Transcript GlobalFiler Express PCR Amplification Kit

RÉFÉRENCE RAPIDE
GlobalFiler™ PCR Amplification Kit – PCR Setup
Pub. No. 4482081 Rev. A
Remarque : pour obtenir des instructions en matière de sécurité et de risques biologiques, consulter la section « Safety » du
GlobalFiler™ PCR Amplification Kit User Guide (Pub. no. 4477604). Concernant les produits chimiques, lire les fiches signalétiques (FS)
et suivre les consignes de manipulation. Porter des lunettes de sécurité, des gants et des vêtements appropriés.
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Présentation du produit. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1
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Prérequis . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1
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Préparation des réactions . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1
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Réalisation de la PCR et de l’électrophorèse capillaire . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2
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Garantie limitée du produit . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2
Présentation du produit
Le GlobalFiler™ Kit (200 reaction Part no. 4476135 ou 1000 reaction Part no. 4482815) est un multiplex STR à 6 filtres qui amplifie
21 loci STR autosomiques, Amélogénine, 1 locus Y STR, et 1 locus Y insertion/suppression (Y indel).
Prérequis
Avant de commencer, placer ce guide dans la zone du laboratoire où les procédures de configuration de la PCR sont réalisées.
Préparation des réactions
1. Préparer les réactifs :
a. Décongeler le Master Mix, le Master Mix Additive et le Primer Set, puis passer 3 secondes au vortex et centrifuger quelques
instants avant d’ouvrir les tubes ou les flacons.
b. Préparer le Master Mix (avant la première utilisation du kit uniquement) :
• Ajouter les volumes suivants de Master Mix Additive au tube de Master Mix :
Kit
Volume de Master Mix
Additive
200 réactions
83 µl
1 000 réactions
413 µl
• Renverser délicatement le tube de Master Mix à 10 reprises et centrifuger quelques instants.
• Marquer le bouchon du Master Mix à l’aide du symbole (+) pour indiquer que le Master Mix Additive a été ajouté.
• Mettre le tube de Master Mix Additive au rebut.
IMPORTANT ! La décongélation n’est requise que lors de la première utilisation du kit. Après la première utilisation, les réactifs
sont stockés à une température comprise entre 2 et 8 °C, il n’est donc plus nécessaire de les décongeler par la suite. Ne pas
recongeler les réactifs.
2. Calculer le volume de chaque composant nécessaire à la préparation des réactions à l’aide du tableau ci-dessous.
Composant de la réaction
Volume par réaction
Master Mix
7,5 µl
Primer Set
2,5 µl
Remarque : inclure des réactions supplémentaires dans les calculs pour compenser les pertes subies
pendant le transfert des réactifs.
Pour une utilisation dans le cadre médico-légal ou en paternité
uniquement.
3. Pipeter le volume de composants requis dans un tube polypropylène de volume adapté.
4. Passer le mélange réactionnel au vortex pendant 3 secondes, puis le centrifuger brièvement.
5. Distribuer 10 µl de mélange réactionnel dans chaque puits de réaction d’une MicroAmp® Optical 96-Well Reaction Plate.
6. Préparer les échantillons d’ADN comme décrit dans le tableau ci-dessous. Le volume réactionnel final doit être de 25 µl :
Échantillon ADN
Pour préparer...
Contrôle négatif
Ajouter 15 µl de tampon TE à faible force ionique (10 mM Tris, 0,1 mM EDTA, pH 8).
Échantillon test
Diluer une partie de l’échantillon d’ADN test avec le tampon TE de faible force ionique afin d’obtenir 1 ng d’ADN
total dans un volume final de 15 µl. Ajouter 15 µl d’échantillon dilué dans le mix réactionnel.
Contrôle positif
Combiner 10 µl d’ADN de contrôle (0,1 ng/µl) avec 5 µl de tampon TE de faible force ionique pour un volume total
de 15 µl. (La concentration finale de l’échantillon est de 0,067 ng/µl.) Ajouter 15 µl au mix réactionnel.
7. Sceller la plaque à l’aide de MicroAmp® Clear Adhesive Film (Part no. 4306311) ou de MicroAmp® Optical Adhesive Film
(Part no. 4311971).
IMPORTANT ! Nous recommandons l’utilisation de film adhésif pour sceller les plaques, afin d’assurer la fermeture hermétique
de tous les puits et d’empêcher l’évaporation. Ne pas utiliser de bouchons : ils ne permettent pas de fermer hermétiquement tous
les puits.
IMPORTANT ! Si le thermocycleur 9700 avec bloc en argent ou en argent plaqué or est utilisé, placer un Compression Pad
MicroAmp® (Part no. 4312639) sur la plaque, afin d’éviter tout phénomène d’évaporation pendant le thermocyclage. Le Veriti®
Thermal Cycler ne requiert pas l’utilisation d’un tapis de compression.
8. Centrifuger la plaque à 3 000 tr/min pendant environ 20 secondes, dans une centrifugeuse de laboratoire équipée de supports
de plaques.
Réalisation de la PCR et de l’électrophorèse capillaire
Pour effectuer l’amplification par PCR et l’électrophorèse capillaire (EC), voir le GlobalFiler™ PCR Amplification Kit-PCR Amplification
and CE Quick Reference Card (Pub. no. 4477593) et le GlobalFiler™ PCR Amplification Kit User Guide (Pub. no. 4477604).
Garantie limitée du produit
Life Technologies Corporation et/ou ses filiales garantissent leurs produits comme décrit dans les Termes et conditions de vente
généraux de Life Technologies, disponibles sur le site Web de Life Technologies à l’adresse www.lifetechnologies.com/
termsandconditions. Pour toute question, contacter Life Technologies à l’adresse www.lifetechnologies.com/support.
Translated from English Pub. no. 4477594 Rev. A
Pour une utilisation dans le cadre médico-légal ou en paternité uniquement.
Les informations figurant dans ce guide sont susceptibles d’être modifiées sans préavis.
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BUT NOT LIMITED TO THOSE OF MERCHANTABILITY, FITNESS FOR A PARTICULAR PURPOSE, OR NON-INFRINGEMENT. TO THE EXTENT ALLOWED BY LAW, IN NO EVENT SHALL LIFE
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INDIRECT, PUNITIVE, MULTIPLE OR CONSEQUENTIAL DAMAGES IN CONNECTION WITH OR ARISING FROM THIS DOCUMENT, INCLUDING BUT NOT LIMITED TO THE USE THEREOF.
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June 2014