Transcript Práctico 1
Información general
• Clases teóricas y practicas semanales.
• Cambios de comisión:
sólo
en las dos primeras semanas de clases con el correspondiente trámite en
despacho de alumnos
(presentar constancia en la cátedra).
• Tendrán 2 exámenes parciales escritos teórico-prácticos.
Promoción:
• Asistir al 80 % de las clases prácticas.
DOS FALTAS.
• Aprobar al menos con 7 puntos los 2 exámenes parciales.
NO SE PROMEDIAN LAS NOTAS.
• Tener aprobadas las asignaturas correlativas.
• No se pueden recuperar parciales para promocionar.
Regularización:
• Asistir al 80% de las clases prácticas.
DOS FALTAS.
• Aprobar al menos con 4 puntos los 2 exámenes parciales
. NO SE PROMEDAN LAS NOTAS.
• Se puede recuperar un examen parcial por ausencia o aplazo.
PRÁCTICO N° 1
Técnicas para el estudio de microorganismos del suelo Objetivo:
Conocer las técnicas básicas para el análisis microbiológico del suelo 1) 2) 3) 4) Normas prácticas para el muestreo de suelo Técnicas para el cultivo de microorganismos Técnicas de observación al microscopio Métodos de aislamiento y conservación
Normas prácticas para el muestreo de suelo
1) • • • Diseño de muestreo: Cantidad de muestras: topografía y heterogeneidad del lote Forma de muestreo: cultivo, sistema de labranza Profundidad: 0 – 20 cm 2) Acondicionamiento de las muestras 3) Preparación de las muestras en laboratorio
Cantidad de muestras: topografía y heterogeneidad del lote
Loma Medialoma Bajo
15 Submuestras = 1 Muestra
Agricultura de Precisión Imagen Satelital Mapa de Rendimiento Mapa de Ambientes
Elementos de muestreo Pala Barreno Manual Barreno Hidráulico
Forma de muestreo: cultivo y sistema de labranza Siembra directa Labranza convencional Rastrojo de maíz Rastrojo de soja Suelo laboreado
0 cm.
20 cm.
Forma de muestreo: profundidad
~200 g.
Acondicionamiento de las submuestras
Tamizado Embolsado y Rotulado
Preparación de las muestras en laboratorio
Oreado Mínimo 24 hs.
Conservación
Visualización de microorganismos: porta objeto enterrado
Suelo en estudio Riego Portaobjeto enterrado Incubación
Actividades 1) Preparación de muestras de suelo en laboratorio
: tamizar, embolsar y rotular.
2) Visualización de microorganismos de suelo:
enterrar un portaobjeto.
Técnicas para el cultivo de microorganismos
Requerimientos para el cultivo de microorganismos en laboratorio: 1) Condiciones de asepsia: esterilización 2) Medios de cultivos 3) Condiciones ambientales
Condiciones de asepsia: esterilización
•
Esterilización:
eliminar todos los organismos vivos • Métodos de esterilización: – Calor: húmedo y seco – Radiación – Filtración – Productos químicos
Calor húmedo: Autoclave
Combinación de calor, presión y humedad Para sustancias acuosas Temperatura de esterilización: 121°C - 20 minutos A gas con regulación manual Eléctrica con regulación automática
Calor seco: Horno de esterilización
Vista exterior Para materiales estables al calor (vidrio, metal, porcelana etc.) Vista interior Temperatura de esterilización: 160 °C Tiempo: 2 hs
Otros métodos de esterilización
Radiación UV: superficies, aire y agua Filtración: soluciones lábiles Productos químicos: mesada, manos, tapones, etc.
Filtro •Agua Oxigenada •Alcohol etílico •Hipoclorito •Formol •Bicloruro de mercurio
Medios de cultivos
•
Definición
: mezcla balanceada de requerimientos nutritivos para el crecimiento de microorganismos •
Tipos
: – Generales – Selectivos •
Composición química
: fuente de carbono, fuente de nitrógeno, fuente de energía, base mineral y factores de crecimiento •
Características
: líquidos o sólidos: agentes solidificantes
Composición de medios de cultivos Medio selectivo: Fijadores de Nitrógeno
FUENTE COMPUESTO CANTIDAD Fuente de C y energía Sucrosa 20 g Base mineral Agua Fosfato di potásico Fosfato monopotásico Cloruro de calcio Sulfato de magnesio Molibdato de sodio Cloruro férrico Carbonato de calcio Agua destilada pH = 7 0.05 g 0.15 g 0.01 g 0.2 g 0.002 g 0.01 g 0.1 g 1000 ml FUENTE Fuente de C y energía Fuente de N
Medio general
COMPUESTO Almidón NO3 Na CANTIDAD 12 g 0.5 g Base mineral Agente solidificante Agua PO4 HK2 SO4 Mg 7 H2O Agar Agua destilada pH = 7 1.0 g 0.5 g 15 g 1000 ml
Preparación de medios de cultivo Pesar componentes sólidos:
encender colocar recipiente para pesar tarar registrar la lectura colocar el componente a pesar
Disolver con agua destilada: hidratar
componentes sólidos agregar agua disolver
Regular pH: pHmetro
soluciones reguladoras encendido y lavado lectura protección del electrodo lavado del electrodo
Preparación de medio sólido
medio líquido agregar agar fundir al calor medio agarizado
Fraccionar y acondicionar para esterilizar
Fraccionamiento de medio líquido Fraccionamiento de medio sólido (en caliente ) Acondicionado para esterilizar
Esterilizar en autoclave
Medios en “Pico de flauta”
Cultivo de microorganismos del suelo en medio líquido
Siembra Dilución Incubación
Actividad:
colocar una alícuota de suelo en medios general y selectivo.
Tamaño del lote Cantidad de muestras Topografía
Muestreo de suelo
Profundidad 0-20 cm.
con rastrojos Composición n ° submuestras
Una muestra
Guardar en conservadora Oreado Tamizado
Preparación de muestras en laboratorio
Envasado y Rotulado Conservación en heladera
Práctico 1 Laboratorio Práctico 3 Esterilización Medio de cultivo
• Autoclave - horno • Radiación • Filtración • Productos químicos
Composición química
• Base mineral • Fuente de carbono • Fuente de energía • Agua
*
Visita al Laboratorio
de Microbiología Agrícola F.C.A.
Observación Aislamiento Preparación de medios
Líquidos Sólidos • Pesar drogas • Disolver con agua destilada • Regular pH • Fraccionar • Pesar drogas • Disolver con agua destilada • Regular pH • Agarizar • Fundir • Fraccionar Esterilización en autoclave Siembra de suelo Incubación