Transcript 实验动物保种
实验动物保种、饲养与 繁殖质量管理文件 的建立 一、申报资料概况 1、单位基本情况 2、申请项目 3、工作总结 二、结构平面图 1、人员走向示意图 2、物品走向示意图 3、动物走向示意图 4、废弃物走向示意图 三、设施保障情况 四、工作人员岗位职责与管理制度 五、制度的建立与完善 六、标准化操作规程 只有建立切实可行的严格的制度 及操作规程，才能够完善实验动物和 动物实验的质量标准体系，所有工作 有章可循。 一、申报资料概况 （一）单位基本情况 单位名称： 单位地址： 邮政编码： 联系电话： 联系人： 法定代表人： 设施地点： 二、申请项目 （一）普通环境普通级实验动物许可证 1．普通级豚鼠 开放式结构 有温湿度调节系统及换风系统 有关指标复合国家要求 豚鼠饲养方式为池养 2．普通级兔 开放式结构 具备温湿度调节系统及换风系统 有关指标复合国家要求 兔饲养方式为笼养：水冲式/干养式 3、普通级猪：笼养 4、普通级猕猴：笼养 5、普通级犬：笼养 （二）屏障环境实验动物许可证 1、SPF级 三走廊式屏障结构 小鼠、大鼠、金黄地鼠、沙土鼠等小型啮齿类 2、清洁级（过渡） 双走廊/单走廊 大鼠、小鼠、金黄地鼠、沙土鼠等小型啮齿类 过渡阶段 三、实验动物中心工作总结 1、单位基本情况：发展过程、人员情况、生产、科研 情况等 2、单位使用实验动物情况：包括数量、种类、用途 3、与兄弟单位比较所处位置 4、上岗人员培训情况 5、与实验动物相关的上下水道、电、环境面积等 6、卫生情况 7、各项规章制度是否健全、监督机制是否备齐 8、发展规划：发展目标、发展重点、突出技术特色 9、队伍建设 二、平面图 平面结构图 各房间用途分布图 人员走向示意图 物料走向示意图 动物走向示意图 废弃物走向示意图 送排风管道 空气过滤布置 电源线走向示意图等 三、实验动物设施保障情况 1、合适的人员 2、必须配备的设备、设施 四、实验动物中心工作人员岗位职 责、各项管理制度的建立 五、足够的经费支持 （一）实验动物中心职责 1、按时提供、保质、保量使用的实验动物 2、提供符合要求的饲料 3、相应笼具的洗刷 4、关注疫情、防范疫情的发生 5、备足消毒灭菌剂 6、处理动物残体 7、全部饲养实验区卫生的保持、消毒、灭菌、 灭野鼠等工作 8、一旦发现问题的紧急应对措施 （二）考勤制度 （三）所有工作人员的岗位职责 负责人、技术员、饲养员、饲料加工 人员、卫生清洁人员、一般辅助人员、卫 生清洁人员等 加强各项制度建设 1、实验动物管理制度 正确的分笼、饲喂、交配、饮水、通 风、光照、消毒等 死亡动物查明原因，及时处理， 不同级别的动物饲养人员要区分开。 2、实验动物采购制度 首先要明确从有合格证的生产单位购买动物 动物购入后验收 运输要求 接收登记 购进后隔离观察，发现问题及时处理 3、实验动物正常死亡登记制度 鉴于在正常饲养的情况下实验动物也 会有自然死亡，自然减耗现象，所以通 过加强严格的实验动物死亡登记制度， 严格掌握实验动物的健康状况，以便及 时发现问题，妥善处理。 4、实验动物残体处理制度 在实验动物生产、使用过程中会产生大 量的实验动物残体，为保护环境、保证人 体健康、防止人畜共患病的发生和疫情流 行，对所产生的实验动物残体要明确死亡 原因，登记在案，视不同情况妥善处理。 集中封存、定期焚烧，挖坑深埋，食肉动 物饲料等 5、洗刷消毒管理制度 工作人员进入非洁净区要更换普通工作服、 鞋、帽、手套等。 工作人员进入洁净区要更换经过消毒灭菌的工 作服、鞋、帽、手套、口罩、（防护眼镜）等。 所有笼具、饮水瓶等物品器具均要经洗刷、冲 洗、消毒的处理。 消毒方式有化学法、高温物理法/紫外线照射。 化学法消毒一定要定期更换消毒剂的类型以预防 产生耐药性。 6、饲料的采购、配置及储存制度 要从有饲料合格证的单位购买饲料， 有质量保证，饲料事关实验动物生产与使 用合格的关键保障。 级别：普通级、SPF级饲料 消毒方式：高温消毒、照射消毒 种类：繁殖料、成长料 微量元素、防止野鼠、通风、卫生要求、 质量要求，温、湿度调节要符合要求 7、实验动物垫料的质量控制 目前国内实验动物使用的垫料是一个比较突出的 困难，尤其是对山东省来讲是一件比较麻烦的事情。 国外已经形成产业化，我们国家有些地方使用玉米 骨，但仅限于少数几个地方，难以满足我们的需要。 按质量要求来讲应该是：无味、无毒、无污染、无 粉尘、易降解、价格便宜。 可选小刨花、瓦楞纸等，一定要注意无甲醛污染。 8．实验动物饮用水的制度建立 目的：严格实验动物饮用水的供水质量，保证实验 动物饮用水符合国家标准。 ⑴经实验动物饮用水处理器处理过的消毒灭菌水。 ⑵高温高压消毒自来水。 ⑶市售符合城市饮水质量标准的罐装饮用水。 ⑷不能让实验动物饮用蒸馏水/实验室水处理器处理 的水。 ⑸普通级实验动物饮用符合要求的城市自来水。 4.SPF级实验动物饮用水，按照物品进入洁净 区的进入程序将水提供给实验动物。 5.一次灌装的无菌水可使用三天，三天饮用不 完，倒掉，重新换瓶灌装。 6.实验动物饮用水每月取样作一次琼脂糖无菌 培养，如发现细菌培养为阳性，应及时终止提 供实验动物饮用水，立即请厂家对仪器设备检 查维修，直至水的细菌培养阴性为止。 9、环境卫生标准和清理消毒制度 主要目的就是建立严格的环境卫生标准和清理消毒 制度，确保各工作区域卫生状态，坚决杜绝人畜共患病， 保证实验动物质量达到标准。 普通区域主要是保证无垃圾、无死角，无野鼠、蚊蝇 等。 洁净区要保证无尘、无菌、无污染、无寄生虫。 卫生处理方式：扫、抹、冲、空气过滤、紫外线照射、 使用化学消毒剂（一定要定期更换） 10、工作人员清洁卫生制度 这是非常重要的，因为所有的工作都是 人来做，制度制定的再严格，如果人做不 到，等于形同虚设，这需要从思想上来认 识这个问题，而且所有有关人员都得认识 到问题的严肃性。 ⑴身体健康：每年都要查体 ⑵个人卫生：洗澡、剪指甲、不能带饰物手表 等，严格按照更衣程序进行。 ⑶洁净服要求必须是纯棉的，裁剪线条简单， 不能有口袋，接缝处无外露纤维，无菌衣、帽、口 罩洗净晾干高温消毒，不能穿离洁净区，高温 （121℃／２０min）消毒后可保持一周时间。 ⑷鞋： 拖鞋：化学浸泡消毒 或者用厚棉质袜子当鞋穿，可高温消毒。 ⑸务必及时做好消毒记录。 11、笼器具的消毒与灭菌制度 必须建立严格的笼器具清洗、消毒、灭菌制 度，防止来自笼器具的交叉污染，无论哪个区域 的笼器具在清洗时就要绝对分开。 普通区： 干养式的要及时更换垫料，每周要彻底水冲一次。 水冲式的要及时冲洗，每月要晾干，消毒一次。 饮水瓶要每天更换水。 洁净区： 敞开式笼盒、 IVC笼盒、饮水瓶： 自来水刷、热水泡、晾干 化学法：环氧乙烷、戊二醛、紫外照射、 次氯酸、泡腾片浸泡等 高温灭菌：121℃、30min 敞开式笼盒消毒时同时放垫料。 IVC笼盒用的垫料单独袋装消毒。 12、工作服、鞋、帽、口罩、毛巾等 物品的清洁卫生与消毒灭菌 强调要用棉质 普通区的要及时洗涤 洁净区的强调要专人负责，分开 清洗，集中高压灭菌、固定位置存放， 所有物品均一次性使用，不经消毒灭 菌不能重复使用。 做好记录 13、洁净区数据记录管理制度 仪器设备运转、维修，空气温度、 湿度、动物交配、生产、胎数、存活 量、动物实验日期、名称、结果、麻 醉药种类、剂量，所给药物剂量、种 类等相关操作数据均应该如实记录。 当事人签名。 14、工作人员包括首次进入洁净区人 员的岗前培训制度及日常工作制度 建立完善的工作人员包括外来人员首 次进入屏障环境岗前培训制度，以保证洁 净区域的无菌环境、各项设备设施的正常 运行。 适用范围：首次进入屏障环境的工作 人员包括外来人员岗前培训 培训内容包括 （1）目前国家对实验动物的分级标准。 （2）实验动物所用标准饲料的要求。 （3）屏障环境内主要设施设备的使用、操作规 程、日常养护及注意事项。主要培训的是空调、 高压消毒柜的简单使用及简单养护。 （4）洁净区域的洁净范围。 （5）洁净区域人员的进出要求，工作服、鞋、 帽、口罩、手套的穿戴、清洗、消毒要求。 （6）各种表格的填写、记录。 （7）每次进出洁净区域的消毒措施。 （8）进入洁净区域所使用物品的交接手续。 （9）私人物品不准带入洁净区域，私人物品 的专门存放处。 （10）必须进入洁净区域的外来物品（主要指 使用仪器、试剂等必须带入的物品）的消毒灭 菌方法及规定。 （11）每次进入洁净区域的记录要求。 （12）特殊锁具的使用方法。 实验动物饲养繁殖设施设备 操作规程的建立 1、实验动物饲养繁殖操作规程 注意事项： 饲养密度 沙鼠分笼 光照、噪音 裸鼠饲养 2、实验动物安死术 目的：使动物无惊恐、无痛苦、安静地的死去。 适用范围：适用于实验动物中心所有实验动物， 包括淘汰不再使用的实验动物。 动物安乐死原则 （1）动物死亡时没有惊恐、疼痛或苦楚的表 现，在最短的时间内，失去意识并迅速死亡。 （2）对施术者安全，不能有心理上及生理上 的不良影响。 （3）对环境污染最小，施术点不对动物群体 构成威胁。 （4）方法简单，价廉，可靠。 （5）动物尸体处理 参照第五部分之实验动物残体处理制度。 实施操作程序： （1）大鼠、小鼠、沙鼠、裸鼠等小动物处死方法： 颈部脱臼法 将大/小鼠放在笼盖上，大鼠四肢自然抓住笼盖， 左手抓住尾根，右手拇、食指捏住大鼠颈部，左手向 后上方突然用力猛拉，同时右手拇指用力下按，造成 颈部脱臼使大鼠迅速死亡。 （2）兔处死方法：空气栓塞法 耳缘静脉注射30ml空气，迅速致死。 （3）豚鼠处死方法：药物注射法 以巴比妥钠为例，剂量150mg/Kg，腹腔注 射致死。 （4）乙醚麻醉：过量乙醚麻醉，适用于所 有小型实验动物，但价格贵，一般不用。 3、洁净级屏障环境净化的操作规程 目的：建立屏障环境设施的净化规程，保证通 风管道及室内的一切设施和设备的洁净 度符合要求。 适用范围：适用于屏障环境设施开启使用前， 或新动物引入前必须进行的净化处理， 包括净化通风管道及室内的一切设施 和设备。 操作程序： （1）净化程序： 开机→清扫洁净区→净水洗刷→洗涤剂洗 刷→净水洗刷→关机→封闭通道口→喷雾 消毒→启封各通道→开机→换气24h以上 →消毒剂擦拭→封闭通道→熏蒸消毒→启 封各通道→换气2d→检测落下菌数→结果 →合格→启用 →不合格→重复以上净化消毒步骤 （2）菌落数检测 进行室内菌落检查，洁净区域要求标准为： 落下菌数≤3个/皿；超净工作台内要求标准为： 落下菌数≤1个/皿。 检测要求： 无菌物品存放室、SPF级动物实验室、二更、 内缓冲间、清洁走廊、IVC笼盒1次/月；超净 工作台每次使用时检测； 外缓冲间、风淋室1次/2月。 4、 实验动物、动物实验各区域环 境检测标准操作规程： 执行国标 实验动物质量检测规程： 执行国标 注意：紫外线灯有陪护。 5、IVC标准化使用、维护的操作规程 目的：建立完善的独立通气笼盒系统的标准 化操作规程，使IVC笼盒随时处于良好的运行状 态，保证实验动物的供应，保证动物实验的可 靠性、准确性。 责任范围：实验动物中心洁净区所有工作人员、准 许使用IVC系统的外来实验人员。 与IVC相关的洗刷、消毒、配 件更换、滤器更换等。 6、化学消毒液机的使用操作规程 产生的消毒液成分是： 用盐作原材料，产生次氯酸作消毒 灭菌用。 7.脉动真空灭菌柜使用维护操作规程 目的：保证SPF级动物实验室处于正常运转状 态，保证动物实验结果的可靠。 适用范围：适用于进入SPF级动物实验室 进行动物实验的所有人员。 动物实验操作规程 目的：保证SPF级动物实验室处于正 常运转状态，保证动物实验结 果的准确、可靠。 适用范围：适用于进入SPF级动物实验 室进行动物实验的所有人员。 操作规程： 1．登记预约→填写申请单→交纳押金。 2．从有实验动物生产合格证的单位购买实验动物。 3．使用有饲料生产合格证的饲料。 4．遵守SPF级动物实验室的所有制度及操作规程。 5．每日实验结束需对实验室进行清洁灭菌工作，及 时按照相关规定处理各种实验丢弃物。 6．实验室内禁止饮食、吸烟及保存食物。 7．进行实验时所使用的非消耗性器材设备，检查是 否正常无损后，按照规定交纳押金后领取并使用，完 毕须经保管人员检查后收回，如有损坏，应负责修理 或赔偿 一、大鼠局灶性（插线法）脑缺 血再灌注动物实验操作规程 1.体重220－240克的SPF级大鼠，雌雄不限。 2．制备尼龙线栓子： 3号尼龙钓鱼线，于距处理端18mm、 20mm处分别做标记。 （1）颈部正中切口，游离并结扎一侧颈总动脉。 （2）分离结扎枕动脉、甲状腺上动脉和咽升动脉。 （3）游离颈内动脉（ICA）主干一段，注意勿损伤邻近的迷走 神经和舌下神经绊。 （4）穿线并扎活结备用，用无创伤微血管夹夹闭ICA。 （5）以ECA、ICA分叉处为标志，插线深度为（18±0.5）mm。 （6）剪去栓子留置于血管外的部分，逐层缝合切口形成单纯 大脑中动脉缺血动物模型。 （7）将扎活结的线端及栓子的另一端留置皮肤外，逐层缝合 切口，依据实验规定缺血持续不同时间缓慢拔出栓子，大脑中 动脉供血区即可得到前交通动脉、后交通动脉的血供，形成大 脑中动脉供血区的再灌注动物模型。 （8）手术期间用白炽灯维持大鼠肛温在（37±0.5）℃。 4．模型成功标准： 动物清醒后出现同侧Horner征和对侧以前肢为主的偏 瘫症状，表现为同侧眼球下陷，分泌物增多，眼睑闭 合，头偏向对侧，对侧前肢不能完全伸展，爬行时向 偏瘫侧转圈或倾倒，提尾倒立时身体弯向对侧，对侧 前肢下垂无力。 5．神经功能评分 （1）0分：无神经损伤体征。 （2）1分：不能完全伸展对侧前爪。 （3）2分：行走时向偏瘫侧转圈。 （4）3分：行走时向偏瘫侧倾倒。 （5）4分：不能自发行走，意识丧失。 根据此标准，神经功能评分为0分及4分的大鼠 不符合要求被剔除不用。 6．实验取材： 将手术后的大鼠饲养至实验规定的时间，摘除 眼球放血，断头取脑作相应检查。 二、沙鼠脑缺血再灌注动物实验 标准化操作规程 1．选择体重为70－90克SPF级雄性沙鼠。 2．沙鼠麻醉：乙醚吸入性麻醉。 3．仰卧于手术台上，颈部正中切口。 4．分离颈总动脉鞘，游离颈内动脉、颈外动脉。 5．用无创伤微动脉夹夹闭颈内动脉5分钟，松开动脉 夹，形成再灌注状态，去掉穿线，缝合创口。 6．放回原条件下饲养至规定时间，摘除眼球放血处 死，断头取脑作病理学检查。 实验动物残体的处理记录 日期 数 动物种 量 类 实验 内容 有无毒性 （毒物） 处理方式 经手人 监督人 实验动物饲养繁殖记录 日期 动物 名称 产仔 数量 幼仔死亡数量及 原因初步判断 存活 数量 雌性动物 一般情况 温度 湿度 备注 经手人 实验动物死亡登记 日期 动物名 称 数量 死亡性 质初步 检验人 监督人 判断 备注 外购实验动物饲养、使用情况记录 购买 日期 动物 名称 购买 数量 使用数量 及科室 现存 数量 消耗 饲料 温、湿度 经手人 备注 饲料出、入库登记 日期 饲料 名称 入库 数量 出库 数量 单位（斤） 库存 数量 用途 领用 人 经手人 购进实验动物登记 日期 动物 名称 单价 数量 金额 动物 供应人 验收人 备注