Transcript 8주차 초파리 침샘 염색체 관찰

8주차 초파리 침샘 염색체의 관찰
Introduction
초파리는 초파리과(Drosophilidae) 동물의 총칭으로, 세계에 2000여종이 분포하고 있다.
특히 노랑초파리(Drosophila melanogaster)는 Morgan 이후 유전학 실험에서 가장 많이 쓰이는 다세포 생물이다. 큰
이유는 초파리의 한 세대는 12일 전후로 상대적으로 짧아서 교배 실험에 효율적이다. 그리고 한 쌍의 교배로 약 500
개의 알을 얻을 수 있어 고전적인 통계를 처리할 때에도 좋은 표본이 될 수가 있다. 몸집이 매우 작아서 많은 개체수
를 사육 하여도 어렵지 않는 장점이 있고, 환경에서 직접 채취하여 사육하기도 쉽다. 돌연변이가 빈번하게 발생하고,
염색체 수가 적어서 염색체 지도를 작성하기에도 매우 적합하기 때문이다. 초파리의 거대 침샘염색체는 매우 잘 알
려진 유전자 실험 재료다.
Wandering third instar larvae
Introduction
쌍시목(Diptera)곤충의 유충은 침샘(salivary gland)에서 세포분열이 없이 염색체의 연속적인 분열을 통해 다사
염색체(polytene chromosome)를 형성한다. 초파리의 침샘 세포의 염색체는 다른 세포의 염색체에 비해 약 100배
정도 크고, 4쌍의 각 염색체에 특징적인 띠(band)가 나타나므로 비교적 구별이 용이하다.
침샘세포에서 염색체는 8개로 보이는 것이 아니라 각 상동염색체가
접합하여 마치 하나의 염색체처럼 되어 있어 4쌍이 아니라 4개로
보이며, 또한 4종류의 염색체가 동원체에서 붙어있다.
X염색체와 4번째 염색체는 동원체가 염색체의 한쪽 끝에 놓여 있으며,
2번째와 3번째 염색체는 동원체로부터 양쪽으로 염색체팔이 뻗어 있다
염색체에 결실이나 복제가 일어나면 침샘 염색체가 고리를 형성한다.
한편 퍼프(puff)라는 혹과 같은 구조도 관찰되는데 퍼프는 염색체의 응축이 풀어진 것으로 유전자에서 전사 활동, 즉
mRNA를 만들고 있다는 것을 나타낸다. 이러한 퍼프는 조직에 따라 염색체의 다른 부위에서 나타나므로 유전자의
발현이 조직마다 차별적으로 일어난다는 간접적인 증거를 확인할 수 있다.
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Object
침샘염색체의 슬라이드 표본을 제작하는 방법을 배우고, 각 염색체의 밴드 패턴과 염색체
의 끝 모양을 참조하여 각 염색체를 구별하고 퍼프와 같은 특징을 관찰한다.
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Material
해부현미경
광학현미경
핀셋(2개)
슬라이드글라스, 커버글라스, 흡수용 화장지
식염수, 45% 아세트산, 초산오르세인액(염색약)
method
1) 밥 위로 올라온 큰 초파리의 유충(제3령 유충)을 꺼내 petridish에 올려놓는다.
2) 물이나 식염수 약간으로 겉에 묻은 밥이나 이물질을 씻어낸다.
3) 해부현미경 받침대 위에 슬라이드 글라스를 놓고, 그 위에
45% 아세트산 두 방울을 떨어뜨린다.
4) 유충을 핀셋으로 꺼내어 슬라이드글라스 위의 아세트산으로
옮긴다.
5) 꼬리에서 1/3되는 지점을 무딘 핀셋으로 붙들고
날카로운 핀셋으로 머리 쪽을 잡고 빼낸다.
(머리-소화기-침샘 순)
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침샘분리
Salivary gland
(침샘)
지방체
6) 얇은 핀셋으로 한 쌍의 주머니 모양의 침샘만을 남기고 다른 부분은 조심스럽게 제거한다.
*둘 중 하나의 침샘만 잘 제거해도 OK!
7) 같은 슬라이드 글라스의 다른 부위에 새45% 아세트산을 한 방울 떨어뜨린다.
8) 뽑아낸 침샘을 새로 떨어뜨린 아세트산에 놓고 2∼5분 더 고정한다.
*옮길 시 이미 고정되어 잘 떨어지지 않을 수 있음. 조심히!
9) 고정 후, 파이펫 팁이나 휴지를 이용해 아세트산을 조심스레 제거한다. (침샘이 딸려오지
않도록 주의!)
10) 초산 오르세인액(lactic-acetic-orcein)을 침샘 위에 한 방울 떨어뜨리고 2-3분 지나 커버글
라스를 덮는다.
method
11) 프레파라트를 여과지 사이에 끼우고 엄지손가락으로 커버글라스의 정 중앙을 지그시 눌러
서 염색체가 잘 펴지도록 한다. (커버글라스가 밀리지 않도록 주의)
12) 옆으로 새어 나온 염색액은 여과지나 화장지로 닦아 낸다.
13) 저배율로 검경해서 잘 염색되고 펼쳐져 있는 염색체를 고른다. 고배율로 바꾸어 관찰하고
스케치한다. 400배에서 비교적 잘 보인다.
X100
X200
X200
X400