Transcript Diagnóstico do carcinoma gastrointestinal pela detecção plasmática da heparanase VII CICI – VII Congresso de Iniciação Científica do IAMSPE AC.

Diagnóstico do carcinoma gastrointestinal
pela detecção plasmática da heparanase
VII CICI – VII Congresso de Iniciação Científica do IAMSPE
AC. GIOVANNA CANATO TOLOI
ORIENTADOR: PROF. DR. JAQUES WAISBERG
INTRODUÇÃO
Introdução
Carcinomas gastrointestinais
◦Alta incidência
◦Alta morbidade
◦Alta mortalidade
◦ Principais causas de morte relacionadas ao câncer
◦Metástases
◦ Principal causa de morte em doentes com tumor
Introdução
Metástase
Mecanismo
◦ Interação entre matriz extracelular e membrana
basal
◦ Membrana basal: colágeno tipo IV, laminina e
proteoglicanos de heparan sulfato
◦ Invasão: metaloproteinases e enzimas
(heparanase)
Introdução
Heparanase
◦ Endo-beta-glucuronidase
◦ Degradação da cadeia de proteoglicanos de heparan
sulfato
◦ Efeito modulador multifuncional das células neoplásicas
◦ Papel na progressão de tumores do esôfago, estômago e
cólon
◦ Expressão relacionada ao prognóstico do carcinoma
gastrointestinal
Introdução
Heparanase-1 (HPSE1) e Heparanase-2
(HPSE2)
◦Codificadas por genes diferentes
◦Distribuição tecidual e celular distintas
◦Identidade global: 35%
Introdução
◦ HPSE1
◦ Associada ao aumento potencial dos tumores e metástases
◦ Formas
◦ Superficie celular
◦ 65kDa
◦ Proteína percusora sem atividade enzimática aparente
◦ Enzima ativa
◦ 50kDa
◦ Enzima madura
Introdução
◦HPSE2: papel clínico pouco elucidado
◦ Sem atividade enzimática
◦ Poucos dados sobre funções no
desenvolvimento tumoral
Introdução
Catepsina B
◦ proteinase cisteina lisossômica
◦ alguns estudos: superexpressão desta enzima em
tumores malignos
◦ pode facilitar a invasão por dois processos:
◦ degradação direta dos componentes da matriz
extracelular
◦ ativação de outras proteases
MÉTODO
Critérios de elegibilidade
Idade ≥ 18 anos
Diagnóstico histopatológico
carcinoma gastrintestinal
confirmado
Sem quimioterapia ou radioterapia
Sem tratamento prévio de outra neoplasia
Ausência de doença aguda associada
de
Pacientes
◦ Grupo Paciente: 21 indivíduos operados de
carcinoma gastrointestinal primário sem doença
metastática
◦ 16 (76,2%) homens e 5 (23,8%) mulheres
◦ Média de idade: 68,7 ± 10,0 anos (50 a 82 anos)
◦ Grupo Controle: 43 indivíduos saudáveis
◦ 32 (74,4%) homens e 11 (25,6%) mulheres
◦ Média de idade: 52,9 ± 5,0 anos (46 a 65 anos)
Distribuição pela localização
Distribuição pelo grau de
diferenciação
Método
Amostras de plasma e de células mononucleares de ambos os
grupos de indivíduos
Proteínas HPSE1 e HPSE2 identificadas e quantificadas pelo
método Western Blot
Expressão de mRNA analisada com PCR tempo real
Atividade enzimática da HPSE1 mensurada com heparan sulfato
biotinilado e ensaio de ELISA-like
• Atividade
da
Catepsina
B
foi
mensurada
por
espectrofluorometria e os estudos foram feitos triplicados
Resultados
Resultados
Resultados
Atividade Catepsina B
Resultados
Conclusão
Conclusão
Houve um aumento significativo na atividade enzimática da
HPSE1 e Catepsina B no plasma do grupo paciente.
Este estudo com teste de plasma e sangue não invasivo
demonstrou a superexpressão das isoformas combinadas de
HPSE1 e HPSE2 no carcinoma gastrointestinal como também
um aumento da atividade da HPSE1 e da Catepsina B.
Estes resultados, combinados com os resultados de outros
estudos são encorajadores para investigar sua possível
contribuição para diagnóstico e tratamento do carcinoma
gastrointestinal.