Transcript Klinička važnost DNA fragmentacije spermija

Marijan Tandara
Ana Bajić, Martina Šunj
1860 Prisutnost spermija/pokretni spermiji
1929 Prvi objavljeni rad o analizi sjemena u NEJM
(Macomber)
1940-tih Sjemeni parametri (MacLead and Gold)
1944 Sistematska analiza sjemena (Hotchkiss)
1980 Morfologija spermija (Kruger and Menkveld)
1986 Objektivni biokemijski markeri sazrijevanja
spermija i potencijala plodnosti (Huszar Lab)
Jajna
stanica
80%
Uterus
10%
Spermij
10%
Modificirano - Danny Sakkas

Varikocela

Kemoterapija i radioterapija

Pušenje cigareta (Mak, 2000; Kunzle, 2003; Potts, 1999, Sun, 1993)

Leukocitospermija
(Saleh, 2003; Fischer, 2003; Zini, 2000)
(Chatterjee, 2000; Deane, 2004; Kobayashi, 2001)
(de Laminrande, 1993; Zini, 1995, Twigg, 1998; Iwasaki, 1992;
Zini, 1993)

Povećana tjelesna težina

Testikularna hipertermija
(Kort 2006)
(Sailer J 1997,Banks Reproduction 2005)
Intratestikularno
Posttestikularno
 Nedostatak protamina
(nađen kod 5-15% neplodnih muškaraca)
De Yebra et al, J Biol Chem 1993; Bianchi et al, Biol Reprod 1993; Kramer et al, Genet Test 1997,
Cho, 2003
 Poremećaj topoizomeraze II i tranzicijskih proteina
Balhorn, J Cell Biol 1982; Kierzenbaum, Mol Reprod Dev 2001; Bissoneault, FEBS Lett 2002
 Apoptoza
Sakkas et al, Exp Cell Res 1999, Sakkas et al. Reprod Biomed Online 2003
VARIKOKELA
LIJEKOVI
PUŠENJE
ZAGAĐENJE
INFEKCIJA
 prostate
 sjemenih vezikula
 epididimisa
KARCINOM
NEZRELI/ABNORMALNI
SPERMIJI
Lipidna
peroksidacija
Produženo
zadržavanje spermija
u epididimisu
DNA
oštećenje
Apoptoza
Oštećenje
spermija
Aitken et al, Biol Reprod 1998;
Irvine et al, J Androl 2000
TUNEL ( terminal deoxynucleotydil transferase-mediated deoxyuridin
triphosphatenick-end labeling assay ) ( sdSB )
ISNT ( in situ-nick translation )
Comet Assay ( neutral pH – sdSB )
( zahtjeva denaturaciju DNA )
SCSA ( sperm chromatin structure assay )
Comet Assay ( acidic oder basischem pH ) ( sdSB )
SCD ( sperm chromatin dispersion test )
Parametri
Normalni spermiogram
DFI (%)
>30%
24%
DFI (%)
<30%
Lošim spermiogramom
29%
Tandara M. i sur. 2012
Koncentracija Morfologija
Pokretljivost Vitalnost
* Spearman´s Rho
r=-0,18
r=-0,32
r=-0,41
r=-0,36
p value
p=0,069
p=0,001
p<0,001
p<0,001
Tandara M. i sur.
Reference
PARAMETRI
koncentracija
pokretljivost
morfologija
Kodama i sur (1997)
0,49
Shen i sur (1999)
0,24
0,38
0,42
Irvine i sur (2000)
0,37
0,37
0,54
Chan i sur (2001)
0,38
0,38
0,66
Tomlinson i sur (2001)
0,24
Saleh i sur (2003)
0,31
0,04
0,47
Larson-Cook i sur (2003)
0,08
0,18
0,25
0,20
A. Agarwal i sur; Human Reprod 2003
Variables
Cijela grupa
(n=206)
Groupa1
Groupa 2
(n=108)
DFI<30%
(n=98)
DFI30%
DFI (%)
28 (24-32)
25 (22-28)
34 (30-44)
Koncentracija
(×106/ml)
27,1±14,3
28,2±12,3
25,7±16,6
p=0,374
Morfologija(%)
40,7±16,7
44,6±14,9
35,5±17,7
p=0,006
Pokretljivost(%)
28,7±18,0
35,2±17,0
20,0±15,7
p<0,0001
Vitalnost (%)
68,1±14,6
72,0±11,6
63,0±16,4
p=0,002
(n=57)
Tandara M. i sur.
DNA fragmentacija
Granična vrijednosti
< 4%
> 4%
< 15%
>15%
< 18%
>18%
< 20%
> 20%
Trudnoće(%)
22.7%
21.4%
22.8%
15.4%
23.2%
10.0%
23.8%
0.0%
M. Benchaib i sur. Human Reprod 2003
 Da li visoka razina oštećenja DNA spermija pogađa
fertilizaciju i razvoj embrija?
Ebner et al.
DFI (%)
Pearsonov koeficijent
korelacije (r)
p vrijednost
ES (IVF/ICSI)
- 0,3865
0,0199*
*statistički značajno p< 0,05
Tandara M i sur. 2012.
Tandara M i sur. 2012
Integritet DNA
spermija postaje
važan – ekspresija
genoma embria
blastocista
2 pronukleusa
2 st embrio
4 st embrio
8 st embrio
….
 Za pacijente sa više od 3 uzastopna IVF
neuspjeha
 U slučajevima kad je primijećen zastoj
razvoja embrija
 U slučaju ponavljanih pobačaja
 U slučajevima neobjašnjene neplodnosti