Transcript perfectionnement en immuno-hématologie

Association de Biologie Praticienne
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375 SIRET : 321 609 489 00034 – NAF 9499Z
Dr Annick DATRY
Consultant chargé de la fabrication des échantillons et de
l’exploitation des résultats
PARASITOLOGIE Confrontation N°02/2014
Anne-Marie Fihman
Responsable scientifique
Coordonnateur
Rapport final 01/07/2014
Nombre de réponses reçues : 300 participants sur 307
1). Echantillon A : Frottis sanguin
1.1 - Résultats
Trophozoites de Plasmodium falciparum
1.2 - Techniques de coloration
Les nouveaux kits comme le RAL 555 ou le Diff-Quick colorent mal les hématies parasitées sur le frottis
sanguin. Nous ne préconisons pas le MGG.
Notre préférence va au Giemsa rapide (Giemsa R RAL 555) :
- La lame étant déjà fixée par le méthanol, saturer la lame d'eau du robinet
- Ajouter 8 gouttes de Giemsa R à l'aide d'une liquipette
- Attendre 5 mn
- Rincer abondamment à l'eau du robinet
- Laisser sécher.
On peut utiliser le Giemsa lent que nous aimons moins (Giemsa RAL lent) le Giemsa lent est dilué à 3%
(dilution dans l'eau du robinet). Le temps de coloration est de 1 h minimum, puis rinçage à l'eau du robinet.
Nous avons parfaitement coloré les lames que nous vous avons envoyées (voir photos).
1.3 - Caractéristiques morphologiques :
- Voir annexe 1
1.4 - Thérapeutique recommandée
Atovaquone (Malarone®) 4 cp /jour en 1 prise pendant 3 jours
1.5 - Commentaires concernant les réponses
- Réponses exactes : Plasmodium falciparum, 290 fois ( parasitémie 4% )
- Réponses inexactes ou incomplètes :
- Plasmodium vivax, 4 fois
- Plasmodium malariae, 3 fois
- Plasmodium ovale, 1 fois
- Pas de réponse, 2 fois
Réponses non retournées : 7 fois
2) Echantillon B : Echantillon de selles
2.1 - Résultats
Embryophores de Taenia saginata
2.2 Techniques de laboratoire utilisées
- Examen direct et technique de concentration standard (Ritchie).
2.3 Caractéristiques morphologiques : voir annexe 2
2.4 - Thérapeutique recommandée
Tredemine® (niclosamide) ou Biltricide® (praziquantel)
2.5 Commentaires concernant les réponses
- Réponses exactes :
- Embryophores de Taenia saginata (ou T. spp ou T. solium) 178 fois
- Réponses inexactes ou incomplètes :
- Cryptosporidium spp, 25 fois
- Microsporidies, 22 fois
- Cyclospora cayetanensis, 6 fois
- Endolimax nana, 3 fois
- Isospora belli, 2 fois
- Chilomastix mesnili, 1 fois
- Dientamoeba fragilis, 1 fois
- Entamoeba hartmanni, 1 fois
- Absence de parasite, 6 fois
- Non identifié, 29 fois
- Recherche non effectuée au laboratoire, 33 fois
Réponses non retournées, 7 fois
ANNEXE 1 : Plasmodium falciparum: aspects en frottis mince coloré au Giemsa
1. Trophozoïte
Le jeune trophozoïte apparaît mince et gracile. Un très mince cercle bleu figure le contour de l'anneau autour
d'une grande vacuole.
Le noyau coloré en rouge vif peut apparaître bi-nucléé : 2 petits noyaux séparés ou reliés par un filament rouge à
peine visible (formes en "haltères") ou diamétralement opposés.
Les parasites sont souvent appliqués au bord de l'hématie (formes "accolées") Le jeune trophozoïte de P. falciparum
est le plus petit des quatre espèces humaines (1,2µm).
A un stade plus avancé, les trophozoïtes apparaissent plus gros et plus épais (1,7 à 2,5 µm). Un petit prolongement
effilé leur donne une allure piriforme.
Plus tard, le cytoplasme se boursoufle en une espèce de poche à mailles :"forme en filet à papillons". Parfois le
trophozoïte âgé peut prendre une allure amoeboïde comme P. vivax ou se présenter sous forme de bandelettes comme P.
malariae. A ce stade, un seul grain de pigment noir ou de minuscules petits points noirs apparaissent dans le cytoplasme.
2. Les schizontes
Taille et nombre de mérozoïtes d'un schizonte mature sont variables, mais habituellement, il mesure 5 µm de diamètre
et occupe les 2/3 de l'hématie hôte avec en moyenne 16 mérozoïtes (8 à 32).
Les mérozoïtes sont petits ovales ou ronds. Il est exceptionnel de les retrouver dans le sang périphérique, sauf, en cas
de paludisme transfusionnel.
Ces formes ne devront pas être confondues avec les corps en "marguerite" de P. malariae
3. Les gamétocytes
Le gamétocyte jeune a une forme arrondie ou ovale; mature, il prend la forme d'un fuseau droit à extrémités effilées
(forme en "cigare"), ou arqué avec les bouts arrondis (forme en "banane" ou en "croissant").
A ce stade, ils peuvent être apparemment libres, l'hématie hôte ayant été détruite ou devenue plus ou moins
"fantomatisée". Le gamétocyte femelle a un cytoplasme bleu foncé, un noyau granuleux étiré au centre masqué en partie par un
abondant pigment noir et une forme élancée.
Le gamétocyte mâle est plus trapu; son cytoplasme est rose et son noyau plus condensé au centre.
4. Hématie-hôte
P.falciparum parasite tous les globules rouges à tous les stades de maturité sans discrimination. La taille de l'hématie
hôte reste normale et l'hématie ne subit aucune déformation. A l'intérieur de l'hématie on peut trouver de petites mouchetures,
caractéristiques : les taches de Maurer. Ces taches apparaissent préférentiellement à PH compris entre 7,2 et 7,4 et à un stade
tardif de trophozoïte âgé. Elles se colorent en rouge-brun.
L'hématie ainsi mouchetée est en général plus pâle et sa bordure parait nettement accentuée
Très souvent, on observe un pluriparasitisme à l'intérieur d'une même hématie (jusqu'à 8 parasites dans une même hématie).
5. Image microscopique du frottis sanguin parasité
Le frottis de sang parasité par P.falciparum est monotone. Au cours d'un accès, on trouve essentiellement des
trophozoïtes semblables les uns aux autres avec ou sans gamétocytes.
En résumé,
Le diagnostic de P.falciparum est posé quand on constate :
- une abondance de petits trophozoïtes annulaires non pigmentés assez semblables
- la coexistence ou l'existence seule de gamétocytes caractéristiques
- l'absence de schizontes en général
- la non altération des hématies parasitées avec présence de taches de Maurer
Trophozoïtes de Plasmodium falciparum
ANNEXE 2 : Morphologie d’un œuf de Taenia saginata ou T. Solium
Les œufs de Taenia renferment dès l’émission un embryon muni de 6 crochets et appelé pour cette raison embryon hexacanthe.
Tous les œufs de Taenia sont pourvus de 2 membranes :
- Une membrane externe ou vitelline mince et transparente, renfermant souvent de nombreuses granulations
réfringentes et séparé de la membrane interne par un grand espace une membrane interne ou ovulaire renfermant l’embryon
hexacanthe.
- Cette membrane est épaisse et brun-foncé. La membrane interne est aussi appelée embryophore car elle contient
l’embryon. Par extension, on désigne sous le nom d’embryophore, l’embryon entouré de sa membrane ovulaire (taille : 50µm).
Embryophores de Taenia spp
ANNEXE 4 : Diagrammes
Echantillon A
Nbre de réponse % Identification des
300 sur 307
Parasites
Plasmodium falciparum
290
96,67
Plasmodium vivax
4
1,33
Plasmodium malariae
3
1,00
Plasmodium ovale
1
0,33
Pas de réponse
2
0,67
Total
300
100,00
Echantillon B
Nbre de réponse %
Identification
300 sur 307
des Parasites
Embryophores de Taenia saginata
178
57,98
Cryptosporidium sp.
25
8,14
Microsporidies
22
7,17
Cyclospora Cayetanensis
6
1,95
Endolimax nana
3
0,98
Isospora belli
2
0,65
Chilomastix mesnili
1
0,33
Dientamoeba fragilis
1
0,33
Entamoeba hartmanni
1
0,33
Technique non réalisée au laboratoire
33
10,75
Non identifié
29
9,45
Absence de parasite
6
1,95
TOTAL
307
100,00