diabetes mellitus

monitorování lékové nebo dietní terapie
u pacientů s DM
diagnostika při hypoglykemiích
monitorování energetického stavu a výživy hlavně
u intenzivně léčených pacientů

klinicko-biochemická diagnostika
stanovuje se:
náhodně naměřená glykemie
glykemie na lačno (FPG - Fasting Plasma Glucose)
glykemie po jídle
(postprandiální glykemie, pozátěžová glykemie )

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
glykemický profil

stanovení glukózy na lačno
nástroj laboratorní diagnózy DM
vyhledávání osob se zvýšeným rizikem DM

příprava pacienta:
odběr provádíme minimálně
po 8hodinovém lačnění,
vyloučit fyzickou námahu a kouření

odběr:
doporučuje se odebrat venózní krev
do odběrové nádobky
s antiglykolytickou směsí,
stanovit glukózu
ve stabilizované plazmě

předanalytické podmínky
pro stanovení glukózy na lačno

stabilizace antiglykolytickou směsí:
antiglykolytická směs obsahuje NaF (2,5 mg NaF/ml krve)
a protisrážlivé činidlo (např. heparin, EDTA...)
NaF stabilizuje glukózu ve vzorku blokací glykolýzy

!!! pokud není použité stabilizační činidlo, klesá bez oddělení
krevních elementů koncentrace glukózy
při pokojové teplotě za 1 hod. o 5 až 7 %

transport do laboratoře:

okamžitý

oddělení séra/plazmy od krevních elementů:
sérum/plazmu je potřeba oddělit od krevních elementů
do 60 minut od odběru

metody stanovení glukózy
neenzymové metody
oxidačně–redukční a kondenzační metody
jsou nejstarší metody stanovení
v současnosti se v klinické biochemii nepoužívají

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu (GOD) a peroxidázu (POD)
využívající enzym hexokinázu (HK)
využívající enzym glukózodehydrogenázu (GDH)

elektrochemické metody
hmotnostní spektrometrie
(ID-GC/MS – doporučená referenční metoda)

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu a peroxidázu

princip stanovení:
glukóza + O2

+ H 2O

GOD

glukonolakton

+ H 2 O2

na detekci vzniklého H2O2 se využívá reakce
katalyzované enzymem peroxidázou

H2O2 + 4-AAP+ fenol
redukovaný chromogen

POD

chinonimin

+ H 2O

oxidovaný chromogen

Trinderova reakce

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

činidla:
Enzymy lahvička 

pufer – chromogen lahvička 

peroxidáza

fosforečnanový tlumivý roztok

glukózooxidáza

3-methyl-fenol

4-aminoantipyrin

příprava pracovního roztoku
•

obsah lahvičky  se rozpustí v 6 ml destilované vody

•

vleje se do lahvičky  a promíchá se

stabilita: při +2-8 °C ve tmě 1 měsíc,

při +15-25 °C ve tmě 10 dní

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

postup analýzy:
vlnová délka (480-540 nm), s maximem při 498 nm
kyveta 1 cm
teplota +15-25 °C, nebo 37 ± 0,1 °C
ve třech zkumavkách se smíchá pracovní roztok v poměru 100 + 1
se sérem, plazmou (vzorkem), standardním roztokem glukózy (standard)
a s destilovanou vodou (reagenční blenk)
 vzorek (A1)

vzorek (sérum, plazma)

 standard (A2)

 reag. blenk

0,02 ml

standard

0,02 ml

dest. H2O

0,02 ml

pracovní roztok

2,0 ml

2,0 ml

2,0 ml

inkubace: (30 min při +15 až +25 °C nebo 15 min při 37 °C),
změří se absorbance vzorku (A1)
a standardu (A2) proti reagenčnímu blenku

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

metoda je aplikovatelná:
na manuální stanovení glukózy bez deproteinace
na manuální stanovení glukózy s deproteinací
na biochemické analyzátory

linearita: do 22,0 mmol/l
hodnoty přesahující horní hranici linearity
se ředí manuálně destilovanou vodou
a analýza se opakuje (výsledek x ředění)

interference:
hemolýza
chylozita
přítomnost redukujících látek
– kyselina askorbová, kyselina močová, bilirubin a jiné...

enzymové metody
využívající enzym hexokinázu

princip stanovení:
glukóza + ATP

hexokináza + Mg2+

glukóza-6-fosfát + ADP

glukóza-6-fosfát + NAD+

G-6-PDH

glukonát-6-fosfát + NADPH + H+

ATP: adenozintrifosfát
ADP: adenozindifosfát
G-6-PDH: glukóza-6-fosfátdehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

enzymové metody
využívající enzym glukózodehydrogenázu

princip stanovení:
glukóza + NAD+
GDH

glukonolakton

+ NADH + H+

GDH: glukózodehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

elektrochemické metody
princip stanovení je založen na:
enzymové reakci a ampérometrické detekci

produktů enzymové reakce

enzym glukózooxidáza je imobilizován na biosenzoru

vzniklý peroxid vodíku se detekuje a pomocí

převodníku převádí na elektrický signál

elektrochemické metody
vyšetření se provádí
na glukózových analyzátorech

výhodou je rychlost stanovení

na stanovení se může přímo použít
stabilizovaná kapilární krev,
bez předchozí úpravy vzorku
neinterferuje hemolýza

elektrochemické metody

glukóza + O2

glukózooxidáza

kyselina glukonová

+ H2O2
H2
elektrony

registrační
elektroda

O2

glukometry
sebekontrola diabetu

(SMBG – selfmonitoring of blood glucose)

domácí monitorování glykemie
různé typy glukometrů
odebírá se kapilární krev

pracují na principu přímého
elektrochemického stanovení
doporučuje se kontrola glukometrů
a spolupráce s OKB

algoritmus pro laboratorní screening DM
u dospělých
vyloučení
glukóza
postprandiální
(náhodný odběr)
+klinické příznaky
DM

< 5,6

< 11,1

≥ 11,1

doporučení ČDS a ČSKB
hodnoty glukózy jsou v mmol/l

glukóza
v plazmě
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

opakovat odběr
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

Diabetes mellitus
(DM)

< 7,0

≥ 5,6
a < 7,0

< 5,6l, ale
v anam. riziko
DM nebo IGT

oGTT-WHO
(zátěž 75g glukózy,
odběr žilní krve
na lačno a 2h
po zátěži)

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 11,1
2h po zátěži

Diabetes mellitus

hraniční
glukóza na lačno
(IFG)
glukóza v plazmě
žilní krve < 7,8
2h po zátěži

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 7,8
<11,1 2h po zátěži

porušená
glukózová tolerance
(IGT)

orální glukózo-toleranční test (oGTT)

je podpůrný diagnostický funkční test
pro diagnostiku DM
a porušené glukózové tolerance
(IGT – Impaired Glucose Tolerance)

sleduje se glykemie na lačno
a po zátěži glukózou,
opakovaně v určitých intervalech
za přesně definovaných podmínek

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
příprava pacienta:
3 dny před testem pacient konzumuje běžnou stravu
s dostatečným obsahem sacharidů (nejméně 150 g za den)
a normální fyzickou zátěží
test se provádí ráno po 10-14hodinovém lačnění
a fyzickém klidu bez alkoholu, kofeinu a nikotinu
doporučuje se vynechat léky, pokud je to
z klinického hlediska možné

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
provedení testu:
odebírá se venózní krev na lačno
a čeká se na výsledek glykemie

pokud je glykemie v rozmezí 5,6-6,9 mmol/l ,
oGTT se provede
pacient vypije během 5-10 minut 75 g glukózy
v 250-300 ml roztoku
další odběry venózní krve se provádějí
za 60 a 120 minut po vypití roztoku glukózy

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
diagnostická kritéria:
pro hodnotu glukózy v plazmě venózní krve 120 minut
po zátěži 75 g glukózy
vyloučení DM

< 7,8 mmol/l

porušená
glukózová tolerance (IGT )

≥ 7,8 mmol/l
až < 11,1 mmol/l

Diabetes mellitus

≥11,1 mmol/l

glykemie v mmol/l

12
11,1

11,1

10
8

7,8
6,7

6

6,7
5,6

4
2
0
0 minut

60 minut

čas

120 minut

180 minut

glykemický profil
několik stanovení glukózy v průběhu dne,

popřípadě i v noci odráží aktuální kompenzaci DM

glykemický profil zkrácený:
4 nebo 3 odběry
indikace: při DM I. a II. typu, při operacích diabetiků
nebo po porodu při DM II. typu,
pro posouzení kompenzace apod.

glykemický profil
glykemický profil úplný:
9 odběrů
indikace: je indikován při DM I. typu, při intenzivní terapii
nebo při inzulinové terapii, u gravidních diabetiček,
při těžké dekompenzaci DM všech typů,
po transplantaci pankreatu…

počet a přesné časování odběrů se v jednotlivých
diabetologických centrech liší
a závisí i na denním režimu nemocného

analýza glukózy se provádí v laboratořích, pokud pacient
je hospitalizovaný, nebo v domácích podmínkách
formou selfmonitoringu

glykemický profil
odběr materiálu:
nejčastěji se odebírá kapilární krev (z prstu) do odběrových nádob
určených na kapilární odběry s obsahem antiglykolytické směsi
(např. Sarstedt Multivette)

prevedení testu:
glykemický profil úplný
9 odběrů
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

1 hod. po snídani

3. vzorek

30 min. před obědem

4. vzorek

1 hod. po obědě

5. vzorek

30 min. před večeří

6. vzorek

1 hod. po večeři

7. vzorek

v 22.00 hod.

8. vzorek

v 01.00 hod.

9. vzorek

v 04.00 hod.

glykemický profil zkrácený
4 odběry
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

30 min. před obědem

3. vzorek

30 min. před večeří

4. vzorek

v 22.00 hod.

glykosurie
koncentrace glukózy v moči závisí
na hladině glukózy v krvi a na funkci ledvin
účel testu:
screening poruch glukózové tolerance
detekce poruch tubulární resorpce při poškození ledvin

stanovení glukózy v moči:
semikvantitativně – diagnostický proužek
kvantitativně
Poznámka:
semikvantitativní a kvantitativní stanovení glukózy v moči není
zařazené mezi základní nástroje na určení diagnózy diabetu ani
na sledovaní jeho stavu, protože individuální rozdíly ledvinného
prahu pro glukózu jsou dost velké a práh kolísá u každého jedince

• Játra přeměňují glukózu na ………. (8)
(též zásobní forma glukózy)

G

L

Y

K

O

S

U

R

I

E

L

L

2

O

2

H

J

I

C



N

6

B

Z

H

U

U

12

Ň

L

O

K

Í

6

Y

N

a

F

• Hormon, který snižuje glykémii se nazývá U G Y L P U Á
…………………………….. (7).
K
K
O
K
R
N
T
• Krev pro stanovení glukózy se odebírá
A
T
T
G
O
E
R
do nádobek s antiglykolytickým činidlem,
G
O
G
E
F
G
A
kterým je ……. (3 - vzorec).
•Jak se nazývá diagnostický funkční test
O
N
E
Z
I
E
E
pro diagnostiku diabetu mellitu a porušené N M M O L / L
glukózové tolerance? (4 – zkratka).
• Hladina glukózy v moči se nazývá …………………………..(10).
• Hormon, který zvyšuje glykémii se nazývá ……………………… (8).
• Test, kdy se stanovují glykémie několikrát během dne a popř.
i v noci se nazývá glykemický …………….. (6).
• Jednotky, v kterých se uvádí výsledky glykémie …………………… (6).
• Sumární vzorec glukózy ………………(6)
• Reakcí glukózy a GOD vzniká sloučenina ………………. ( 4 vzorec).
• Které buňky pankreatu produkují inzulín? (6)
• Zásoby glykogenu, jsou uloženy v orgánu, který se nazývá
………………………………. (5).


Slide 25

Zdravotnická škola, Hradec Králové
Stredná zdravotnícka škola, Bánská Bystrica

glukóza
klinicko-biochemická diagnostika
a metody stanovení

glukóza
monosacharid – aldohexóza
chemický vzorec: C6H12O6
zkratka:
Glc
-Dglukopyranóza

=
D-glukóza

D-glukóza

-Dglukopyranóza

glukóza
je nejdůležitější látkou metabolizmu
sacharidů, tvoří se trávením a konverzí
glykogenu v játrech
za fyziologických podmínek získává organizmus
glukózu:
potravou - přísun z vnějšího prostředí
glykogenolýzou – metabolická dráha konverze glykogenu
na glukózu (zásoby glykogenu jsou uložené hlavně
v játrech a příčně pruhovaných svalech)

glukoneogenezí - metabolická dráha syntézy glukózy
z necukernatých prekurzorů (pyruvát, laktát, aminokyseliny, meziprodukty citrátového cyklu, glycerol)

regulační systém metabolizmu glukózy
organizmus se snaží zachovat koncentraci glukózy
v krvi v úzkém rozmezí: 3,3 - 6,1 mmol/l
regulační systém:
nervová složka
hormonální složka
- inzulin
- glukagon
- adrenalin a noradrenalin
- glukokortikoidy
- růstový hormon
- hormony štítné žlázy...

poruchy v metabolizmu glukózy
glykemie, glukozemie, glukoplazmie - hladina glukózy v krvi
glykosurie - přítomnost glukózy v moči
porucha v metabolizmu se může projevit ve smyslu:
trvalého zvýšení  hladiny glukózy
- hyperglykemie
za hyperglykemii považujeme stavy, kdy koncentrace glukózy
na lačno je vyšší než horní hranice referenčního intervalu

nebo snížení  hladiny glukózy
- hypoglykemie
hypoglykemie je vážný stav, kdy koncentrace glukózy v krvi
klesne pod dolní hranici referenčního intervalu,
tj. pod 3,3 mmol/l, a je doprovázena klinickými projevy

klinicko-biochemická diagnostika
stanovení glukózy je základní biochemickou
informací o sacharidovém metabolizmu

účelem testu je:
screening diabetes mellitus

monitorování lékové nebo dietní terapie
u pacientů s DM
diagnostika při hypoglykemiích
monitorování energetického stavu a výživy hlavně
u intenzivně léčených pacientů

klinicko-biochemická diagnostika
stanovuje se:
náhodně naměřená glykemie
glykemie na lačno (FPG - Fasting Plasma Glucose)
glykemie po jídle
(postprandiální glykemie, pozátěžová glykemie )

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
glykemický profil

stanovení glukózy na lačno
nástroj laboratorní diagnózy DM
vyhledávání osob se zvýšeným rizikem DM

příprava pacienta:
odběr provádíme minimálně
po 8hodinovém lačnění,
vyloučit fyzickou námahu a kouření

odběr:
doporučuje se odebrat venózní krev
do odběrové nádobky
s antiglykolytickou směsí,
stanovit glukózu
ve stabilizované plazmě

předanalytické podmínky
pro stanovení glukózy na lačno

stabilizace antiglykolytickou směsí:
antiglykolytická směs obsahuje NaF (2,5 mg NaF/ml krve)
a protisrážlivé činidlo (např. heparin, EDTA...)
NaF stabilizuje glukózu ve vzorku blokací glykolýzy

!!! pokud není použité stabilizační činidlo, klesá bez oddělení
krevních elementů koncentrace glukózy
při pokojové teplotě za 1 hod. o 5 až 7 %

transport do laboratoře:

okamžitý

oddělení séra/plazmy od krevních elementů:
sérum/plazmu je potřeba oddělit od krevních elementů
do 60 minut od odběru

metody stanovení glukózy
neenzymové metody
oxidačně–redukční a kondenzační metody
jsou nejstarší metody stanovení
v současnosti se v klinické biochemii nepoužívají

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu (GOD) a peroxidázu (POD)
využívající enzym hexokinázu (HK)
využívající enzym glukózodehydrogenázu (GDH)

elektrochemické metody
hmotnostní spektrometrie
(ID-GC/MS – doporučená referenční metoda)

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu a peroxidázu

princip stanovení:
glukóza + O2

+ H 2O

GOD

glukonolakton

+ H 2 O2

na detekci vzniklého H2O2 se využívá reakce
katalyzované enzymem peroxidázou

H2O2 + 4-AAP+ fenol
redukovaný chromogen

POD

chinonimin

+ H 2O

oxidovaný chromogen

Trinderova reakce

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

činidla:
Enzymy lahvička 

pufer – chromogen lahvička 

peroxidáza

fosforečnanový tlumivý roztok

glukózooxidáza

3-methyl-fenol

4-aminoantipyrin

příprava pracovního roztoku
•

obsah lahvičky  se rozpustí v 6 ml destilované vody

•

vleje se do lahvičky  a promíchá se

stabilita: při +2-8 °C ve tmě 1 měsíc,

při +15-25 °C ve tmě 10 dní

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

postup analýzy:
vlnová délka (480-540 nm), s maximem při 498 nm
kyveta 1 cm
teplota +15-25 °C, nebo 37 ± 0,1 °C
ve třech zkumavkách se smíchá pracovní roztok v poměru 100 + 1
se sérem, plazmou (vzorkem), standardním roztokem glukózy (standard)
a s destilovanou vodou (reagenční blenk)
 vzorek (A1)

vzorek (sérum, plazma)

 standard (A2)

 reag. blenk

0,02 ml

standard

0,02 ml

dest. H2O

0,02 ml

pracovní roztok

2,0 ml

2,0 ml

2,0 ml

inkubace: (30 min při +15 až +25 °C nebo 15 min při 37 °C),
změří se absorbance vzorku (A1)
a standardu (A2) proti reagenčnímu blenku

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

metoda je aplikovatelná:
na manuální stanovení glukózy bez deproteinace
na manuální stanovení glukózy s deproteinací
na biochemické analyzátory

linearita: do 22,0 mmol/l
hodnoty přesahující horní hranici linearity
se ředí manuálně destilovanou vodou
a analýza se opakuje (výsledek x ředění)

interference:
hemolýza
chylozita
přítomnost redukujících látek
– kyselina askorbová, kyselina močová, bilirubin a jiné...

enzymové metody
využívající enzym hexokinázu

princip stanovení:
glukóza + ATP

hexokináza + Mg2+

glukóza-6-fosfát + ADP

glukóza-6-fosfát + NAD+

G-6-PDH

glukonát-6-fosfát + NADPH + H+

ATP: adenozintrifosfát
ADP: adenozindifosfát
G-6-PDH: glukóza-6-fosfátdehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

enzymové metody
využívající enzym glukózodehydrogenázu

princip stanovení:
glukóza + NAD+
GDH

glukonolakton

+ NADH + H+

GDH: glukózodehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

elektrochemické metody
princip stanovení je založen na:
enzymové reakci a ampérometrické detekci

produktů enzymové reakce

enzym glukózooxidáza je imobilizován na biosenzoru

vzniklý peroxid vodíku se detekuje a pomocí

převodníku převádí na elektrický signál

elektrochemické metody
vyšetření se provádí
na glukózových analyzátorech

výhodou je rychlost stanovení

na stanovení se může přímo použít
stabilizovaná kapilární krev,
bez předchozí úpravy vzorku
neinterferuje hemolýza

elektrochemické metody

glukóza + O2

glukózooxidáza

kyselina glukonová

+ H2O2
H2
elektrony

registrační
elektroda

O2

glukometry
sebekontrola diabetu

(SMBG – selfmonitoring of blood glucose)

domácí monitorování glykemie
různé typy glukometrů
odebírá se kapilární krev

pracují na principu přímého
elektrochemického stanovení
doporučuje se kontrola glukometrů
a spolupráce s OKB

algoritmus pro laboratorní screening DM
u dospělých
vyloučení
glukóza
postprandiální
(náhodný odběr)
+klinické příznaky
DM

< 5,6

< 11,1

≥ 11,1

doporučení ČDS a ČSKB
hodnoty glukózy jsou v mmol/l

glukóza
v plazmě
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

opakovat odběr
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

Diabetes mellitus
(DM)

< 7,0

≥ 5,6
a < 7,0

< 5,6l, ale
v anam. riziko
DM nebo IGT

oGTT-WHO
(zátěž 75g glukózy,
odběr žilní krve
na lačno a 2h
po zátěži)

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 11,1
2h po zátěži

Diabetes mellitus

hraniční
glukóza na lačno
(IFG)
glukóza v plazmě
žilní krve < 7,8
2h po zátěži

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 7,8
<11,1 2h po zátěži

porušená
glukózová tolerance
(IGT)

orální glukózo-toleranční test (oGTT)

je podpůrný diagnostický funkční test
pro diagnostiku DM
a porušené glukózové tolerance
(IGT – Impaired Glucose Tolerance)

sleduje se glykemie na lačno
a po zátěži glukózou,
opakovaně v určitých intervalech
za přesně definovaných podmínek

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
příprava pacienta:
3 dny před testem pacient konzumuje běžnou stravu
s dostatečným obsahem sacharidů (nejméně 150 g za den)
a normální fyzickou zátěží
test se provádí ráno po 10-14hodinovém lačnění
a fyzickém klidu bez alkoholu, kofeinu a nikotinu
doporučuje se vynechat léky, pokud je to
z klinického hlediska možné

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
provedení testu:
odebírá se venózní krev na lačno
a čeká se na výsledek glykemie

pokud je glykemie v rozmezí 5,6-6,9 mmol/l ,
oGTT se provede
pacient vypije během 5-10 minut 75 g glukózy
v 250-300 ml roztoku
další odběry venózní krve se provádějí
za 60 a 120 minut po vypití roztoku glukózy

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
diagnostická kritéria:
pro hodnotu glukózy v plazmě venózní krve 120 minut
po zátěži 75 g glukózy
vyloučení DM

< 7,8 mmol/l

porušená
glukózová tolerance (IGT )

≥ 7,8 mmol/l
až < 11,1 mmol/l

Diabetes mellitus

≥11,1 mmol/l

glykemie v mmol/l

12
11,1

11,1

10
8

7,8
6,7

6

6,7
5,6

4
2
0
0 minut

60 minut

čas

120 minut

180 minut

glykemický profil
několik stanovení glukózy v průběhu dne,

popřípadě i v noci odráží aktuální kompenzaci DM

glykemický profil zkrácený:
4 nebo 3 odběry
indikace: při DM I. a II. typu, při operacích diabetiků
nebo po porodu při DM II. typu,
pro posouzení kompenzace apod.

glykemický profil
glykemický profil úplný:
9 odběrů
indikace: je indikován při DM I. typu, při intenzivní terapii
nebo při inzulinové terapii, u gravidních diabetiček,
při těžké dekompenzaci DM všech typů,
po transplantaci pankreatu…

počet a přesné časování odběrů se v jednotlivých
diabetologických centrech liší
a závisí i na denním režimu nemocného

analýza glukózy se provádí v laboratořích, pokud pacient
je hospitalizovaný, nebo v domácích podmínkách
formou selfmonitoringu

glykemický profil
odběr materiálu:
nejčastěji se odebírá kapilární krev (z prstu) do odběrových nádob
určených na kapilární odběry s obsahem antiglykolytické směsi
(např. Sarstedt Multivette)

prevedení testu:
glykemický profil úplný
9 odběrů
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

1 hod. po snídani

3. vzorek

30 min. před obědem

4. vzorek

1 hod. po obědě

5. vzorek

30 min. před večeří

6. vzorek

1 hod. po večeři

7. vzorek

v 22.00 hod.

8. vzorek

v 01.00 hod.

9. vzorek

v 04.00 hod.

glykemický profil zkrácený
4 odběry
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

30 min. před obědem

3. vzorek

30 min. před večeří

4. vzorek

v 22.00 hod.

glykosurie
koncentrace glukózy v moči závisí
na hladině glukózy v krvi a na funkci ledvin
účel testu:
screening poruch glukózové tolerance
detekce poruch tubulární resorpce při poškození ledvin

stanovení glukózy v moči:
semikvantitativně – diagnostický proužek
kvantitativně
Poznámka:
semikvantitativní a kvantitativní stanovení glukózy v moči není
zařazené mezi základní nástroje na určení diagnózy diabetu ani
na sledovaní jeho stavu, protože individuální rozdíly ledvinného
prahu pro glukózu jsou dost velké a práh kolísá u každého jedince

• Játra přeměňují glukózu na ………. (8)
(též zásobní forma glukózy)

G

L

Y

K

O

S

U

R

I

E

L

L

2

O

2

H

J

I

C



N

6

B

Z

H

U

U

12

Ň

L

O

K

Í

6

Y

N

a

F

• Hormon, který snižuje glykémii se nazývá U G Y L P U Á
…………………………….. (7).
K
K
O
K
R
N
T
• Krev pro stanovení glukózy se odebírá
A
T
T
G
O
E
R
do nádobek s antiglykolytickým činidlem,
G
O
G
E
F
G
A
kterým je ……. (3 - vzorec).
•Jak se nazývá diagnostický funkční test
O
N
E
Z
I
E
E
pro diagnostiku diabetu mellitu a porušené N M M O L / L
glukózové tolerance? (4 – zkratka).
• Hladina glukózy v moči se nazývá …………………………..(10).
• Hormon, který zvyšuje glykémii se nazývá ……………………… (8).
• Test, kdy se stanovují glykémie několikrát během dne a popř.
i v noci se nazývá glykemický …………….. (6).
• Jednotky, v kterých se uvádí výsledky glykémie …………………… (6).
• Sumární vzorec glukózy ………………(6)
• Reakcí glukózy a GOD vzniká sloučenina ………………. ( 4 vzorec).
• Které buňky pankreatu produkují inzulín? (6)
• Zásoby glykogenu, jsou uloženy v orgánu, který se nazývá
………………………………. (5).


Slide 26

Zdravotnická škola, Hradec Králové
Stredná zdravotnícka škola, Bánská Bystrica

glukóza
klinicko-biochemická diagnostika
a metody stanovení

glukóza
monosacharid – aldohexóza
chemický vzorec: C6H12O6
zkratka:
Glc
-Dglukopyranóza

=
D-glukóza

D-glukóza

-Dglukopyranóza

glukóza
je nejdůležitější látkou metabolizmu
sacharidů, tvoří se trávením a konverzí
glykogenu v játrech
za fyziologických podmínek získává organizmus
glukózu:
potravou - přísun z vnějšího prostředí
glykogenolýzou – metabolická dráha konverze glykogenu
na glukózu (zásoby glykogenu jsou uložené hlavně
v játrech a příčně pruhovaných svalech)

glukoneogenezí - metabolická dráha syntézy glukózy
z necukernatých prekurzorů (pyruvát, laktát, aminokyseliny, meziprodukty citrátového cyklu, glycerol)

regulační systém metabolizmu glukózy
organizmus se snaží zachovat koncentraci glukózy
v krvi v úzkém rozmezí: 3,3 - 6,1 mmol/l
regulační systém:
nervová složka
hormonální složka
- inzulin
- glukagon
- adrenalin a noradrenalin
- glukokortikoidy
- růstový hormon
- hormony štítné žlázy...

poruchy v metabolizmu glukózy
glykemie, glukozemie, glukoplazmie - hladina glukózy v krvi
glykosurie - přítomnost glukózy v moči
porucha v metabolizmu se může projevit ve smyslu:
trvalého zvýšení  hladiny glukózy
- hyperglykemie
za hyperglykemii považujeme stavy, kdy koncentrace glukózy
na lačno je vyšší než horní hranice referenčního intervalu

nebo snížení  hladiny glukózy
- hypoglykemie
hypoglykemie je vážný stav, kdy koncentrace glukózy v krvi
klesne pod dolní hranici referenčního intervalu,
tj. pod 3,3 mmol/l, a je doprovázena klinickými projevy

klinicko-biochemická diagnostika
stanovení glukózy je základní biochemickou
informací o sacharidovém metabolizmu

účelem testu je:
screening diabetes mellitus

monitorování lékové nebo dietní terapie
u pacientů s DM
diagnostika při hypoglykemiích
monitorování energetického stavu a výživy hlavně
u intenzivně léčených pacientů

klinicko-biochemická diagnostika
stanovuje se:
náhodně naměřená glykemie
glykemie na lačno (FPG - Fasting Plasma Glucose)
glykemie po jídle
(postprandiální glykemie, pozátěžová glykemie )

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
glykemický profil

stanovení glukózy na lačno
nástroj laboratorní diagnózy DM
vyhledávání osob se zvýšeným rizikem DM

příprava pacienta:
odběr provádíme minimálně
po 8hodinovém lačnění,
vyloučit fyzickou námahu a kouření

odběr:
doporučuje se odebrat venózní krev
do odběrové nádobky
s antiglykolytickou směsí,
stanovit glukózu
ve stabilizované plazmě

předanalytické podmínky
pro stanovení glukózy na lačno

stabilizace antiglykolytickou směsí:
antiglykolytická směs obsahuje NaF (2,5 mg NaF/ml krve)
a protisrážlivé činidlo (např. heparin, EDTA...)
NaF stabilizuje glukózu ve vzorku blokací glykolýzy

!!! pokud není použité stabilizační činidlo, klesá bez oddělení
krevních elementů koncentrace glukózy
při pokojové teplotě za 1 hod. o 5 až 7 %

transport do laboratoře:

okamžitý

oddělení séra/plazmy od krevních elementů:
sérum/plazmu je potřeba oddělit od krevních elementů
do 60 minut od odběru

metody stanovení glukózy
neenzymové metody
oxidačně–redukční a kondenzační metody
jsou nejstarší metody stanovení
v současnosti se v klinické biochemii nepoužívají

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu (GOD) a peroxidázu (POD)
využívající enzym hexokinázu (HK)
využívající enzym glukózodehydrogenázu (GDH)

elektrochemické metody
hmotnostní spektrometrie
(ID-GC/MS – doporučená referenční metoda)

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu a peroxidázu

princip stanovení:
glukóza + O2

+ H 2O

GOD

glukonolakton

+ H 2 O2

na detekci vzniklého H2O2 se využívá reakce
katalyzované enzymem peroxidázou

H2O2 + 4-AAP+ fenol
redukovaný chromogen

POD

chinonimin

+ H 2O

oxidovaný chromogen

Trinderova reakce

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

činidla:
Enzymy lahvička 

pufer – chromogen lahvička 

peroxidáza

fosforečnanový tlumivý roztok

glukózooxidáza

3-methyl-fenol

4-aminoantipyrin

příprava pracovního roztoku
•

obsah lahvičky  se rozpustí v 6 ml destilované vody

•

vleje se do lahvičky  a promíchá se

stabilita: při +2-8 °C ve tmě 1 měsíc,

při +15-25 °C ve tmě 10 dní

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

postup analýzy:
vlnová délka (480-540 nm), s maximem při 498 nm
kyveta 1 cm
teplota +15-25 °C, nebo 37 ± 0,1 °C
ve třech zkumavkách se smíchá pracovní roztok v poměru 100 + 1
se sérem, plazmou (vzorkem), standardním roztokem glukózy (standard)
a s destilovanou vodou (reagenční blenk)
 vzorek (A1)

vzorek (sérum, plazma)

 standard (A2)

 reag. blenk

0,02 ml

standard

0,02 ml

dest. H2O

0,02 ml

pracovní roztok

2,0 ml

2,0 ml

2,0 ml

inkubace: (30 min při +15 až +25 °C nebo 15 min při 37 °C),
změří se absorbance vzorku (A1)
a standardu (A2) proti reagenčnímu blenku

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

metoda je aplikovatelná:
na manuální stanovení glukózy bez deproteinace
na manuální stanovení glukózy s deproteinací
na biochemické analyzátory

linearita: do 22,0 mmol/l
hodnoty přesahující horní hranici linearity
se ředí manuálně destilovanou vodou
a analýza se opakuje (výsledek x ředění)

interference:
hemolýza
chylozita
přítomnost redukujících látek
– kyselina askorbová, kyselina močová, bilirubin a jiné...

enzymové metody
využívající enzym hexokinázu

princip stanovení:
glukóza + ATP

hexokináza + Mg2+

glukóza-6-fosfát + ADP

glukóza-6-fosfát + NAD+

G-6-PDH

glukonát-6-fosfát + NADPH + H+

ATP: adenozintrifosfát
ADP: adenozindifosfát
G-6-PDH: glukóza-6-fosfátdehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

enzymové metody
využívající enzym glukózodehydrogenázu

princip stanovení:
glukóza + NAD+
GDH

glukonolakton

+ NADH + H+

GDH: glukózodehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

elektrochemické metody
princip stanovení je založen na:
enzymové reakci a ampérometrické detekci

produktů enzymové reakce

enzym glukózooxidáza je imobilizován na biosenzoru

vzniklý peroxid vodíku se detekuje a pomocí

převodníku převádí na elektrický signál

elektrochemické metody
vyšetření se provádí
na glukózových analyzátorech

výhodou je rychlost stanovení

na stanovení se může přímo použít
stabilizovaná kapilární krev,
bez předchozí úpravy vzorku
neinterferuje hemolýza

elektrochemické metody

glukóza + O2

glukózooxidáza

kyselina glukonová

+ H2O2
H2
elektrony

registrační
elektroda

O2

glukometry
sebekontrola diabetu

(SMBG – selfmonitoring of blood glucose)

domácí monitorování glykemie
různé typy glukometrů
odebírá se kapilární krev

pracují na principu přímého
elektrochemického stanovení
doporučuje se kontrola glukometrů
a spolupráce s OKB

algoritmus pro laboratorní screening DM
u dospělých
vyloučení
glukóza
postprandiální
(náhodný odběr)
+klinické příznaky
DM

< 5,6

< 11,1

≥ 11,1

doporučení ČDS a ČSKB
hodnoty glukózy jsou v mmol/l

glukóza
v plazmě
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

opakovat odběr
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

Diabetes mellitus
(DM)

< 7,0

≥ 5,6
a < 7,0

< 5,6l, ale
v anam. riziko
DM nebo IGT

oGTT-WHO
(zátěž 75g glukózy,
odběr žilní krve
na lačno a 2h
po zátěži)

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 11,1
2h po zátěži

Diabetes mellitus

hraniční
glukóza na lačno
(IFG)
glukóza v plazmě
žilní krve < 7,8
2h po zátěži

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 7,8
<11,1 2h po zátěži

porušená
glukózová tolerance
(IGT)

orální glukózo-toleranční test (oGTT)

je podpůrný diagnostický funkční test
pro diagnostiku DM
a porušené glukózové tolerance
(IGT – Impaired Glucose Tolerance)

sleduje se glykemie na lačno
a po zátěži glukózou,
opakovaně v určitých intervalech
za přesně definovaných podmínek

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
příprava pacienta:
3 dny před testem pacient konzumuje běžnou stravu
s dostatečným obsahem sacharidů (nejméně 150 g za den)
a normální fyzickou zátěží
test se provádí ráno po 10-14hodinovém lačnění
a fyzickém klidu bez alkoholu, kofeinu a nikotinu
doporučuje se vynechat léky, pokud je to
z klinického hlediska možné

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
provedení testu:
odebírá se venózní krev na lačno
a čeká se na výsledek glykemie

pokud je glykemie v rozmezí 5,6-6,9 mmol/l ,
oGTT se provede
pacient vypije během 5-10 minut 75 g glukózy
v 250-300 ml roztoku
další odběry venózní krve se provádějí
za 60 a 120 minut po vypití roztoku glukózy

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
diagnostická kritéria:
pro hodnotu glukózy v plazmě venózní krve 120 minut
po zátěži 75 g glukózy
vyloučení DM

< 7,8 mmol/l

porušená
glukózová tolerance (IGT )

≥ 7,8 mmol/l
až < 11,1 mmol/l

Diabetes mellitus

≥11,1 mmol/l

glykemie v mmol/l

12
11,1

11,1

10
8

7,8
6,7

6

6,7
5,6

4
2
0
0 minut

60 minut

čas

120 minut

180 minut

glykemický profil
několik stanovení glukózy v průběhu dne,

popřípadě i v noci odráží aktuální kompenzaci DM

glykemický profil zkrácený:
4 nebo 3 odběry
indikace: při DM I. a II. typu, při operacích diabetiků
nebo po porodu při DM II. typu,
pro posouzení kompenzace apod.

glykemický profil
glykemický profil úplný:
9 odběrů
indikace: je indikován při DM I. typu, při intenzivní terapii
nebo při inzulinové terapii, u gravidních diabetiček,
při těžké dekompenzaci DM všech typů,
po transplantaci pankreatu…

počet a přesné časování odběrů se v jednotlivých
diabetologických centrech liší
a závisí i na denním režimu nemocného

analýza glukózy se provádí v laboratořích, pokud pacient
je hospitalizovaný, nebo v domácích podmínkách
formou selfmonitoringu

glykemický profil
odběr materiálu:
nejčastěji se odebírá kapilární krev (z prstu) do odběrových nádob
určených na kapilární odběry s obsahem antiglykolytické směsi
(např. Sarstedt Multivette)

prevedení testu:
glykemický profil úplný
9 odběrů
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

1 hod. po snídani

3. vzorek

30 min. před obědem

4. vzorek

1 hod. po obědě

5. vzorek

30 min. před večeří

6. vzorek

1 hod. po večeři

7. vzorek

v 22.00 hod.

8. vzorek

v 01.00 hod.

9. vzorek

v 04.00 hod.

glykemický profil zkrácený
4 odběry
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

30 min. před obědem

3. vzorek

30 min. před večeří

4. vzorek

v 22.00 hod.

glykosurie
koncentrace glukózy v moči závisí
na hladině glukózy v krvi a na funkci ledvin
účel testu:
screening poruch glukózové tolerance
detekce poruch tubulární resorpce při poškození ledvin

stanovení glukózy v moči:
semikvantitativně – diagnostický proužek
kvantitativně
Poznámka:
semikvantitativní a kvantitativní stanovení glukózy v moči není
zařazené mezi základní nástroje na určení diagnózy diabetu ani
na sledovaní jeho stavu, protože individuální rozdíly ledvinného
prahu pro glukózu jsou dost velké a práh kolísá u každého jedince

• Játra přeměňují glukózu na ………. (8)
(též zásobní forma glukózy)

G

L

Y

K

O

S

U

R

I

E

L

L

2

O

2

H

J

I

C



N

6

B

Z

H

U

U

12

Ň

L

O

K

Í

6

Y

N

a

F

• Hormon, který snižuje glykémii se nazývá U G Y L P U Á
…………………………….. (7).
K
K
O
K
R
N
T
• Krev pro stanovení glukózy se odebírá
A
T
T
G
O
E
R
do nádobek s antiglykolytickým činidlem,
G
O
G
E
F
G
A
kterým je ……. (3 - vzorec).
•Jak se nazývá diagnostický funkční test
O
N
E
Z
I
E
E
pro diagnostiku diabetu mellitu a porušené N M M O L / L
glukózové tolerance? (4 – zkratka).
• Hladina glukózy v moči se nazývá …………………………..(10).
• Hormon, který zvyšuje glykémii se nazývá ……………………… (8).
• Test, kdy se stanovují glykémie několikrát během dne a popř.
i v noci se nazývá glykemický …………….. (6).
• Jednotky, v kterých se uvádí výsledky glykémie …………………… (6).
• Sumární vzorec glukózy ………………(6)
• Reakcí glukózy a GOD vzniká sloučenina ………………. ( 4 vzorec).
• Které buňky pankreatu produkují inzulín? (6)
• Zásoby glykogenu, jsou uloženy v orgánu, který se nazývá
………………………………. (5).


Slide 27

Zdravotnická škola, Hradec Králové
Stredná zdravotnícka škola, Bánská Bystrica

glukóza
klinicko-biochemická diagnostika
a metody stanovení

glukóza
monosacharid – aldohexóza
chemický vzorec: C6H12O6
zkratka:
Glc
-Dglukopyranóza

=
D-glukóza

D-glukóza

-Dglukopyranóza

glukóza
je nejdůležitější látkou metabolizmu
sacharidů, tvoří se trávením a konverzí
glykogenu v játrech
za fyziologických podmínek získává organizmus
glukózu:
potravou - přísun z vnějšího prostředí
glykogenolýzou – metabolická dráha konverze glykogenu
na glukózu (zásoby glykogenu jsou uložené hlavně
v játrech a příčně pruhovaných svalech)

glukoneogenezí - metabolická dráha syntézy glukózy
z necukernatých prekurzorů (pyruvát, laktát, aminokyseliny, meziprodukty citrátového cyklu, glycerol)

regulační systém metabolizmu glukózy
organizmus se snaží zachovat koncentraci glukózy
v krvi v úzkém rozmezí: 3,3 - 6,1 mmol/l
regulační systém:
nervová složka
hormonální složka
- inzulin
- glukagon
- adrenalin a noradrenalin
- glukokortikoidy
- růstový hormon
- hormony štítné žlázy...

poruchy v metabolizmu glukózy
glykemie, glukozemie, glukoplazmie - hladina glukózy v krvi
glykosurie - přítomnost glukózy v moči
porucha v metabolizmu se může projevit ve smyslu:
trvalého zvýšení  hladiny glukózy
- hyperglykemie
za hyperglykemii považujeme stavy, kdy koncentrace glukózy
na lačno je vyšší než horní hranice referenčního intervalu

nebo snížení  hladiny glukózy
- hypoglykemie
hypoglykemie je vážný stav, kdy koncentrace glukózy v krvi
klesne pod dolní hranici referenčního intervalu,
tj. pod 3,3 mmol/l, a je doprovázena klinickými projevy

klinicko-biochemická diagnostika
stanovení glukózy je základní biochemickou
informací o sacharidovém metabolizmu

účelem testu je:
screening diabetes mellitus

monitorování lékové nebo dietní terapie
u pacientů s DM
diagnostika při hypoglykemiích
monitorování energetického stavu a výživy hlavně
u intenzivně léčených pacientů

klinicko-biochemická diagnostika
stanovuje se:
náhodně naměřená glykemie
glykemie na lačno (FPG - Fasting Plasma Glucose)
glykemie po jídle
(postprandiální glykemie, pozátěžová glykemie )

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
glykemický profil

stanovení glukózy na lačno
nástroj laboratorní diagnózy DM
vyhledávání osob se zvýšeným rizikem DM

příprava pacienta:
odběr provádíme minimálně
po 8hodinovém lačnění,
vyloučit fyzickou námahu a kouření

odběr:
doporučuje se odebrat venózní krev
do odběrové nádobky
s antiglykolytickou směsí,
stanovit glukózu
ve stabilizované plazmě

předanalytické podmínky
pro stanovení glukózy na lačno

stabilizace antiglykolytickou směsí:
antiglykolytická směs obsahuje NaF (2,5 mg NaF/ml krve)
a protisrážlivé činidlo (např. heparin, EDTA...)
NaF stabilizuje glukózu ve vzorku blokací glykolýzy

!!! pokud není použité stabilizační činidlo, klesá bez oddělení
krevních elementů koncentrace glukózy
při pokojové teplotě za 1 hod. o 5 až 7 %

transport do laboratoře:

okamžitý

oddělení séra/plazmy od krevních elementů:
sérum/plazmu je potřeba oddělit od krevních elementů
do 60 minut od odběru

metody stanovení glukózy
neenzymové metody
oxidačně–redukční a kondenzační metody
jsou nejstarší metody stanovení
v současnosti se v klinické biochemii nepoužívají

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu (GOD) a peroxidázu (POD)
využívající enzym hexokinázu (HK)
využívající enzym glukózodehydrogenázu (GDH)

elektrochemické metody
hmotnostní spektrometrie
(ID-GC/MS – doporučená referenční metoda)

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu a peroxidázu

princip stanovení:
glukóza + O2

+ H 2O

GOD

glukonolakton

+ H 2 O2

na detekci vzniklého H2O2 se využívá reakce
katalyzované enzymem peroxidázou

H2O2 + 4-AAP+ fenol
redukovaný chromogen

POD

chinonimin

+ H 2O

oxidovaný chromogen

Trinderova reakce

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

činidla:
Enzymy lahvička 

pufer – chromogen lahvička 

peroxidáza

fosforečnanový tlumivý roztok

glukózooxidáza

3-methyl-fenol

4-aminoantipyrin

příprava pracovního roztoku
•

obsah lahvičky  se rozpustí v 6 ml destilované vody

•

vleje se do lahvičky  a promíchá se

stabilita: při +2-8 °C ve tmě 1 měsíc,

při +15-25 °C ve tmě 10 dní

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

postup analýzy:
vlnová délka (480-540 nm), s maximem při 498 nm
kyveta 1 cm
teplota +15-25 °C, nebo 37 ± 0,1 °C
ve třech zkumavkách se smíchá pracovní roztok v poměru 100 + 1
se sérem, plazmou (vzorkem), standardním roztokem glukózy (standard)
a s destilovanou vodou (reagenční blenk)
 vzorek (A1)

vzorek (sérum, plazma)

 standard (A2)

 reag. blenk

0,02 ml

standard

0,02 ml

dest. H2O

0,02 ml

pracovní roztok

2,0 ml

2,0 ml

2,0 ml

inkubace: (30 min při +15 až +25 °C nebo 15 min při 37 °C),
změří se absorbance vzorku (A1)
a standardu (A2) proti reagenčnímu blenku

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

metoda je aplikovatelná:
na manuální stanovení glukózy bez deproteinace
na manuální stanovení glukózy s deproteinací
na biochemické analyzátory

linearita: do 22,0 mmol/l
hodnoty přesahující horní hranici linearity
se ředí manuálně destilovanou vodou
a analýza se opakuje (výsledek x ředění)

interference:
hemolýza
chylozita
přítomnost redukujících látek
– kyselina askorbová, kyselina močová, bilirubin a jiné...

enzymové metody
využívající enzym hexokinázu

princip stanovení:
glukóza + ATP

hexokináza + Mg2+

glukóza-6-fosfát + ADP

glukóza-6-fosfát + NAD+

G-6-PDH

glukonát-6-fosfát + NADPH + H+

ATP: adenozintrifosfát
ADP: adenozindifosfát
G-6-PDH: glukóza-6-fosfátdehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

enzymové metody
využívající enzym glukózodehydrogenázu

princip stanovení:
glukóza + NAD+
GDH

glukonolakton

+ NADH + H+

GDH: glukózodehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

elektrochemické metody
princip stanovení je založen na:
enzymové reakci a ampérometrické detekci

produktů enzymové reakce

enzym glukózooxidáza je imobilizován na biosenzoru

vzniklý peroxid vodíku se detekuje a pomocí

převodníku převádí na elektrický signál

elektrochemické metody
vyšetření se provádí
na glukózových analyzátorech

výhodou je rychlost stanovení

na stanovení se může přímo použít
stabilizovaná kapilární krev,
bez předchozí úpravy vzorku
neinterferuje hemolýza

elektrochemické metody

glukóza + O2

glukózooxidáza

kyselina glukonová

+ H2O2
H2
elektrony

registrační
elektroda

O2

glukometry
sebekontrola diabetu

(SMBG – selfmonitoring of blood glucose)

domácí monitorování glykemie
různé typy glukometrů
odebírá se kapilární krev

pracují na principu přímého
elektrochemického stanovení
doporučuje se kontrola glukometrů
a spolupráce s OKB

algoritmus pro laboratorní screening DM
u dospělých
vyloučení
glukóza
postprandiální
(náhodný odběr)
+klinické příznaky
DM

< 5,6

< 11,1

≥ 11,1

doporučení ČDS a ČSKB
hodnoty glukózy jsou v mmol/l

glukóza
v plazmě
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

opakovat odběr
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

Diabetes mellitus
(DM)

< 7,0

≥ 5,6
a < 7,0

< 5,6l, ale
v anam. riziko
DM nebo IGT

oGTT-WHO
(zátěž 75g glukózy,
odběr žilní krve
na lačno a 2h
po zátěži)

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 11,1
2h po zátěži

Diabetes mellitus

hraniční
glukóza na lačno
(IFG)
glukóza v plazmě
žilní krve < 7,8
2h po zátěži

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 7,8
<11,1 2h po zátěži

porušená
glukózová tolerance
(IGT)

orální glukózo-toleranční test (oGTT)

je podpůrný diagnostický funkční test
pro diagnostiku DM
a porušené glukózové tolerance
(IGT – Impaired Glucose Tolerance)

sleduje se glykemie na lačno
a po zátěži glukózou,
opakovaně v určitých intervalech
za přesně definovaných podmínek

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
příprava pacienta:
3 dny před testem pacient konzumuje běžnou stravu
s dostatečným obsahem sacharidů (nejméně 150 g za den)
a normální fyzickou zátěží
test se provádí ráno po 10-14hodinovém lačnění
a fyzickém klidu bez alkoholu, kofeinu a nikotinu
doporučuje se vynechat léky, pokud je to
z klinického hlediska možné

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
provedení testu:
odebírá se venózní krev na lačno
a čeká se na výsledek glykemie

pokud je glykemie v rozmezí 5,6-6,9 mmol/l ,
oGTT se provede
pacient vypije během 5-10 minut 75 g glukózy
v 250-300 ml roztoku
další odběry venózní krve se provádějí
za 60 a 120 minut po vypití roztoku glukózy

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
diagnostická kritéria:
pro hodnotu glukózy v plazmě venózní krve 120 minut
po zátěži 75 g glukózy
vyloučení DM

< 7,8 mmol/l

porušená
glukózová tolerance (IGT )

≥ 7,8 mmol/l
až < 11,1 mmol/l

Diabetes mellitus

≥11,1 mmol/l

glykemie v mmol/l

12
11,1

11,1

10
8

7,8
6,7

6

6,7
5,6

4
2
0
0 minut

60 minut

čas

120 minut

180 minut

glykemický profil
několik stanovení glukózy v průběhu dne,

popřípadě i v noci odráží aktuální kompenzaci DM

glykemický profil zkrácený:
4 nebo 3 odběry
indikace: při DM I. a II. typu, při operacích diabetiků
nebo po porodu při DM II. typu,
pro posouzení kompenzace apod.

glykemický profil
glykemický profil úplný:
9 odběrů
indikace: je indikován při DM I. typu, při intenzivní terapii
nebo při inzulinové terapii, u gravidních diabetiček,
při těžké dekompenzaci DM všech typů,
po transplantaci pankreatu…

počet a přesné časování odběrů se v jednotlivých
diabetologických centrech liší
a závisí i na denním režimu nemocného

analýza glukózy se provádí v laboratořích, pokud pacient
je hospitalizovaný, nebo v domácích podmínkách
formou selfmonitoringu

glykemický profil
odběr materiálu:
nejčastěji se odebírá kapilární krev (z prstu) do odběrových nádob
určených na kapilární odběry s obsahem antiglykolytické směsi
(např. Sarstedt Multivette)

prevedení testu:
glykemický profil úplný
9 odběrů
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

1 hod. po snídani

3. vzorek

30 min. před obědem

4. vzorek

1 hod. po obědě

5. vzorek

30 min. před večeří

6. vzorek

1 hod. po večeři

7. vzorek

v 22.00 hod.

8. vzorek

v 01.00 hod.

9. vzorek

v 04.00 hod.

glykemický profil zkrácený
4 odběry
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

30 min. před obědem

3. vzorek

30 min. před večeří

4. vzorek

v 22.00 hod.

glykosurie
koncentrace glukózy v moči závisí
na hladině glukózy v krvi a na funkci ledvin
účel testu:
screening poruch glukózové tolerance
detekce poruch tubulární resorpce při poškození ledvin

stanovení glukózy v moči:
semikvantitativně – diagnostický proužek
kvantitativně
Poznámka:
semikvantitativní a kvantitativní stanovení glukózy v moči není
zařazené mezi základní nástroje na určení diagnózy diabetu ani
na sledovaní jeho stavu, protože individuální rozdíly ledvinného
prahu pro glukózu jsou dost velké a práh kolísá u každého jedince

• Játra přeměňují glukózu na ………. (8)
(též zásobní forma glukózy)

G

L

Y

K

O

S

U

R

I

E

L

L

2

O

2

H

J

I

C



N

6

B

Z

H

U

U

12

Ň

L

O

K

Í

6

Y

N

a

F

• Hormon, který snižuje glykémii se nazývá U G Y L P U Á
…………………………….. (7).
K
K
O
K
R
N
T
• Krev pro stanovení glukózy se odebírá
A
T
T
G
O
E
R
do nádobek s antiglykolytickým činidlem,
G
O
G
E
F
G
A
kterým je ……. (3 - vzorec).
•Jak se nazývá diagnostický funkční test
O
N
E
Z
I
E
E
pro diagnostiku diabetu mellitu a porušené N M M O L / L
glukózové tolerance? (4 – zkratka).
• Hladina glukózy v moči se nazývá …………………………..(10).
• Hormon, který zvyšuje glykémii se nazývá ……………………… (8).
• Test, kdy se stanovují glykémie několikrát během dne a popř.
i v noci se nazývá glykemický …………….. (6).
• Jednotky, v kterých se uvádí výsledky glykémie …………………… (6).
• Sumární vzorec glukózy ………………(6)
• Reakcí glukózy a GOD vzniká sloučenina ………………. ( 4 vzorec).
• Které buňky pankreatu produkují inzulín? (6)
• Zásoby glykogenu, jsou uloženy v orgánu, který se nazývá
………………………………. (5).


Slide 28

Zdravotnická škola, Hradec Králové
Stredná zdravotnícka škola, Bánská Bystrica

glukóza
klinicko-biochemická diagnostika
a metody stanovení

glukóza
monosacharid – aldohexóza
chemický vzorec: C6H12O6
zkratka:
Glc
-Dglukopyranóza

=
D-glukóza

D-glukóza

-Dglukopyranóza

glukóza
je nejdůležitější látkou metabolizmu
sacharidů, tvoří se trávením a konverzí
glykogenu v játrech
za fyziologických podmínek získává organizmus
glukózu:
potravou - přísun z vnějšího prostředí
glykogenolýzou – metabolická dráha konverze glykogenu
na glukózu (zásoby glykogenu jsou uložené hlavně
v játrech a příčně pruhovaných svalech)

glukoneogenezí - metabolická dráha syntézy glukózy
z necukernatých prekurzorů (pyruvát, laktát, aminokyseliny, meziprodukty citrátového cyklu, glycerol)

regulační systém metabolizmu glukózy
organizmus se snaží zachovat koncentraci glukózy
v krvi v úzkém rozmezí: 3,3 - 6,1 mmol/l
regulační systém:
nervová složka
hormonální složka
- inzulin
- glukagon
- adrenalin a noradrenalin
- glukokortikoidy
- růstový hormon
- hormony štítné žlázy...

poruchy v metabolizmu glukózy
glykemie, glukozemie, glukoplazmie - hladina glukózy v krvi
glykosurie - přítomnost glukózy v moči
porucha v metabolizmu se může projevit ve smyslu:
trvalého zvýšení  hladiny glukózy
- hyperglykemie
za hyperglykemii považujeme stavy, kdy koncentrace glukózy
na lačno je vyšší než horní hranice referenčního intervalu

nebo snížení  hladiny glukózy
- hypoglykemie
hypoglykemie je vážný stav, kdy koncentrace glukózy v krvi
klesne pod dolní hranici referenčního intervalu,
tj. pod 3,3 mmol/l, a je doprovázena klinickými projevy

klinicko-biochemická diagnostika
stanovení glukózy je základní biochemickou
informací o sacharidovém metabolizmu

účelem testu je:
screening diabetes mellitus

monitorování lékové nebo dietní terapie
u pacientů s DM
diagnostika při hypoglykemiích
monitorování energetického stavu a výživy hlavně
u intenzivně léčených pacientů

klinicko-biochemická diagnostika
stanovuje se:
náhodně naměřená glykemie
glykemie na lačno (FPG - Fasting Plasma Glucose)
glykemie po jídle
(postprandiální glykemie, pozátěžová glykemie )

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
glykemický profil

stanovení glukózy na lačno
nástroj laboratorní diagnózy DM
vyhledávání osob se zvýšeným rizikem DM

příprava pacienta:
odběr provádíme minimálně
po 8hodinovém lačnění,
vyloučit fyzickou námahu a kouření

odběr:
doporučuje se odebrat venózní krev
do odběrové nádobky
s antiglykolytickou směsí,
stanovit glukózu
ve stabilizované plazmě

předanalytické podmínky
pro stanovení glukózy na lačno

stabilizace antiglykolytickou směsí:
antiglykolytická směs obsahuje NaF (2,5 mg NaF/ml krve)
a protisrážlivé činidlo (např. heparin, EDTA...)
NaF stabilizuje glukózu ve vzorku blokací glykolýzy

!!! pokud není použité stabilizační činidlo, klesá bez oddělení
krevních elementů koncentrace glukózy
při pokojové teplotě za 1 hod. o 5 až 7 %

transport do laboratoře:

okamžitý

oddělení séra/plazmy od krevních elementů:
sérum/plazmu je potřeba oddělit od krevních elementů
do 60 minut od odběru

metody stanovení glukózy
neenzymové metody
oxidačně–redukční a kondenzační metody
jsou nejstarší metody stanovení
v současnosti se v klinické biochemii nepoužívají

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu (GOD) a peroxidázu (POD)
využívající enzym hexokinázu (HK)
využívající enzym glukózodehydrogenázu (GDH)

elektrochemické metody
hmotnostní spektrometrie
(ID-GC/MS – doporučená referenční metoda)

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu a peroxidázu

princip stanovení:
glukóza + O2

+ H 2O

GOD

glukonolakton

+ H 2 O2

na detekci vzniklého H2O2 se využívá reakce
katalyzované enzymem peroxidázou

H2O2 + 4-AAP+ fenol
redukovaný chromogen

POD

chinonimin

+ H 2O

oxidovaný chromogen

Trinderova reakce

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

činidla:
Enzymy lahvička 

pufer – chromogen lahvička 

peroxidáza

fosforečnanový tlumivý roztok

glukózooxidáza

3-methyl-fenol

4-aminoantipyrin

příprava pracovního roztoku
•

obsah lahvičky  se rozpustí v 6 ml destilované vody

•

vleje se do lahvičky  a promíchá se

stabilita: při +2-8 °C ve tmě 1 měsíc,

při +15-25 °C ve tmě 10 dní

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

postup analýzy:
vlnová délka (480-540 nm), s maximem při 498 nm
kyveta 1 cm
teplota +15-25 °C, nebo 37 ± 0,1 °C
ve třech zkumavkách se smíchá pracovní roztok v poměru 100 + 1
se sérem, plazmou (vzorkem), standardním roztokem glukózy (standard)
a s destilovanou vodou (reagenční blenk)
 vzorek (A1)

vzorek (sérum, plazma)

 standard (A2)

 reag. blenk

0,02 ml

standard

0,02 ml

dest. H2O

0,02 ml

pracovní roztok

2,0 ml

2,0 ml

2,0 ml

inkubace: (30 min při +15 až +25 °C nebo 15 min při 37 °C),
změří se absorbance vzorku (A1)
a standardu (A2) proti reagenčnímu blenku

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

metoda je aplikovatelná:
na manuální stanovení glukózy bez deproteinace
na manuální stanovení glukózy s deproteinací
na biochemické analyzátory

linearita: do 22,0 mmol/l
hodnoty přesahující horní hranici linearity
se ředí manuálně destilovanou vodou
a analýza se opakuje (výsledek x ředění)

interference:
hemolýza
chylozita
přítomnost redukujících látek
– kyselina askorbová, kyselina močová, bilirubin a jiné...

enzymové metody
využívající enzym hexokinázu

princip stanovení:
glukóza + ATP

hexokináza + Mg2+

glukóza-6-fosfát + ADP

glukóza-6-fosfát + NAD+

G-6-PDH

glukonát-6-fosfát + NADPH + H+

ATP: adenozintrifosfát
ADP: adenozindifosfát
G-6-PDH: glukóza-6-fosfátdehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

enzymové metody
využívající enzym glukózodehydrogenázu

princip stanovení:
glukóza + NAD+
GDH

glukonolakton

+ NADH + H+

GDH: glukózodehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

elektrochemické metody
princip stanovení je založen na:
enzymové reakci a ampérometrické detekci

produktů enzymové reakce

enzym glukózooxidáza je imobilizován na biosenzoru

vzniklý peroxid vodíku se detekuje a pomocí

převodníku převádí na elektrický signál

elektrochemické metody
vyšetření se provádí
na glukózových analyzátorech

výhodou je rychlost stanovení

na stanovení se může přímo použít
stabilizovaná kapilární krev,
bez předchozí úpravy vzorku
neinterferuje hemolýza

elektrochemické metody

glukóza + O2

glukózooxidáza

kyselina glukonová

+ H2O2
H2
elektrony

registrační
elektroda

O2

glukometry
sebekontrola diabetu

(SMBG – selfmonitoring of blood glucose)

domácí monitorování glykemie
různé typy glukometrů
odebírá se kapilární krev

pracují na principu přímého
elektrochemického stanovení
doporučuje se kontrola glukometrů
a spolupráce s OKB

algoritmus pro laboratorní screening DM
u dospělých
vyloučení
glukóza
postprandiální
(náhodný odběr)
+klinické příznaky
DM

< 5,6

< 11,1

≥ 11,1

doporučení ČDS a ČSKB
hodnoty glukózy jsou v mmol/l

glukóza
v plazmě
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

opakovat odběr
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

Diabetes mellitus
(DM)

< 7,0

≥ 5,6
a < 7,0

< 5,6l, ale
v anam. riziko
DM nebo IGT

oGTT-WHO
(zátěž 75g glukózy,
odběr žilní krve
na lačno a 2h
po zátěži)

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 11,1
2h po zátěži

Diabetes mellitus

hraniční
glukóza na lačno
(IFG)
glukóza v plazmě
žilní krve < 7,8
2h po zátěži

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 7,8
<11,1 2h po zátěži

porušená
glukózová tolerance
(IGT)

orální glukózo-toleranční test (oGTT)

je podpůrný diagnostický funkční test
pro diagnostiku DM
a porušené glukózové tolerance
(IGT – Impaired Glucose Tolerance)

sleduje se glykemie na lačno
a po zátěži glukózou,
opakovaně v určitých intervalech
za přesně definovaných podmínek

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
příprava pacienta:
3 dny před testem pacient konzumuje běžnou stravu
s dostatečným obsahem sacharidů (nejméně 150 g za den)
a normální fyzickou zátěží
test se provádí ráno po 10-14hodinovém lačnění
a fyzickém klidu bez alkoholu, kofeinu a nikotinu
doporučuje se vynechat léky, pokud je to
z klinického hlediska možné

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
provedení testu:
odebírá se venózní krev na lačno
a čeká se na výsledek glykemie

pokud je glykemie v rozmezí 5,6-6,9 mmol/l ,
oGTT se provede
pacient vypije během 5-10 minut 75 g glukózy
v 250-300 ml roztoku
další odběry venózní krve se provádějí
za 60 a 120 minut po vypití roztoku glukózy

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
diagnostická kritéria:
pro hodnotu glukózy v plazmě venózní krve 120 minut
po zátěži 75 g glukózy
vyloučení DM

< 7,8 mmol/l

porušená
glukózová tolerance (IGT )

≥ 7,8 mmol/l
až < 11,1 mmol/l

Diabetes mellitus

≥11,1 mmol/l

glykemie v mmol/l

12
11,1

11,1

10
8

7,8
6,7

6

6,7
5,6

4
2
0
0 minut

60 minut

čas

120 minut

180 minut

glykemický profil
několik stanovení glukózy v průběhu dne,

popřípadě i v noci odráží aktuální kompenzaci DM

glykemický profil zkrácený:
4 nebo 3 odběry
indikace: při DM I. a II. typu, při operacích diabetiků
nebo po porodu při DM II. typu,
pro posouzení kompenzace apod.

glykemický profil
glykemický profil úplný:
9 odběrů
indikace: je indikován při DM I. typu, při intenzivní terapii
nebo při inzulinové terapii, u gravidních diabetiček,
při těžké dekompenzaci DM všech typů,
po transplantaci pankreatu…

počet a přesné časování odběrů se v jednotlivých
diabetologických centrech liší
a závisí i na denním režimu nemocného

analýza glukózy se provádí v laboratořích, pokud pacient
je hospitalizovaný, nebo v domácích podmínkách
formou selfmonitoringu

glykemický profil
odběr materiálu:
nejčastěji se odebírá kapilární krev (z prstu) do odběrových nádob
určených na kapilární odběry s obsahem antiglykolytické směsi
(např. Sarstedt Multivette)

prevedení testu:
glykemický profil úplný
9 odběrů
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

1 hod. po snídani

3. vzorek

30 min. před obědem

4. vzorek

1 hod. po obědě

5. vzorek

30 min. před večeří

6. vzorek

1 hod. po večeři

7. vzorek

v 22.00 hod.

8. vzorek

v 01.00 hod.

9. vzorek

v 04.00 hod.

glykemický profil zkrácený
4 odběry
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

30 min. před obědem

3. vzorek

30 min. před večeří

4. vzorek

v 22.00 hod.

glykosurie
koncentrace glukózy v moči závisí
na hladině glukózy v krvi a na funkci ledvin
účel testu:
screening poruch glukózové tolerance
detekce poruch tubulární resorpce při poškození ledvin

stanovení glukózy v moči:
semikvantitativně – diagnostický proužek
kvantitativně
Poznámka:
semikvantitativní a kvantitativní stanovení glukózy v moči není
zařazené mezi základní nástroje na určení diagnózy diabetu ani
na sledovaní jeho stavu, protože individuální rozdíly ledvinného
prahu pro glukózu jsou dost velké a práh kolísá u každého jedince

• Játra přeměňují glukózu na ………. (8)
(též zásobní forma glukózy)

G

L

Y

K

O

S

U

R

I

E

L

L

2

O

2

H

J

I

C



N

6

B

Z

H

U

U

12

Ň

L

O

K

Í

6

Y

N

a

F

• Hormon, který snižuje glykémii se nazývá U G Y L P U Á
…………………………….. (7).
K
K
O
K
R
N
T
• Krev pro stanovení glukózy se odebírá
A
T
T
G
O
E
R
do nádobek s antiglykolytickým činidlem,
G
O
G
E
F
G
A
kterým je ……. (3 - vzorec).
•Jak se nazývá diagnostický funkční test
O
N
E
Z
I
E
E
pro diagnostiku diabetu mellitu a porušené N M M O L / L
glukózové tolerance? (4 – zkratka).
• Hladina glukózy v moči se nazývá …………………………..(10).
• Hormon, který zvyšuje glykémii se nazývá ……………………… (8).
• Test, kdy se stanovují glykémie několikrát během dne a popř.
i v noci se nazývá glykemický …………….. (6).
• Jednotky, v kterých se uvádí výsledky glykémie …………………… (6).
• Sumární vzorec glukózy ………………(6)
• Reakcí glukózy a GOD vzniká sloučenina ………………. ( 4 vzorec).
• Které buňky pankreatu produkují inzulín? (6)
• Zásoby glykogenu, jsou uloženy v orgánu, který se nazývá
………………………………. (5).


Slide 29

Zdravotnická škola, Hradec Králové
Stredná zdravotnícka škola, Bánská Bystrica

glukóza
klinicko-biochemická diagnostika
a metody stanovení

glukóza
monosacharid – aldohexóza
chemický vzorec: C6H12O6
zkratka:
Glc
-Dglukopyranóza

=
D-glukóza

D-glukóza

-Dglukopyranóza

glukóza
je nejdůležitější látkou metabolizmu
sacharidů, tvoří se trávením a konverzí
glykogenu v játrech
za fyziologických podmínek získává organizmus
glukózu:
potravou - přísun z vnějšího prostředí
glykogenolýzou – metabolická dráha konverze glykogenu
na glukózu (zásoby glykogenu jsou uložené hlavně
v játrech a příčně pruhovaných svalech)

glukoneogenezí - metabolická dráha syntézy glukózy
z necukernatých prekurzorů (pyruvát, laktát, aminokyseliny, meziprodukty citrátového cyklu, glycerol)

regulační systém metabolizmu glukózy
organizmus se snaží zachovat koncentraci glukózy
v krvi v úzkém rozmezí: 3,3 - 6,1 mmol/l
regulační systém:
nervová složka
hormonální složka
- inzulin
- glukagon
- adrenalin a noradrenalin
- glukokortikoidy
- růstový hormon
- hormony štítné žlázy...

poruchy v metabolizmu glukózy
glykemie, glukozemie, glukoplazmie - hladina glukózy v krvi
glykosurie - přítomnost glukózy v moči
porucha v metabolizmu se může projevit ve smyslu:
trvalého zvýšení  hladiny glukózy
- hyperglykemie
za hyperglykemii považujeme stavy, kdy koncentrace glukózy
na lačno je vyšší než horní hranice referenčního intervalu

nebo snížení  hladiny glukózy
- hypoglykemie
hypoglykemie je vážný stav, kdy koncentrace glukózy v krvi
klesne pod dolní hranici referenčního intervalu,
tj. pod 3,3 mmol/l, a je doprovázena klinickými projevy

klinicko-biochemická diagnostika
stanovení glukózy je základní biochemickou
informací o sacharidovém metabolizmu

účelem testu je:
screening diabetes mellitus

monitorování lékové nebo dietní terapie
u pacientů s DM
diagnostika při hypoglykemiích
monitorování energetického stavu a výživy hlavně
u intenzivně léčených pacientů

klinicko-biochemická diagnostika
stanovuje se:
náhodně naměřená glykemie
glykemie na lačno (FPG - Fasting Plasma Glucose)
glykemie po jídle
(postprandiální glykemie, pozátěžová glykemie )

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
glykemický profil

stanovení glukózy na lačno
nástroj laboratorní diagnózy DM
vyhledávání osob se zvýšeným rizikem DM

příprava pacienta:
odběr provádíme minimálně
po 8hodinovém lačnění,
vyloučit fyzickou námahu a kouření

odběr:
doporučuje se odebrat venózní krev
do odběrové nádobky
s antiglykolytickou směsí,
stanovit glukózu
ve stabilizované plazmě

předanalytické podmínky
pro stanovení glukózy na lačno

stabilizace antiglykolytickou směsí:
antiglykolytická směs obsahuje NaF (2,5 mg NaF/ml krve)
a protisrážlivé činidlo (např. heparin, EDTA...)
NaF stabilizuje glukózu ve vzorku blokací glykolýzy

!!! pokud není použité stabilizační činidlo, klesá bez oddělení
krevních elementů koncentrace glukózy
při pokojové teplotě za 1 hod. o 5 až 7 %

transport do laboratoře:

okamžitý

oddělení séra/plazmy od krevních elementů:
sérum/plazmu je potřeba oddělit od krevních elementů
do 60 minut od odběru

metody stanovení glukózy
neenzymové metody
oxidačně–redukční a kondenzační metody
jsou nejstarší metody stanovení
v současnosti se v klinické biochemii nepoužívají

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu (GOD) a peroxidázu (POD)
využívající enzym hexokinázu (HK)
využívající enzym glukózodehydrogenázu (GDH)

elektrochemické metody
hmotnostní spektrometrie
(ID-GC/MS – doporučená referenční metoda)

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu a peroxidázu

princip stanovení:
glukóza + O2

+ H 2O

GOD

glukonolakton

+ H 2 O2

na detekci vzniklého H2O2 se využívá reakce
katalyzované enzymem peroxidázou

H2O2 + 4-AAP+ fenol
redukovaný chromogen

POD

chinonimin

+ H 2O

oxidovaný chromogen

Trinderova reakce

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

činidla:
Enzymy lahvička 

pufer – chromogen lahvička 

peroxidáza

fosforečnanový tlumivý roztok

glukózooxidáza

3-methyl-fenol

4-aminoantipyrin

příprava pracovního roztoku
•

obsah lahvičky  se rozpustí v 6 ml destilované vody

•

vleje se do lahvičky  a promíchá se

stabilita: při +2-8 °C ve tmě 1 měsíc,

při +15-25 °C ve tmě 10 dní

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

postup analýzy:
vlnová délka (480-540 nm), s maximem při 498 nm
kyveta 1 cm
teplota +15-25 °C, nebo 37 ± 0,1 °C
ve třech zkumavkách se smíchá pracovní roztok v poměru 100 + 1
se sérem, plazmou (vzorkem), standardním roztokem glukózy (standard)
a s destilovanou vodou (reagenční blenk)
 vzorek (A1)

vzorek (sérum, plazma)

 standard (A2)

 reag. blenk

0,02 ml

standard

0,02 ml

dest. H2O

0,02 ml

pracovní roztok

2,0 ml

2,0 ml

2,0 ml

inkubace: (30 min při +15 až +25 °C nebo 15 min při 37 °C),
změří se absorbance vzorku (A1)
a standardu (A2) proti reagenčnímu blenku

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

metoda je aplikovatelná:
na manuální stanovení glukózy bez deproteinace
na manuální stanovení glukózy s deproteinací
na biochemické analyzátory

linearita: do 22,0 mmol/l
hodnoty přesahující horní hranici linearity
se ředí manuálně destilovanou vodou
a analýza se opakuje (výsledek x ředění)

interference:
hemolýza
chylozita
přítomnost redukujících látek
– kyselina askorbová, kyselina močová, bilirubin a jiné...

enzymové metody
využívající enzym hexokinázu

princip stanovení:
glukóza + ATP

hexokináza + Mg2+

glukóza-6-fosfát + ADP

glukóza-6-fosfát + NAD+

G-6-PDH

glukonát-6-fosfát + NADPH + H+

ATP: adenozintrifosfát
ADP: adenozindifosfát
G-6-PDH: glukóza-6-fosfátdehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

enzymové metody
využívající enzym glukózodehydrogenázu

princip stanovení:
glukóza + NAD+
GDH

glukonolakton

+ NADH + H+

GDH: glukózodehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

elektrochemické metody
princip stanovení je založen na:
enzymové reakci a ampérometrické detekci

produktů enzymové reakce

enzym glukózooxidáza je imobilizován na biosenzoru

vzniklý peroxid vodíku se detekuje a pomocí

převodníku převádí na elektrický signál

elektrochemické metody
vyšetření se provádí
na glukózových analyzátorech

výhodou je rychlost stanovení

na stanovení se může přímo použít
stabilizovaná kapilární krev,
bez předchozí úpravy vzorku
neinterferuje hemolýza

elektrochemické metody

glukóza + O2

glukózooxidáza

kyselina glukonová

+ H2O2
H2
elektrony

registrační
elektroda

O2

glukometry
sebekontrola diabetu

(SMBG – selfmonitoring of blood glucose)

domácí monitorování glykemie
různé typy glukometrů
odebírá se kapilární krev

pracují na principu přímého
elektrochemického stanovení
doporučuje se kontrola glukometrů
a spolupráce s OKB

algoritmus pro laboratorní screening DM
u dospělých
vyloučení
glukóza
postprandiální
(náhodný odběr)
+klinické příznaky
DM

< 5,6

< 11,1

≥ 11,1

doporučení ČDS a ČSKB
hodnoty glukózy jsou v mmol/l

glukóza
v plazmě
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

opakovat odběr
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

Diabetes mellitus
(DM)

< 7,0

≥ 5,6
a < 7,0

< 5,6l, ale
v anam. riziko
DM nebo IGT

oGTT-WHO
(zátěž 75g glukózy,
odběr žilní krve
na lačno a 2h
po zátěži)

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 11,1
2h po zátěži

Diabetes mellitus

hraniční
glukóza na lačno
(IFG)
glukóza v plazmě
žilní krve < 7,8
2h po zátěži

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 7,8
<11,1 2h po zátěži

porušená
glukózová tolerance
(IGT)

orální glukózo-toleranční test (oGTT)

je podpůrný diagnostický funkční test
pro diagnostiku DM
a porušené glukózové tolerance
(IGT – Impaired Glucose Tolerance)

sleduje se glykemie na lačno
a po zátěži glukózou,
opakovaně v určitých intervalech
za přesně definovaných podmínek

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
příprava pacienta:
3 dny před testem pacient konzumuje běžnou stravu
s dostatečným obsahem sacharidů (nejméně 150 g za den)
a normální fyzickou zátěží
test se provádí ráno po 10-14hodinovém lačnění
a fyzickém klidu bez alkoholu, kofeinu a nikotinu
doporučuje se vynechat léky, pokud je to
z klinického hlediska možné

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
provedení testu:
odebírá se venózní krev na lačno
a čeká se na výsledek glykemie

pokud je glykemie v rozmezí 5,6-6,9 mmol/l ,
oGTT se provede
pacient vypije během 5-10 minut 75 g glukózy
v 250-300 ml roztoku
další odběry venózní krve se provádějí
za 60 a 120 minut po vypití roztoku glukózy

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
diagnostická kritéria:
pro hodnotu glukózy v plazmě venózní krve 120 minut
po zátěži 75 g glukózy
vyloučení DM

< 7,8 mmol/l

porušená
glukózová tolerance (IGT )

≥ 7,8 mmol/l
až < 11,1 mmol/l

Diabetes mellitus

≥11,1 mmol/l

glykemie v mmol/l

12
11,1

11,1

10
8

7,8
6,7

6

6,7
5,6

4
2
0
0 minut

60 minut

čas

120 minut

180 minut

glykemický profil
několik stanovení glukózy v průběhu dne,

popřípadě i v noci odráží aktuální kompenzaci DM

glykemický profil zkrácený:
4 nebo 3 odběry
indikace: při DM I. a II. typu, při operacích diabetiků
nebo po porodu při DM II. typu,
pro posouzení kompenzace apod.

glykemický profil
glykemický profil úplný:
9 odběrů
indikace: je indikován při DM I. typu, při intenzivní terapii
nebo při inzulinové terapii, u gravidních diabetiček,
při těžké dekompenzaci DM všech typů,
po transplantaci pankreatu…

počet a přesné časování odběrů se v jednotlivých
diabetologických centrech liší
a závisí i na denním režimu nemocného

analýza glukózy se provádí v laboratořích, pokud pacient
je hospitalizovaný, nebo v domácích podmínkách
formou selfmonitoringu

glykemický profil
odběr materiálu:
nejčastěji se odebírá kapilární krev (z prstu) do odběrových nádob
určených na kapilární odběry s obsahem antiglykolytické směsi
(např. Sarstedt Multivette)

prevedení testu:
glykemický profil úplný
9 odběrů
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

1 hod. po snídani

3. vzorek

30 min. před obědem

4. vzorek

1 hod. po obědě

5. vzorek

30 min. před večeří

6. vzorek

1 hod. po večeři

7. vzorek

v 22.00 hod.

8. vzorek

v 01.00 hod.

9. vzorek

v 04.00 hod.

glykemický profil zkrácený
4 odběry
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

30 min. před obědem

3. vzorek

30 min. před večeří

4. vzorek

v 22.00 hod.

glykosurie
koncentrace glukózy v moči závisí
na hladině glukózy v krvi a na funkci ledvin
účel testu:
screening poruch glukózové tolerance
detekce poruch tubulární resorpce při poškození ledvin

stanovení glukózy v moči:
semikvantitativně – diagnostický proužek
kvantitativně
Poznámka:
semikvantitativní a kvantitativní stanovení glukózy v moči není
zařazené mezi základní nástroje na určení diagnózy diabetu ani
na sledovaní jeho stavu, protože individuální rozdíly ledvinného
prahu pro glukózu jsou dost velké a práh kolísá u každého jedince

• Játra přeměňují glukózu na ………. (8)
(též zásobní forma glukózy)

G

L

Y

K

O

S

U

R

I

E

L

L

2

O

2

H

J

I

C



N

6

B

Z

H

U

U

12

Ň

L

O

K

Í

6

Y

N

a

F

• Hormon, který snižuje glykémii se nazývá U G Y L P U Á
…………………………….. (7).
K
K
O
K
R
N
T
• Krev pro stanovení glukózy se odebírá
A
T
T
G
O
E
R
do nádobek s antiglykolytickým činidlem,
G
O
G
E
F
G
A
kterým je ……. (3 - vzorec).
•Jak se nazývá diagnostický funkční test
O
N
E
Z
I
E
E
pro diagnostiku diabetu mellitu a porušené N M M O L / L
glukózové tolerance? (4 – zkratka).
• Hladina glukózy v moči se nazývá …………………………..(10).
• Hormon, který zvyšuje glykémii se nazývá ……………………… (8).
• Test, kdy se stanovují glykémie několikrát během dne a popř.
i v noci se nazývá glykemický …………….. (6).
• Jednotky, v kterých se uvádí výsledky glykémie …………………… (6).
• Sumární vzorec glukózy ………………(6)
• Reakcí glukózy a GOD vzniká sloučenina ………………. ( 4 vzorec).
• Které buňky pankreatu produkují inzulín? (6)
• Zásoby glykogenu, jsou uloženy v orgánu, který se nazývá
………………………………. (5).


Slide 30

Zdravotnická škola, Hradec Králové
Stredná zdravotnícka škola, Bánská Bystrica

glukóza
klinicko-biochemická diagnostika
a metody stanovení

glukóza
monosacharid – aldohexóza
chemický vzorec: C6H12O6
zkratka:
Glc
-Dglukopyranóza

=
D-glukóza

D-glukóza

-Dglukopyranóza

glukóza
je nejdůležitější látkou metabolizmu
sacharidů, tvoří se trávením a konverzí
glykogenu v játrech
za fyziologických podmínek získává organizmus
glukózu:
potravou - přísun z vnějšího prostředí
glykogenolýzou – metabolická dráha konverze glykogenu
na glukózu (zásoby glykogenu jsou uložené hlavně
v játrech a příčně pruhovaných svalech)

glukoneogenezí - metabolická dráha syntézy glukózy
z necukernatých prekurzorů (pyruvát, laktát, aminokyseliny, meziprodukty citrátového cyklu, glycerol)

regulační systém metabolizmu glukózy
organizmus se snaží zachovat koncentraci glukózy
v krvi v úzkém rozmezí: 3,3 - 6,1 mmol/l
regulační systém:
nervová složka
hormonální složka
- inzulin
- glukagon
- adrenalin a noradrenalin
- glukokortikoidy
- růstový hormon
- hormony štítné žlázy...

poruchy v metabolizmu glukózy
glykemie, glukozemie, glukoplazmie - hladina glukózy v krvi
glykosurie - přítomnost glukózy v moči
porucha v metabolizmu se může projevit ve smyslu:
trvalého zvýšení  hladiny glukózy
- hyperglykemie
za hyperglykemii považujeme stavy, kdy koncentrace glukózy
na lačno je vyšší než horní hranice referenčního intervalu

nebo snížení  hladiny glukózy
- hypoglykemie
hypoglykemie je vážný stav, kdy koncentrace glukózy v krvi
klesne pod dolní hranici referenčního intervalu,
tj. pod 3,3 mmol/l, a je doprovázena klinickými projevy

klinicko-biochemická diagnostika
stanovení glukózy je základní biochemickou
informací o sacharidovém metabolizmu

účelem testu je:
screening diabetes mellitus

monitorování lékové nebo dietní terapie
u pacientů s DM
diagnostika při hypoglykemiích
monitorování energetického stavu a výživy hlavně
u intenzivně léčených pacientů

klinicko-biochemická diagnostika
stanovuje se:
náhodně naměřená glykemie
glykemie na lačno (FPG - Fasting Plasma Glucose)
glykemie po jídle
(postprandiální glykemie, pozátěžová glykemie )

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
glykemický profil

stanovení glukózy na lačno
nástroj laboratorní diagnózy DM
vyhledávání osob se zvýšeným rizikem DM

příprava pacienta:
odběr provádíme minimálně
po 8hodinovém lačnění,
vyloučit fyzickou námahu a kouření

odběr:
doporučuje se odebrat venózní krev
do odběrové nádobky
s antiglykolytickou směsí,
stanovit glukózu
ve stabilizované plazmě

předanalytické podmínky
pro stanovení glukózy na lačno

stabilizace antiglykolytickou směsí:
antiglykolytická směs obsahuje NaF (2,5 mg NaF/ml krve)
a protisrážlivé činidlo (např. heparin, EDTA...)
NaF stabilizuje glukózu ve vzorku blokací glykolýzy

!!! pokud není použité stabilizační činidlo, klesá bez oddělení
krevních elementů koncentrace glukózy
při pokojové teplotě za 1 hod. o 5 až 7 %

transport do laboratoře:

okamžitý

oddělení séra/plazmy od krevních elementů:
sérum/plazmu je potřeba oddělit od krevních elementů
do 60 minut od odběru

metody stanovení glukózy
neenzymové metody
oxidačně–redukční a kondenzační metody
jsou nejstarší metody stanovení
v současnosti se v klinické biochemii nepoužívají

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu (GOD) a peroxidázu (POD)
využívající enzym hexokinázu (HK)
využívající enzym glukózodehydrogenázu (GDH)

elektrochemické metody
hmotnostní spektrometrie
(ID-GC/MS – doporučená referenční metoda)

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu a peroxidázu

princip stanovení:
glukóza + O2

+ H 2O

GOD

glukonolakton

+ H 2 O2

na detekci vzniklého H2O2 se využívá reakce
katalyzované enzymem peroxidázou

H2O2 + 4-AAP+ fenol
redukovaný chromogen

POD

chinonimin

+ H 2O

oxidovaný chromogen

Trinderova reakce

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

činidla:
Enzymy lahvička 

pufer – chromogen lahvička 

peroxidáza

fosforečnanový tlumivý roztok

glukózooxidáza

3-methyl-fenol

4-aminoantipyrin

příprava pracovního roztoku
•

obsah lahvičky  se rozpustí v 6 ml destilované vody

•

vleje se do lahvičky  a promíchá se

stabilita: při +2-8 °C ve tmě 1 měsíc,

při +15-25 °C ve tmě 10 dní

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

postup analýzy:
vlnová délka (480-540 nm), s maximem při 498 nm
kyveta 1 cm
teplota +15-25 °C, nebo 37 ± 0,1 °C
ve třech zkumavkách se smíchá pracovní roztok v poměru 100 + 1
se sérem, plazmou (vzorkem), standardním roztokem glukózy (standard)
a s destilovanou vodou (reagenční blenk)
 vzorek (A1)

vzorek (sérum, plazma)

 standard (A2)

 reag. blenk

0,02 ml

standard

0,02 ml

dest. H2O

0,02 ml

pracovní roztok

2,0 ml

2,0 ml

2,0 ml

inkubace: (30 min při +15 až +25 °C nebo 15 min při 37 °C),
změří se absorbance vzorku (A1)
a standardu (A2) proti reagenčnímu blenku

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

metoda je aplikovatelná:
na manuální stanovení glukózy bez deproteinace
na manuální stanovení glukózy s deproteinací
na biochemické analyzátory

linearita: do 22,0 mmol/l
hodnoty přesahující horní hranici linearity
se ředí manuálně destilovanou vodou
a analýza se opakuje (výsledek x ředění)

interference:
hemolýza
chylozita
přítomnost redukujících látek
– kyselina askorbová, kyselina močová, bilirubin a jiné...

enzymové metody
využívající enzym hexokinázu

princip stanovení:
glukóza + ATP

hexokináza + Mg2+

glukóza-6-fosfát + ADP

glukóza-6-fosfát + NAD+

G-6-PDH

glukonát-6-fosfát + NADPH + H+

ATP: adenozintrifosfát
ADP: adenozindifosfát
G-6-PDH: glukóza-6-fosfátdehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

enzymové metody
využívající enzym glukózodehydrogenázu

princip stanovení:
glukóza + NAD+
GDH

glukonolakton

+ NADH + H+

GDH: glukózodehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

elektrochemické metody
princip stanovení je založen na:
enzymové reakci a ampérometrické detekci

produktů enzymové reakce

enzym glukózooxidáza je imobilizován na biosenzoru

vzniklý peroxid vodíku se detekuje a pomocí

převodníku převádí na elektrický signál

elektrochemické metody
vyšetření se provádí
na glukózových analyzátorech

výhodou je rychlost stanovení

na stanovení se může přímo použít
stabilizovaná kapilární krev,
bez předchozí úpravy vzorku
neinterferuje hemolýza

elektrochemické metody

glukóza + O2

glukózooxidáza

kyselina glukonová

+ H2O2
H2
elektrony

registrační
elektroda

O2

glukometry
sebekontrola diabetu

(SMBG – selfmonitoring of blood glucose)

domácí monitorování glykemie
různé typy glukometrů
odebírá se kapilární krev

pracují na principu přímého
elektrochemického stanovení
doporučuje se kontrola glukometrů
a spolupráce s OKB

algoritmus pro laboratorní screening DM
u dospělých
vyloučení
glukóza
postprandiální
(náhodný odběr)
+klinické příznaky
DM

< 5,6

< 11,1

≥ 11,1

doporučení ČDS a ČSKB
hodnoty glukózy jsou v mmol/l

glukóza
v plazmě
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

opakovat odběr
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

Diabetes mellitus
(DM)

< 7,0

≥ 5,6
a < 7,0

< 5,6l, ale
v anam. riziko
DM nebo IGT

oGTT-WHO
(zátěž 75g glukózy,
odběr žilní krve
na lačno a 2h
po zátěži)

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 11,1
2h po zátěži

Diabetes mellitus

hraniční
glukóza na lačno
(IFG)
glukóza v plazmě
žilní krve < 7,8
2h po zátěži

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 7,8
<11,1 2h po zátěži

porušená
glukózová tolerance
(IGT)

orální glukózo-toleranční test (oGTT)

je podpůrný diagnostický funkční test
pro diagnostiku DM
a porušené glukózové tolerance
(IGT – Impaired Glucose Tolerance)

sleduje se glykemie na lačno
a po zátěži glukózou,
opakovaně v určitých intervalech
za přesně definovaných podmínek

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
příprava pacienta:
3 dny před testem pacient konzumuje běžnou stravu
s dostatečným obsahem sacharidů (nejméně 150 g za den)
a normální fyzickou zátěží
test se provádí ráno po 10-14hodinovém lačnění
a fyzickém klidu bez alkoholu, kofeinu a nikotinu
doporučuje se vynechat léky, pokud je to
z klinického hlediska možné

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
provedení testu:
odebírá se venózní krev na lačno
a čeká se na výsledek glykemie

pokud je glykemie v rozmezí 5,6-6,9 mmol/l ,
oGTT se provede
pacient vypije během 5-10 minut 75 g glukózy
v 250-300 ml roztoku
další odběry venózní krve se provádějí
za 60 a 120 minut po vypití roztoku glukózy

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
diagnostická kritéria:
pro hodnotu glukózy v plazmě venózní krve 120 minut
po zátěži 75 g glukózy
vyloučení DM

< 7,8 mmol/l

porušená
glukózová tolerance (IGT )

≥ 7,8 mmol/l
až < 11,1 mmol/l

Diabetes mellitus

≥11,1 mmol/l

glykemie v mmol/l

12
11,1

11,1

10
8

7,8
6,7

6

6,7
5,6

4
2
0
0 minut

60 minut

čas

120 minut

180 minut

glykemický profil
několik stanovení glukózy v průběhu dne,

popřípadě i v noci odráží aktuální kompenzaci DM

glykemický profil zkrácený:
4 nebo 3 odběry
indikace: při DM I. a II. typu, při operacích diabetiků
nebo po porodu při DM II. typu,
pro posouzení kompenzace apod.

glykemický profil
glykemický profil úplný:
9 odběrů
indikace: je indikován při DM I. typu, při intenzivní terapii
nebo při inzulinové terapii, u gravidních diabetiček,
při těžké dekompenzaci DM všech typů,
po transplantaci pankreatu…

počet a přesné časování odběrů se v jednotlivých
diabetologických centrech liší
a závisí i na denním režimu nemocného

analýza glukózy se provádí v laboratořích, pokud pacient
je hospitalizovaný, nebo v domácích podmínkách
formou selfmonitoringu

glykemický profil
odběr materiálu:
nejčastěji se odebírá kapilární krev (z prstu) do odběrových nádob
určených na kapilární odběry s obsahem antiglykolytické směsi
(např. Sarstedt Multivette)

prevedení testu:
glykemický profil úplný
9 odběrů
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

1 hod. po snídani

3. vzorek

30 min. před obědem

4. vzorek

1 hod. po obědě

5. vzorek

30 min. před večeří

6. vzorek

1 hod. po večeři

7. vzorek

v 22.00 hod.

8. vzorek

v 01.00 hod.

9. vzorek

v 04.00 hod.

glykemický profil zkrácený
4 odběry
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

30 min. před obědem

3. vzorek

30 min. před večeří

4. vzorek

v 22.00 hod.

glykosurie
koncentrace glukózy v moči závisí
na hladině glukózy v krvi a na funkci ledvin
účel testu:
screening poruch glukózové tolerance
detekce poruch tubulární resorpce při poškození ledvin

stanovení glukózy v moči:
semikvantitativně – diagnostický proužek
kvantitativně
Poznámka:
semikvantitativní a kvantitativní stanovení glukózy v moči není
zařazené mezi základní nástroje na určení diagnózy diabetu ani
na sledovaní jeho stavu, protože individuální rozdíly ledvinného
prahu pro glukózu jsou dost velké a práh kolísá u každého jedince

• Játra přeměňují glukózu na ………. (8)
(též zásobní forma glukózy)

G

L

Y

K

O

S

U

R

I

E

L

L

2

O

2

H

J

I

C



N

6

B

Z

H

U

U

12

Ň

L

O

K

Í

6

Y

N

a

F

• Hormon, který snižuje glykémii se nazývá U G Y L P U Á
…………………………….. (7).
K
K
O
K
R
N
T
• Krev pro stanovení glukózy se odebírá
A
T
T
G
O
E
R
do nádobek s antiglykolytickým činidlem,
G
O
G
E
F
G
A
kterým je ……. (3 - vzorec).
•Jak se nazývá diagnostický funkční test
O
N
E
Z
I
E
E
pro diagnostiku diabetu mellitu a porušené N M M O L / L
glukózové tolerance? (4 – zkratka).
• Hladina glukózy v moči se nazývá …………………………..(10).
• Hormon, který zvyšuje glykémii se nazývá ……………………… (8).
• Test, kdy se stanovují glykémie několikrát během dne a popř.
i v noci se nazývá glykemický …………….. (6).
• Jednotky, v kterých se uvádí výsledky glykémie …………………… (6).
• Sumární vzorec glukózy ………………(6)
• Reakcí glukózy a GOD vzniká sloučenina ………………. ( 4 vzorec).
• Které buňky pankreatu produkují inzulín? (6)
• Zásoby glykogenu, jsou uloženy v orgánu, který se nazývá
………………………………. (5).


Slide 31

Zdravotnická škola, Hradec Králové
Stredná zdravotnícka škola, Bánská Bystrica

glukóza
klinicko-biochemická diagnostika
a metody stanovení

glukóza
monosacharid – aldohexóza
chemický vzorec: C6H12O6
zkratka:
Glc
-Dglukopyranóza

=
D-glukóza

D-glukóza

-Dglukopyranóza

glukóza
je nejdůležitější látkou metabolizmu
sacharidů, tvoří se trávením a konverzí
glykogenu v játrech
za fyziologických podmínek získává organizmus
glukózu:
potravou - přísun z vnějšího prostředí
glykogenolýzou – metabolická dráha konverze glykogenu
na glukózu (zásoby glykogenu jsou uložené hlavně
v játrech a příčně pruhovaných svalech)

glukoneogenezí - metabolická dráha syntézy glukózy
z necukernatých prekurzorů (pyruvát, laktát, aminokyseliny, meziprodukty citrátového cyklu, glycerol)

regulační systém metabolizmu glukózy
organizmus se snaží zachovat koncentraci glukózy
v krvi v úzkém rozmezí: 3,3 - 6,1 mmol/l
regulační systém:
nervová složka
hormonální složka
- inzulin
- glukagon
- adrenalin a noradrenalin
- glukokortikoidy
- růstový hormon
- hormony štítné žlázy...

poruchy v metabolizmu glukózy
glykemie, glukozemie, glukoplazmie - hladina glukózy v krvi
glykosurie - přítomnost glukózy v moči
porucha v metabolizmu se může projevit ve smyslu:
trvalého zvýšení  hladiny glukózy
- hyperglykemie
za hyperglykemii považujeme stavy, kdy koncentrace glukózy
na lačno je vyšší než horní hranice referenčního intervalu

nebo snížení  hladiny glukózy
- hypoglykemie
hypoglykemie je vážný stav, kdy koncentrace glukózy v krvi
klesne pod dolní hranici referenčního intervalu,
tj. pod 3,3 mmol/l, a je doprovázena klinickými projevy

klinicko-biochemická diagnostika
stanovení glukózy je základní biochemickou
informací o sacharidovém metabolizmu

účelem testu je:
screening diabetes mellitus

monitorování lékové nebo dietní terapie
u pacientů s DM
diagnostika při hypoglykemiích
monitorování energetického stavu a výživy hlavně
u intenzivně léčených pacientů

klinicko-biochemická diagnostika
stanovuje se:
náhodně naměřená glykemie
glykemie na lačno (FPG - Fasting Plasma Glucose)
glykemie po jídle
(postprandiální glykemie, pozátěžová glykemie )

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
glykemický profil

stanovení glukózy na lačno
nástroj laboratorní diagnózy DM
vyhledávání osob se zvýšeným rizikem DM

příprava pacienta:
odběr provádíme minimálně
po 8hodinovém lačnění,
vyloučit fyzickou námahu a kouření

odběr:
doporučuje se odebrat venózní krev
do odběrové nádobky
s antiglykolytickou směsí,
stanovit glukózu
ve stabilizované plazmě

předanalytické podmínky
pro stanovení glukózy na lačno

stabilizace antiglykolytickou směsí:
antiglykolytická směs obsahuje NaF (2,5 mg NaF/ml krve)
a protisrážlivé činidlo (např. heparin, EDTA...)
NaF stabilizuje glukózu ve vzorku blokací glykolýzy

!!! pokud není použité stabilizační činidlo, klesá bez oddělení
krevních elementů koncentrace glukózy
při pokojové teplotě za 1 hod. o 5 až 7 %

transport do laboratoře:

okamžitý

oddělení séra/plazmy od krevních elementů:
sérum/plazmu je potřeba oddělit od krevních elementů
do 60 minut od odběru

metody stanovení glukózy
neenzymové metody
oxidačně–redukční a kondenzační metody
jsou nejstarší metody stanovení
v současnosti se v klinické biochemii nepoužívají

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu (GOD) a peroxidázu (POD)
využívající enzym hexokinázu (HK)
využívající enzym glukózodehydrogenázu (GDH)

elektrochemické metody
hmotnostní spektrometrie
(ID-GC/MS – doporučená referenční metoda)

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu a peroxidázu

princip stanovení:
glukóza + O2

+ H 2O

GOD

glukonolakton

+ H 2 O2

na detekci vzniklého H2O2 se využívá reakce
katalyzované enzymem peroxidázou

H2O2 + 4-AAP+ fenol
redukovaný chromogen

POD

chinonimin

+ H 2O

oxidovaný chromogen

Trinderova reakce

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

činidla:
Enzymy lahvička 

pufer – chromogen lahvička 

peroxidáza

fosforečnanový tlumivý roztok

glukózooxidáza

3-methyl-fenol

4-aminoantipyrin

příprava pracovního roztoku
•

obsah lahvičky  se rozpustí v 6 ml destilované vody

•

vleje se do lahvičky  a promíchá se

stabilita: při +2-8 °C ve tmě 1 měsíc,

při +15-25 °C ve tmě 10 dní

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

postup analýzy:
vlnová délka (480-540 nm), s maximem při 498 nm
kyveta 1 cm
teplota +15-25 °C, nebo 37 ± 0,1 °C
ve třech zkumavkách se smíchá pracovní roztok v poměru 100 + 1
se sérem, plazmou (vzorkem), standardním roztokem glukózy (standard)
a s destilovanou vodou (reagenční blenk)
 vzorek (A1)

vzorek (sérum, plazma)

 standard (A2)

 reag. blenk

0,02 ml

standard

0,02 ml

dest. H2O

0,02 ml

pracovní roztok

2,0 ml

2,0 ml

2,0 ml

inkubace: (30 min při +15 až +25 °C nebo 15 min při 37 °C),
změří se absorbance vzorku (A1)
a standardu (A2) proti reagenčnímu blenku

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

metoda je aplikovatelná:
na manuální stanovení glukózy bez deproteinace
na manuální stanovení glukózy s deproteinací
na biochemické analyzátory

linearita: do 22,0 mmol/l
hodnoty přesahující horní hranici linearity
se ředí manuálně destilovanou vodou
a analýza se opakuje (výsledek x ředění)

interference:
hemolýza
chylozita
přítomnost redukujících látek
– kyselina askorbová, kyselina močová, bilirubin a jiné...

enzymové metody
využívající enzym hexokinázu

princip stanovení:
glukóza + ATP

hexokináza + Mg2+

glukóza-6-fosfát + ADP

glukóza-6-fosfát + NAD+

G-6-PDH

glukonát-6-fosfát + NADPH + H+

ATP: adenozintrifosfát
ADP: adenozindifosfát
G-6-PDH: glukóza-6-fosfátdehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

enzymové metody
využívající enzym glukózodehydrogenázu

princip stanovení:
glukóza + NAD+
GDH

glukonolakton

+ NADH + H+

GDH: glukózodehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

elektrochemické metody
princip stanovení je založen na:
enzymové reakci a ampérometrické detekci

produktů enzymové reakce

enzym glukózooxidáza je imobilizován na biosenzoru

vzniklý peroxid vodíku se detekuje a pomocí

převodníku převádí na elektrický signál

elektrochemické metody
vyšetření se provádí
na glukózových analyzátorech

výhodou je rychlost stanovení

na stanovení se může přímo použít
stabilizovaná kapilární krev,
bez předchozí úpravy vzorku
neinterferuje hemolýza

elektrochemické metody

glukóza + O2

glukózooxidáza

kyselina glukonová

+ H2O2
H2
elektrony

registrační
elektroda

O2

glukometry
sebekontrola diabetu

(SMBG – selfmonitoring of blood glucose)

domácí monitorování glykemie
různé typy glukometrů
odebírá se kapilární krev

pracují na principu přímého
elektrochemického stanovení
doporučuje se kontrola glukometrů
a spolupráce s OKB

algoritmus pro laboratorní screening DM
u dospělých
vyloučení
glukóza
postprandiální
(náhodný odběr)
+klinické příznaky
DM

< 5,6

< 11,1

≥ 11,1

doporučení ČDS a ČSKB
hodnoty glukózy jsou v mmol/l

glukóza
v plazmě
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

opakovat odběr
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

Diabetes mellitus
(DM)

< 7,0

≥ 5,6
a < 7,0

< 5,6l, ale
v anam. riziko
DM nebo IGT

oGTT-WHO
(zátěž 75g glukózy,
odběr žilní krve
na lačno a 2h
po zátěži)

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 11,1
2h po zátěži

Diabetes mellitus

hraniční
glukóza na lačno
(IFG)
glukóza v plazmě
žilní krve < 7,8
2h po zátěži

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 7,8
<11,1 2h po zátěži

porušená
glukózová tolerance
(IGT)

orální glukózo-toleranční test (oGTT)

je podpůrný diagnostický funkční test
pro diagnostiku DM
a porušené glukózové tolerance
(IGT – Impaired Glucose Tolerance)

sleduje se glykemie na lačno
a po zátěži glukózou,
opakovaně v určitých intervalech
za přesně definovaných podmínek

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
příprava pacienta:
3 dny před testem pacient konzumuje běžnou stravu
s dostatečným obsahem sacharidů (nejméně 150 g za den)
a normální fyzickou zátěží
test se provádí ráno po 10-14hodinovém lačnění
a fyzickém klidu bez alkoholu, kofeinu a nikotinu
doporučuje se vynechat léky, pokud je to
z klinického hlediska možné

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
provedení testu:
odebírá se venózní krev na lačno
a čeká se na výsledek glykemie

pokud je glykemie v rozmezí 5,6-6,9 mmol/l ,
oGTT se provede
pacient vypije během 5-10 minut 75 g glukózy
v 250-300 ml roztoku
další odběry venózní krve se provádějí
za 60 a 120 minut po vypití roztoku glukózy

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
diagnostická kritéria:
pro hodnotu glukózy v plazmě venózní krve 120 minut
po zátěži 75 g glukózy
vyloučení DM

< 7,8 mmol/l

porušená
glukózová tolerance (IGT )

≥ 7,8 mmol/l
až < 11,1 mmol/l

Diabetes mellitus

≥11,1 mmol/l

glykemie v mmol/l

12
11,1

11,1

10
8

7,8
6,7

6

6,7
5,6

4
2
0
0 minut

60 minut

čas

120 minut

180 minut

glykemický profil
několik stanovení glukózy v průběhu dne,

popřípadě i v noci odráží aktuální kompenzaci DM

glykemický profil zkrácený:
4 nebo 3 odběry
indikace: při DM I. a II. typu, při operacích diabetiků
nebo po porodu při DM II. typu,
pro posouzení kompenzace apod.

glykemický profil
glykemický profil úplný:
9 odběrů
indikace: je indikován při DM I. typu, při intenzivní terapii
nebo při inzulinové terapii, u gravidních diabetiček,
při těžké dekompenzaci DM všech typů,
po transplantaci pankreatu…

počet a přesné časování odběrů se v jednotlivých
diabetologických centrech liší
a závisí i na denním režimu nemocného

analýza glukózy se provádí v laboratořích, pokud pacient
je hospitalizovaný, nebo v domácích podmínkách
formou selfmonitoringu

glykemický profil
odběr materiálu:
nejčastěji se odebírá kapilární krev (z prstu) do odběrových nádob
určených na kapilární odběry s obsahem antiglykolytické směsi
(např. Sarstedt Multivette)

prevedení testu:
glykemický profil úplný
9 odběrů
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

1 hod. po snídani

3. vzorek

30 min. před obědem

4. vzorek

1 hod. po obědě

5. vzorek

30 min. před večeří

6. vzorek

1 hod. po večeři

7. vzorek

v 22.00 hod.

8. vzorek

v 01.00 hod.

9. vzorek

v 04.00 hod.

glykemický profil zkrácený
4 odběry
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

30 min. před obědem

3. vzorek

30 min. před večeří

4. vzorek

v 22.00 hod.

glykosurie
koncentrace glukózy v moči závisí
na hladině glukózy v krvi a na funkci ledvin
účel testu:
screening poruch glukózové tolerance
detekce poruch tubulární resorpce při poškození ledvin

stanovení glukózy v moči:
semikvantitativně – diagnostický proužek
kvantitativně
Poznámka:
semikvantitativní a kvantitativní stanovení glukózy v moči není
zařazené mezi základní nástroje na určení diagnózy diabetu ani
na sledovaní jeho stavu, protože individuální rozdíly ledvinného
prahu pro glukózu jsou dost velké a práh kolísá u každého jedince

• Játra přeměňují glukózu na ………. (8)
(též zásobní forma glukózy)

G

L

Y

K

O

S

U

R

I

E

L

L

2

O

2

H

J

I

C



N

6

B

Z

H

U

U

12

Ň

L

O

K

Í

6

Y

N

a

F

• Hormon, který snižuje glykémii se nazývá U G Y L P U Á
…………………………….. (7).
K
K
O
K
R
N
T
• Krev pro stanovení glukózy se odebírá
A
T
T
G
O
E
R
do nádobek s antiglykolytickým činidlem,
G
O
G
E
F
G
A
kterým je ……. (3 - vzorec).
•Jak se nazývá diagnostický funkční test
O
N
E
Z
I
E
E
pro diagnostiku diabetu mellitu a porušené N M M O L / L
glukózové tolerance? (4 – zkratka).
• Hladina glukózy v moči se nazývá …………………………..(10).
• Hormon, který zvyšuje glykémii se nazývá ……………………… (8).
• Test, kdy se stanovují glykémie několikrát během dne a popř.
i v noci se nazývá glykemický …………….. (6).
• Jednotky, v kterých se uvádí výsledky glykémie …………………… (6).
• Sumární vzorec glukózy ………………(6)
• Reakcí glukózy a GOD vzniká sloučenina ………………. ( 4 vzorec).
• Které buňky pankreatu produkují inzulín? (6)
• Zásoby glykogenu, jsou uloženy v orgánu, který se nazývá
………………………………. (5).


Slide 32

Zdravotnická škola, Hradec Králové
Stredná zdravotnícka škola, Bánská Bystrica

glukóza
klinicko-biochemická diagnostika
a metody stanovení

glukóza
monosacharid – aldohexóza
chemický vzorec: C6H12O6
zkratka:
Glc
-Dglukopyranóza

=
D-glukóza

D-glukóza

-Dglukopyranóza

glukóza
je nejdůležitější látkou metabolizmu
sacharidů, tvoří se trávením a konverzí
glykogenu v játrech
za fyziologických podmínek získává organizmus
glukózu:
potravou - přísun z vnějšího prostředí
glykogenolýzou – metabolická dráha konverze glykogenu
na glukózu (zásoby glykogenu jsou uložené hlavně
v játrech a příčně pruhovaných svalech)

glukoneogenezí - metabolická dráha syntézy glukózy
z necukernatých prekurzorů (pyruvát, laktát, aminokyseliny, meziprodukty citrátového cyklu, glycerol)

regulační systém metabolizmu glukózy
organizmus se snaží zachovat koncentraci glukózy
v krvi v úzkém rozmezí: 3,3 - 6,1 mmol/l
regulační systém:
nervová složka
hormonální složka
- inzulin
- glukagon
- adrenalin a noradrenalin
- glukokortikoidy
- růstový hormon
- hormony štítné žlázy...

poruchy v metabolizmu glukózy
glykemie, glukozemie, glukoplazmie - hladina glukózy v krvi
glykosurie - přítomnost glukózy v moči
porucha v metabolizmu se může projevit ve smyslu:
trvalého zvýšení  hladiny glukózy
- hyperglykemie
za hyperglykemii považujeme stavy, kdy koncentrace glukózy
na lačno je vyšší než horní hranice referenčního intervalu

nebo snížení  hladiny glukózy
- hypoglykemie
hypoglykemie je vážný stav, kdy koncentrace glukózy v krvi
klesne pod dolní hranici referenčního intervalu,
tj. pod 3,3 mmol/l, a je doprovázena klinickými projevy

klinicko-biochemická diagnostika
stanovení glukózy je základní biochemickou
informací o sacharidovém metabolizmu

účelem testu je:
screening diabetes mellitus

monitorování lékové nebo dietní terapie
u pacientů s DM
diagnostika při hypoglykemiích
monitorování energetického stavu a výživy hlavně
u intenzivně léčených pacientů

klinicko-biochemická diagnostika
stanovuje se:
náhodně naměřená glykemie
glykemie na lačno (FPG - Fasting Plasma Glucose)
glykemie po jídle
(postprandiální glykemie, pozátěžová glykemie )

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
glykemický profil

stanovení glukózy na lačno
nástroj laboratorní diagnózy DM
vyhledávání osob se zvýšeným rizikem DM

příprava pacienta:
odběr provádíme minimálně
po 8hodinovém lačnění,
vyloučit fyzickou námahu a kouření

odběr:
doporučuje se odebrat venózní krev
do odběrové nádobky
s antiglykolytickou směsí,
stanovit glukózu
ve stabilizované plazmě

předanalytické podmínky
pro stanovení glukózy na lačno

stabilizace antiglykolytickou směsí:
antiglykolytická směs obsahuje NaF (2,5 mg NaF/ml krve)
a protisrážlivé činidlo (např. heparin, EDTA...)
NaF stabilizuje glukózu ve vzorku blokací glykolýzy

!!! pokud není použité stabilizační činidlo, klesá bez oddělení
krevních elementů koncentrace glukózy
při pokojové teplotě za 1 hod. o 5 až 7 %

transport do laboratoře:

okamžitý

oddělení séra/plazmy od krevních elementů:
sérum/plazmu je potřeba oddělit od krevních elementů
do 60 minut od odběru

metody stanovení glukózy
neenzymové metody
oxidačně–redukční a kondenzační metody
jsou nejstarší metody stanovení
v současnosti se v klinické biochemii nepoužívají

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu (GOD) a peroxidázu (POD)
využívající enzym hexokinázu (HK)
využívající enzym glukózodehydrogenázu (GDH)

elektrochemické metody
hmotnostní spektrometrie
(ID-GC/MS – doporučená referenční metoda)

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu a peroxidázu

princip stanovení:
glukóza + O2

+ H 2O

GOD

glukonolakton

+ H 2 O2

na detekci vzniklého H2O2 se využívá reakce
katalyzované enzymem peroxidázou

H2O2 + 4-AAP+ fenol
redukovaný chromogen

POD

chinonimin

+ H 2O

oxidovaný chromogen

Trinderova reakce

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

činidla:
Enzymy lahvička 

pufer – chromogen lahvička 

peroxidáza

fosforečnanový tlumivý roztok

glukózooxidáza

3-methyl-fenol

4-aminoantipyrin

příprava pracovního roztoku
•

obsah lahvičky  se rozpustí v 6 ml destilované vody

•

vleje se do lahvičky  a promíchá se

stabilita: při +2-8 °C ve tmě 1 měsíc,

při +15-25 °C ve tmě 10 dní

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

postup analýzy:
vlnová délka (480-540 nm), s maximem při 498 nm
kyveta 1 cm
teplota +15-25 °C, nebo 37 ± 0,1 °C
ve třech zkumavkách se smíchá pracovní roztok v poměru 100 + 1
se sérem, plazmou (vzorkem), standardním roztokem glukózy (standard)
a s destilovanou vodou (reagenční blenk)
 vzorek (A1)

vzorek (sérum, plazma)

 standard (A2)

 reag. blenk

0,02 ml

standard

0,02 ml

dest. H2O

0,02 ml

pracovní roztok

2,0 ml

2,0 ml

2,0 ml

inkubace: (30 min při +15 až +25 °C nebo 15 min při 37 °C),
změří se absorbance vzorku (A1)
a standardu (A2) proti reagenčnímu blenku

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

metoda je aplikovatelná:
na manuální stanovení glukózy bez deproteinace
na manuální stanovení glukózy s deproteinací
na biochemické analyzátory

linearita: do 22,0 mmol/l
hodnoty přesahující horní hranici linearity
se ředí manuálně destilovanou vodou
a analýza se opakuje (výsledek x ředění)

interference:
hemolýza
chylozita
přítomnost redukujících látek
– kyselina askorbová, kyselina močová, bilirubin a jiné...

enzymové metody
využívající enzym hexokinázu

princip stanovení:
glukóza + ATP

hexokináza + Mg2+

glukóza-6-fosfát + ADP

glukóza-6-fosfát + NAD+

G-6-PDH

glukonát-6-fosfát + NADPH + H+

ATP: adenozintrifosfát
ADP: adenozindifosfát
G-6-PDH: glukóza-6-fosfátdehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

enzymové metody
využívající enzym glukózodehydrogenázu

princip stanovení:
glukóza + NAD+
GDH

glukonolakton

+ NADH + H+

GDH: glukózodehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

elektrochemické metody
princip stanovení je založen na:
enzymové reakci a ampérometrické detekci

produktů enzymové reakce

enzym glukózooxidáza je imobilizován na biosenzoru

vzniklý peroxid vodíku se detekuje a pomocí

převodníku převádí na elektrický signál

elektrochemické metody
vyšetření se provádí
na glukózových analyzátorech

výhodou je rychlost stanovení

na stanovení se může přímo použít
stabilizovaná kapilární krev,
bez předchozí úpravy vzorku
neinterferuje hemolýza

elektrochemické metody

glukóza + O2

glukózooxidáza

kyselina glukonová

+ H2O2
H2
elektrony

registrační
elektroda

O2

glukometry
sebekontrola diabetu

(SMBG – selfmonitoring of blood glucose)

domácí monitorování glykemie
různé typy glukometrů
odebírá se kapilární krev

pracují na principu přímého
elektrochemického stanovení
doporučuje se kontrola glukometrů
a spolupráce s OKB

algoritmus pro laboratorní screening DM
u dospělých
vyloučení
glukóza
postprandiální
(náhodný odběr)
+klinické příznaky
DM

< 5,6

< 11,1

≥ 11,1

doporučení ČDS a ČSKB
hodnoty glukózy jsou v mmol/l

glukóza
v plazmě
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

opakovat odběr
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

Diabetes mellitus
(DM)

< 7,0

≥ 5,6
a < 7,0

< 5,6l, ale
v anam. riziko
DM nebo IGT

oGTT-WHO
(zátěž 75g glukózy,
odběr žilní krve
na lačno a 2h
po zátěži)

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 11,1
2h po zátěži

Diabetes mellitus

hraniční
glukóza na lačno
(IFG)
glukóza v plazmě
žilní krve < 7,8
2h po zátěži

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 7,8
<11,1 2h po zátěži

porušená
glukózová tolerance
(IGT)

orální glukózo-toleranční test (oGTT)

je podpůrný diagnostický funkční test
pro diagnostiku DM
a porušené glukózové tolerance
(IGT – Impaired Glucose Tolerance)

sleduje se glykemie na lačno
a po zátěži glukózou,
opakovaně v určitých intervalech
za přesně definovaných podmínek

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
příprava pacienta:
3 dny před testem pacient konzumuje běžnou stravu
s dostatečným obsahem sacharidů (nejméně 150 g za den)
a normální fyzickou zátěží
test se provádí ráno po 10-14hodinovém lačnění
a fyzickém klidu bez alkoholu, kofeinu a nikotinu
doporučuje se vynechat léky, pokud je to
z klinického hlediska možné

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
provedení testu:
odebírá se venózní krev na lačno
a čeká se na výsledek glykemie

pokud je glykemie v rozmezí 5,6-6,9 mmol/l ,
oGTT se provede
pacient vypije během 5-10 minut 75 g glukózy
v 250-300 ml roztoku
další odběry venózní krve se provádějí
za 60 a 120 minut po vypití roztoku glukózy

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
diagnostická kritéria:
pro hodnotu glukózy v plazmě venózní krve 120 minut
po zátěži 75 g glukózy
vyloučení DM

< 7,8 mmol/l

porušená
glukózová tolerance (IGT )

≥ 7,8 mmol/l
až < 11,1 mmol/l

Diabetes mellitus

≥11,1 mmol/l

glykemie v mmol/l

12
11,1

11,1

10
8

7,8
6,7

6

6,7
5,6

4
2
0
0 minut

60 minut

čas

120 minut

180 minut

glykemický profil
několik stanovení glukózy v průběhu dne,

popřípadě i v noci odráží aktuální kompenzaci DM

glykemický profil zkrácený:
4 nebo 3 odběry
indikace: při DM I. a II. typu, při operacích diabetiků
nebo po porodu při DM II. typu,
pro posouzení kompenzace apod.

glykemický profil
glykemický profil úplný:
9 odběrů
indikace: je indikován při DM I. typu, při intenzivní terapii
nebo při inzulinové terapii, u gravidních diabetiček,
při těžké dekompenzaci DM všech typů,
po transplantaci pankreatu…

počet a přesné časování odběrů se v jednotlivých
diabetologických centrech liší
a závisí i na denním režimu nemocného

analýza glukózy se provádí v laboratořích, pokud pacient
je hospitalizovaný, nebo v domácích podmínkách
formou selfmonitoringu

glykemický profil
odběr materiálu:
nejčastěji se odebírá kapilární krev (z prstu) do odběrových nádob
určených na kapilární odběry s obsahem antiglykolytické směsi
(např. Sarstedt Multivette)

prevedení testu:
glykemický profil úplný
9 odběrů
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

1 hod. po snídani

3. vzorek

30 min. před obědem

4. vzorek

1 hod. po obědě

5. vzorek

30 min. před večeří

6. vzorek

1 hod. po večeři

7. vzorek

v 22.00 hod.

8. vzorek

v 01.00 hod.

9. vzorek

v 04.00 hod.

glykemický profil zkrácený
4 odběry
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

30 min. před obědem

3. vzorek

30 min. před večeří

4. vzorek

v 22.00 hod.

glykosurie
koncentrace glukózy v moči závisí
na hladině glukózy v krvi a na funkci ledvin
účel testu:
screening poruch glukózové tolerance
detekce poruch tubulární resorpce při poškození ledvin

stanovení glukózy v moči:
semikvantitativně – diagnostický proužek
kvantitativně
Poznámka:
semikvantitativní a kvantitativní stanovení glukózy v moči není
zařazené mezi základní nástroje na určení diagnózy diabetu ani
na sledovaní jeho stavu, protože individuální rozdíly ledvinného
prahu pro glukózu jsou dost velké a práh kolísá u každého jedince

• Játra přeměňují glukózu na ………. (8)
(též zásobní forma glukózy)

G

L

Y

K

O

S

U

R

I

E

L

L

2

O

2

H

J

I

C



N

6

B

Z

H

U

U

12

Ň

L

O

K

Í

6

Y

N

a

F

• Hormon, který snižuje glykémii se nazývá U G Y L P U Á
…………………………….. (7).
K
K
O
K
R
N
T
• Krev pro stanovení glukózy se odebírá
A
T
T
G
O
E
R
do nádobek s antiglykolytickým činidlem,
G
O
G
E
F
G
A
kterým je ……. (3 - vzorec).
•Jak se nazývá diagnostický funkční test
O
N
E
Z
I
E
E
pro diagnostiku diabetu mellitu a porušené N M M O L / L
glukózové tolerance? (4 – zkratka).
• Hladina glukózy v moči se nazývá …………………………..(10).
• Hormon, který zvyšuje glykémii se nazývá ……………………… (8).
• Test, kdy se stanovují glykémie několikrát během dne a popř.
i v noci se nazývá glykemický …………….. (6).
• Jednotky, v kterých se uvádí výsledky glykémie …………………… (6).
• Sumární vzorec glukózy ………………(6)
• Reakcí glukózy a GOD vzniká sloučenina ………………. ( 4 vzorec).
• Které buňky pankreatu produkují inzulín? (6)
• Zásoby glykogenu, jsou uloženy v orgánu, který se nazývá
………………………………. (5).


Slide 33

Zdravotnická škola, Hradec Králové
Stredná zdravotnícka škola, Bánská Bystrica

glukóza
klinicko-biochemická diagnostika
a metody stanovení

glukóza
monosacharid – aldohexóza
chemický vzorec: C6H12O6
zkratka:
Glc
-Dglukopyranóza

=
D-glukóza

D-glukóza

-Dglukopyranóza

glukóza
je nejdůležitější látkou metabolizmu
sacharidů, tvoří se trávením a konverzí
glykogenu v játrech
za fyziologických podmínek získává organizmus
glukózu:
potravou - přísun z vnějšího prostředí
glykogenolýzou – metabolická dráha konverze glykogenu
na glukózu (zásoby glykogenu jsou uložené hlavně
v játrech a příčně pruhovaných svalech)

glukoneogenezí - metabolická dráha syntézy glukózy
z necukernatých prekurzorů (pyruvát, laktát, aminokyseliny, meziprodukty citrátového cyklu, glycerol)

regulační systém metabolizmu glukózy
organizmus se snaží zachovat koncentraci glukózy
v krvi v úzkém rozmezí: 3,3 - 6,1 mmol/l
regulační systém:
nervová složka
hormonální složka
- inzulin
- glukagon
- adrenalin a noradrenalin
- glukokortikoidy
- růstový hormon
- hormony štítné žlázy...

poruchy v metabolizmu glukózy
glykemie, glukozemie, glukoplazmie - hladina glukózy v krvi
glykosurie - přítomnost glukózy v moči
porucha v metabolizmu se může projevit ve smyslu:
trvalého zvýšení  hladiny glukózy
- hyperglykemie
za hyperglykemii považujeme stavy, kdy koncentrace glukózy
na lačno je vyšší než horní hranice referenčního intervalu

nebo snížení  hladiny glukózy
- hypoglykemie
hypoglykemie je vážný stav, kdy koncentrace glukózy v krvi
klesne pod dolní hranici referenčního intervalu,
tj. pod 3,3 mmol/l, a je doprovázena klinickými projevy

klinicko-biochemická diagnostika
stanovení glukózy je základní biochemickou
informací o sacharidovém metabolizmu

účelem testu je:
screening diabetes mellitus

monitorování lékové nebo dietní terapie
u pacientů s DM
diagnostika při hypoglykemiích
monitorování energetického stavu a výživy hlavně
u intenzivně léčených pacientů

klinicko-biochemická diagnostika
stanovuje se:
náhodně naměřená glykemie
glykemie na lačno (FPG - Fasting Plasma Glucose)
glykemie po jídle
(postprandiální glykemie, pozátěžová glykemie )

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
glykemický profil

stanovení glukózy na lačno
nástroj laboratorní diagnózy DM
vyhledávání osob se zvýšeným rizikem DM

příprava pacienta:
odběr provádíme minimálně
po 8hodinovém lačnění,
vyloučit fyzickou námahu a kouření

odběr:
doporučuje se odebrat venózní krev
do odběrové nádobky
s antiglykolytickou směsí,
stanovit glukózu
ve stabilizované plazmě

předanalytické podmínky
pro stanovení glukózy na lačno

stabilizace antiglykolytickou směsí:
antiglykolytická směs obsahuje NaF (2,5 mg NaF/ml krve)
a protisrážlivé činidlo (např. heparin, EDTA...)
NaF stabilizuje glukózu ve vzorku blokací glykolýzy

!!! pokud není použité stabilizační činidlo, klesá bez oddělení
krevních elementů koncentrace glukózy
při pokojové teplotě za 1 hod. o 5 až 7 %

transport do laboratoře:

okamžitý

oddělení séra/plazmy od krevních elementů:
sérum/plazmu je potřeba oddělit od krevních elementů
do 60 minut od odběru

metody stanovení glukózy
neenzymové metody
oxidačně–redukční a kondenzační metody
jsou nejstarší metody stanovení
v současnosti se v klinické biochemii nepoužívají

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu (GOD) a peroxidázu (POD)
využívající enzym hexokinázu (HK)
využívající enzym glukózodehydrogenázu (GDH)

elektrochemické metody
hmotnostní spektrometrie
(ID-GC/MS – doporučená referenční metoda)

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu a peroxidázu

princip stanovení:
glukóza + O2

+ H 2O

GOD

glukonolakton

+ H 2 O2

na detekci vzniklého H2O2 se využívá reakce
katalyzované enzymem peroxidázou

H2O2 + 4-AAP+ fenol
redukovaný chromogen

POD

chinonimin

+ H 2O

oxidovaný chromogen

Trinderova reakce

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

činidla:
Enzymy lahvička 

pufer – chromogen lahvička 

peroxidáza

fosforečnanový tlumivý roztok

glukózooxidáza

3-methyl-fenol

4-aminoantipyrin

příprava pracovního roztoku
•

obsah lahvičky  se rozpustí v 6 ml destilované vody

•

vleje se do lahvičky  a promíchá se

stabilita: při +2-8 °C ve tmě 1 měsíc,

při +15-25 °C ve tmě 10 dní

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

postup analýzy:
vlnová délka (480-540 nm), s maximem při 498 nm
kyveta 1 cm
teplota +15-25 °C, nebo 37 ± 0,1 °C
ve třech zkumavkách se smíchá pracovní roztok v poměru 100 + 1
se sérem, plazmou (vzorkem), standardním roztokem glukózy (standard)
a s destilovanou vodou (reagenční blenk)
 vzorek (A1)

vzorek (sérum, plazma)

 standard (A2)

 reag. blenk

0,02 ml

standard

0,02 ml

dest. H2O

0,02 ml

pracovní roztok

2,0 ml

2,0 ml

2,0 ml

inkubace: (30 min při +15 až +25 °C nebo 15 min při 37 °C),
změří se absorbance vzorku (A1)
a standardu (A2) proti reagenčnímu blenku

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

metoda je aplikovatelná:
na manuální stanovení glukózy bez deproteinace
na manuální stanovení glukózy s deproteinací
na biochemické analyzátory

linearita: do 22,0 mmol/l
hodnoty přesahující horní hranici linearity
se ředí manuálně destilovanou vodou
a analýza se opakuje (výsledek x ředění)

interference:
hemolýza
chylozita
přítomnost redukujících látek
– kyselina askorbová, kyselina močová, bilirubin a jiné...

enzymové metody
využívající enzym hexokinázu

princip stanovení:
glukóza + ATP

hexokináza + Mg2+

glukóza-6-fosfát + ADP

glukóza-6-fosfát + NAD+

G-6-PDH

glukonát-6-fosfát + NADPH + H+

ATP: adenozintrifosfát
ADP: adenozindifosfát
G-6-PDH: glukóza-6-fosfátdehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

enzymové metody
využívající enzym glukózodehydrogenázu

princip stanovení:
glukóza + NAD+
GDH

glukonolakton

+ NADH + H+

GDH: glukózodehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

elektrochemické metody
princip stanovení je založen na:
enzymové reakci a ampérometrické detekci

produktů enzymové reakce

enzym glukózooxidáza je imobilizován na biosenzoru

vzniklý peroxid vodíku se detekuje a pomocí

převodníku převádí na elektrický signál

elektrochemické metody
vyšetření se provádí
na glukózových analyzátorech

výhodou je rychlost stanovení

na stanovení se může přímo použít
stabilizovaná kapilární krev,
bez předchozí úpravy vzorku
neinterferuje hemolýza

elektrochemické metody

glukóza + O2

glukózooxidáza

kyselina glukonová

+ H2O2
H2
elektrony

registrační
elektroda

O2

glukometry
sebekontrola diabetu

(SMBG – selfmonitoring of blood glucose)

domácí monitorování glykemie
různé typy glukometrů
odebírá se kapilární krev

pracují na principu přímého
elektrochemického stanovení
doporučuje se kontrola glukometrů
a spolupráce s OKB

algoritmus pro laboratorní screening DM
u dospělých
vyloučení
glukóza
postprandiální
(náhodný odběr)
+klinické příznaky
DM

< 5,6

< 11,1

≥ 11,1

doporučení ČDS a ČSKB
hodnoty glukózy jsou v mmol/l

glukóza
v plazmě
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

opakovat odběr
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

Diabetes mellitus
(DM)

< 7,0

≥ 5,6
a < 7,0

< 5,6l, ale
v anam. riziko
DM nebo IGT

oGTT-WHO
(zátěž 75g glukózy,
odběr žilní krve
na lačno a 2h
po zátěži)

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 11,1
2h po zátěži

Diabetes mellitus

hraniční
glukóza na lačno
(IFG)
glukóza v plazmě
žilní krve < 7,8
2h po zátěži

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 7,8
<11,1 2h po zátěži

porušená
glukózová tolerance
(IGT)

orální glukózo-toleranční test (oGTT)

je podpůrný diagnostický funkční test
pro diagnostiku DM
a porušené glukózové tolerance
(IGT – Impaired Glucose Tolerance)

sleduje se glykemie na lačno
a po zátěži glukózou,
opakovaně v určitých intervalech
za přesně definovaných podmínek

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
příprava pacienta:
3 dny před testem pacient konzumuje běžnou stravu
s dostatečným obsahem sacharidů (nejméně 150 g za den)
a normální fyzickou zátěží
test se provádí ráno po 10-14hodinovém lačnění
a fyzickém klidu bez alkoholu, kofeinu a nikotinu
doporučuje se vynechat léky, pokud je to
z klinického hlediska možné

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
provedení testu:
odebírá se venózní krev na lačno
a čeká se na výsledek glykemie

pokud je glykemie v rozmezí 5,6-6,9 mmol/l ,
oGTT se provede
pacient vypije během 5-10 minut 75 g glukózy
v 250-300 ml roztoku
další odběry venózní krve se provádějí
za 60 a 120 minut po vypití roztoku glukózy

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
diagnostická kritéria:
pro hodnotu glukózy v plazmě venózní krve 120 minut
po zátěži 75 g glukózy
vyloučení DM

< 7,8 mmol/l

porušená
glukózová tolerance (IGT )

≥ 7,8 mmol/l
až < 11,1 mmol/l

Diabetes mellitus

≥11,1 mmol/l

glykemie v mmol/l

12
11,1

11,1

10
8

7,8
6,7

6

6,7
5,6

4
2
0
0 minut

60 minut

čas

120 minut

180 minut

glykemický profil
několik stanovení glukózy v průběhu dne,

popřípadě i v noci odráží aktuální kompenzaci DM

glykemický profil zkrácený:
4 nebo 3 odběry
indikace: při DM I. a II. typu, při operacích diabetiků
nebo po porodu při DM II. typu,
pro posouzení kompenzace apod.

glykemický profil
glykemický profil úplný:
9 odběrů
indikace: je indikován při DM I. typu, při intenzivní terapii
nebo při inzulinové terapii, u gravidních diabetiček,
při těžké dekompenzaci DM všech typů,
po transplantaci pankreatu…

počet a přesné časování odběrů se v jednotlivých
diabetologických centrech liší
a závisí i na denním režimu nemocného

analýza glukózy se provádí v laboratořích, pokud pacient
je hospitalizovaný, nebo v domácích podmínkách
formou selfmonitoringu

glykemický profil
odběr materiálu:
nejčastěji se odebírá kapilární krev (z prstu) do odběrových nádob
určených na kapilární odběry s obsahem antiglykolytické směsi
(např. Sarstedt Multivette)

prevedení testu:
glykemický profil úplný
9 odběrů
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

1 hod. po snídani

3. vzorek

30 min. před obědem

4. vzorek

1 hod. po obědě

5. vzorek

30 min. před večeří

6. vzorek

1 hod. po večeři

7. vzorek

v 22.00 hod.

8. vzorek

v 01.00 hod.

9. vzorek

v 04.00 hod.

glykemický profil zkrácený
4 odběry
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

30 min. před obědem

3. vzorek

30 min. před večeří

4. vzorek

v 22.00 hod.

glykosurie
koncentrace glukózy v moči závisí
na hladině glukózy v krvi a na funkci ledvin
účel testu:
screening poruch glukózové tolerance
detekce poruch tubulární resorpce při poškození ledvin

stanovení glukózy v moči:
semikvantitativně – diagnostický proužek
kvantitativně
Poznámka:
semikvantitativní a kvantitativní stanovení glukózy v moči není
zařazené mezi základní nástroje na určení diagnózy diabetu ani
na sledovaní jeho stavu, protože individuální rozdíly ledvinného
prahu pro glukózu jsou dost velké a práh kolísá u každého jedince

• Játra přeměňují glukózu na ………. (8)
(též zásobní forma glukózy)

G

L

Y

K

O

S

U

R

I

E

L

L

2

O

2

H

J

I

C



N

6

B

Z

H

U

U

12

Ň

L

O

K

Í

6

Y

N

a

F

• Hormon, který snižuje glykémii se nazývá U G Y L P U Á
…………………………….. (7).
K
K
O
K
R
N
T
• Krev pro stanovení glukózy se odebírá
A
T
T
G
O
E
R
do nádobek s antiglykolytickým činidlem,
G
O
G
E
F
G
A
kterým je ……. (3 - vzorec).
•Jak se nazývá diagnostický funkční test
O
N
E
Z
I
E
E
pro diagnostiku diabetu mellitu a porušené N M M O L / L
glukózové tolerance? (4 – zkratka).
• Hladina glukózy v moči se nazývá …………………………..(10).
• Hormon, který zvyšuje glykémii se nazývá ……………………… (8).
• Test, kdy se stanovují glykémie několikrát během dne a popř.
i v noci se nazývá glykemický …………….. (6).
• Jednotky, v kterých se uvádí výsledky glykémie …………………… (6).
• Sumární vzorec glukózy ………………(6)
• Reakcí glukózy a GOD vzniká sloučenina ………………. ( 4 vzorec).
• Které buňky pankreatu produkují inzulín? (6)
• Zásoby glykogenu, jsou uloženy v orgánu, který se nazývá
………………………………. (5).


Slide 34

Zdravotnická škola, Hradec Králové
Stredná zdravotnícka škola, Bánská Bystrica

glukóza
klinicko-biochemická diagnostika
a metody stanovení

glukóza
monosacharid – aldohexóza
chemický vzorec: C6H12O6
zkratka:
Glc
-Dglukopyranóza

=
D-glukóza

D-glukóza

-Dglukopyranóza

glukóza
je nejdůležitější látkou metabolizmu
sacharidů, tvoří se trávením a konverzí
glykogenu v játrech
za fyziologických podmínek získává organizmus
glukózu:
potravou - přísun z vnějšího prostředí
glykogenolýzou – metabolická dráha konverze glykogenu
na glukózu (zásoby glykogenu jsou uložené hlavně
v játrech a příčně pruhovaných svalech)

glukoneogenezí - metabolická dráha syntézy glukózy
z necukernatých prekurzorů (pyruvát, laktát, aminokyseliny, meziprodukty citrátového cyklu, glycerol)

regulační systém metabolizmu glukózy
organizmus se snaží zachovat koncentraci glukózy
v krvi v úzkém rozmezí: 3,3 - 6,1 mmol/l
regulační systém:
nervová složka
hormonální složka
- inzulin
- glukagon
- adrenalin a noradrenalin
- glukokortikoidy
- růstový hormon
- hormony štítné žlázy...

poruchy v metabolizmu glukózy
glykemie, glukozemie, glukoplazmie - hladina glukózy v krvi
glykosurie - přítomnost glukózy v moči
porucha v metabolizmu se může projevit ve smyslu:
trvalého zvýšení  hladiny glukózy
- hyperglykemie
za hyperglykemii považujeme stavy, kdy koncentrace glukózy
na lačno je vyšší než horní hranice referenčního intervalu

nebo snížení  hladiny glukózy
- hypoglykemie
hypoglykemie je vážný stav, kdy koncentrace glukózy v krvi
klesne pod dolní hranici referenčního intervalu,
tj. pod 3,3 mmol/l, a je doprovázena klinickými projevy

klinicko-biochemická diagnostika
stanovení glukózy je základní biochemickou
informací o sacharidovém metabolizmu

účelem testu je:
screening diabetes mellitus

monitorování lékové nebo dietní terapie
u pacientů s DM
diagnostika při hypoglykemiích
monitorování energetického stavu a výživy hlavně
u intenzivně léčených pacientů

klinicko-biochemická diagnostika
stanovuje se:
náhodně naměřená glykemie
glykemie na lačno (FPG - Fasting Plasma Glucose)
glykemie po jídle
(postprandiální glykemie, pozátěžová glykemie )

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
glykemický profil

stanovení glukózy na lačno
nástroj laboratorní diagnózy DM
vyhledávání osob se zvýšeným rizikem DM

příprava pacienta:
odběr provádíme minimálně
po 8hodinovém lačnění,
vyloučit fyzickou námahu a kouření

odběr:
doporučuje se odebrat venózní krev
do odběrové nádobky
s antiglykolytickou směsí,
stanovit glukózu
ve stabilizované plazmě

předanalytické podmínky
pro stanovení glukózy na lačno

stabilizace antiglykolytickou směsí:
antiglykolytická směs obsahuje NaF (2,5 mg NaF/ml krve)
a protisrážlivé činidlo (např. heparin, EDTA...)
NaF stabilizuje glukózu ve vzorku blokací glykolýzy

!!! pokud není použité stabilizační činidlo, klesá bez oddělení
krevních elementů koncentrace glukózy
při pokojové teplotě za 1 hod. o 5 až 7 %

transport do laboratoře:

okamžitý

oddělení séra/plazmy od krevních elementů:
sérum/plazmu je potřeba oddělit od krevních elementů
do 60 minut od odběru

metody stanovení glukózy
neenzymové metody
oxidačně–redukční a kondenzační metody
jsou nejstarší metody stanovení
v současnosti se v klinické biochemii nepoužívají

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu (GOD) a peroxidázu (POD)
využívající enzym hexokinázu (HK)
využívající enzym glukózodehydrogenázu (GDH)

elektrochemické metody
hmotnostní spektrometrie
(ID-GC/MS – doporučená referenční metoda)

enzymové metody
využívající enzymy glukózooxidázu a peroxidázu

princip stanovení:
glukóza + O2

+ H 2O

GOD

glukonolakton

+ H 2 O2

na detekci vzniklého H2O2 se využívá reakce
katalyzované enzymem peroxidázou

H2O2 + 4-AAP+ fenol
redukovaný chromogen

POD

chinonimin

+ H 2O

oxidovaný chromogen

Trinderova reakce

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

činidla:
Enzymy lahvička 

pufer – chromogen lahvička 

peroxidáza

fosforečnanový tlumivý roztok

glukózooxidáza

3-methyl-fenol

4-aminoantipyrin

příprava pracovního roztoku
•

obsah lahvičky  se rozpustí v 6 ml destilované vody

•

vleje se do lahvičky  a promíchá se

stabilita: při +2-8 °C ve tmě 1 měsíc,

při +15-25 °C ve tmě 10 dní

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

postup analýzy:
vlnová délka (480-540 nm), s maximem při 498 nm
kyveta 1 cm
teplota +15-25 °C, nebo 37 ± 0,1 °C
ve třech zkumavkách se smíchá pracovní roztok v poměru 100 + 1
se sérem, plazmou (vzorkem), standardním roztokem glukózy (standard)
a s destilovanou vodou (reagenční blenk)
 vzorek (A1)

vzorek (sérum, plazma)

 standard (A2)

 reag. blenk

0,02 ml

standard

0,02 ml

dest. H2O

0,02 ml

pracovní roztok

2,0 ml

2,0 ml

2,0 ml

inkubace: (30 min při +15 až +25 °C nebo 15 min při 37 °C),
změří se absorbance vzorku (A1)
a standardu (A2) proti reagenčnímu blenku

stanovení glukózy
GLUKOSA GOD 1500 (GLU GOD 6x250)

metoda je aplikovatelná:
na manuální stanovení glukózy bez deproteinace
na manuální stanovení glukózy s deproteinací
na biochemické analyzátory

linearita: do 22,0 mmol/l
hodnoty přesahující horní hranici linearity
se ředí manuálně destilovanou vodou
a analýza se opakuje (výsledek x ředění)

interference:
hemolýza
chylozita
přítomnost redukujících látek
– kyselina askorbová, kyselina močová, bilirubin a jiné...

enzymové metody
využívající enzym hexokinázu

princip stanovení:
glukóza + ATP

hexokináza + Mg2+

glukóza-6-fosfát + ADP

glukóza-6-fosfát + NAD+

G-6-PDH

glukonát-6-fosfát + NADPH + H+

ATP: adenozintrifosfát
ADP: adenozindifosfát
G-6-PDH: glukóza-6-fosfátdehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

enzymové metody
využívající enzym glukózodehydrogenázu

princip stanovení:
glukóza + NAD+
GDH

glukonolakton

+ NADH + H+

GDH: glukózodehydrogenáza
NAD+: nikotinamidadenindinukleotid, oxidovaná forma
NADH+H+: nikotinamidadenindinukleotid, redukovaná forma

látkové množství glukózy se určuje z přírůstku
 absorbance při λ = 340 nm

elektrochemické metody
princip stanovení je založen na:
enzymové reakci a ampérometrické detekci

produktů enzymové reakce

enzym glukózooxidáza je imobilizován na biosenzoru

vzniklý peroxid vodíku se detekuje a pomocí

převodníku převádí na elektrický signál

elektrochemické metody
vyšetření se provádí
na glukózových analyzátorech

výhodou je rychlost stanovení

na stanovení se může přímo použít
stabilizovaná kapilární krev,
bez předchozí úpravy vzorku
neinterferuje hemolýza

elektrochemické metody

glukóza + O2

glukózooxidáza

kyselina glukonová

+ H2O2
H2
elektrony

registrační
elektroda

O2

glukometry
sebekontrola diabetu

(SMBG – selfmonitoring of blood glucose)

domácí monitorování glykemie
různé typy glukometrů
odebírá se kapilární krev

pracují na principu přímého
elektrochemického stanovení
doporučuje se kontrola glukometrů
a spolupráce s OKB

algoritmus pro laboratorní screening DM
u dospělých
vyloučení
glukóza
postprandiální
(náhodný odběr)
+klinické příznaky
DM

< 5,6

< 11,1

≥ 11,1

doporučení ČDS a ČSKB
hodnoty glukózy jsou v mmol/l

glukóza
v plazmě
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

opakovat odběr
žilní krve
na lačno

≥ 7,0

Diabetes mellitus
(DM)

< 7,0

≥ 5,6
a < 7,0

< 5,6l, ale
v anam. riziko
DM nebo IGT

oGTT-WHO
(zátěž 75g glukózy,
odběr žilní krve
na lačno a 2h
po zátěži)

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 11,1
2h po zátěži

Diabetes mellitus

hraniční
glukóza na lačno
(IFG)
glukóza v plazmě
žilní krve < 7,8
2h po zátěži

glukóza v plazmě
žilní krve ≥ 7,8
<11,1 2h po zátěži

porušená
glukózová tolerance
(IGT)

orální glukózo-toleranční test (oGTT)

je podpůrný diagnostický funkční test
pro diagnostiku DM
a porušené glukózové tolerance
(IGT – Impaired Glucose Tolerance)

sleduje se glykemie na lačno
a po zátěži glukózou,
opakovaně v určitých intervalech
za přesně definovaných podmínek

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
příprava pacienta:
3 dny před testem pacient konzumuje běžnou stravu
s dostatečným obsahem sacharidů (nejméně 150 g za den)
a normální fyzickou zátěží
test se provádí ráno po 10-14hodinovém lačnění
a fyzickém klidu bez alkoholu, kofeinu a nikotinu
doporučuje se vynechat léky, pokud je to
z klinického hlediska možné

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
provedení testu:
odebírá se venózní krev na lačno
a čeká se na výsledek glykemie

pokud je glykemie v rozmezí 5,6-6,9 mmol/l ,
oGTT se provede
pacient vypije během 5-10 minut 75 g glukózy
v 250-300 ml roztoku
další odběry venózní krve se provádějí
za 60 a 120 minut po vypití roztoku glukózy

orální glukózo-toleranční test (oGTT)
diagnostická kritéria:
pro hodnotu glukózy v plazmě venózní krve 120 minut
po zátěži 75 g glukózy
vyloučení DM

< 7,8 mmol/l

porušená
glukózová tolerance (IGT )

≥ 7,8 mmol/l
až < 11,1 mmol/l

Diabetes mellitus

≥11,1 mmol/l

glykemie v mmol/l

12
11,1

11,1

10
8

7,8
6,7

6

6,7
5,6

4
2
0
0 minut

60 minut

čas

120 minut

180 minut

glykemický profil
několik stanovení glukózy v průběhu dne,

popřípadě i v noci odráží aktuální kompenzaci DM

glykemický profil zkrácený:
4 nebo 3 odběry
indikace: při DM I. a II. typu, při operacích diabetiků
nebo po porodu při DM II. typu,
pro posouzení kompenzace apod.

glykemický profil
glykemický profil úplný:
9 odběrů
indikace: je indikován při DM I. typu, při intenzivní terapii
nebo při inzulinové terapii, u gravidních diabetiček,
při těžké dekompenzaci DM všech typů,
po transplantaci pankreatu…

počet a přesné časování odběrů se v jednotlivých
diabetologických centrech liší
a závisí i na denním režimu nemocného

analýza glukózy se provádí v laboratořích, pokud pacient
je hospitalizovaný, nebo v domácích podmínkách
formou selfmonitoringu

glykemický profil
odběr materiálu:
nejčastěji se odebírá kapilární krev (z prstu) do odběrových nádob
určených na kapilární odběry s obsahem antiglykolytické směsi
(např. Sarstedt Multivette)

prevedení testu:
glykemický profil úplný
9 odběrů
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

1 hod. po snídani

3. vzorek

30 min. před obědem

4. vzorek

1 hod. po obědě

5. vzorek

30 min. před večeří

6. vzorek

1 hod. po večeři

7. vzorek

v 22.00 hod.

8. vzorek

v 01.00 hod.

9. vzorek

v 04.00 hod.

glykemický profil zkrácený
4 odběry
1. vzorek

30 min. před snídaní

2. vzorek

30 min. před obědem

3. vzorek

30 min. před večeří

4. vzorek

v 22.00 hod.

glykosurie
koncentrace glukózy v moči závisí
na hladině glukózy v krvi a na funkci ledvin
účel testu:
screening poruch glukózové tolerance
detekce poruch tubulární resorpce při poškození ledvin

stanovení glukózy v moči:
semikvantitativně – diagnostický proužek
kvantitativně
Poznámka:
semikvantitativní a kvantitativní stanovení glukózy v moči není
zařazené mezi základní nástroje na určení diagnózy diabetu ani
na sledovaní jeho stavu, protože individuální rozdíly ledvinného
prahu pro glukózu jsou dost velké a práh kolísá u každého jedince

• Játra přeměňují glukózu na ………. (8)
(též zásobní forma glukózy)

G

L

Y

K

O

S

U

R

I

E

L

L

2

O

2

H

J

I

C



N

6

B

Z

H

U

U

12

Ň

L

O

K

Í

6

Y

N

a

F

• Hormon, který snižuje glykémii se nazývá U G Y L P U Á
…………………………….. (7).
K
K
O
K
R
N
T
• Krev pro stanovení glukózy se odebírá
A
T
T
G
O
E
R
do nádobek s antiglykolytickým činidlem,
G
O
G
E
F
G
A
kterým je ……. (3 - vzorec).
•Jak se nazývá diagnostický funkční test
O
N
E
Z
I
E
E
pro diagnostiku diabetu mellitu a porušené N M M O L / L
glukózové tolerance? (4 – zkratka).
• Hladina glukózy v moči se nazývá …………………………..(10).
• Hormon, který zvyšuje glykémii se nazývá ……………………… (8).
• Test, kdy se stanovují glykémie několikrát během dne a popř.
i v noci se nazývá glykemický …………….. (6).
• Jednotky, v kterých se uvádí výsledky glykémie …………………… (6).
• Sumární vzorec glukózy ………………(6)
• Reakcí glukózy a GOD vzniká sloučenina ………………. ( 4 vzorec).
• Které buňky pankreatu produkují inzulín? (6)
• Zásoby glykogenu, jsou uloženy v orgánu, který se nazývá
………………………………. (5).