Transcript 4薄层色谱

薄层色谱
Thin Layer Chromatography, TLC
实验目的
• 初步掌握簿层色谱法的实验技术
• 学会用薄层色谱法跟踪有机反应
薄层色谱小知识
简称TLC, 是色谱法中的一种，是快速分离和定性分
析少量物质的一种很重要的实验技术，属固-液吸附色谱，
一方面适用于少量样品（几到几微克，甚至0.01微克）的
分离；另一方面在制作薄层板时，把吸附层加厚加大，又
可用来精制样品。此外，薄层色谱法还可用来跟踪有机反
应及进行柱色谱之前的一种极性监测。
实验原理
薄层色谱是利用吸附剂（硅胶、氧化铝等）对
不同组分吸附能力的差异从而达到分离目的的方
法。
吸附能力:
薄层吸附色谱和柱吸附色谱一样，化合物的吸
附能力和它们的极性成正比，具有较大极性的化合
物吸附较强，因而Rf值就小。因此利用化合物极性
基本操作步骤
薄层板的制备
平铺法
倾注法
机械涂铺法
溶剂前沿
展开剂选择
点样
L0
展开
显色
比移值计算
碘蒸气显色法
试剂显色法
紫外光显色法
10%硫酸乙醇溶液
L1
点样线
比移值 Rf = L1/L0
实验步骤
1、薄层板的制备:
制薄层板的主要原料是吸附剂和粘结剂
吸附剂：
“硅胶H”—不含粘合剂;
“硅胶G”—含煅石膏做粘合剂;
“硅胶HF-254”—含荧光物质，254nm 紫外光下观察光;
“硅胶GF-254”——含有煅石膏和荧光剂。
薄层色谱用的氧化铝也分为氧化铝G，氧化铝GF-254及氧化铝HF—254。
粘结剂：一般用粉状固体羧甲基纤维素钠（CMC）,使用时配成1％水溶液。
制板
（1）小板的制备：将1％ CMC加入到硅胶，调成桨状（在
平铺玻璃板上能晃动但不能流动），将其涂在载玻片上
（75 mm×25mm），为使其坦平，可将载玻片用手端平晃
动，致坦平为止，放在干净平坦的台面上，晾干之后放
入110℃烘箱活化1小时即可使用（一次可做很多块）。
（2）大板的制备：与小板制备类似，可以调节厚度。
2、点样
用内径为0.5mm的管口平整的毛
细管将溶于低沸点溶剂（醚、丙
酮）配成的约为1％的溶液点样。
点样前，先用铅笔在小板上距一
端5mm处轻轻划一横线，作为起始
线，然后用毛细管吸取样品在起
始线上小心点样。
3、展开
展开剂的选择主要根据样品
极性、溶解度和吸附剂的活性等
因素来考虑。薄层展开在密闭的
容器中进行。点样的位置必须在
展开剂液面之上，当展开剂上升
到薄层的前沿（离前端 5－10mm）
或多组分已明显分开时，取出薄
层板放平晾干，用铅笔划溶剂前
沿的位置后，即可显色。
4、显色
如果化合物本身有颜色，就
可直接观察它的斑点。
如果本身无色，可先在紫外
灯光下观察有无荧光斑点（有芳
环的物质），用铅笔在薄层板上
划出斑点的位置；对于在紫外灯
光下不显色的，可放在含少量碘
蒸气的容器中显色来检查色点
（因为许多化合物都能和碘成黄
棕色斑点），或者根据不同物质
的性质采取相应的显色方式。
例如：烯烃类、炔烃类的化
合物可以用高锰酸钾溶液显色，
用铅笔标出斑点的位置。
5、比移值的计算
Rf是表示色谱图上斑点位置的一个数值，它用来鉴定一
个未知的化合物。因某个特定化合物所移动的距离与溶剂
前沿所移动的距离相比是一个恒定的数值。任何一种特定
的化合物的Rf值是一个常数，由于在操作过程中不可能完
全准确地重复所测定的条件，所以Rf值不易重复，但参考
已知数据作相对的比较还是有一定意义的。
Rf＝物质所移动的距离L1/溶剂前沿移动的距离L0
第二块板重复做一次，选择较好的一块板进行测量Rf值。
思考题？
1、在一定的操作条件下为什么可利用Rf值来鉴
定化合物？
2、在混合物薄层色谱中，如何判定各组分在薄
层上的位置？
3、展开剂的高度若超过了点样线，对薄层色谱
有何影响？