Transcript 胶体金免疫层析技术原理

免疫检测法来检测食品中的三聚氰胺
第3小组
组长：邱玉兰
PPT制作：平亚东 邱玉兰
成员：凌瑞雪 董才 倪智敏
• 2007年3月, 美国发生多起因食用宠物食品
而导致宠物中毒死亡事件。
• 2008 年9月, 中国发生因食用三鹿婴幼儿
奶粉导致婴幼儿产生肾结石病症的严重事
件。
• 两起事件的原因都是在食品或饲料中非法
添加大剂量三聚氰胺。
三聚氰胺
三聚氰胺（化学式：C3H6N6），俗称
密胺、蛋白精，被用作化工原料。它
是白色单斜晶体，几乎无味，微溶于
水（3.1g/L常温），可溶于甲醇、甲
醛、乙酸、热乙二醇、甘油、吡啶等，
不溶於丙酮、醚类、对身体有害，不
可用於食品加工或食品添加物。
主要检测方法
一、三聚氰胺酶联免疫检测法
二、胶体金免疫层析实验方法
酶联免疫法
• 酶联免疫法(ELISA)是在免疫荧光和组织化
学基础上发展起来的新技术。其主要是利
用抗原与抗体的高特异性反应，通过合适
的载体，使酶标抗原或抗体与待测样品反
应，形成酶标抗原抗体复合物，在相应的
酶底物参与下，复合物上的酶催化底物使
之水解成有色物质。一定条件下，呈色物
质与待测物的含量直接相关，因此可以根
据呈色物质颜色的深浅，对待测样品进行
定性定量分析。
酶联免疫法原理
采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔
条上预包被三聚氰胺抗原，样本残留的三
聚氰胺和微孔条上预包被的抗原竞争抗三
聚氰胺抗体，加入TMB底物显色，样本吸
光值与其残留物三聚氰胺成负相关，与标
准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即
可得出样本中三聚氰胺的含量。
酶联免疫法的缺陷
酶联免疫法方法由于高通量简单快速，在食品检
测中应用非常广泛，但是该方法存在一定的假阳性
，只能作为一种筛选方法，其阳性结果必须经相应
的确证方法确证。因此虽然验证结果显示酶联免疫
法方法检测乳制品和肉类中三聚氰胺都可以满足
1mg/kg，但是检出的阳性结果必须经过液相色谱质
谱质谱( lc-ms/ms) 确证。
三聚氰胺酶联免疫检测试剂盒
该试剂盒是利用免疫学竞争法的
原理，在酶标板微孔上预包被
三胺卵清蛋白偶联物聚氰。检
测时，加入三聚氰胺标准品或
待测样品溶液及特异性的抗三
聚氰胺抗体，包被在微孔板上
的三聚氰胺卵清蛋白偶联物和
标准品或样品中的三聚氰胺竞
争性地与抗体结合，再加入酶
标二抗， 形成抗原抗体复合物；
用TMB底物显色；加入反应终
止液后在450nm波长酶标仪下
进行检测，样品中的三聚氰胺
浓度与吸收光强度成反比。
胶体金免疫层析技术
-----介绍
• 胶体金免疫层析技术（GICA)是以胶体金为
标记物的免疫层析技术，免疫层析( IC)技术
是20世纪80年代发展起来的一种将免疫技
术和色谱层析技术相结合的快速免疫分析
方法。
胶体金免疫层析技术原理
其原理是以条状纤维层析材料为固相,借助
毛细作用使样品溶液在层析条上泳动,同时,使样
品中的待测物与层析材料上针对待测物的受体(如
抗体或抗原)发生高特异、高亲和性的免疫反应,
层析过程中免疫复合物被富集或截留在层析材料
的一定区域(检测带) ,通过酶促显色反应或直接
使用可目测的着色标记物(如胶体金) ,短时间(5
～10min内)便可得到直观的实验结果。
三聚氰胺胶体金速测卡的检测原理
将着色标记物与待测抗原的特异性抗体(Ab1)相
偶联,沉积在结合区。而检测区处固相化的是待测抗
原或待测抗原的类似物。若样品中含有待测抗原,则
样品中的抗原和带有标记物的Ab1形成Ag-Ab1复合物
。随后在通过固相化有待测抗原或其类似物的检测
区时,由于竞争抑制,不再发生反应,检测线处不显色
;样品继续前移, Ag- Ab1 复合物被固相化在质控线
处的抗Ab1 抗体(Ab2)所结合,形成Ab1- Ag- Ab2 复
合物,使质控线显色。
胶体金免疫层析技术的优势及应用
• 胶体金免疫层析技术不需进行结合标记物与游离
标记物的分离,省去了繁琐的加样、洗涤步骤。因
而这种分析技术操作简单快速,分析结果清楚,易
于判断,且无须仪器。
• 三聚氰胺胶体金速测卡检测灵敏度高，结果直观，
操作方便、快捷，携带、储存方便，成本低，非
常适合于基层执法部门对三聚氰胺的快速筛查。
• 胶体金免疫层析技术在医学上应用较多,在食品检
测领域的应用在近几年才发展起来。有多种应用
胶体金免疫层析技术的商业化产品面世，三聚氰
胺胶体金速测卡就是其中之一。
从以上两种方法中，我们可以得出
要检测食品中是否有三聚氰胺，可以
用免疫检测的方法。而且可以达到快
速、简便的目的。相信以后对于食品
中三聚氰胺的检测方法有更加简便、
快速的免疫检测方法。
谢谢欣赏
可
怜
老
师
苦
教
导
试
问
几
人
精
免
疫