Transcript 第二章C3：药品的鉴别（色谱法）2

第二章C
药品的鉴别试验
(如何通过药品的鉴别判定其真伪)
§3. 鉴别方法
化学法
chemistry identification
光谱法
spectrophotometry identification
色谱法
chromatography identification
1.色谱的实质及前题？
2.用公式简述色谱法的两基本理论？
3.色谱分析的实质？
4.色谱分析的应用对象是：
A.混合物
B.原料药
C.制剂
D.临床药物研究
E.单一的化合物或原料药
5.色谱分析主要的三个条件是什么？
6. 请画出色谱分析仪器工作原理的框图。
7.分别按固定相与流动相将色谱分析方法分类。
最常用的方法为哪三类？
1.色谱的实质及前题？ 分离
20世纪初：
俄国植物学家茨维特（Tsweet）→色谱
20世纪中叶：
瑞典科学家Tiselius→电泳与吸附色谱
英国马丁(Martin)、辛格(Synge) →分配色谱
2.用公式简述色谱法的两基本理论？
塔板理论：n = L/H
马丁(Martin)、辛格(Synge)
速率理论：H = A+B/u+Cu
范迪姆等(van Deemter)
涡流扩散项
纵向扩散项
m
传质阻抗项
3.色谱分析的实质与对象？
分离与分析同时进行，混合物
R
木犀草素
槲皮素
芦丁
4.色谱分析的应用对象不是：
A.混合物
B.原料药
C.制剂
D.临床药物研究
E.单一化合物的原料药
5.色谱分析的三个主要条件是什么？
●固定相
●温度
●流动相
●进样方式
●检测器
●流速
6. 请画出色谱分析仪器工作原理的框图。
流
动
相
混合物
固
定
相
分 离
检测器
7.分别按固定相与流动相将色谱分析方法分类。
最常用的方法为哪三类？
1）吸附色谱
2）分配色谱
TLC
3）化学键合色谱
固定相
4）离子交换色谱
5）分子排阻色谱
6）对映异构体拆分色谱
HPLC
7.分别按固定相与流动相将色谱分析方法分类。
最常用的方法为哪三类？
流动相
电泳与毛细管电泳
§3. 鉴别方法
3.chromatography identification
Ⅰ
TLC
Ⅱ
HPLC
Ⅲ
GC
§3. 鉴别方法
Ⅰ
TLC
thin-layer chromatography
TLC：
对象:能配成溶液的样品
●操作条件：室温.
直接点样
●色谱类型：液相平板色谱
●固定相：
薄层板φ >100μm，n↓
出柱顺序：正相?反相?
●流动相：常压输送。
液体；起分离用；种类多
●非在线检测：UV等
●
§3. 鉴别方法
（1）原理：吸附色谱、分配色谱等
COOH
OCOCH3
ＲfR = ＲfS
L
Ｒf ＝
L0
R
S
§3. 鉴别方法
Ch.P
对照品( Referrence Substand)：
用于化学药品与中药分析的标准物质。
标准品（Standard）：
指用于生物检定、抗生素或生化药品分析的标
准物质。
§3. 鉴别方法
（2）色谱条件与检视方法
固定相: 硅胶G、 GF254、Ｈ、ＨF254等
流动相：液体
检视方法：
日光
紫外灯365nm
254nm
R
显色剂
§3. 鉴别方法
（3）系统适用性试验
①对象：
②内容：
对照品
灵敏度
● Ｒf：0.2～0.8
● Ｒ＞１
③影响因素：
●
塔板理论：
速率理论：
n=L0/H
Rf =
1
1+KVs/Vm
例1
布洛芬缓释胶囊的TLC鉴别
固定相：硅胶GF254
流动相：正已烷-乙酸乙酯-冰醋酸（15：5：1）
检视：254nm紫外灯
样品试验：
H
CH3
CH3
COOH
H3C
R
S
§3. 鉴别方法
（4）特点与应用
●高分离能力
●高灵敏度(10-６～10-８g)
●高专属性
●简便快速
中药鉴别的首选方法
Ⅱ
HPLC
high pressure liquid chromatography
HPLC：
●对象:能成溶液的样品(80%)
●对象:能成溶液的样品
●操作条件：室温,
●操作条件：室温.
直接进样
直接点样
●色谱类型：液相平板色谱 ●色谱类型：液相柱色谱
●固定相：
●固定相：
色谱柱L:cm,φ:μm， n↑
薄层板φ >100μm，n↓
出柱顺序：正相?反相?
出柱顺序：正相?反相?
●流动相：高压输送。
●流动相：常压输送。
液体；起分离用；种类多 液体；起分离用；种类多
●在线检测：UV-vis，MS等
●非在线检测：UV等
TLC：
HPLC仪器流程图：
tRr化学键合色谱等
（1）原理：
COOH
t
OCOCH3
tRS
tRr = tRS
t
UV-vis
（2）色谱条件
固定相: 反相键合柱（ODS）等
流动相：液体H2O、CH3OH、乙腈等
检视方法：
差式折光
蒸发光散射
MS
UV-vis
flu
§3. 鉴别方法
（3）系统适用性试验（见含量测定）
1.试验对象：对照品溶液
◆理论塔板数：n
2. 试验内容：
◆分离度：R
◆托尾因子：Ｔ
◆重复性：RSD
§3. 鉴别方法
（4）特点与应用
●高柱效(n=104片/米）
●高专属性
●高灵敏度(10-9～10-15g)
制剂与多组分原料药鉴别的首选方法
§3. 鉴别方法
Ⅲ GC
gas chromatography
HPLC：
●对象:能成溶液的样品(80%)
●操作条件：室温,
直接进样
●色谱类型：液相柱色谱
●固定相：
色谱柱:L:cm,φ:μm，n↑
出柱顺序：极性；其它
●流动相：高压输送。
液体；起分离用；种类多
●在线检测：UV-vis，MS等
GC：
●对象:能气化的样品(20%)
●操作条件：高温.
直接进样或顶空进样
●色谱类型：气相柱色谱
●固定相：
色谱柱：L:m,φ:mm↓;0↑
出柱顺序：极性；沸点等
●流动相：常压输送。
惰性气;无分离作用;H2、N2、He
●
在线检测：FID,TCD,MS等
仪器流程图：
§3. 鉴别方法
（1）原理: 吸附色谱、分配色谱等
CH3CH2OH
t
t =tRS
Rr
t
（2）色谱条件
固定相:填充柱与毛细管柱，填料种类较多
流动相：种类较少 H2 N2 He等
检视方法：
MS
TCD
ECD
FID
NPD
FPD
§3. 鉴别方法
（3）系统适用性试验：同HPLC
①对象：
对照品
②内容： n、Ｒ、T、RSD
§3. 鉴别方法
（4）特点与应用
●高柱效(n=104～106片/米）
●高专属性
●高灵敏度(10-11～10-15g)
●分析速度快
主要用于易挥发的药品鉴别与杂质检查
小结与思考题
1、分别简述TLC、HPLC、GC鉴别药品的特点及在现版
药典中的应用情况？
2、下列哪些方法需进行系统适用性试验后方能进行
样品检测？为什么？
A. TLC
B.HPLC
C.IR
D.GC
E.UV
3、分别写出HPLC系统适用性试验的4个参数计算公式？
4、速率理论公试中各符号的含意？
5、薄层色谱的检测器？
6.设计如下巴比妥类原料药及制剂鉴别方法
O
H
N
O
O
H
N
C2H5
C 2 H5
O
NH
NH
C 2 H5
O
CH2
CH
H
N
CH2
N
C3H7
O
O
C5H11
O
原料药： chemistry 、 IR
制剂： chemistry 、 TLC or HPLC
ONa
再见