Transcript Présentation

DISPOSITIF D’AIDE AU GUIDAGE
DES BIOPSIES PROSTATIQUES
PAR FLUORESCENCE PROCHEINFRAROUGE
J. Boutet2, N.Grenier1, E.Rustique2, A.Jacquart2, L.Hervé2, J.L.Coll3, M.Keramidas3,
I.Texier2, F.Navarro2,F. Couillaud1, R.Boisgard2, G.Pottier2, J.M.Dinten1
1-Université Bordeaux Segalen – CHU de Bordeaux
2-CEA-LETI, Grenoble
3-INSERM U823, Institut A. Bonniot, Grenoble
(2)
(1)
[email protected]
(3)
1
Comment identifier le cancer ?
Imagerie fonctionnelle en IRM :
Véritable progrès mais manque
de SS et de SP
Perfusion
Prometteur mais résolution spatiale
insuffisante
Diffusion
SpT2
Imagerie moléculaire en TEP-IRM :
Biopsies prostatiques ciblées par imagerie
1
2
Ciblage cognitif
après IRM
Fusion IRM-US
Rapide
On ne voit pas
les cibles pdt la
biopsie
Permet de cibler
la lésion
principale
Nécessite un
système approprié
3
Injection de
microbulles
Permet de
retrouver la cible
4
Biopsies sous IRM
Permet de cibler la
lésion principale
Vérification du
positionnement de
l’aiguille
Nécessite le
logiciel PDCUS
dans l’échographe
Peu disponible
Immobilise l’IRM
Système d’imagerie bimodal
FIANIUM
Localisation de la tumeur
sur l’image bimodale
CEA-LETI, VERMON
Sonde bimodale
6 fibres d’excitation
4 fibres de détection
J.Boutet et al., J. Biomed. Opt., 2009
Conclusions de Prostafluo
•
Développement d’une sonde bimodale US/optique adaptée aux contraintes
cliniques
–
–
–
•
Profondeur d’investigation : 0-28 mm
Résolution
• σX = 0.13 cm
• σY = 0.9 cm
• σZ = 0.10 cm
Répétabilité < 0.1 cm
reconstruction optique et co-enregistrement avec les US
– Validation sur fantôme à 80%
– Validation sur petit animal 3/4
•
Futur :
– Prendre en compte les hétérogénéités tissulaires pour améliorer la localisation
optique : étude clinique
– Test de différentes sondes fluorescentes sur de gros animaux : chien
développant spontanément un cancer de prostate.
Projet BiTum, ANR 2011
• Finaliser le système pour la clinique
• Développer un nanovecteur fluorescent (Lipidots) pour cibler le
cancer
– Choix de fluorophore
– Pharmacocinétique, biodistribution
• Ciblage spécifique
– anticorps anti-PSMA
– RGD
• Imagerie du gros animal (chien)
• Imagerie du petit animal
– Développer des modèles murins de KP exprimant ou non les cibles
– Implantation in situ (collaboration avec Muriel Busson, Montpellier)
Développements récents en instrumentation
•
Test de la compatibilité de la sonde avec des études
cliniques (laser safety, biocompatibilité,
décontamination...)
•
Intégration du système dans une baie transportable
À l’aide notamment d’une nouvelle technologie de
laser à fibre
•
Adaptation de la sonde optique en vue d’une étude
préclinique sur chien
PROSTAMOBILE
Développement d’un nouveau traceur : LIPIMAGE™
Nanoparticules lipidiques :
Dispersion d’une phase lipidique dans
une phase aqueuse (sonication)
- Nanoémulsion -
Cœur lipidique
Fluorophore lipophile
50 nm
surfactant
Chaines PEG
Avantages:
•Furtivité
•Brillance (5x ICG)
•internalisation facilitée
•Stabilité > 5 semaines
Ciblage non spécifique
Fonctionnalités des nanoparticules par EPR :
- test visibilité des nanoparticules
- test de localisation passive à la tumeur
Souris 1
Souris 3
Les nanoparticules sont fonctionnelles
Sur tumeur DU145 sous cutanées
80 nm
Ciblage spécifique
• Choix de l’Ac
– YPSMA Abcam : NON
– scFvD2B (Giulio Fracasso & Marco Colombati, Vérone, IT)
FrigerioB et al, Eur J Cancer 2013
• Modèles :
– Orthotopique vs sous-cutané
– Souris immunocompétentes vs immunodéficientes
– Expression conditionnelle PSMA
Anticorps pour la fonctionnalisation des lipidots
scFvD2B (collaboration laboratoire de Verone)
1- Validation de l’utilisation du fragment d’anticorps en immunocytochimie
Cellules LnCap
(marquage sur
cellules vivantes)
DAPI bleu = noyau
Vert = PSMA
2- Validation en immunohistotochimie
Coupe prostate souris/cancer
Anticorps (fragment scFv) validé
D2B
scFv
Construction du modèle cellulaire : LnCap – souris immunodéficiente
1-Lignée LnCap transformée (stable) =LnCaplucF
expression de la luciférase Firefly pour le suivi en bioluminescence de la pousse tumorale
Marquage scFv de la lignée LnCaplucF
(cellules vivantes)
DAPI bleu = noyau
Vert = PSMA
2-Validé en implantation orthotopique par bioluminescence
Activité luciférase (LnCaplucF injectée dans la prostate 0.5M/lobe)
Image 9 jours après implantation
Utilisation des LnCaplucF pour implantation
orthotopique
Construction du modèle cellulaire : LnCaplucF
3-Validé par coloration et histochimie
Premier lot de souris Inj prostate LnCap (0.5M/lobe) 8 semaines post inj
Coupe cryo 15µm/ HES et IHC
contrôle
S0-249
cancer
nécrose
X20 HE
X63 DAPI = noyau
vert = PSMA
Injection des nanos scFv ou capées (première série)
T0
20 min
60 min
1 (296) scFv
2 (297) scFv
5 (300) capées
Prélèvement 4
V
P
Tissus traités
pour IHC et
HE
Essais pré-cliniques
• Gros animal :
– Chien :
• Cancers spontanés
• Implantation
– Transducteur spécifique
– École vétérinaire de Lyon
Projets cliniques
• Optimisation du système
– AO Ressourcement du CR Aquitaine
– Implication de la Route des Lasers : Alphanov
• Essais pilotes :
– Propriétés optiques de la prostate
– Essai pilote avec de l’IGC (AMM) avant PT
– Essai Lipidots ?