Información general

• Clases teóricas y practicas semanales.

• Cambios de comisión:

sólo

en las dos primeras semanas de clases con el correspondiente trámite en

despacho de alumnos

(presentar constancia en la cátedra).

• Tendrán 2 exámenes parciales escritos teórico-prácticos.

Promoción:

• Asistir al 80 % de las clases prácticas.

DOS FALTAS.

• Aprobar al menos con 7 puntos los 2 exámenes parciales.

NO SE PROMEDIAN LAS NOTAS.

• Tener aprobadas las asignaturas correlativas.

• No se pueden recuperar parciales para promocionar.

Regularización:

• Asistir al 80% de las clases prácticas.

DOS FALTAS.

• Aprobar al menos con 4 puntos los 2 exámenes parciales

. NO SE PROMEDAN LAS NOTAS.

• Se puede recuperar un examen parcial por ausencia o aplazo.

PRÁCTICO N° 1

Técnicas para el estudio de microorganismos del suelo Objetivo:

Conocer las técnicas básicas para el análisis microbiológico del suelo 1) 2) 3) 4) Normas prácticas para el muestreo de suelo Técnicas para el cultivo de microorganismos Técnicas de observación al microscopio Métodos de aislamiento y conservación

Normas prácticas para el muestreo de suelo

1) • • • Diseño de muestreo: Cantidad de muestras: topografía y heterogeneidad del lote Forma de muestreo: cultivo, sistema de labranza Profundidad: 0 – 20 cm 2) Acondicionamiento de las muestras 3) Preparación de las muestras en laboratorio

Cantidad de muestras: topografía y heterogeneidad del lote

Loma Medialoma Bajo

15 Submuestras = 1 Muestra

Agricultura de Precisión Imagen Satelital Mapa de Rendimiento Mapa de Ambientes

Elementos de muestreo Pala Barreno Manual Barreno Hidráulico

Forma de muestreo: cultivo y sistema de labranza Siembra directa Labranza convencional Rastrojo de maíz Rastrojo de soja Suelo laboreado

0 cm.

20 cm.

Forma de muestreo: profundidad

~200 g.

Acondicionamiento de las submuestras

Tamizado Embolsado y Rotulado

Preparación de las muestras en laboratorio

Oreado Mínimo 24 hs.

Conservación

Visualización de microorganismos: porta objeto enterrado

Suelo en estudio Riego Portaobjeto enterrado Incubación

Actividades 1) Preparación de muestras de suelo en laboratorio

: tamizar, embolsar y rotular.

2) Visualización de microorganismos de suelo:

enterrar un portaobjeto.

Técnicas para el cultivo de microorganismos

Requerimientos para el cultivo de microorganismos en laboratorio: 1) Condiciones de asepsia: esterilización 2) Medios de cultivos 3) Condiciones ambientales

Condiciones de asepsia: esterilización

•

Esterilización:

eliminar todos los organismos vivos • Métodos de esterilización: – Calor: húmedo y seco – Radiación – Filtración – Productos químicos

Calor húmedo: Autoclave

Combinación de calor, presión y humedad Para sustancias acuosas Temperatura de esterilización: 121°C - 20 minutos A gas con regulación manual Eléctrica con regulación automática

Calor seco: Horno de esterilización

Vista exterior Para materiales estables al calor (vidrio, metal, porcelana etc.) Vista interior Temperatura de esterilización: 160 °C Tiempo: 2 hs

Otros métodos de esterilización

Radiación UV: superficies, aire y agua Filtración: soluciones lábiles Productos químicos: mesada, manos, tapones, etc.

Filtro •Agua Oxigenada •Alcohol etílico •Hipoclorito •Formol •Bicloruro de mercurio

Medios de cultivos

•

Definición

: mezcla balanceada de requerimientos nutritivos para el crecimiento de microorganismos •

Tipos

: – Generales – Selectivos •

Composición química

: fuente de carbono, fuente de nitrógeno, fuente de energía, base mineral y factores de crecimiento •

Características

: líquidos o sólidos: agentes solidificantes

Composición de medios de cultivos Medio selectivo: Fijadores de Nitrógeno

FUENTE COMPUESTO CANTIDAD Fuente de C y energía Sucrosa 20 g Base mineral Agua Fosfato di potásico Fosfato monopotásico Cloruro de calcio Sulfato de magnesio Molibdato de sodio Cloruro férrico Carbonato de calcio Agua destilada pH = 7 0.05 g 0.15 g 0.01 g 0.2 g 0.002 g 0.01 g 0.1 g 1000 ml FUENTE Fuente de C y energía Fuente de N

Medio general

COMPUESTO Almidón NO3 Na CANTIDAD 12 g 0.5 g Base mineral Agente solidificante Agua PO4 HK2 SO4 Mg 7 H2O Agar Agua destilada pH = 7 1.0 g 0.5 g 15 g 1000 ml

Preparación de medios de cultivo Pesar componentes sólidos:

encender colocar recipiente para pesar tarar registrar la lectura colocar el componente a pesar

Disolver con agua destilada: hidratar

componentes sólidos agregar agua disolver

Regular pH: pHmetro

soluciones reguladoras encendido y lavado lectura protección del electrodo lavado del electrodo

Preparación de medio sólido

medio líquido agregar agar fundir al calor medio agarizado

Fraccionar y acondicionar para esterilizar

Fraccionamiento de medio líquido Fraccionamiento de medio sólido (en caliente ) Acondicionado para esterilizar

Esterilizar en autoclave

Medios en “Pico de flauta”

Cultivo de microorganismos del suelo en medio líquido

Siembra Dilución Incubación

Actividad:

colocar una alícuota de suelo en medios general y selectivo.

Tamaño del lote Cantidad de muestras Topografía

Muestreo de suelo

Profundidad 0-20 cm.

con rastrojos Composición n ° submuestras

Una muestra

Guardar en conservadora Oreado Tamizado

Preparación de muestras en laboratorio

Envasado y Rotulado Conservación en heladera

Práctico 1 Laboratorio Práctico 3 Esterilización Medio de cultivo

• Autoclave - horno • Radiación • Filtración • Productos químicos

Composición química

• Base mineral • Fuente de carbono • Fuente de energía • Agua

*

Visita al Laboratorio

de Microbiología Agrícola F.C.A.

Observación Aislamiento Preparación de medios

Líquidos Sólidos • Pesar drogas • Disolver con agua destilada • Regular pH • Fraccionar • Pesar drogas • Disolver con agua destilada • Regular pH • Agarizar • Fundir • Fraccionar Esterilización en autoclave Siembra de suelo Incubación