Transcript Powerpoint File

Comparable between Rapid One Step
Immunochromatographic Assay and ELISA
in the Detection of Prostate Specific Antigen
in Vaginal Specimens of Raped Women
•Vichan Peonim MD*,
•J Med Assoc Thai 2007; 90 (12): 2624-9
1
2
เพือ่ พิสูจน์ เปรียบเทียบคุณภาพความแม่ นยา
- rapid one step test kit
- ELISA
สรุปสิ่ งทีเ่ ป็ นประโยชน์ ของวิธีการตรวจเพือ่ ทีใ่ ห้ เหมาะสมในการ
นามาใช้ อย่ างกว้ างขวางในงานบริการประจา
3
ความสาคัญ
 ขาดประจักษ์ พยานที่พบเห็นผู้กระทาผิด
 การพิสูจน์ หลักฐานทางชีววิทยาในทางนิตวิ ทิ ยาศาสตร์
 ใช้ สืบหาผู้กระทาความผิด
4
การพิสูจน์ หลักฐานทางชีววิทยาในทาง
นิตวิ ิทยาศาสตร์
• ในช่ องคลอดของผู้เสียหาย (Vaginal Specimens of Raped Women)
• ตัวอสุจิ (sperm)
จากกล้ องจุลทรรศน์
• นา้ อสุจิ (semen)
– สารชีวเคมีท่ เี ป็ นส่ วนประกอบใน semen
5
ปั ญหาและทีม่ า
• การตรวจหาเอนไซม์ Acid phosphatase test
• ทดสอบยืนยันผลด้ วยวิธีการตรวจหา PSA (prostate specific antigen)
• การวิเคราะห์ PSA เป็ นแบบ quantitative ด้ วยวิธีการวิเคราะห์ ของ
ELISA
• Rapid one step test kit (semi-quantitative) ยังไม่ นิยมใช้ ในงานประจา
6
เปรียบเทียบการใช้ งาน
ELISA
Rapid test kit
ข้ อดี
ข้ อเสี ย
-Quantitative
-Cut off ต่ำ
-แพง
-ยุ่งยำก
-ใช้ ผู้เชี่ยวชำญ
-ถูก
-ใช้ งำนง่ ำย
-ไม่ ใช้ ผู้เชี่ยวชำญ
Semi-quantitative
7
8
•E1 , P30
•สารจาพวก glycoprotein ที่ผลิตจากต่ อม prostatic
•ยีนของ PSA อยู่บน chromosome 19
•โดยปกตินัน้ PSA ใช้ เป็ นตัวบ่ งชีม้ ะเร็งต่ อมลูกหมาก
9
ภาพแสดงอวัยวะเพศชาย
10
•โครงสร้ างหลัก ได้ แก่ ส่ วนหัวและส่ วนหาง
•จากนัน้ ก็แบ่ งตัวแบบ meiosis
11
ตัวอสุจ(ิ ดูสด) ภายใต้ กล้ องจุลทรรศน์
ตัวอสุจ(ิ ย้ อมสี) ภายใต้ กล้ องจุลทรรศน์
12
ตัวอสุจทิ ่ ีผิดปกติ
13
ส่วนที่เป็ นเซลล์ คือ ตัวอสุจิ (spermatozoa)
ส่วนที่เป็ นของเหลว คือ พลาสมา (seminal plasma)
14
• ใน 1 ลูกบำศก์เซนติเมตร มีตัวอสุ จิประมำณ 20-200 ล้ำนตัว
• ปริมำณของนำ้ อสุ จิทหี่ ลัง่ แต่ ละครั้งประมำณ 3-5 ลูกบำศก์
เซนติเมตร
• Seminal vasicle
ประมำณ 70%
• Prostate gland
ประมำณ 13-33%
15
แอนติเจนหรือแอนติบอดีเกาะอยู่บน solid phase
แต่ ละขัน้ ตอนจะต้ องมีการแยกเอาสารส่ วนเกินที่ไม่ ได้
ทาปฏิกิริยาออกไป
วิธีท่ มี ีความไวและความจาเพาะสูง
16
เอนไซม์ ท่ นี ิยมใช้ ในวิธีการ ELISA คือ
•Horseradish peroxidase
(substate ที่นิยม คือ O-phenylene diamine ให้ สีนา้ ตาล)
•alkaline phosphatase
(substrate ที่นิยมคือ p-nitrophenyl phosphate ให้ สีเหลือง)
Cut off 0.5 ng/ml
17
18
•ตัวกลางยึดเกาะ (solid phase)
•กระดาษชนิด nitrocellulose หรื อ nylon
• เมื่อทาปฏิกิริยา
ตกตะกอนลงมาเกาะบนผิวกระดาษ
ปรากฏสีสาหรับการอ่ านผล
•ทาให้ เกิดสี เช่ น ผงทอง (colloidal gold)
19
การวิเคราะห์ PSA ของ rapid one step test kit
•test (mouse anti-human PSA Mc antibody)
• Antibody colloidal gold conjugate
•สิ่งส่ งตรวจพบ PSA (specific antibody- PSA-color conjugate)
•การตรวจวิเคราะห์ แบบนีใ้ ช้ สารตัวอย่ าง 100 µl ( 3 หยด)
•cut off ของ PSA คือ 4 ng/ml
20
21
ขั้นตอนการตรวจ
•การตรวจร่ างกายผู้เสียหาย
•การตรวจร่ างกายผู้ต้องหา
•การตรวจทางห้ องปฏิบัตกิ าร
วัตถุพยานที่พบ
การตรวจหาเอนไซม์ Acid phosphatase
การดูคราบอสุจดิ ้ วยเครื่องกาเนิดแสง
การตรวจ PSA (prostate specific antigen)
การตรวจยืนยันด้ วยกล้ องจุลทรรศน์
22
23
24
• พยำธิวทิ ยำ คณะแพทย์ ศำสตร์ โรงพยำบำลรำมำธิบดี มหำวิทำลัยมหิดล
•สิ่ งส่ งตรวจจำนวน 100 ตัวอย่ ำง ได้ จำกสู ตร
Z P(1 P)
d2
2
•N =
ทีร่ ะดับควำมเชื่อมัน่ 96%
;  = 0.05 หรื อ 1-α/2
Z = Z0.975 = 1.96
(alpha error two-tailed)
25
• N = 59 ที่ระดับควำมเชื่อมั่น 96%
• จากงานวิจยั อื่นตรวจพบ = 67.5%
• ต้องมีตวั อย่าง อย่างน้อย = 87 ตัวอย่าง
26
- Cotton swab
- กระดาษกรองที่มีพืน้ ที่ 0.3 x 0.3 cm
- ใส่ ในหลอดทดลองที่มีนา้ กลั่น (DW) 2 ml ปั่ นเหวี่ยง 3 นาที
- นาไปทดสอบด้ วย rapid one step test kit และ ELISA
27
•ทัง้ 2 หลักการ
•ตรวจสอบหาตัวอสุจโิ ดยการดูภายใต้ กล้ องจุลทรรศน์ (gold standard)
•เปรียบเทียบ sensitivity, accuracy,specificity, positive predictive value,
negative predictive value
28
29
TP
FP
FN
TN
30
31
32
•ในประเทศที่พัฒนาแล้ วใช้ วธิ ีการทดสอบแบบ rapid one step
test kit เพื่อการตรวจแยกใน seminal fluid
•ผลการทดลองของวิธีทัง้ สองนัน้ เมื่อเปรี ยบเทียบแล้ วไม่ มี
ความแตกต่ างกันยกเว้ น
• sensitivity
• negative predictive value
•ค่ าจากการคานวณของ rapid kit ดีกว่ า ELISA
33
34
สรุ ป
• rapid one step test kit นามาใช้ การตรวจ PSA ใน
ช่ องคลอดในคดีข่มขืนกระทาชาเราที่ทาในงาน
ประจาได้ อย่ างเหมาะสม
35
อาจารย์ที่ปรึกษา
อ.ธงชัย เตโชวิศาล
36