Transcript lp 2 – microbio – Preparate microscopice

PREPARATE MICROSCOPICE
CATEDRA DE MICROBIOLOGIE
LP 2
• In microbiologia clinica, microscopul este
indispensabil.
• Microscopia uzuala o facem cu fond
luminos.
• Numai in circumstante speciale recurgem
la:
- microscopia cu fond negru,
- cu contrast de faza sau
- cu luminiscenta.
Microscopia optica pe fond luminos
• Bacteriile, fungii, protozoarele le urmarim:
in produse patologice
sau
in culturi
fie in stare nativa, vie (preparate umede),
fie dupa fixare si colorare (preparate
colorate).
Microscopia optica pe fond luminos
Preparate microscopice umede
• Indicatii:
- depistarea rapida si
- identificarea spirochetelor, fungilor sau
protozoarelor
- observarea rapida a mobilitatii
microorganismelor
- depistarea si identificarea unor elemente
celulare si necelulare in expectoratie, lavaj
bronsiolo – alveolar, urina, materii fecale,
secretie vaginala, lichid duodenal etc.
Microscopia optica pe fond luminos
Preparate microscopice umede
• Materiale necesare:
- lame de sticla: 76/25 mm., grosime 1 –
1,1mm.
- laméle de sticla: 18/18, 20/20, 22/22,
24/24 mm., grosime 0,1 - 0,17 mm.
- microscop optic: obiective uscate de 4x,
10x, 20x si 40x.
Microscopia optica pe fond luminos
Preparate microscopice umede
• Interpretare:
- Miscarea browniana determina oscilatia
pe loc a particulelor.
Curentii de fluid antreneaza o multime de
particule care traverseaza campul
microscopic in aceeasi directie.
Microscopia optica pe fond luminos
Preparate microscopice umede
- Un microorganism este mobil cand isi
modifica pozitia fata de un reper din
vecinatate.
- Bacteriile monotriche sau lofotriche au
miscari rapide de rostogolire,
- Bacteriile peritriche au miscari oscilatorii.
Microscopia optica pe fond luminos
Preparate microscopice colorate
• Principiu:
Fixarea colorantilor (ex. coloranti bazici de
anilina etc.) pe structurile protoplastului
mareste refringenta microorganismelor si
permite observarea detaliilor morfologice.
Microscopia optica pe fond luminos
Preparate microscopice colorate
• Structuri speciale asociate
peptidoglicanului bacterian determina
anumite afinitati tinctoriale care apar dupa
coloratii diferentiale: Gram, Ziehl –
Neelsen etc.
Microscopia optica pe fond luminos
Preparate microscopice colorate
• In coloratiile negative particulele insolubile
ale colorantului (carbonul din tusul de
India, nigrozina) formeaza fondul negru al
campului microscopic pe care se observa
usor, ca un halou incolor, capsula unor
microorganisme ca: pneumococii,
Cryptococcus neoformans etc.
Microscopia optica pe fond luminos
Preparate microscopice colorate
• Indicatii: identificarea microscopica a
microorganismelor.
Microscopia optica pe fond luminos
Preparate microscopice colorate
• Procedura:
1. Efectuarea frotiului:
Frotiul este materialul microbian etalat in
strat subtire pe suprafata unei lame de
microscop marcata cu indicativul
produsului examinat.
Microscopia optica pe fond luminos
Preparate microscopice colorate
• Frotiul se efectueaza in 3 timpi:
- Etalarea
- Uscarea rapida a frotiului in aer cald
- Fixarea frotiului pentru bacterioscopie
Microscopia optica pe fond luminos
Preparate microscopice colorate
• 2. Colorarea frotiului
• 3. Protejarea frotiului prin montarea in
balsam de Canada
Microscopia optica pe fond luminos
Preparate microscopice colorate
Coloratia Gram
1. Colorare cu sol. Violet de gentiana (cristal violet) 1% - 1’.
Spalare cu apa de robinet.
2.. Mordantare cu sol. Lugol (sol. de I2 in KI) – 1’.
Spalare cu apa de robinet.
3. Decolorare cu sol. alcool – acetona – 30” – 1’
Spalare cu apa de robinet.
4. Colorare cu sol. Safranina (fucsina bazica diluata) – 1’.
Spalare cu apa de robinet.
Coloratia Gram
Coloratia Gram
Link-uri
• http://www.microbiologybytes.com/LabWork/LabWork.ht
m
• http://www.ncl.ac.uk/dental/oralbiol/oralenv/tutorials/chris
tian_gram.htm
• http://www.uphs.upenn.edu/bugdrug/antibiotic_manual/gr
am.htm
• http://serc.carleton.edu/microbelife/research_methods/mi
croscopy/gramstain.html
• http://homepage.ntlworld.com/diamonddove/01_Content
s/Contents.htm
• http://micro.digitalproteus.com/morphology.php
TEMA PENTRU STUDENTI
• Cautati si alte link-uri despre coloratia
Gram (“staining Gram”) si imagini cu
bacterii Gram (+) si Gram (-).
• Desenati in caietul de lucrari bacteriile pe
care le-ati gasit.