Transcript Medición de crecimiento de microorganismos

Medición de crecimiento de
microorganismos
Martha Fernanda Martínez Chavira
Carolina Lizeth Domínguez Erives
Norma Angélica Bolivar Jacobo
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El examen de alimentos en cuanto a
presencia
y
número
de
microorganismos es básico en la
microbiología de los alimentos.
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Los cuatro métodos básicos
empleados para los números
“totales” son:

Recuentos en placas normales (SPC)
Métodos de los números más probables (NMP)
Técnica de reducción de colorantes

Recuentos microscópicos directos (DMC)


Recuento convencional en placa
normal (SPC)

Se mezclan y se homogeneizan
porciones de muestras, se diluyen
seriadamente, se siembran en la
placa
y
se
incuban
a
una
temperatura y tiempo apropiados.
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Aunque el SPC se determina con
mayor frecuencia por inundación de
placas,
se
pueden
obtener
resultados equiparables por siembra
en superficie.
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
Organismos
aerobios
estrictos
resultan favorecidos por la siembra
en superficie
Microaerófilos
lentamente.
crecen
más
Homogenización de las muestras
de alimentos

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En 1971 fue
Stomacher
ideado
el
Colwell
Homogeniza las muestras en una
bolsa
de
plástico
mediante
machacamiento energético de dos
tambores.
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Es específico de los alimentos; es
mejor que la mezcladora de alta
velocidad
para algunos tipos de
alimentos pero no para otros.
Aparato para la siembra de placas
en espiral
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Distribuye el inóculo líquido sobre la
superficie de una placa rotatoria
que contiene un medio de agar o
que ha sido vertido y endurecido.
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El
recuento
de
las
colonias se realiza con un
retículo especial.

Dependiendo
de
la
densidad relativa de las
colonias, se cuentan las
que aparecen en una o
más zonas específicas del
retículo.
Filtros de membrana.
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Se usan membranas de un diámetro
de poro que retiene las bacterias
(0.45 micras) pero que permiten ser
atravesadas por el agua o por el
diluyente.
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Una vez recogidas las bacterias por
la filtracion, se coloca la placa sobre
el agar o sobre una almohadilla
absorbente.

Despues del crecimiento se cuentan
las colonias en el microscopio
despues de la tincion apropiada,
lavado y tratamiento de la
membrana para hacerla
transparente.
Técnica directa del filtro
epiflourescente (DEFT)
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Emplea colorantes fluorescentes y
microscopìa de fluoresencia.
El homogenizado se pasa a través
de un filtro de nilon 5 micras.
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Triton X-100 y 0.5 ml de tripsina.
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Incubacion.
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Membrana de policarbonato
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El filtro se tiñe con naranja de
acridina
Conteo de celulas teñidas mediante
microscopia de flourescencia.
DEFT en microcolonias.
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Permite detectar células viables.
Se utiliza el filtro de nylon 5
micras.
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Incubaciòn:
Gram + 3 horas
Gram – 6 horas
Coliformes, pseudomonas y stap 8
horas.
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Muestras tratamiento enzimatico.
Membrana policarbonato.
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Medio selectivo 3-6 horas.
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Tiñen de naranja de acridina
Conteo de colonias.
Filtro de membrana con retículo
hidrófobo.
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Sharpe y Michaud.
Se filtra 1 ml homogenizado a
través de una membrana de filtro.
Se coloca la membrana en el agar
aproiado

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Incubaciòn durante la noche
Conteo de las celdillas
Métodos de recuento de colonias
al microscopio
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Supone
el
recuento
de
las
microcolonias que se forman en
capas de agar dispuestas sobre
portaobjetos.
Método de las gotitas de agar.
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Sharpe y Kilsby
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Incuba durante 24 horas.
Conteo con lupa de 10 aumentos.
Método Petrifilm.
 Son
películas
deshidratadas
de medios de
cultivos
generales o
selectivos.
Método del número más probable

Se trata de un método estadístico
para averiguar el número de
organismos.
Se
basa
en
la
presunción de que, pasado un cierto
tiempo, si están los organismos que
creemos, la prueba deberá ser
positiva.
Ventajas:



Relativamente sencillo
Se pueden determinar el número de
microorganismos pertenecientes a
grupos concretos
Determinación
de
coliformes
fecales.
Reducción de colorantes.
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Numero de m.O. viables en
alimentos.
Azul de metileno y resazurina.
Se añaden los colorantes al
alimentos y se toma el tiempo en
que estos son reducidos.
Método de los tubos rodantes.
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Son tubos herméticamente cerrados
en los que haciéndolos girar se
forma una fina capa de agua. Útiles
para recuento de anaerobios.
Recuento microscópico directo.
Recuento microscópico directo

Contadores electrónicos de
partículas (tipo Coulter) Se hace
pasar una suspensión microbiana
por un tubo capilar, entre los dos
polos de una corriente eléctrica, que
detecta el número y el tamaño de
las partículas que van pasando
Recuento microscópico directo
Examen microbiológico de superficies.
Placas de contacto.
Se utilizan para determinar la calidad
microbiológica de superficies planas.
Presiona la placa sobre la superficie.
Examen microbiologico de superficies.
Método del hisopo
Se debe definir el área donde se va a
tomar
la muestra, generalmente se usa una
plantilla con un área entre 24 y 30 cm
Otros métodos para el examen de
superficie.
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Siembra directa en superficie
Pelicula pegajosa

GRACIAS POR SU ATENCIÒN.