Transcript 槐花米中芦丁的提取

南阳师范学院化学实验教学中心
槐花米中芦丁的提取、分离
和鉴定
制作人：熊
燕
一、实验目的要求
1、掌握黄酮类化合物的提取和分离的原理和方法。
2、掌握黄酮类成分的主要理化性质及鉴别方法。
3、了解IR及NMR在黄酮类化合物结构鉴定中的应用。
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二、实验原理
中药槐米中的主要化学成分
 主要含有芦丁、槲皮素，还含少量皂苷类及多糖、
粘液质等。
 槐米含芦丁可高达23.5%，槐花开放后降至13.0%。
 芦丁可用于治疗毛细血管脆性引起的出血症，并用
作高血压辅助治疗剂。
 芦丁还可以作为制备槲皮素、羟乙基槲皮素、羟乙
基芦丁、二乙胺基乙基芦丁等的原料。
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OH
O
HO
OH
槲皮素的化学结构式
O
OH
O
glc
OH
rha
OH
3'
芦丁的化学结构式
HO
O
7
3
5
OH
OH
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O
4'
芦丁的性质
 芦丁为浅黄色粉末或极细微淡黄色针状结晶，含3分子结晶
水（C27H30O16·3H2O），加热至185℃以上熔融并开始分解。
 芦丁可溶于乙醇、吡啶、甲酰胺、甘油、丙酮、冰醋酸、
乙酸乙酯中，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚。
 芦丁的溶解度，在冷水中1:10000，沸水中1:200，沸乙醇
中1:60，沸甲醇中1:7
 芦丁分子中具有较多酚羟基，显弱酸性，易溶于碱液中，
酸化后又可析出，因此可以用碱溶酸沉的方法提取芦丁。
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碱溶酸沉法原理
由槐花米中提取芦丁的方法很多，本实验是根
据芦丁在冷水和热水中的溶解度差异的特性进行提
取和精制，或根据芦丁分子中具有酚羟基，显弱酸
性，能与碱成盐而增大溶解度，以碱水为溶剂煮沸
提取，其提取液加酸酸化后则芦丁游离析出。
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三、实验流程
1、芦丁的提取
槐花米
（15g）
加水
300ml
搅拌下加
入石灰乳
保持微
沸30min
调节
PH8-9
1.5g CaO 加10ml水
双层滤纸趁
热抽滤
• 趁热抽滤时，注意防
止滤液因减压而沸腾。
滤液
注意及时补充水
和石灰乳，维持
PH 8~9
直火加热
在60-70度下，用
浓盐酸调PH3-4
残渣
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静置
2、芦丁的精制与水解
第一次实验所得滤液
• 酸水解过程
中，注意补充
蒸馏水，维持
原体积。
抽滤
沉淀（粗品芦丁）均分2份
滤液
重结晶
按1:70量加入2%硫酸，
加热40min，放冷静置，
抽滤
按1:60量加入蒸馏水，沉淀
悬浮于蒸馏水中，加热煮沸
15分钟后，趁热抽滤
残渣
抽滤时，热烧杯勿直接放在实
验台上，防止烧杯炸裂。
水解
滤液
冷却 静置，抽滤
精制芦丁
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滤液
糖鉴定
• 2%的硫酸用
98%浓硫酸自
己配制，注意
浓硫酸和水的
加入顺序。
沉淀
干燥、 95％
乙醇重结晶
槲皮素
3、芦丁、槲皮素的理化鉴别方法
实验名称
实验试剂
Molish反应
10%α-萘酚乙醇、溶液浓硫酸
盐酸-镁粉反应
盐酸-镁粉
醋酸镁反应
1％醋酸镁甲醇溶液
三氯化铝反应
1％三氯化铝乙醇溶液
（紫外灯）
锆-柠檬酸反应
2％二氯氧锆甲醇溶液2％
柠檬酸甲醇溶液3～4滴
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现
芸香苷
紫色环
象
槲皮素
无现象
红色～紫红色
黄色荧光（紫外灯）
黄色荧光
黄色并褪色 黄色不褪色
4、芦丁的TLC鉴定
 样品： ①自制芦丁乙醇液;
②自制槲皮素乙醇液。
 对照品：①芦丁对照品乙醇液;
②槲皮素对照品乙醇液。
 吸附剂：聚酰胺薄膜。
 展开剂：①氯仿—甲醇—甲酸(15：5：1);
②醋酸乙酯—甲酸—水(8：1：1)。
 显色剂：①喷三氯化铝试液，待乙醇挥干后，置紫外灯
(365nm)下观察。
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5、芦丁的IR、1HNMR鉴定




样品：自制芦丁。
实验：KBr压片，红外分光光度仪测试。
IR谱图与芦丁标准谱图对照。
DMSO-d6作溶剂，测芦丁的1HNMR。
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四、注意事项
 在提取前应将槐花米粉碎，使芦丁易于被热水溶出。
粉碎不可过细，以免过滤时速度过慢；
 本实验用碱溶酸沉法提取，加入石灰乳可以达到碱
性溶解的目的，又可除去槐花米中所含的大量粘液
质，但应严格控制其碱性pH8～9，不可超过pH10。
如pH值过高，加热提取过程中芦丁可被水解破坏，
降低收得率。加酸沉淀时，控制pH3～4,不宜过低，
否则芦丁可生成佯盐而溶于水，也降低收得率。
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五、思考题
 苷类结构的检识大体程序如何？
 苷类水解的方法？
 怎样确定芦丁结构中的糖基是连接在槲皮素3-OH
上？
 苷元的结构怎样确定？
 怎样确定苷键的构型？
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六、实验课后总结与讨论
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芦丁提取
芦丁的分离纯化
芦丁的理化鉴别
芦丁的苷元-槲皮素的制备
芦丁与槲皮素的波谱鉴定
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