Protocole :

PREPARATION DE TISSUS CONGELES EN OCT POUR COUPE CRYOSTAT

Référence : PRMH/PO/010/4b Rédigé par : M. FAVIER Création/Mise à jour : 21/10/2014 Approuvé par : M. FAVIER Version : 3 Nb de pages : 1/2 Rédacteur Vérificateur Approbateur Fonction Responsable plate-forme Ingénieur Qualité Responsable plate-forme M. FAVIER Y. LOTTIN M. FAVIER Nom Signature 2 3 Version 1 Révisions Description Création Mise à jour Mise à jour (logo et nouveau doc nomenclature à part) Maj gomme adragante M. Favier M. Favier M. Favier Auteur Date 15/01/2011 13/09/12 07/01/2013 4

M. Favier 21/10/2014 1.

Objet et domaine d’application

Ce protocole est utilisé pour la préparation de tissus congelés inclus en moule + OCT pour coupe Cryostat. Il s’agit d’un protocole classique pour la majorité des tissus. Les tissus sont déposés dans l’OCT selon l’orientation souhaitée à la coupe.

2.

Matériel OCT

(que l’on peut fournir). Il s’agit d’une « colle », liquide et transparente à température ambiante et blanche et dure à partir de -20°C. C’est un cryoconservateur, qui préserve le tissu des congélations/décongélations intempestives, qui protège le tissu de tout contact, qui évite la formation de cristaux dans le tissu conservé à -80°C.

Moule de congélation en plastique pour congélation (cryomold)

fournir), de 1,5cm x 1,5cm. (que l’on peut

Isopentane

(que l’on peut fournir)

3.

Documents associés

Fiche de demande de coupes cryostat.

4.

Description Remarque préalable : Afin d’obtenir de belles coupes histologiques, les échantillons que vous nous donnez sont les PLUS BEAUX (pas de coups de pince, pas de déchirure, pas trop petits…). À préparer avant tout prélèvement :

Les tissus prélevés seront congelés, inclus dans de l’OCT, dans un moule plastique, dans de l’isopentane refroidi à l’azote liquide. Ils seront préservés dans la carboglace avant d’être placés à -80°C jusqu’à leur utilisation. - Préparer et annoter les moules plastiques, en remplir le fond d’OCT

Préparation de tissus congelés pour coupe cryostat Réf : PRMH/PO/010/2 2/2 - Préparer et annoter des feuilles d’aluminium pour entourer le moule après congélation. Faire refroidir un bécher d’isopentane dans un fond d’azote liquide. La température idéale de l’isopentane pour la congélation des tissus est atteinte (entre -80 et -100°C) lorsqu’il se forme une couronne blanche au fond du bécher d’isopentane qui ne disparaît pas à l’agitation.

Les prélèvements peuvent commencer :

1 Prélever rapidement les organes. La bonne conservation d’un tissu n’excédant pas 10 minutes. Travailler sur aluminium et sans lumière directe pour éviter le dessèchement du tissu. 2 L’échantillon ne dépassera pas plus 1cm x 1cm d’envergure (pour rentrer dans le moule). 3 Déposer le tissu à l’aide d’une pince dans le moule contenant de l’OCT et recouvrir de nouveau d’OCT jusqu’au bord du moule.

ATTENTION

: Une fois le tissu déposé dans l’OCT, éviter de trop le manipuler avec la pince pour éviter la formation de bulles ou rayures dans l’OCT. 4 À l’aide d’une pince solide, attraper le complexe « moule/OCT/tissu » et plonger dans l’isopentane à bonne température, en tournoyant doucement pendant quelques secondes et laisser congeler une minute. 5 Mettre les tissus montés dans l’aluminium et conserver dans la carboglace le temps des prélèvements. 6 Stocker à -80°C jusqu’à utilisation.

Lorsque vous nous amenez les prélèvements :

Lorsque vous amenez vos échantillons à la plate-forme, les transporter en CARBOGLACE UNIQUEMENT et accompagnés de la fiche « Demande de coupes cryostat » dûment remplie et que vous nous aurez également envoyée par mail.