Transcript 丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用 P

生物化学与分子生物学实验室 CQMU 2008
丙二酸对琥珀酸脱氢酶的
竞争性抑制作用
P、97
教师： * *
*
一、实验目的

学习掌握酶竞争性抑制的概念和特点

学习丙二酸对琥珀酸脱氢酶竞争性抑制
实验的设计思路和方法
二、实验原理
酶的竞争性抑制作用
抑制剂和底物结构相
似，可与底物竞争结
合酶的活性中心，阻
碍酶-底物复合物形成
抑制程度取决于抑制剂与酶的相对亲和力，以
及抑制剂与底物浓度的相对比例（[I]/[S]）
HOOC—CH2—CH2—COOH
FAD
丙二酸
HOOC—CH2—COOH
甲烯白MBH2
（无色）
琥珀酸脱氢酶
HOOC—CH=CH—COOH
FADH2
甲烯蓝MB
（蓝色）
在无氧条件下以甲烯蓝褪色时间判断琥珀
酸脱氢酶活性高低，观察竞争性抑制作用
三、实验步骤
1. 酶提取液的制备
处死大白鼠，分离出肌肉。
制备匀浆液。
２. 酶促反应及竞争性抑制作用
取试管6支，按表所列步骤操作。
加液体石蜡以隔绝空气37℃水浴保温
随时观察并记录各管褪色时间！！！
3. 实验记录和结果分析
试管编号
[I]/[S]
1
2
3
4
5
6
0:1
1:10
1:1
10.1
-
-
褪色时间
酶提取液中有没有琥珀酸脱氢酶活性？
各管的褪色情况有何区别？为什么？
丙二酸对琥珀酸脱氢酶抑制作用的类型及其特点是什么？
本实验中5号、6号试管的作用是什么？
四、结果分析
1、酶提取液中有没有琥珀酸脱氢酶活性？
2、各管的褪色情况有何区别？为什么？
3、丙二酸对琥珀酸脱氢酶抑制作用的类型
及其特点是什么？如何证明的？
4、本实验中5号、6号试管的作用是什么？
五、注意事项

加试剂时看清底物与抑制剂的浓度。

注意随时观察记录各管褪色时间。

37℃水浴保温过程中，不能振摇试管，避
免甲烯白重新氧化变蓝。

实验结束后一定洗净试管内的液体石蜡。
开始！