Transcript 灭菌室
项目、二 植物组织培养实验室 设计与设备配置 教学目标 教学终极目标 能设计组培实验室和组培苗生产小型工厂 促 成 目 标 能熟练运用植物组培尤其是“无菌”概念设计组培室 能运用组培生产工艺流程配置组培“四室”和相应仪器设备 能使用主要设备，并运用原理进行维护和修理 工作任务 任务1 设计组培实验室和组培苗生产小型工厂 任务2 使用超净工作台和灭菌锅等仪器设备 任务3 列出组培室常用仪器设备的名称和作 用清单 任务4 写一份组织培养室注意事项 实践知识 组培室设计及其基本设备 一、设计 缓冲室 无菌操作室 准备室 组培室 培养室 温室 驯化室 （一）准备室 作用：材料、培养器械的清洗、培养基准备、灭菌及 组织学细胞学观察等的准备工作。 普通化学实验室 准 备 室 细胞学实验室 洗涤室 灭菌室 普通化学实验室： 仪器及设备、化学药品。 纯水仪、冰箱、移液枪、过滤灭菌器、电炉、微波 炉、磁力搅拌器、低速台式离心机、电脑等 。 作用：配制培养基。 细胞学实验室： 作用：细胞学和组织学观察。 需备有高倍显微镜、体视显微 镜、倒置显微镜、各种相机、 恒温箱、切片机、恒温水浴、 滴瓶、染色缸、载玻片、盖玻 片等。 洗涤室：清洗、贮存器皿设施、鼓风干燥箱等。 作用：玻璃器皿、用具和培养材料的洗涤。 灭菌室：细菌过滤器：用于液体培养基灭菌装置。 高压蒸气灭菌装置：如立式、卧式和手提式灭菌。 作用：培养基、器械、棉塞、无菌纸等灭菌消毒。 （二）缓冲室 主要功能：用于无菌操作人 员更换灭菌工作服、拖鞋，戴口罩。 设施装备：紫外灯 缓冲室 三、无菌操作室 作用：进行植物材料分离接种的重要场所，需 长时间的无菌操作，对组织培养成功起关键作用。 超净工作台 试 验 设 施 紫外灯 固定式和移动式载物台 广口瓶、酒精灯、酒精棉、机械支架 手术剪、解剖刀、解剖针、镊子等 （四）培养室 作用：进行材料的培养的场所。其大小、规模可根 据工作性质设定。以充分利用空间和节能为原则。 设备： 可调控光、温、湿度等设备。 还有固定式培养架、转床、摇床。 适用于器官（芽、茎、花药等）、愈伤组织、细胞 和原生质体的固体培养和液体培养。 （五）驯化室 主要功能：用于试管苗出瓶后的驯化。 设施装备：空调机、加湿器、恒温恒湿控制 仪、光照调节装置、通风口及杀菌剂。 驯化室 （六）温室 作用：培育组织与细 胞培养出来的材料。 组 织 工 厂 设 计 图 组培工厂设计图 二、仪器设备和器皿用具 （一）仪器设备 1、超净工作台 2、无菌箱 3、空调 4、除湿机 5、恒温箱 6、烘箱 7、高压灭菌器 8、冰箱 9、 天平 10、显微镜 11、水浴锅 12、摇床或转床 13、蒸馏水发生器 14、酸度计 15、离心机 超净工作台(a laminar flow hood) 工作原理: 利用鼓风机驱动空气 遁过高效过滤器除去 空气中的尘埃颗粒， 使空气得到净化。 净化空气徐徐通过工 作台面，使工作台内 构成无菌环境。 Holmes HAP-240 HEPA 空气净化器 卧式灭菌 锅 手提式灭 菌锅 高压蒸汽灭菌器 立式灭菌 锅 过滤灭菌器 滚动摇床 空 气 浴 摇 床 烘箱 纸制品， 干热灭菌 （二）各类器皿 1、 培养器皿：试管、三角瓶、L和T形管、 培养器皿、果酱瓶等 2、分注器 3、离心管 4、刻度移液管 5、细菌过滤器 6、实验器皿：量筒、量杯、烧杯、吸管、 滴管、容量瓶、称量瓶、试剂瓶等 （三）器皿的洗涤 洗涤方法： 1、重铬酸钾洗液： 饱和的重铬酸钾洗液：43克重铬酸钾溶于1000毫升 馏水中（饱和溶液）。按1：1体积比将浓硫酸缓慢地 倒入饱和重铬酸钾水溶液中。 流程： 水洗 晾干 蒸馏水洗两次 （12h） 重铬酸钾洗液 自来水冲净 干燥 2、洗涤剂：洗衣粉、洗液 3、超声波洗净器：小型玻璃器皿，顽固性污渍。 新的玻璃器皿：0.1﹪HCl浸泡12小时，洗衣粉、 自来水洗、蒸馏水冲。 污染的玻璃器皿：要先高压灭菌后，然后再刷洗。 要避免交叉污染。 （四）器械用具 1、镊子 2、剪刀 3、解剖刀 4、接种工具 5、打孔器 6、其他：酒精灯、电炉、磁力搅拌器、 微波炉、蒸馏水瓶等。 常用工具 酒精灯 消毒工具 组培工厂设计的原则及总体要求 设计原则 根据培养目的和规模来设计。 流水线式设计布局合理。 防止污染。 降低成本、节能、安全。 总体要求 选址要求排灌水方便，远离污染源，水电供应充足， 交通便利，周边环境清洁，地下水位在1.5m以下。 各车间的大小与相对比例合理，在车间设计和设施 设备的配置、摆放上与其功能相适应。 建筑与装修材料要经得起消毒、清洁和冲洗 超净工作台的工作原理 知识拓展 超净工作台将空气通过由特制的微孔泡沫塑料涂层叠 合组成的 “超级滤清器”后除去大于0.3um的尘埃、真菌 和细菌孢子等吹送出来，形成连续不断的无尘无菌的超净 空气层流，已达到台内无菌的状态。 超净工作台 超净工作台使用管理 （1）每次使用超净工作台时，实验人员应先开启超净 工作台上的紫外灯，紫外照射20min后使用。 （2）开启超净工作台工作电源，关闭紫外灯，并用 75%的酒精喷洒擦拭消毒工作台面。 （3）整个实验过程过程中，实验人员应按照无菌操作 规程操作。 紫 外 灯 （4）实验结束后，用消毒液擦拭工作台面，关闭 工作电源，重新开启紫外灯照射15分钟。 （5）如遇机组发生故障，应立即通知实验员，由 专业人员检修合格后继续使用。 （6）实验人员应注意保持室内整洁。 （7）超净工作台的滤材每2-3年更换一次，并作 好更换记录。 项目小结 1.组培工厂应包括组培苗生产车间和驯化栽培区。其中组 培苗生产车间主要包括洗涤车间、培养基配制车间、灭菌 车间、接种车间、培养车间；驯化栽培区包括移栽驯化车 间和育苗苗圃。 2.建立组培工厂后应为组培工厂配置超净工作台、高压灭 菌锅、空调、冰箱等仪器设备。 3.组培工厂中需要配备各种玻璃器皿（如培养皿、量筒、 移液管、容量瓶、烧杯等）和各种器械（如剪刀、各种镊 子、打孔器、接种环等）。 4.设计组培工厂应根据组培的工艺流程和工作程序以及培 养目的和培养规模来设计，同时还要考虑其经济性。 课后作业 1.如何正确设计植物组培工厂，设计时要考虑 哪些因素？ 2.如何正确使用高压灭菌锅？ 3.超净工作台的工作原理？ 4.怎样清洗新的玻璃器皿？