Transcript Lactasa (EC 3.2.1.23)

Tecnología Enzimática
Elizabeth Torres Pérez
mayo, 2010
 Tipo
hidrolasa.
 Producida en el intestino delgado y se
sintetiza durante la infancia de todos los
mamíferos.
 Se produce en el borde de cepillo de las
células que recubren las microvellosidades
intestinales.
 Su
acción: hidroliza a
la lactosa
(disacárido), en sus
componentes, glucosa
y galactosa.
 Propiedades
funcionales muy
superiores a las de la
lactosa.
 Aumentar
el poder
edulcorante del
producto hidrolizado
isomerizando la
glucosa obtenida en
fructosa, mediante
la glucosa
isomerasa.
 De este modo se
evita la adición de
azúcar durante la
producción.
 Intolerancia
a la
lactosa.
 Malabosorción de
lactosa.
 Deficiencia primaria
de lactasa.
 Deficiencia
secundaria de
lactasa.
 Este
azúcar tiene una solubilidad
relativamente baja (aproximadamente 180
g/L a 25ºC.)
 Es de difícil fermentación, lo que provoca
problemas de contaminación y limita las
posibilidades de revalorización directa.
 Su poder edulcorante es cinco veces menor,
aproximadamente, que el de la sacarosa.
 Conversión
de suero de queso en un jarabe
dulce rico en proteínas que se pueden
utilizar en productos horneados y helados.
 La aplicación del enzima inmovilizada en la
producción de edulcorante por hidrólisis de
la lactosa en sueros.
 Como suplemente digestivo.
 Adaptada al frío, se puede utilizar para
hidrolizar la lactosa en productos lácteos
procesados en plantas refrigerados.
 Con
la ayuda de bacterias, levaduras y
mohos.
 Saccharomyces lactis
 Kluyveromyces fragilis
 Aspergillus niger
A. niger
 T. harzianum 1567 D2
 T. harzianum D3 1073
 T. harzianum D2 1620
 T. harzianum D1 1041
 T. viride 1897 A2
 T. viride ATCC 32098
 T. viride
 Penicillium sp.
 P. spinulosum
 Rhizopus sp.
 Fusarium culmorum
 F. accumulatum

 Lactosa
 Peptona
 Extracto
de levadura
 KH2PO4
 (NH4)H2PO4
 MgSO47H2O
 CaCl2
10.0
1.5
1.0
1.0
7.0
1.0
0.3
Inóculo 1mL
esporas/50mL
medio.
Determinar
crecimiento.
Determinar
actividad
Estabilidad
temperatura
Estabilidad
pH
Enzima + ONPG (substrato).
 1mL substrato + muestra  incubar 50°C, 5 min.
 Para reacción, 1mL carbonato de sodio.
 Abs 420nm UV-Vis.
 [ONPG] a partir de curva estándar.


Actividad= cantidad de enzima que produce
1µmol de glucosa (ONPG) / minuto.
 Incubó
la enzima en buffers.
 pH = 3 – 7.5
 1h, TA.
 Enzima
a temp. 20 – 70°C
 1h
 Ensayo
con condiciones estándar.
 Trichoderma
spp. es una alternativa eficaz
para la producción de lactasa.
T. viride ATCC 32098
T. harzianum 1073 D3
T. viride 1897 A2
 La
estabilidad de temperatura y pH de la
producción lactasa eran considerablemente
altos.
 Temperaturas entre 20 y 60 °C
 pH = 3.0-7.5
 Implica
que puede ser utilizada a escala
industrial para varios aplicaciones,
especialmente en la industria lechera.