Transcript Receiver - iGEM 2007

ものがたり
１
３
まりも完成
２
私たちのプロジェクトに必要なもの
☆大腸菌同士をくっつける
⇒ＦｌｉＣ‐Ｈｉｓの作成
☆大腸菌を一箇所に集め、
かつ大きさを制限する
⇒ＡＨＬシステムの開発
Ｒ
Ｒ
ＡＨＬ
Ｒ
Ｒ
Ｒ
Ｒ
Ｒ
Ｓ
Ｓ
Ｒ
Ｒ
Ｒ
②ＲｅｃｅｉｖｅｒはＡＨＬ存在下で
鞭毛が生えて、ＡｉｉＡによりＡ
ＨＬを分解する。
Ｒ
Ｒ
Ｓ
Ｓ
ＡＨＬ
Ｒ
Ｒ
①Ｓｅｎｄｅｒは常に鞭毛が生
えていて、ＡＨＬを生産する。
ＡＨ
Ｌ
Ｄｅｓｉｇｎ
Ｒ
Ｒ
Ｒ
Ｒ
Ｒ
ＡＨＬ
Ｒ
Ｒ
③鞭毛にはヒスタグが付いて
いるのでニッケルイオンを仲
介としてくっつく。
Ｒ
Ｒ
一箇所に集合できる。
中心から離れるとAHLの濃度
が薄くなり鞭毛を生やさなくな
るのでまりもの成長がとまる。
AHL System
• MarimoはAHLでコントロール
• 濃度勾配を利用して、サイズのコントロール
・SenderとReceiverの選択ができるようにする
Sender
Receiver
Strong
Sensitive
Normal
Normal
• Strong senderとSensitive Recieverの作成
• 振蘯させていると培地のAHL濃度が一定になるので、aiiAを
発現するレシーバーを作成する。
AHL濃度低下の要因
細胞内に取り込まれることによって濃度低下
aiiA
aiiA Receiver
Strategy
Super Sender
AHL synthesis
methionine
S-adenosyl methionine
3OC6HSL
O
HO
metK
C
N
HO
H2 N
NH2
NH 2
S+
N
O
LuxI, acyl-ACP
OH
N
HN
O
O
S
N
O
Assembly Strategy
Genome
PCR
metK
O
O-
O
Super Sender
Strain
BBa_03623
Super Sender
GFP Ring
Final-Construction 実験
1. 鞭毛間吸着テスト（senderとreceiver同士
が吸着するか確認）
2. マリモがちゃんと形作れるかテスト
3. サイズの制御テスト
Receiver
O/N Culture
R
R
R
Ni2+
R
R
R
R
R
R
1滴
S
S
S
Receiver
O/N Culture
R
R
R
R
R
R
R
R
R
AHL
Ni2+
S
S
S
Receiver
O/N Culture
R
R
R
R
R
R
R
S
S S
R
R
AHL
Ni2+
S
S
S
Receiver
O/N Culture
R
R
R
R SR
S S R
R
R R
R
R
AHL
Ni2+
S
S
S
Receiver
O/N Culture
R
R
R
R SR
S S R
R
R R
R
R
AHL
Ni2+
S
S
S
Receiver
O/N Culture
R
R
R SR
S S R
R
R R
R
R
R
MARIMO!
AHL
Ni2+
Marimoのサイズ制御 TEST