Transcript καλλιεργεια επιλεγμενων βακτηριων

Καλλιέργια επιλεγμένων
βακτηρίων
Κρητικός Ιωάννης
Νταβράζου Βασιλική
Ντελή Πολυξένη
Καλλιέργεια – Θρεπτικό υπόστρωμα
• Καλλιέργεια : η ανάπτυξη
ενός μικροοργανισμού
υπό ελεγχόμενες
συνθήκες.
• Θρεπτικό υπόστρωμα :
παρέχει θρεπτικά
στοιχεία και μέρος
συνθηκών ανάπτυξης
Σύσταση θρεπτικών υποστρωμάτων
• Πηγή ενέργειας και απαραίτητων στοιχείων
σάκχαρα, λιπίδια, πρωτείνες
• Παράγοντες ανάπτυξης που δεν μπορουν να
συνθέσουν
νερό, μέταλλα, αμέταλλα, βιταμίνες
• Συστατικα αναλογα με την λειτουργεια τους
παράγοντες σταθεροποίησης, ανασταλτικούς παράγοντες,
χρωμογόνα και φθορίζοντα συστατικά, δείκτες
Η επιλογή του κατάλληλου θρεπτικού υλικού
γίνεται βάση των μεταβολικών και
βιοχημικών ιδιοτήτων του
μικροοργανισμού.
Γένος Streptococcus
•
•
•
1.
2.
3.
Gram-θετικά βακτήρια
Η καλλιέργεια γίνεται σε
αιμοτούχο άγαρ με 5% αίμα
προβάτου
Με βάση την ζώνη
αιμόλυσης, κατηγοριοποιούμε
τους στρεπτοκόκκους σε:
Α-αιμολυτικούς (οξείδωση
αιμογλοβίνης-πράσινη ζώνη
αιμόλυσης)
Β-αιμολυτικοί (πλήρης λύση
ερυθρών-διαυγής ζώνη)
Γ-αιμολυτικοί-μη αιμολυτικοί
(καμία αιμόλυση)
Γένος Staphylococcus
• Gram-θετικοί κόκκοι.
• Όλα τα είδη αναπτύσονται
παρουσία χοληδόχων
αλάτων. Μερικά διασπάνε την
μανιτόλη.
• Ανθεκτικά στην αλατότητα.
• Αναπτύσσονται σε BairdParker άγαρ.
• Chapman (περιέχει και
μανιτόλη και NaCl 7,5%) ο S.
epidermidis δεν διασπά την
μανιτόλη άρα φέρει λευκές
αποικίες στο Chapman.
• Staphylococcus aureus
Γένος Corynebacterium
• Gram-θετικοί βάκιλλοι.
• C.diphtheriae προκαλει την
διφθερίτιδα.
• Χρειάζονται βιοτίνη για να
αναπτυχθουν.
• Αναπτύσσονται αργά.
• Καλλιεργούνται σε αιματούχο
άγαρ και trypticase soy agar.
• Ιδιαίτερα το Loeffler άγαρ
χρησιμοποιείτε για την
καλλιέργια του C.diphtheriae,
σχηματίζει χαρακτηριστικές
μεταχρωματικές αποικίες.
Γένος Neisseria
• Gram-αρνητικοί διπλόκοκκοι.
• Σε 35ο-36ο C σε ατμόσφαιρα 3-10% CO2
• Αναγνωρίζονται με βάση τα σάκχαρα από τα οποία
παράγουν οξέα.
• Κύρια παθογόνα N. gonorrhoeae, N. meningitidis
• Κύριό θρεπτικό υλικό το Thayer-Martin άγαρ (αίμααντιβιοτικά)
Γένος Mycobacterium
• Gram-θετικά.
• To M. Leprae δεν
καλλιεργείται.
• Το θρεπτικό υλικό
Lowenstein-Jensen είναι
κατάληλο για το M.
Tuberculosis, καθώς
περιέχει μικρες
ποσότητες πενικιλίνης και
ναλιδιξικό οξύ. Η
παρουσία γλυκερόλης
ενισχύει την ανάπτυξη
του.
Γένος Bordetella
• Bordetella pertussis
(κοκκύτης)
• Bordet-gengou agar with
15% sheep blood
• Bordetella agar with C
7% horse blood
• Περιέχουν άμυλο που
απορροφά τα λιπαρά
οξέα της Φ.Μ.Χ.,
γλυκερόλη ως πηγή
άνθρακα, αίμα για
παράγοντες πήξης και
κεφαλεξίνη.
Γένος Haemophilus
• Haemophilus influenzae
• BD Chocolate agar with
Isovitalex and Bacitracin
• Περιέχει αίμη(παράγοντας
Χ), NAD(νικοτιναμιδοαδενινο-δινουκλεοτίδιο),
εμφανίζεται το φαινόμενο
του δορυφορισμού από
Staphylococcus aureus που
παράγει μεταβολικά
προιόντα(παράγοντας V),
βακιτρασίνη για Φ.Μ.Χ.
Enterobacteriaceae (οικογένεια)
•
Ανάλογα με το αν διασπούν
τη λακτοζη στο Mac Concey
χωρίζονται σε:
•
Λακτόζη+
(κόκκινες αποικίες)
Esherichia
Klebsiella
Enterobacter
•
Λακτόζη(άχροες αποικίες)
Salmonella
Shigella
Serratia
Proteus
Kligler Iron Agar
• Με αυτό το υλικό ελέγχουμε τη
διάσπαση της γλυκόζης,
λακτόζης, την παραγωγή Η2S με ή
χωρίς την παραγωγή αερίου.
• Αν το βακτήριο διασπά τη γλυκόζη
με παραγωγή αερίου παρατηρείται
κίτρινο χρώμα στην ευθεία
στήλη και σχηματισμό
φυσσαλίδων ή ανασήκωση του
υλικού. Αν παράγει H2S μαύρο
χρώμα στην ευθεία στήλη. Αν
διασπά τη λακτόζη κίτρινο χρώμα
σε όλο το υλικό.
SS agar
• Λόγω της
περιεκτικότητας σε
χολικά άλατα
αναστέλλει την
ανάπτυξη όλων των
εντεροβακτηριακων
εκτός της Samonella
και Shigella.
-----------------------------------------------------------------------------------------------------
A. Klebsiella pneumoniae
B. Escherichia coli
C: Salmonella sp.
D: Proteus mirabilis
E: Pseudomona aeruginosa
Mycoplasma
• Θρεπτικά υλικά με ορό
ίππου εκχύλισμα μυκητών
και αντιβιοτικά για την M.
pneumoniae (άτυπη
πνευμονία Φ.Μ.Χ.
• Μ. Hominis (φλεγμονή
ουρογεννητικού)
• Σε ειδικο θρεπτικό ζωμό
που περιέχει αργινίνη και
ερυθρομικίνη. Είναι το
μοναδικό είδος από τα
Mycoplasma spp που
υδρολύει την αργινίνη και
έχει αντοχή στην
ερυθρομικίνη.
- Vibrio (γένη)
• Vibrio Clolerae
(χολέρα)
• Χρησιμοποιούμε σε
ανακαλλιέργεια το TCBS
agar (Triosulfate Citrate
Bile Salt Agar) το οποίο
καλύπτει τις ανάγκες του
V. Cholerae για
ανάπτυξη σε αλκαλικό
pH (8-9) λόγω των
χολικών αλάτων που
περιέχει.
Γένος Brucella
• Gram – αερόβιος βάκιλλος, ακίνητο,
μη σπορογόνο
• Βρουκέλλωση – ζωοανθρωπονόσος
• Ειδικά : B.melitensis, B.abortus,
B.suis.
• Καλλιέργεια μόνο σε θρεπτικά υλικά
πλούσια σε τρυπτικάση.
• Τρυπτικάση-σόγια άγαρ (TSA)
• Ζωμό με τρυπτικάση-σόγια
(TSB)
• Brucella Blood Agar (αποικίες
άχρωμες, λείες, γυαλιστερές)
Γένος Clostridium
• Gram +, αναερόβιο, σπορογόνο
• C.tetani
• Εγωτοξίνη – τέτανος
• Αιματούχο : αιμόλυση, φαινόμενο
ερπυσμού
•
•
•
•
C.perfringens
Αεριογόνος γάγγραινα
Αιματούχο : β ζώνη αιμόλυσης
Αιματούχο προβάτου : διπλή ζώνη
αιμόλυσης