Transcript 幻灯片 1
柱分配色谱-紫外分光光度法 三氯化铁作用——与水杨酸形成 尿素作用——高浓度尿素的存在可使 ——阿司匹林胶囊测定（USP） 紫色配位物，使水杨酸保留在柱上。 配位物在柱上的移动变慢，谱带较窄。 样品的氯 水杨酸的限量测定 仿溶液 磷酸的作用—— 冲洗：氯仿分次洗（阿司匹林） 硅藻土 若有少量FeCl3被冲 洗脱：冰HAc+乙醚（解吸） 三氯化铁 洗下来，色带变黄， 洗脱：氯仿（水杨酸） 尿素 影响结果，磷酸可 测定：306nm，A 样 A对 3+ 硅藻土 与Fe 形成不溶性 限量：以阿司匹林标示量计， 磷酸 对照溶液75g10ml/50ml, 磷酸铁而避免干扰。 允许水杨酸的量为0.75% 样品液100mg/50ml 阿司匹林的含量测定 上样：样品的氯仿溶液 冲洗：氯仿（弃去） 洗脱：冰HAc-CHCl3 （阿司匹林+水杨酸） 测定 ：280nm 计算：对照品比较法 （测得的是总量） 硅藻土 碳酸氢钠 碳酸氢钠的作用： 使阿司匹林和水 杨酸均成钠盐保 留在柱上。 冰Hac作用：解吸 高效液相色谱法 高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流 动相泵入装有填充剂的色谱柱进行分离测定 的色谱方法。 注入进样阀的供试品，由流动相带入柱内，各 成分在柱内被分离，并依次进入检测器，由 记录仪、积分仪或数据处理系统记录色谱信 号。 现代液相色谱和经典液相色谱没有本质的区别。不 同点仅仅是现代液相色谱比经典液相色谱有较高的 效率和实现了自动化 操作。经典的液相色谱法，流 动相在常压下输送，所用的固定相柱效低，分析周 期长。而现代液相色谱法引用了气相色谱的理论， 流动相改为高压输送（最高输送压力可达 4.9107Pa）;色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料 填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱（每 米塔板数可达几万或几十万）；同时柱后连有高灵 敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。因此， 高效液相色谱具有分析速度快、分离效能高、自动 化等特点。所以人们称它为高压、高速、高效或现 代液相色谱法。 阿司匹林栓剂的含量测定 色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶（ODS） 流动相：甲醇-二乙胺水溶液-冰醋酸 检测波长：280nm 内标物质：咖啡因 系统适用性试验： n——按阿司匹林应不低于2000， R——阿司匹林、水杨酸与内标物峰的分离度 应大于1.5 溶液配制： 内标溶液：取咖啡因，加乙醇制成4mg/ml 对照品溶液：阿司匹林0.15g，精密加内标液 5ml，稀释至50ml，精密量取2ml，稀释至 50ml。 供试品溶液：取5粒，精密称定，在40-50C 水浴上熔融，精密量取适量（相当于阿司匹 林0.15g），精密加内标液5ml，加乙醇至 50ml，精密量取2ml，稀释至50ml。 测定法：取对照品溶液和供试品溶液各10ul分别注入液相色谱 仪，记录色谱图，按内标法以峰面积计算求得供试品溶液中阿 司匹林的浓度Cx 计算供试液 C样=（R样/R标）×C标 标示量%= C样×稀释倍数×平均粒重 称样量×标示量 × 100% 丙磺舒原料的含量测定 色谱柱：苯基键和硅胶 流动相：磷酸二氢钠的1%冰醋酸溶液 检测波长：254nm 系统适用性实验： ｎ----按丙磺舒计算不低于3900 拖尾因子不大于2.3 重复进样５次，相对标准偏差不大于1.5% 测定法：精密称取丙磺舒对照品流动相溶液 和供试品流动相溶液各20ul，分别进样，记 录色谱图 （按课本Ｐ１３４页公式计算丙磺舒含量） 固定相填充剂的选择 最常用的色谱柱填充剂为化学键合硅胶 反相色谱系统使用非极性填充剂，以十八烷 基硅烷键合硅胶最为常用 正相色谱系统使用极性填充剂，常用的填充 剂有硅胶等 硅胶适用PH2-8 当pH大于8时，可使载体硅胶溶解；当pH小 于2时，与硅胶相连的化学键合相易水解脱落 PH大于8需选用耐碱填充剂 PH小于2需选用耐酸填充剂 返回 流动相的选择 由于C18链在水相环境中不易保持伸展状态， 故对于十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的反 相色谱系统，流动相中有机溶剂的比例通常 不应低于5％，否则C18链的随机卷曲将导致 组分保留值变化，造成色谱系统不稳定。 返回 系统适用性试验 对一些仪器测试方法，在进行方法验证时，有必要 将分析设备、电子仪器与实验操作、被测试样品等 一起当作完整的系统进行评估。 系统适用性便是对整个系统进行评估的指标。系 统适用性试验参数的设置需根据被验证方法类型而 定。 色谱方法对分析设备、电子仪器的依赖程度较高， 因此所有色谱方法均应进行该指标验证，并将系统 适用性作为分析方法的组成部分。 ｎ：是色谱柱的理论板数 Ｒ：是分离度 重复性：取各品种项下的对照溶液，连续进 样3～5次，其峰面积测量值的相对标准偏差 应不大于2.0% 返回 内标法 内标法是一种间接或相对的校准方法。在分析测定样品 中某组分含量时，加入一种内标物质以校准和消除出于操作 条件的波动而对分析结果产生的影响，以提高分析结果的准 确度。 内标法在气相色谱定量分析中是一种重要的技术。使用 内标法时，在样品中加入一定量的标准物质，它可被色谱柱 所分离，又不受试样中其它组分峰的干扰，只要测定内标物 和待测组分的峰面积与相对响应值，即可求出待测组分在样 品中的百分含量。 采用内标法定量时，内标物的选择是一项十分重要的工作。 理想地说，内标物应当是一个能得到纯样的己知化合物，这 样它能以准确、已知的量加到样品中去，它应当和被分析的 样品组分有基本相同或尽可能一致的物理化学性质(如化学 结构、极性、挥发度及在溶剂中的溶解度等)、色谱行为和 响应特征，最好是被分析物质的一个同系物。当然，在色谱 分析条什下，内标物必须能与样品中各组分充分分离。 返回 为什么要用咖啡因做内标物质呢 返回 如采用高纯硅胶为载体并具有高表面覆盖度 的键合硅胶、包覆聚合物填充剂、有机-无机 杂化填充剂或非硅胶填充剂等 back 如具有大体积侧链能产生空间位阻保护作用 的二异丙基或二异丁基取代十八烷基硅烷键 合硅胶、有机-无机杂化填充剂等 back