Transcript v cv ct - genoma . unsam . edu . ar

Universidad Nacional de San Martín
Instituto de Investigaciones Biotecnológicas
Genética General
Laboratorio
TP2: Mapeos mediante cruzamientos
genéticamente controlados en Drosophila
TP 2: Mapeos mediante cruzamientos
genéticamente controlados en Drosophila
Objetivos
1 ) Mapeo genético entre los genes yellow y white
basándose en la frecuencia relativa de recombinantes
2 ) Mapeo cromosómico del elemento P de líneas de
una colección de mutantes insercionales basándose en
la segregación de los marcadores de los balanceadores
con respecto al marcador del P
Mapa genético - Ligamiento
Establecer el orden y las distancias relativas entre genes
ligados en un mismo cromosoma en base a la frecuencia
de eventos de recombinación genética (crossing over).
Crossing over: las cromátidas homólogas no hermanas
intercambian material genético.
la probabilidad de entrecruzamiento es
proporcional a la distancia entre genes
Unidad de distancia de mapa genético:
unidad de mapa (um) ó centi Morgan (cM)
1 um equivale a 1% de recombinantes
Mapa genético de Drosophila
Genes ligados en
el cromos X:
Alas cross-veinless (cv)
Alas cortadas (ct)
Ojos vermillion (v)
Determinar mapa genético entre: Alas cross-veinless (cv)
Alas cortadas (ct)
Ojos vermillion (v)
Cruzamiento prueba calcular la frecuencia de recombinantes
Parentales:
hembras v + +
+ cv ct
x machos v cv ct
Y
En Drosophila, el macho no recombina
Progenie:
v+ +
+ cv ct
v cv +
+ + ct
v cv ct
+ + +
v + ct
+ cv +
580
592
45
40
89
94
3
5
% rec entre loci v-cv = ?
% rec entre loci cv-ct = ?
% rec entre loci v-ct = ?
Determinar mapa genético :
% rec entre loci v-cv = 18,5%
% rec entre loci cv-ct = 6,4%
% rec entre loci v-ct = 13,2%
cv
ct
13,2 um
6,4 um
18,5 um < 19,6 um
No considera los dobles
recombinantes
subestimación
v
TP 2: Mapeos mediante cruzamientos
genéticamente controlados en Drosophila
Objetivos
1 ) Mapeo genético entre los genes yellow y white
basándose en la frecuencia relativa de recombinantes
2 ) Mapeo cromosómico del elemento P de líneas de
una colección de mutantes insercionales basándose en
la segregación de los marcadores de los balanceadores
con respecto al marcador del P
Parte I Mapeo genético entre los genes yellow y white
en el cromosoma X de Drosophila
Cruzamiento a realizar
prueba
¿Cómo se obtuvieron las moscas heterocigotas?
¿Cuál es el fenotipo/genotipo esperado en la progenie?
Contar número de individuos recombinantes
Calcular la distancia genética entre los loci yellow y white
Mapeo genético entre los genes curly wing (Cy) y black
body (b) en el cromosoma 2 de Drosophila
Hembra
x
Macho
TP 2: Mapeos mediante cruzamientos
genéticamente controlados en Drosophila
Objetivos
1 ) Mapeo genético entre los genes yellow y white
basándose en la frecuencia relativa de recombinantes
2 ) Mapeo cromosómico del elemento P de líneas de
una colección de mutantes insercionales basándose en
la segregación de los marcadores de los balanceadores
con respecto al marcador del P
Mapeo del elemento P
Mapear el sitio de inserción para identificar el gen afectado
Sitio etiquetado por el elemento P
Marcador w+
Secuencia del P
1) Determinar el cromosoma que contiene el elemento P
2) Determinar la posición genética relativa del elemento P
dentro del cromosoma
3) Determinar la posición molecular del elemento P en el
genoma
Parte II Mapeo cromosómico del elemento P de líneas de
una colección de mutantes insercionales
-891
-964
-869
Líneas de la colección de moscas
-Elemento P insertado:
-Observar y anotar el color de ojos de cada línea
Cromosomas balanceadores
- Contienen rearreglos cromosómicos
No recombinan con el
cromosoma homólogo
- Contienen marcadores dominantes
Seguimiento de los
cromosomas en la
progenie (tanto el
balanceador como el
cromosoma homólogo)
Deducir fácilmente el genotipo de la progenie cuando la
mutación de interés no presenta un fenotipo morfológica
visible
Etiquetas para cruzamientos genéticos controlados
Caso 1:
-Balanceador en el cromosoma III marcado con Stubble (Sb)
-Mutación puntual en el cromosoma 3
Parentales:
Genotipo de la progenie:
Fenotipo de la progenie:
Seleccionar en contra de Sb para quedarse con las
moscas que tiene la mutación de interés
Caso 2:
-Balanceador en III marcado con Stubble (Sb)
-Elemento P insertado en cromosoma II (marcador w+)
-Elemento P insertado en cromosoma III (marcador w+)
Parentales:
Genotipo de la progenie:
Fenotipo de la progenie:
Seleccionar en contra de Sb para quedarse con las
moscas que tienen el elemento P en el III
Caso 3:
-Balanceador en III marcado con Stubble (Sb)
-Mutación letal en homocigosis en el III
Parentales:
Parentales:
Progenie:
Mantener líneas con
mutaciones letales balanceadas
Progenie:
La mutación letal se pierde
con las generaciones
Parte II Mapeo cromosómico del elemento P de líneas de
una colección de mutantes insercionales
-Líneas de la colección de moscas: 891, 964, 869
-Cruzamientos a realizar:
En la progenie:
Evaluar la segregación del P con marcador w+ con respecto a los
marcadores de los cromosomas balanceadores II y III
Caso del elemento P (w+) en el cromosoma 2
Cromosoma 2: Balanceador marcado con Curly (Cy)
Cromosoma 3: Balanceador marcado con Stubble (Sb)
Cruzamiento a realizar
Fenotipo de la progenie
La segregación del elemento P está condicionada por el cromosoma
balanceador del II, no es independiente de Cy (marcador del
cromosoma homólogo)
Caso del elemento P(w+) en el cromosoma 3
Cromosoma 2: Balanceador marcado con Curly (Cy)
Cromosoma 3: Balanceador marcado con Stubble (Sb)
Cruzamiento a realizar
Fenotipo de la progenie
La segregación del elemento P está condicionada por el cromosoma
balanceador del III, no es independiente de Sb (marcador del
cromosoma homólogo)
Caso del elemento P(w+) en el cromosoma X
Cromosoma 2: Balanceador marcado con Curly (Cy)
Cromosoma 3: Balanceador marcado con Stubble (Sb)
Cruzamiento a realizar
Fenotipo de la progenie
Hembras:
Fenotipo diferencial entre
macho y hembra
Machos:
El elemento P segrega ligado al
cromosoma X
Caso del elemento P(w+) en el cromosoma 4
Cromosoma 2: Balanceador marcado con Curly (Cy)
Cromosoma 3: Balanceador marcado con Stubble (Sb)
Cruzamiento a realizar
Fenotipo de la progenie
Elemento P segrega de manera
independiente con respecto a los
marcadores de los cromosomas II
y III y el cromosoma X
Parte I:
Mapeo genético entre los genes yellow y white
F1) yw
++
x
yw
Y
F2) Analizar en TP4
14 días a 23ºC
Parte II:
Mapeo cromosómico del elemento P de líneas de una
colección de mutantes insercionales
F1) w
w
x
línea a mapear
w; Cy ; Sb; +
F2) Analizar en TP4
14 días a 23ºC